CN103582493A - 用于禽流感的滴眼疫苗 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的在于,开发一种家禽中的使用灭活疫苗的禽流感的预防方法,该方法即使不并用(通常的禽流感的灭活疫苗的接种中所必需的)油佐剂也能赋予强的免疫,且不是使用注射针的给药法,且可迅速地对多只给药。本发明提供一种家禽中的禽流感的预防方法,其特征在于,对家禽滴眼给药灭活疫苗,所述灭活疫苗含有灭活的禽流感病毒作为抗原、且不含油佐剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种对家禽中的禽流感的预防方法。
背景技术
疫苗根据给予的抗原分为活疫苗和灭活疫苗。
“活疫苗”将弱毒化的病原体作为疫苗抗原,可赋予免疫原性高、强力且长期的免疫。但是,由于将活着的病原体用作抗原,因此,有可能在安全性方面产生问题。
另一方面,“灭活疫苗”是将灭活的病原体或其构成成分(蛋白质等)作为抗原,因此,安全性高,但免疫原性低。
由疫苗赋予的免疫的强度较大地依赖于给药方法。通常,在对皮下或肌内的给药中,所赋予的免疫较强。另一方面,在对粘膜(经口、总排殖腔、经鼻、滴眼)的给药中,所赋予的免疫较弱。
因此,以往,在使用灭活疫苗的情况下,采用并用佐剂(免疫增强剂)且向皮下或肌内注射的方法(例如,参照专利文献1)。
近年来,高病原性的禽流感病毒在家禽中在全世界流行,在一部分国家普遍存在。由该病毒引起的家禽的死亡率极高。进而,在日本国内确认感染该病毒的情况下,为了防疫,将其周边的家禽全部处死。因此,由该病毒导致的家禽产业的经济损失巨大。
另外,该病毒有时引起对人致命的感染。该病毒在现阶段仅存在家禽向人直接传播。
但是,将来,在产生具有从人向人的高传播能力的系统的情况下,有可能引发极严重的流行病。
因此,抑制家禽中的禽流感的产生在家畜卫生及公共卫生方面成为世界性重要的课题。
在家禽中进行针对禽流感的疫苗接种的情况下,若使用活疫苗,则存在病毒在宿主体内变异或重配(基因重配体),对家禽产生强毒性病毒的可能。另外,从食品安全性的角度考虑,将活疫苗用于家禽时也存在问题。进而,不可否定家禽中接种的活疫苗可能与任何途径下引起流行病的流感病毒的出现有关。
因此,作为以往的针对家禽的禽流感疫苗,采用将该病毒的灭活疫苗与油佐剂并用且向皮下或肌内注射的方法。
可是,用这样的方法进行了疫苗接种的家禽由于油佐剂长时间残留在体内,因此,从食品安全性方面考虑,在一段时间内无法出售。
另外,对于皮下或肌肉注射来说,由于需要每一只单独地进行接种,因此需要大量的劳力,难以迅速地对多只进行接种。进而,进行接种的人(兽医工作者等)的针刺伤的危险性和使用完的注射针的废弃成为问题。
因此,以往,在禽流感的防疫中,除紧急情况以外原则上不使用疫苗接种,而采用将发生禽流感的农场中的全部家禽进行处理(处死)的方法。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开2008-231123号公报(“背景技术”的段落)
发明内容
发明要解决的课题
本发明为了解决上述课题,其目的在于,开发一种家禽中的使用灭活疫苗的禽流感的预防方法,该方法即使不并用油佐剂也能赋予高的免疫,且不是使用注射针的给药法,且可迅速地对多只家禽给药。
解决课题的手段
本发明人等进行了反复深入的研究,结果发现,将以“灭活了的禽流感病毒”为抗原的疫苗通过“滴眼”给药,即使完全不并用以往的向皮下或肌内注射的疫苗所必需的油佐剂,也能对家禽赋予强的免疫。
本发明是基于这些见解而完成的。
即,本发明的第一方面涉及一种家禽中的禽流感的预防方法,其特征在于,对家禽滴眼给药下述(A)中所述的灭活疫苗。
(A):含有灭活的禽流感病毒作为抗原、且不含油佐剂的灭活疫苗。
另外,本发明的第二方面涉及本发明第一方面所述的禽流感的预防方法,其中,上述灭活的禽流感病毒在保持病毒粒子的结构的状态下被灭活。
另外,本发明的第三方面涉及本发明第一或第二方面中任一项所述的禽流感的预防方法,其中,上述滴眼给药通过喷雾散布来进行。
另外,本发明的第四方面涉及本发明的第一~第三方面中任一项所述的禽流感的预防方法,其中,上述滴眼给药空出间隔进行2次以上。
发明效果
根据本发明,确认起到以下效果。
i)在本发明中,由于完全不需要使用油佐剂,因此,与接种了油佐剂的家禽相比,在食品安全上没有问题,能更早地出售。
ii)由于可通过利用喷雾等的散布进行滴眼给药,因此可同时对多只家禽给药疫苗。
由此,可大幅削减疫苗给药中的劳力,同时,不产生注射针的针刺事故、使用完的注射针的废弃的问题等。
iii)由于未使用活疫苗,因此,在接种个体内不会产生强毒性的病毒,安全性高。
如上所述,在本发明中,可将疫苗作为对禽流感的有效的防疫手段,可避免一直以来进行的大规模的处死。
附图说明
图1是表示在实施例1中,各处理组中的鸡的抗体效价的测定结果的图;
图2是表示在实施例2中,各处理组中的鸡的抗体效价的测定结果的图。
具体实施方式
本发明涉及一种家禽中的禽流感的预防方法,其特征在于,对家禽滴眼给药禽流感的灭活疫苗。
[灭活疫苗]
作为本发明中的禽流感的灭活疫苗,需要将灭活的禽流感病毒用作抗原。
在此,所谓灭活是指失去作为病毒的功能(感染和繁殖的功能等)的状态。
予以说明,作为本发明中的疫苗,从安全性的角度考虑,不含将具有作为病毒的功能的弱毒性病毒作为抗原的活疫苗。
作为用作抗原的灭活病毒的种类,可举出:在保持病毒粒子结构的状态下被灭活的灭活整个粒子病毒、破坏病毒粒子而灭活的灭活裂解病毒。
灭活的整个粒子病毒可通过β-丙内酯、甲醛等化学处理、加热处理、紫外线照射等获得。另外,灭活裂解病毒可通过醚等化学处理等获得。
在本发明中,为了得到充分的免疫原性,优选使用被灭活的整个粒子病毒。
予以说明,作为本发明中的灭活疫苗,不包括仅将来自病毒的蛋白质(例如,由病毒通过精制或基因重组技术制作的血凝素等)作为抗原的疫苗。
这是因为启示仅具有抗原性的蛋白质不具有充分的免疫原性。
在本发明中,作为禽流感病毒,以感染鸟类的甲型流感病毒为对象。
流感病毒为在表面刺突状地排列有血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的结构,可分类为包括H1N1型~H16N9型的144种亚型。
特别是在感染家禽时,以显示高病原性的高病原性禽流感病毒为对象。
[滴眼给药]
在本发明中,必须对家禽“滴眼给药”上述灭活疫苗。
在本发明中,在从眼睛的粘膜接种灭活病毒的情况下,可赋予较强的免疫。
在此,所谓滴眼给药是指向眼窝给药上述灭活疫苗,经由眼睛的粘膜导入灭活病毒的给药方法。
予以说明,以往,在家禽中,几乎不存在可从粘膜给药的灭活疫苗。这是因为,通常在从粘膜给药灭活疫苗的情况下,几乎不会引起免疫应答或仅引起微弱的免疫应答。
对于针对禽流感的灭活疫苗来说,也完全无法想象在不采用佐剂的情况下通过滴眼给药就能赋予强的免疫。
作为滴眼给药的具体方式,可以采取使用滴眼器等以点入通常的眼药的方式使灭活疫苗的药滴从上方落下的方法。
例如,可以通过向一只眼睛(优选两只眼睛)各给药一滴的方法进行。
另外,也能采取使用注射器、水枪状容器等将上述液体喷向眼睛的方法。
另外,在本发明中,优选可通过采取喷雾灭活疫苗的“喷雾散布”的方式一次对多只家禽滴眼给药。
在此,作为喷雾散布,可以使用喷洒器、喷雾器、喷雾枪等进行。
作为疫苗的给药量,优选在1次滴眼中给药按灭活病毒量换算为103HAU以上,优选103~105HAU,更优选104HAU左右的量。予以说明,所谓HAU是表示红细胞凝集效价(血凝单位)的单位。
另外,在本发明中,为了赋予充分的免疫,优选空出间隔而进行2次以上的给药。作为给药间隔,优选3周~2个月。
[疫苗的形态]
本发明中的疫苗只要为适于滴眼的形态(使用时为液体的状态),就包括任意形态的疫苗。例如可以采用眼药形式的液体安瓿、浓缩液等形态。
另外,即使为粉末、颗粒、胶囊状,只要使用时为液体就可以没有问题地使用。另外,也可以根据需要混合pH调节剂、抗生素等。
另外,作为本发明的疫苗,也可以采用混合了其它的病原菌或病毒的抗原的混合疫苗的形态。
[佐剂]
在本发明中,可以在完全不需要并用佐剂(免疫增强剂)的情况下赋予充分的免疫。
在此,所谓并用佐剂是指(i)原则上在疫苗中含有佐剂来进行给药的方式,但也包括(ii)分开给药疫苗和佐剂的方式。
由此,在本发明中,即使完全不使用以往在将禽流感的灭活疫苗注射到皮下或肌内时所必需的油佐剂,也能赋予对禽流感的免疫。
予以说明,油佐剂适于皮下或肌肉注射,但由于其粘性较高,因此不适于所有粘膜给药(经口、总排泄腔、经鼻、滴眼)。进而,由于油佐剂长期残留在体内,因此,从食品安全性方面考虑,接种家禽将导致在一段时间内无法出货。
予以说明,在本发明中,并不完全排除在疫苗给药中使用佐剂,只要是具有安全性高且粘性低等适于滴眼的性质的佐剂就可以使用。
[作为对象的家禽]
本发明为可对所有鸟类应用的技术,但具体地,作为对象的是家禽。
在此,作为家禽,可举出:鸡、鸭、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、珍珠鸡、火鸡等。特别是从在养鸡产业中的应用的观点考虑,可有效用于鸡。
另外,本发明的通过滴眼的灭活疫苗的给药,只要是禽流感病毒感染之前的个体,则无论是成鸟还是幼鸟都能赋予免疫。
但是,对于感染病毒后的个体,则无法获得疫苗效果。
实施例
下面,举出实施例说明本发明,但本发明的范围并不限定于这些实施例。
[制备例1]灭活病毒的制备
对10日龄的孵化蛋接种高病原性的禽流感病毒(A/鸡/Yamaguchi/07/2004,H5N1型),2天后回收尿浆膜腔液。
在尿浆膜腔液中,添加β-丙内酯至最终浓度为0.1%,在室温下放置4小时,将病毒灭活,进行30,000rpm、2hr的离心分离,回收沉渣。
通过蔗糖密度梯度离心法从得到的沉渣精制出灭活的整个粒子病毒。
与70%及25%的蔗糖溶液一起进行27,000rpm、2hr的离心,回收在两蔗糖溶液之间浓缩的灭活病毒。
得到的灭活的整个粒子病毒使用鸡红细胞测定红细胞凝集效价(HAU),作为疫苗抗原。
[实施例1]灭活病毒对鸡的滴眼给药
·“疫苗给药”
在成鸟的鸡组中,向眼窝滴眼给药上述制备的灭活病毒(104HAU)。予以说明,给药以4周间隔进行2次。
然后,在第2次给药4周后采集血清,测定抗体效价(红细胞凝集抑制效价:HIU)(试验组1)。
另外,作为阳性对照,对除了滴眼给药上述灭活病毒以外、还同时滴眼给药了佐剂(CpG ODN或霍乱毒素)的鸡组的抗体效价进行测定(试验组2,3)。
另外,作为阴性对照,也对未给药疫苗的鸡组的抗体效价进行了测定(试验组4)。测定结果示于表1及图1。
予以说明,在以下的表中,抗体效价的值记为“N.D.”的位置表示为检测限10HIU以下。另外,在以下的图中,对于测定值为检测限10HIU以下(N.D.)的鸡个体,为了方便绘图而显示为1HIU。
该结果表示,通过单独滴眼给药灭活禽流感病毒整个粒子(试验组1:本发明),可诱导产生该病毒的抗体。
另外,其抗体效价与并用佐剂的情况(试验组2,3:阳性对照)相比,显示为同等程度。
·“防御效果的验证”
对上述各试验组1~4的各鸡,使其暴露于致死量的高病原性禽流感病毒(A/鸡/Yamaguchi/07/2004,H5N1型)的攻击(受感染)下,观察2周。结果示于表1。
结果,在未给药疫苗的组(阴性对照),2天后鸡全部死亡。
与此相比,在仅滴眼给药灭活病毒的组(试验组1)中,即使经过2周后,也几乎未引起鸡发病。另外,关于发病的1例,也是从感染6天后发病,发病大大延迟。
另外,其防御效果与并用佐剂的组(试验组2,3)相比,显示为同等程度。
[表1]
[实施例2]滴眼给药与经鼻给药的对比
·“疫苗给药”
与实施例1同样地在成鸟的鸡组中向眼窝滴眼给药上述制备的灭活病毒(103HAU)。给药以4周间隔进行2次,在第2次给药4周后,采集血清,测定抗体效价(试验组5)。
另一方面,作为比较对照,在成鸟的鸡组中,向鸡的鼻腔给药(经鼻给药:粘膜给药的一种)上述制备的灭活病毒(103HAU)。给药以4周间隔进行2次,第2次给药4周后,采集血清,测定抗体效价(试验组6)。
结果示于表2和图2。
其结果显示,在单独经鼻给药该灭活病毒(试验组6:比较对照)的情况下,不能诱导产生对该病毒的抗体。
[表2]
[考察]
以上结果表明,通过将“禽流感病毒的灭活病毒”用作抗原、并且作为给药方法采用“滴眼给药”来进行,可以在未并用以往必需的佐剂(免疫增强剂)的情况下对鸡赋予强的免疫。
予以说明,由通过作为粘膜给药的一种的经鼻给药无法诱导抗体产生的事实表明,该免疫通过从眼睛的粘膜给药而高效地赋予。
产业实用性
可期待本发明成为对家禽中的禽流感极有效的防疫技术。
由此,通过将本发明用于家禽产业,可避免禽流感发生时的大规模的处死,可期待大大有助于减少家禽产业的经济损失。
另外,基于本发明,可期待作为对家禽的禽流感的预防及紧急接种的疫苗的商品化。
Claims (4)
1.家禽中的禽流感的预防方法,其特征在于,对家禽滴眼给药下述(A)中所述的灭活疫苗,
(A):含有灭活的禽流感病毒作为抗原、且不含油佐剂的灭活疫苗。
2.权利要求1所述的禽流感的预防方法,其中,将所述灭活的禽流感病毒在保持病毒粒子的结构的状态下灭活。
3.权利要求1或2任一项所述的禽流感的预防方法,其中,所述滴眼给药通过喷雾散布来进行。
4.权利要求1~3任一项所述的禽流感的预防方法,其中,所述滴眼给药空出间隔进行2次以上。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140212 |