CN103517703B

CN103517703B - 染色剂及其用途

Info

Publication number: CN103517703B
Application number: CN201280022797.4A
Authority: CN
Inventors: 广濑芳彦; 佐藤幸秀
Original assignee: Amano Enzyme Inc
Current assignee: Amano Enzyme Inc
Priority date: 2011-05-11
Filing date: 2012-05-10
Publication date: 2016-11-09
Anticipated expiration: 2032-05-10
Also published as: CN103517703A; JP5972262B2; EP2708223B1; JP2016166243A; EP2708223A4; US20140068875A1; WO2012153791A1; JPWO2012153791A1; US8740994B2; JP6146884B2; EP2708223A1

Abstract

本发明的课题在于，提供利用氧化酶的同时可得到优异的染色效果的染色方法、以及用于它的染色剂。提供一种染色剂，上述染色剂包含通过胺类化学修饰对选自以EC1.10.3.1编号的酶、以EC1.10.3.2编号的酶、以EC1.3.3.5编号的酶、以EC1.10.3.4编号的酶、以EC1.10.3.3编号的酶和以EC1.14.18.1编号的酶中的酶附加正电荷而得到的修饰酶。此外，提供使用该染色剂的染色法。

Description

染色剂及其用途

技术领域

本发明涉及染色剂以及它的用途。详细而言，涉及使用经修饰的氧化酶的染色剂以及染色方法。本申请基于2011年5月11日申请的日本专利申请第2011-106532号、2011年7月12日申请的日本专利申请第2011-154209号、以及2011年12月1日申请的日本专利申请第2011-263158号主张优先权，这些专利申请的全部内容通过参照而引用。

背景技术

利用苯二胺类、氨基苯酚类等氧化染料的染色法活用能够染色各种各样的色调、持续期间长、进而染色时间短等优点，尤其频用于人毛发等角蛋白纤维的染色。以往，氧化染料的发色使用过氧化氢。然而，过氧化氢的刺激性强，它的使用导致毛发和头皮等受到损伤。为了克服这种问题，尝试使用氧化酶代替过氧化氢(例如，参照专利文献1～3)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本专利第3943133号公报

专利文献2:日本特表2000-502757号公报

专利文献3:日本特开2001-139441号公报

发明内容

对于以往报告的使用氧化酶的染色方法，未获得充分的染色效果，实用化还有很大差距。因此，本发明的课题在于，提供一种利用氧化酶、同时可得到优异的染色效果的染色方法、以及用于它的染色剂。

本发明的发明人等考虑在使用氧化酶的染色方法中酶对材料的亲和性尤其重要，使用作为氧化酶之一的胆红素氧化酶进行研究。以人毛发的染色为例子，以染色效果的提高为目标反复研究，其结果表示，若使用通过胺类化学修饰赋予正电荷的胆红素氧化酶(称为修饰BO或PMO)，则染色效果格外地提高。此外，即使在比较低的pH，也看到良好的染色性。进而，明确了利用修饰BO的染色的抗洗发剂性优异。通过这样的本发明的发明人等的研究，明确了通过胺类化学修饰赋予正电荷这类的修饰有效地发挥高染色效果。另外，在使用修饰酶的染色中，可以得到与使用未修饰酶时不同的特殊的色调。该事实也可以说是在寻求使用修饰酶的染色方法和染色剂的应用上重要且有意义的发现。

进一步研究的结果判明，即使在以安全性更高的吲哚化合物为发色基质的情况下，修饰酶也提高染色效果。而且，利用修饰酶的染色的抗洗发剂性优异。此外，也确认了并用2种以上的吲哚化合物能够调节染色的色彩(色调)。

以下所示的发明基于上述成果和发现。

[1]一种染色剂，包含通过胺类的化学修饰对以下的酶附加正电荷而得到的修饰酶，所述酶是选自以EC 1.10.3.1编号的酶、以EC 1.10.3.2编号的酶、以EC 1.3.3.5编号的酶、以EC 1.10.3.4编号的酶、以EC 1.10.3.3编号的酶和以EC 1.14.18.1编号的酶中的酶。

[2]如[1]所述的染色剂，其特征在于，将氧化染料组合而成。

[3]如[2]所述的染色剂，是含有上述氧化染料和上述修饰酶的一剂型。

[4]如[2]所述的染色剂，是由含有上述氧化染料的第1成分和含有上述修饰酶的第2成分形成的二剂型。

[5]如[1]～[4]中的任一项所述的染色剂，用于角蛋白纤维的染色。

[6]如[5]所述的染色剂，其中，上述角蛋白纤维为人毛发。

[7]如[2]～[6]中的任一项所述的染色剂，其中，上述氧化染料是选自苯二胺、氨基苯酚、甲酚、甲苯二胺、萘酚、吲哚、吲哚啉和它们的衍生物中的一种以上化合物。

[8]如[2]～[6]中的任一项所述的染色剂，其中，上述氧化染料是选自对苯二胺、对氨基苯酚、对甲苯二胺、4-氨基吲哚、5-氨基吲哚、6-氨基吲哚、4-羟基吲哚和5,6-二羟基吲哚中的一种以上化合物。

[9]如[1]～[8]中的任一项所述的染色剂，其中，上述酶为胆红素氧化酶。

[10]一种染色方法，包含用[1]～[9]中的任一项所述的染色剂将纤维或纤维加工品进行处理的步骤。

[11]如[10]所述的染色方法，其中，上述纤维为角蛋白纤维。

[12]如[11]所述的染色方法，其中，上述角蛋白纤维为人毛发。

[13]如[12]所述的染色方法，其中，在pH为7.0～8.0的条件下进行上述处理。

附图说明

图1是关于修饰BO的等电聚焦电泳的结果。M为分子量标记。

图2是染发试验1的结果。左为色差(ΔE*ab)的比较，右为红度(a*)的比较。

图3是染发试验2(200U/100g)的结果。左为色差(ΔE*ab)的比较，右为红度(a*)的比较。

图4是染发试验3(pH8.0)的结果。左为色差(ΔE*ab)的比较，右为红度(a*)的比较。

图5是染发试验4(pH9.0)的结果。左为色差(ΔE*ab)的比较，右为红度(a*))的比较。

图6是各种修饰BO的基质特异性(pH9.0，25U/100g)的比较。比较使用不同发色基质(染色基质)时的染色性。PPD：对苯二胺，PAP：对氨基苯酚，PTD：对甲苯二胺

图7是关于各种修饰BO的等电聚焦电泳的结果。泳道(Lane)1：未修饰BO，Lane 2：二胺(1,4-丁二胺)修饰BO，Lane 3：三胺(3,3'-二氨基二丙胺)修饰BO，Lane 4：四胺(硫酸胍基丁胺)修饰BO，Lane M：分子量标记。

图8是利用各种修饰BO的染色效果的比较(pH9.0)。左为色差(ΔE*ab)的比较，右为红度(a*)的比较。

图9是利用各种修饰BO的染色效果的比较(pH9.0)。比较各种修饰BO染色后的毛发而示出。酶量统一为25U/100g。数值为与白发的色差(ΔE*ab)(n＝3)。值越大表示染色效果越高。

图10是抗洗发剂试验的结果。使用洗涤后的毛发的色差相对于洗涤前的毛发的色差的(％)比较抗洗发剂性。

图11是抗洗发剂试验的结果。对各种修饰BO比较洗涤前和洗涤后的毛发而示出。应予说明，酶量统一为25U/100g。

图12是以吲哚化合物为发色基质的染色试验的结果。BO、PMO是用pH7的条件下、H₂O₂是用pH9的条件下进行染色时的值进行比较。BO：未修饰酶，PMO：修饰酶，H₂O₂：过氧化氢，4AI：4-氨基吲哚，5AI:5-氨基吲哚。

图13是抗洗发剂试验的结果。以吲哚化合物作为发色基质进行染色后进行洗涤。对BO(未修饰酶)、PMO(修饰酶)和H₂O₂(过氧化氢)比较·评价抗洗发剂性(牢固度)。BO、PMO是用pH7的条件下、H₂O₂是用pH9的条件下染色时的值进行比较。A：以4-氨基吲哚为发色基质时的结果，B：以5-氨基吲哚为发色基质时的结果，C：以4-氨基吲哚和5-氨基吲哚为发色基质时的结果。

图14是以吲哚化合物为发色基质的染色试验的结果。研究酶浓度与染色效果的关系。BO、PMO是用pH7的条件下、H₂O₂是用pH9的条件下染色时的值进行比较。4AI：4-氨基吲哚，5AI:5-氨基吲哚。

图15是以吲哚化合物为发色基质的染色试验的结果。研究吲哚化合物的组合与染色效果的关系。BO、PMO是用pH7的条件下、H₂O₂是用pH9的条件下染色时的值进行比较。4AI：4-氨基吲哚，5AI:5-氨基吲哚，6AI：6-氨基吲哚，4HI：4-羟基吲哚。

图16是以吲哚化合物为发色基质的染色试验的结果(pH7.0)。将不同的吲哚化合物以各种各样的组合并用，研究色彩的变化。4AI：4-氨基吲哚，5AI:5-氨基吲哚，6AI：6-氨基吲哚，4HI：4-羟基吲哚。-：无酶，+：有酶(添加25U/100g的PMO)。

图17是抗洗发剂试验的结果。将不同的吲哚化合物以各种各样的组合并用，比较抗洗发剂性。A：以5-氨基吲哚为发色基质时的结果，B：并用4-氨基吲哚和5-氨基吲哚作为发色基质时的结果，C：各组合之间的比较(添加25U/100g的PMO)。4AI：4-氨基吲哚，5AI:5-氨基吲哚，6AI：6-氨基吲哚，4HI：4-羟基吲哚。

图18是以吲哚化合物5,6-二羟基吲哚为发色基质进行染色试验的结果。对于以pH7.0的条件染色时(左)和以pH9.0的条件染色时(右)，在过氧化氢(H₂O₂)、BO(未修饰酶)和PMO(修饰酶)之间对染色结果(色差ΔE*ab)进行比较。

图19是以吲哚化合物5,6-二羟基吲哚为发色基质的染色试验的结果。对于以pH7.0的条件染色时(左)和以pH9.0的条件染色时(右)，对酶量和染色效果(色差ΔE*ab)的关系在BO(未修饰酶)和PMO(修饰酶)之间进行比较。

图20是以吲哚化合物5,6-二羟基吲哚为发色基质的染色试验的结果。使用各种氧化剂(BO：未修饰酶，PMO：修饰酶，H₂O₂：过氧化氢)将毛发在pH7.0染色，进行比较。对照(Control)是处理前的毛发。BO和PMO添加了25U/100g。此外，H₂O₂添加了3％(终浓度)。数值是与白发的色差(ΔE*ab)。

具体实施方式

1.染色剂

本发明的第1方面涉及用于纤维或纤维加工品的染色的染色剂。本发明的染色剂利用于例如由角蛋白、棉、二乙酸酯、亚麻、亚麻布(リンネル)、莱赛尔纤维(lyocell)、聚丙烯酸、聚酰胺、聚酯、苎麻、人造丝、天丝(TENCEL，注册商标)或三乙酸酯形成的纤维、纱、布、织物或衣类等的染色。本发明的染色剂包含施行了规定的修饰的氧化酶(以下称为“修饰酶”)。本发明的染色剂对氧化染料起作用，发挥所需的染色效果。因此，有代表性的是将本发明的染色剂与氧化染料组合使用。在本说明书中“组合使用”或“组合而成”的表述是指将氧化染料和修饰酶并用。作为一个方式，本发明的染色剂以混合有氧化染料和修饰酶的组合物的形式被提供。该方式的染色剂称为一剂型染色剂。另一方面，也可以以由包含氧化染料的第1成分和包含修饰酶的第2成分形成的成套的形态提供本发明的染色剂。该方式的染色剂称为二剂型染色剂。二剂型染色剂的情况下，各成分是以收容于各自的容器或被分隔收容的状态被提供的，使用时将两个成分混合。另外，可以说从为简单的构成、可以实现更简便的使用方法方面，一剂型染色剂胜于二剂型染色剂。

(1)染料

在本说明书中用语“氧化染料”是指发色或染色中需要氧化反应的染料。氧化染料包含与它自身进行氧化聚合而发色的“染料前体”和通过与染料前体聚合，呈现特有的色调的“染料助剂(coupler)”。根据本发明的染色剂的用途，采用适当的氧化染料。氧化染料的例子可以举出吖啶、蒽、薁、拜恩拜恩(ベンベン，benbene)、苯并呋喃、苯并噻唑、苯并噻唑啉、咔啉、咔唑、噌啉、苯并二氢吡喃、苯并吡喃、富烯、呋喃、咪唑、吲唑、茚、吲哚、吲哚啉、中氮茚、异噻唑、异喹啉、异唑、萘、萘撑、萘基吡啶、唑、苝、菲、吩嗪、2,3-二氮杂萘、蝶啶、嘌呤、吡喃、吡唑、芘、哒嗪、哒酮、吡啶、嘧啶、吡咯、喹唑啉、喹啉、喹喔啉、磺酰、噻吩、三嗪或者它们的衍生物或取代物、3,4-二乙氧基苯胺、2-甲氧基对苯二胺、1-氨基-4-b-甲氧基乙基氨基-苯(N-b-甲氧基乙基-对苯二胺)、1-氨基-4-双-(b-羟乙基)-氨基苯(N,N-双-(b-羟乙基)-对苯二胺、2-甲基-1，3-二氨基-苯(2,6-二氨基甲苯)、2,4-二氨基甲苯、2,6-二氨基甲苯、1-氨基-4-磺酸根-苯、1-N-甲磺酸根-4-氨基苯、1-甲基-2-羟基-4-氨基苯(3-氨基邻甲酚)、1-甲基-2-羟基-4-b-羟乙基氨基苯(2-羟基-4-b-羟乙基氨基-甲苯)、1-羟基-4-甲氨基-苯(对甲氨基苯酚)、1-甲氧基-2,4-二氨基-苯(2,4-二氨基苯甲醚)、1-乙氧基-2,3-二氨基-苯(2,4-二氨基苯乙醚)、1-b-羟乙基氧基-2,4-二氨基-苯(2,4-二氨基苯氧基乙醇)、1,3-二羟基-2-甲基苯(2-甲基间苯二酚)、1,2,4-三羟基苯、1,2,4-三羟基-5-甲基苯(2,4,5-三羟基甲苯)、2,3,5-三羟基甲苯、4,8-二磺酸根-1-萘酚、3-磺酸根-6-氨基-1-萘酚(J酸)、6,8-二磺酸根-2-萘酚、1,4-苯二胺、2,5-二氨基甲苯、2-氯-1,4-苯二胺、2-氨基苯酚、3-氨基苯酚、4-氨基苯酚、1,3-苯二胺、1-萘酚、2-萘酚、4-氯间苯二酚、1,2,3-苯三酚(连苯三酚)、1,3-苯二酚(间苯二酚)、1,2-苯二酚(邻苯二酚)、2-羟基-肉桂酸、3-羟基-肉桂酸、4-羟基-肉桂酸、2,3-二氨基苯甲酸、2,4-二氨基苯甲酸、3,4-二氨基苯甲酸、3,5-二氨基苯甲酸、2,3-二氨基苯甲酸甲酯、2,3-二氨基苯甲酸乙酯、2,3-二氨基苯甲酸异丙酯、2,4-二氨基苯甲酸甲酯、2,4-二氨基苯甲酸乙酯、2,4-二氨基苯甲酸异丙酯、3,4-二氨基苯甲酸甲酯、3,4-二氨基苯甲酸乙酯、3,4-二氨基苯甲酸异丙酯、3,5-二氨基苯甲酸甲酯、3,5-二氨基苯甲酸乙酯、3,5-二氨基苯甲酸异丙酯、N,N-二甲基-3,4-二氨基苯甲酰胺、N,N-二乙基-3,4-二氨基苯甲酰胺、N,N-二丙基-3,4-二氨基苯甲酰胺、N,N-二丁基-3,4-二氨基苯甲酰胺、4-氯-1-萘酚、N-苯基对苯二胺、3,4-二羟基苯甲醛、吡咯、吡咯-2-氨基咪唑、1,2,3-三唑、苯并三唑、苯并咪唑、咪唑、吲哚、1-氨基-8-羟基萘-4-磺酸(S酸)、4,5-二羟基萘-2,7-二磺酸(变色酸)、邻氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸(PABA)、2-氨基-8-萘酚-6-磺酸(咖马酸)、5-氨基-1-萘酚-3-磺酸(M酸)、2-萘酚-3,6-二磺酸(R酸)、1-氨基-8-萘酚-2,4-二磺酸(芝加哥酸)、1-萘酚-4-磺酸(奈温酸)、迫位酸、N-苯甲酰基J酸、N-苯基J酸、1,7-克雷伯氏酸、1,6-克雷伯氏酸、2-羟基-3-萘甲酸、萘酚AS、分散黑9、萘酚AS OL、萘酚AS PH、萘酚AS KB、萘酚AS BS、萘酚AS D、萘酚AS B1、媒染黑3CI 14640(铬蓝黑B)、4-氨基-5-羟基-2,6-萘二磺酸(H酸)、苏丹红7B(CI 11285)、氢醌、扁桃酸、三聚氰胺、邻硝基苯甲醛、1,5-二羟基萘、2,6-二羟基萘、2,3-二羟基萘、苄基咪唑、2,3-二氨基萘、1,5-二氨基萘、1,8-二氨基萘、水杨酸、3-氨基水杨酸、4-氨基水杨酸、5-氨基水杨酸、3-氨基水杨酸甲酯、4-氨基水杨酸甲酯、5-氨基水杨酸甲酯、3-氨基水杨酸乙酯、4-氨基水杨酸乙酯、5-氨基水杨酸乙酯、3-氨基水杨酸丙酯、4-氨基水杨酸丙酯、5-氨基水杨酸丙酯、水杨酰胺、4-氨基苯硫酚、4-羟基苯硫酚、苯胺、4,4’-二氨基二苯胺硫酸盐、4-氨基偶氮苯、4-硝基苯胺、N,N-二甲基-1,4-苯二胺、N,N-二乙基-1,4-苯二胺、分散橙3、分散黄9、分散蓝1、N-苯基-1,2-苯二胺、6-氨基-2-萘酚、3-氨基-2-萘酚、5-氨基-1-萘酚、1,2-苯二胺、2-氨基嘧啶、4-氨基喹哪啶、2-硝基苯胺、3-硝基苯胺、2-氯苯胺、3-氯苯胺、4-氯苯胺、4-(苯基偶氮)间苯二酚(苏丹橙G，CI11920)、苏丹红B、CI 26110、苏丹红B、CI 26050、4’-氨基乙酰苯胺、茜素、1-蒽胺(1-氨基蒽)、1-氨基蒽醌、蒽醌、2,6-二羟基蒽醌(2,6-二羟基蒽醌)、1,5-二羟基蒽醌(蒽绛酚)、3-氨基吡啶(烟酰胺)、吡啶-3-羧酸(烟酸)、媒染黄1、茜素黄GG、GI 14025、考马斯蓝灰、酸性黑48、CI 65005、宫殿坚牢黑WAN(Palantine Fast Black WAN)、安德黑52(AndBlack 52)、CI 15711、宫殿铬黑6BN、CI 15705、羊毛铬蓝黑R、媒染黑11、羊毛铬黑T、萘酚蓝黑、酸性黑1、CI 20470、1,4-二羟基蒽醌(醌茜)、4-羟基香豆素、伞形酮，7-羟基香豆素、七叶亭6,7-二羟基香豆素、香豆素、铬变素2B酸性红176、CI 1657、铬变素2B酸性红29、CI16570、铬变素FB酸性红14、CI 14720、2,6-二羟基异烟酸、柠嗪酸、2,5-二氯苯胺、2-氨基-4-氯甲苯、2-硝基-4-氯苯胺、2-甲氧基-4-硝基苯胺、对溴苯酚。优选为选自苯二胺、氨基苯酚、甲酚、苯酚、萘酚、吲哚或吲哚啉中的芳香族化合物、或它们的衍生物。这里，衍生物是被1或多个官能团或取代基取代的化合物。这里可导入的官能团或取代基选自卤素；磺基；磺酸根；磺氨基；磺酰基；氨基；酰胺；硝基；偶氮；亚氨基；羧基；氰基；甲酰基；羟基；卤代羰基；氨基甲酰基；脒基；膦酸根；膦酰基；C1-18烷基；C1-18烯基；C1-18炔基；C1-18烷氧基；C1-18氧羰基；C1-18氧代烷基；C1-18烷基硫基；C1-18烷基磺酰基；C1-18烷基亚氨基或氨基中，这里各C1-18烷基、C1-18烯基和C1-18炔基可以由任意的上述官能团或取代基进行一、二或多取代。

本发明的染色剂对角蛋白纤维(人的毛发、牛、马、羊、山羊、羊驼、安哥拉兔等的毛等)的染色尤其有用。作为用于角蛋白纤维的染色，构成本发明的染色剂时优选的氧化染料的例子可以举出对苯二胺类、间苯二胺类、邻苯二胺类、对氨基苯酚类、对氨基苯酚类、邻氨基苯酚类、吡啶衍生物、嘧啶衍生物、吡唑衍生物、间二苯酚类、萘酚类、吲哚啉衍生物、吲哚衍生物以及它们的酸加成盐(作为酸加成盐，例如，可以使用盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、或乙酸盐等。)、吲哚啉化合物、吲哚化合物。这些氧化染料的具体例为对苯二胺、5-氨基邻甲酚、邻氨基苯酚、间氨基苯酚、对氨基苯酚、2,6-二氨基吡啶、5-(2-羟乙基氨基)-2-甲苯二胺、N,N-双(β-羟基)-对苯二胺硫酸盐、对硝基-邻苯二胺、对硝基-2’,4’-二氨基偶氮苯·硫酸钠、甲苯-2,5-二胺、5-氨基邻甲酚·硫酸盐、对氨基苯酚·硫酸盐、邻氯-对苯二胺·硫酸盐、4,4’-二氨基二苯基胺·硫酸盐、对甲氨基苯酚·硫酸盐、对苯二胺·硫酸盐、间苯二胺·硫酸盐、甲苯-2,5-二胺·硫酸盐、2,4-二氨基苯氧基乙醇·盐酸盐、甲苯-2,5-二胺·盐酸盐、间苯二胺·盐酸盐、2,4-二氨基苯酚·盐酸盐、3,3’-亚氨基二苯酚、对苯二胺·盐酸盐、N-苯基-对苯二胺·盐酸盐、N-苯基-对苯二胺·乙酸盐、1,5-二羟基萘、苯亚甲基-3,4-二胺、对甲氨基苯酚、N,N’-双(4-氨苯基)-2,5-二氨基-1,4-醌二亚胺、邻氨基苯酚·硫酸盐、2,4-二氨基苯酚·硫酸盐、间氨基苯酚·硫酸盐、对甲苯二胺、吲哚啉、5,6-二羟基吲哚啉、N-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、N-乙基-5,6-二羟基吲哚啉、N-丁基-5,6-二羟基吲哚啉、4-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基-7-甲氧基吲哚啉、6,7-二羟基吲哚啉、4,5-二羟基吲哚啉、4-甲氧基-6-羟基吲哚啉、N-己基-5,6-二羟基吲哚啉、2-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、3-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、4-羟基吲哚啉、2,3-二甲基-5,6-二羟基吲哚啉、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚啉、2-甲基-5-羟基-6-β-羟乙基吲哚啉、4-羟丙基吲哚啉、2-羟基-3-甲氧基吲哚啉、6-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基吲哚啉、5-羟基吲哚啉、7-羟基吲哚啉、7-氨基吲哚啉、5-氨基吲哚啉、4-氨基吲哚啉、5,6-二羟基吲哚啉羧酸、1-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、4,5-二羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚、6,7-二羟基吲哚、N-甲基-5,6-二羟基吲哚、N-乙基-5,6-二羟基吲哚、N-己基-5,6-二羟基吲哚、2-甲基-5,6-二羟基吲哚、3-甲基-5,6-二羟基吲哚、4-羟基吲哚、2,3-二甲基-5,6-二羟基吲哚、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚、2-甲基-5-羟基-6-β-羟乙基吲哚、4-羟丙基吲哚、2-羟基-3-甲氧基吲哚、4-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基-7-甲氧基吲哚、6-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基吲哚、5-羟基吲哚、7-羟基吲哚、7-氨基吲哚、6-氨基吲哚、5-氨基吲哚、4-氨基吲哚、5,6-二羟基吲哚羧酸、1-甲基-5,6-二羟基吲哚。

本发明的染色剂使用1种或2种以上的氧化染料。2种以上的氧化染料的并用对例如染色效果的提高、色彩(色调)的调节等有效。尤其，构成用于角蛋白纤维的染色时，可以并用分类于染料前体的氧化染料(对苯二胺、邻氨基苯酚、对氨基苯酚、对甲苯二胺、4-氨基吲哚、5-氨基吲哚、6-氨基吲哚、4-羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚等)和分类于染料助剂的氧化染料(间苯二胺、间氨基苯酚、间二苯酚、萘酚、吲哚、吲哚啉、吲唑等)。

氧化染料的配合量没有特别的限定，可以考虑使用的氧化染料的特性、用途等而决定配合量。一剂型染色剂的情况下，可以以相对于染色剂总量例如为0.01～20重量％、优选为0.05～10重量％、更优选为0.01～1重量％的方式配合氧化染料。二剂型染色剂的情况下，可以以相对于含有氧化染料的第1成分总量例如为0.01～20重量％、优选为0.05～10重量％、更优选为0.01～1重量％的方式配合氧化染料。

作为有助于染色的成分，除氧化染料以外，可以配合直接染料。通过配合直接染料，可以提高染色效果，或调节染色的色调。直接染料的例子，可以举出2-氨基-4-硝基苯酚、2-氨基-5-硝基苯酚、1-氨基-4-甲氨基蒽醌、硝基-对苯二胺·盐酸盐、1,4-二氨基蒽醌、硝基-对苯二胺、苦氨酸、苦氨酸钠、2-氨基-5-硝基苯酚·硫酸盐、间苯二酚、硝基-对苯二胺·硫酸盐、对硝基-邻苯二胺·硫酸盐、对硝基-间苯二胺·硫酸盐、天然橙6(2-羟基-1,4-萘醌)、酸性橙8、酸性紫17、雷玛素艳蓝、伊文思蓝、酸性蓝80。

直接染料的配合量也没有特别的限定。一剂型染色剂的情况下，可以以相对于染色剂总量例如为0.01～20重量％的方式配合直接染料。二剂型染色剂的情况下，对含有氧化染料的第1成分和/或含有修饰酶的第2成分配合直接染料。这时的配合量相对于第1成分总量为例如0.01～20重量％，相对于第2成分总量为例如0.01～20重量％。另外，与氧化染料同样，直接染料也能够并用2种以上。

(2)修饰酶

在本发明中，使用与天然状态(Native)相比，持有的正电荷增加的氧化酶。换句话说，使用以附加正电荷的方式进行修饰的氧化酶。对氧化酶可以使用儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、漆酶(EC 1.10.3.2)、胆红素氧化酶(EC1.3.3.5)、邻氨基苯酚氧化酶(EC1.10.3.4)、抗坏血酸氧化酶(EC 1.10.3.3)或一元酚氧化酶(EC 1.14.18.1)。可以使用来源于植物(例如，来源于漆树科(Anacardiacea)、来源于檬果(Magnifera indica)、来源于加州胡椒树(Schinusmolle)、来源于帖木李(Pleiogynium timoriense)、来源于罗汉松(Podocarpacea))、来源于动物或来源于细菌或真菌(例如，来源于曲霉属(Aspergillus)、来源于葡萄孢属(Botrytis)、来源于金钱菌属(Collybia)、来源于层孔菌属(Fomes)、来源于香菇属(Lentinus)、来源于毁丝霉属(Myceliophthora)、来源于脉孢菌属(Neurospora)、来源于侧耳属(Pleurotus)、来源于柄孢壳菌属(Podospora)、来源于柱顶孢霉属(Scytalidium)、来源于栓菌属(Trametes)、来源于丝核菌属(Rhizoctonia)、来源于腐质霉高温变种(H.thermoidea)、来源于短孢腐质霉(H.brevispora))的酶。此外，也可以使用利用基因重组技术生产的酶(重组酶)。

在本发明优选的一个方式中，采用胆红素氧化酶作为氧化酶。胆红素氧化酶可以使用例如来源于属于漆斑菌属、鬼伞属、青霉菌属、芽孢杆菌属的微生物的胆红素氧化酶。作为漆斑菌属菌，可以举出疣孢漆斑菌MT-1、FERM-BP 653(参照Agricultural andBiological Chemistry，第45卷，2383-2384页(1981年))、疣孢漆斑菌IFO 6113、疣孢漆斑菌IFO 6133、疣孢漆斑菌IFO 6351、疣孢漆斑菌IFO 9056、漆斑菌(Myrothecium cinctum)IFO 9950、露湿漆斑菌IFO 9531等保存菌株。此外，作为鬼伞属菌，可以举出灰盖鬼伞IFO8371、Coprinus lagopides IFO 30120等保存菌株。作为青霉菌属菌，可以举出微紫青霉菌(参照日本特开昭63-309187)。作为芽孢杆菌属菌，可以举出地衣芽孢杆菌(参照日本特开昭61-209587)。将这些菌株通过常用方法进行液体培养或固体培养，通过从该培养液进行萃取、盐析、透析、离子交换、凝胶过滤等可以得到酶胆红素氧化酶的精制标品。另一方面，已知来源于裂褶菌(参照日本特开昭59-135886)、来源于菊科植物(参照日本特开昭62-285782)、来源于苜蓿(参照日本特开平6-319536)的胆红素氧化酶；重组体(参照日本特开平5-199882)，也可以使用这些胆红素氧化酶。此外，胆红素氧化酶也在市场上销售(AMANOEnzyme株式会社、TAKARA BIO株式会社、旭化成株式会社、Sigma-Aldrich公司等)，也可以使用该市售品。

本发明中使用的酶通过使用胺类(二胺或多胺(三胺、四胺等))进行化学修饰，从而附加正电荷(以下，将施行了该修饰的酶称为“修饰酶”)。换句话说，通过氨基的附加而增大正电荷。这种修饰方法自身是周知的，例如，可以参考蛋白质的化学修饰法<上>,<下>(学会出版中心，大野等著)、蛋白质杂交(共立出版，稻田编)等。可利用于化学修饰的胺类的例子，可以举出正丁胺、乙二胺、腐胺、3,3'-二氨基二丙胺、胍丁胺、N,N'-双(3-氨基丙基)-1,4-丁二胺、双(六亚甲基)三胺、1,5-二氨基戊烷、二乙烯三胺、精胺、亚精胺或它们的盐等。

通过将构成酶的氨基酸残基的一部分取代为其它氨基酸残基，也能够附加正电荷。具体而言，使用基因工程的方法，在构成氨基酸残基之中，可以将酸性氨基酸残基(例如天冬氨酸、谷氨酸)取代为中性氨基酸(例如谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸)或碱性氨基酸(精氨酸、组氨酸、赖氨酸)。对这种氨基酸残基的取代，可以利用定点突变导入法(MolecularCloning,Third Edition,Chapter 13,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NewYork)、随机突变导入法(Molecular Cloning,Third Edition,Chapter 13,Cold SpringHarbor Laboratory Press,New York)。

为了增多正电荷的附加量，优选的是，对2以上的氨基酸残基进行如上述氨基酸残基的取代。但是，若取代的氨基酸残基的数过多，则有可能酶活性受到影响，因此，虽然也取决于修饰对象的酶，但对例如2～10个左右的氨基酸残基施行取代即可。

在取代的氨基酸残基的选定·确定中，可以以是否影响酶活性为指标。即，可以利用立体结构分析的结果等，在确定不影响(或不太可能影响)酶活性的氨基酸残基的基础上施行取代。另一方面，优选在立体结构上以位于表面的氨基酸残基为取代的目标。这里，若示出利用氨基酸残基取代的修饰的具体例，在由序列号1的氨基酸序列形成的胆红素氧化酶的情况下，优选的取代候补为第91号的Asp、第96号的Asp、第126号的Glu、第151号的Glu、第181号的Glu、第233号的Glu、第280号的Asp、第323号的Asp、第366号的Asp、第376号的Asp、第408号的Asp、第516号的Asp、第529号的Glu、第538号的Glu。因此，可以将它们之中的一种或二种以上取代为碱性氨基酸。

所需的修饰是否达成可以通过例如在修饰后的酶和修饰前的酶(代表性的为天然的酶)之间比较等电点(pI)进行判断。即，若通过等电聚焦电泳等将等电点进行比较的结果是修饰后的酶比修饰前的酶等电点高，则可以判断进行了所需的修饰(正电荷的附加)。另一方面，附加氨基时，也可以通过氨基的定量判断修饰的有无、程度等。

也可以使用除上述修饰以外还施行了其它修饰的酶。作为这里的“其它修饰”，可以举出利用水溶性高分子物质(聚亚烷基二醇、聚乙烯醇、多糖类、部分水解或部分半酯化的苯乙烯和马来酸酐的共聚物、部分水解或部分半酯化的二乙烯基醚和马来酸酐的共聚物、部分水解或部分半酯化的丙烯酸和马来酸酐的共聚物、聚蔗糖、聚氨基酸、白蛋白等)的化学修饰(日本特开昭64-60375)、利用丙烯酰基的修饰(日本特开2009-044997)等。“其它修饰”的目的没有特别的限定。例如，以酶的稳定性、活性和/或保存性的提高，或基质特异性的改变等为目的进行“其它修饰”。

(3)其它成分

本发明的染色剂除上述各成分以外，能够含有追加的成分(任意成分)。作为任意成分，可以例示碱性化合物、硫代乳酸、亚硫酸钠、N-乙酰基-L-半胱氨酸等还原剂，表面活性剂、油性成分、有机硅类、增稠剂、溶剂、水、螯合剂、氨基酸、各种盐类，保湿剂、防腐剂、抗紫外线剂、醇、多元醇、香料等。

构成本发明的染色剂用于角蛋白纤维的染色时，可以使其含有碱性化合物。根据含有碱性化合物的染色剂，应用它时，促进角蛋白纤维的溶胀，提高染色效果。碱性化合物的配合量以可以实现使用时所需的pH(例如pH7.0～10.0)的方式进行设定。一剂型染色剂的情况下的配合量的例子是相对于染色剂总量为0.01～20重量％。另一方面，二剂型染色剂的情况下，原则上，使含有氧化染料的第1成分中含有碱性化合物，作为配合量是例如相对于第1成分总量为0.01～20重量％(但是，可以不使第1成分含有碱性化合物而是使第2成分含有碱性化合物，或也可以使第1成分和第2成分两者含有碱性化合物)。另外，作为碱性化合物的具体例，可以举出单乙醇胺、单异丙醇胺、三乙醇胺、二乙醇胺等胺化合物；氨、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸铵、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾等无机化合物等。

本发明的染色剂制备为糊(膏)状、气溶胶状、凝胶(Gel)状、液状、泡状等形态。在由第1成分(含有氧化染料)和第2成分(含有修饰酶)形成的二剂型的情况下，第1成分和第2成分的形态也可以不同。

2.染色方法

本发明的第2方面涉及使用本发明的染色剂的染色方法。在本发明的染色方法中，在存在氧的条件下(即，氧气氛下)，用本发明的染色剂处理纤维或纤维加工品(以下统称为“被染色材料”)。一剂型的染色剂的情况下，例如，将染色剂根据需要进行稀释后，涂布于被染色材料。或将被染色材料浸渍于溶解有染色剂的溶液中。

二剂型的染色剂的情况下，例如，将第1成分和第2成分混合后(可以根据需要进行稀释，或溶解于溶剂)，涂布于被染色材料。也可以将一者(第1成分或第2成分)涂布于被染色材料后，将另一者涂布于被染色材料，在被染色材料的表面等使得两成分混合。此外，也可以将被染色材料浸渍于溶解有第1成分和第2成分的溶液中。

通过以上的操作形成染色剂与被染色材料接触的状态。然后，维持该接触状态所需染色所需的时间。此时，为了提高染色效果或为了快速或有效地染色，也可以保温或加温。被染色材料为人毛发的情况下，即，以用本发明的染色方法将人毛发染色的情况举例，维持接触状态例如约10分钟～2小时，优选为约20分钟～1小时。

处理时的pH条件依赖于使用的染色剂。但是，也能够另外使用pH调节剂调节pH。处理时的pH例如为pH7.0～9.0。如下述实施例所示，使用附加正电荷的修饰胆红素氧化酶时，即使在比较低的pH条件下也示出高染色效果。基于该发现，在本发明的一个方式中，在pH7.0～ph8.0的条件下进行处理。通过采用该条件，可以减低伴随着染色的被染色材料的损伤。该条件尤其在染色人毛发时有效，也能够减低人毛发的损伤和对皮肤(头皮)的刺激。

上述处理后，通常洗涤被染色材料，最后使其干燥。洗涤可以使用例如水、洗剂等。此外，作为干燥的方法，可以例示风干(自然干燥)、热风干燥、旋转干燥、抽吸干燥、桶干燥等。

在本发明的染色方法中，通过修饰酶的作用产生氧化染料的氧化、聚合，染色被染色材料。在本发明中，由于氧化反应中利用酶，伴随染色处理的被染色材料的损伤(Damage)少。此外，应用于毛发时，对头皮的不良影响(过敏反应)等可能性也减少。另一方面，使用于本发明的酶通过如上述修饰显示出对被染色材料的高亲和性。通过该特性，酶反应(即氧化染料的氧化)有效地进行，染色效果提高。由此，本发明的染色剂能够减低对被染色材料等的影响，同时有效地染色。

3.其它用途

在本发明中的修饰酶作为烫发剂的成分也有用。在一般的烫发的操作中，利用以还原剂(巯基乙酸、巯基乙酸盐类、半胱氨酸、羟基半胱氨酸、二羟基半胱氨酸、乙酰基化半胱氨酸、亚硫酸钠等)为主要成分的第1剂切断毛发中的二硫键(S-S)，接着，利用以氧化剂为主要成分的第2剂处理毛发，使切断的S-S键再形成。氧化剂使用溴酸钠、过硼酸盐、过氧化氢等。能够使用本发明的修饰酶代替这种氧化剂。使用本发明的修饰酶时，也能够构成一剂型的烫发剂。

实施例

以在使用氧化酶的染色方法中的染色效果的提高为目的，进行了以下研究。具体而言，对氧化酶之一的胆红素氧化酶(BO)施行规定的修饰，研究对染色效果的影响。应予说明，以对人毛发的染色为指标。

A.BO的修饰

1.方法

(1)氨基的修饰

用以下方法对BO施行附加氨基的修饰。对200mg的BO(来源于疣孢漆斑菌，AMANOEnzyme公司制)加入以摩尔比1000当量的腐胺、100当量的N-羟基琥珀酰亚胺和200当量的水溶性碳二亚胺(EDC)，用20mM HEPES(pH 6.5)制成20ml，在4℃使其反应1天。应予说明，腐胺是用稀硫酸进行pH调节。

(2)样品的精制

为了从反应后的样品除去未反应的腐胺，用以20mM硼酸缓冲液(pH9.0)平衡了的10DG柱(BIO-RAD)精制样品。

(3)活性测定

将试剂胆红素30mg溶解于0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)(含有0.05mmol/LEDTA)1.0ml中制成基质溶液。在0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)(含有0.05mmol/L EDTA)中溶解胆酸钠使得其达到1％，在该3ml中混合0.2ml的基质溶液和0.1ml的酶液后，使其在37℃反应，由460nm的吸光度的减少进行测定。将使1μmol的胆红素氧化1分钟所需的酶量定义为1单位。

(4)等电聚焦电泳

为了与未修饰BO的电荷进行比较，进行了等电聚焦电泳。

(5)氨基的定量

用以下方法定量氨基。将测定样品(蛋白质含量：0.6～1.0mg/ml的范围内)中的蛋白质含量进行统一后，将制备样品(0.25ml)、4％NaHCO₃(0.25ml)、0.1％TNBS(0.25ml)水溶液进行混合。在40℃使其反应2小时。加入5％SDS(0.25ml)、1M HCl(0.125ml)使反应停止，测定345nm的吸光度。将用水代替测定样品而得的溶液作为空白，将减去空白的测定值的值作为ΔOD。将未修饰BO中的氨基的结合量设为8(赖氨酸的部分为7以及N末端为1)而定量氨基的量。

2.结果

活性测定的结果示于以下表1。收率为5成左右。

[表1]

样品的收率(各样品的活性值)

等电聚焦电泳的结果示于图1。未处理样品示出pI4，但修饰样品对应的条带均消失(认为电荷提高)。此外，修饰样品均涂抹有条带。认为原因是存在修饰程度不同的各种各样的BO。

氨基的定量结果示于以下表2。可知在修饰BO中附加有氨基。

[表2]

样品	OD	ΔO.D.	氨基	相对于1个氨基的OD
					空白(水)	0.445	0	-
未修饰BO	0.990	0.545	8.0	0.0681
					修饰BO	1.681	1.236	18.1

由以上结果确认，成功地制备了通过氨基的附加而改变了电荷的修饰BO。

B.利用染发试验确认修饰BO的染色效果

如上所述，可以确认对制备的BO修饰了氨基。所以，使用未修饰BO和修饰BO实施染发试验。

1.方法

(1)染发基剂的制备

将EMALEX HC-20(Nihon Emulsion株式会社)2％、乳酸1％、P-苯二胺(PPD)1％溶解于蒸馏水，使用单乙醇胺调节为规定的pH。接着，加入羟乙基纤维素1.5％而混合，以最终重量80％的方式加入蒸馏水。接着，加入酶进行制备使得最终为100％。

(2)染发试验

在1束人的白发发束(10cm，1g，BEAULAX制)上涂布2g的染发基剂。于30℃使其反应30分钟(在中途15分钟时翻过来)。用水洗涤后，进一步用1％SDS洗涤，进行水洗直至颜色消失。最后放置一晩，使其风干。

(3)色相评价

使用分光测色计CM-700d(柯尼卡美能达制)，以10°视野、D65Day Light、SCE模式进行测定。使用CIEL*a*b表色系以与未处理的白发的色差(ΔE*ab)进行评价。应予说明，L*表示明度。数值为0～100，数值越高表示越明亮。此外，a*表示色彩。数值为-60～+60，越-表示越绿，越+表示越红。b*表示色彩。数值为-60～+60，越-表示越蓝，越+表示越黄。ΔE*ab是由[(ΔL)²+(Δa)²+(Δb)²]^1/2算出的值，是在发色的评价中一般使用的单位。通过与基准值(染发前的白发的测定值)的L*值、a*值、b*值的差算出ΔE*ab。表3示出色差的程度与ΔE*ab的关系。另外，虽然根据条件进行变动，但一般的染发的情况下，ΔE*ab约为40，将过氧化氢用于氧化剂的染发示出ΔE*ab为50以上。

[表3]

色差的程度的评语	ΔE*ab
		极其微小的不同	0-0.5
微小的不同	0.5-1.5
		能察觉的不同	1.5-3.0
显著不同	3.0-6.0
		极其显著的不同	6.0-12.0
成为另外的色系	12.0以上

2.结果

(1)染发试验1(pH8、9时的染色效果的比较)

染发试验1的结果示于表4和图2。尤其在pH8的条件下修饰BO的染色效果高(色差上3左右的差异)。即使在pH9.0的条件下也确认染色效果的差。整体而言，修饰BO的发染得较红，a*(红度)的值也高(图2右)。用肉眼的观察的印象是，在数值以上修饰BO较好地被染成。

[表4]

(2)染发试验2(将酶浓度设为一定，pH7、8、9、10时的染色效果的比较)

染发试验2的结果示于表5和图3。尤其在pH9.0的条件下修饰BO的染色效果较高(图3左)。在任一pH下均示出修饰BO的a*高的趋势(图3右)。

[表5]

(3)染发试验3(pH8下的各酶浓度时的染色效果的比较)

染发试验3的结果示于表6和图4。即使在酶浓度低的条件下修饰BO也示出高的染色效果(图4左)。此外，在本试验中也确认了修饰BO的红度较高。

[表6]

(4)染发试验4(pH9下的各酶浓度与基质特异性的染色效果的比较)

作为发色基质，除PPD(对苯二胺)以外，也对PAP(对氨基苯酚)、PTD(对甲苯二胺)研究了染色效果(基质特异性的研究)。此外，也新制备了使用丁胺进行修饰的酶，对该染色效果也同样地进行比较。结果示于表7和图5、6。可以确认在pH9.0的条件下，修饰BO(腐胺)示出高染色效果(图5左)。此外，修饰BO(腐胺)示出红度增高的趋势。关于基质特异性，与非修饰BO相比，用腐胺修饰的BO对PPD、PAP的染色效果较高(图6)。此外，用丁胺修饰的BO尤其对PTD示出染色效果增高的趋势(图6)。

[表7]

如上所述，示出与未修饰BO相比，修饰BO的染色效果高。染色效果的差别在低的酶浓度中尤其显著。此外，判明修饰BO与未修饰BO相比，红色增强。据说发的pH约为5.5，认为在一般的染色条件下(例如pH9.0)发带负电荷。通过对BO修饰氨基而提高BO的电荷，其结果，修饰BO中即使在pH9.0的条件下也存在带正电荷(+)的修饰BO。认为对于修饰BO，由于电荷的效果，与发的亲和性提高，作为其结果，染色效果提高。

C.利用各种修饰方法的染色效果的确认

使用各种多胺修饰BO，比较染色效果。

1.方法

(1)氨基的修饰

对100mg的BO加入以摩尔比计为1000当量的多胺(腐胺、3,3'-二氨基二丙胺、硫酸胍基丁胺)、100当量的N-羟基琥珀酰亚胺和200当量的水溶性碳二亚胺(EDC)，用20mMHEPES(pH 6.5)制成10ml，于4℃使其反应1天。应予说明，腐胺、3,3'-二氨基二丙胺是以稀硫酸进行pH调节。

(2)样品的精制

为了从反应后的样品除去未反应的多胺，用以20mM硼酸缓冲液(pH9.0)平衡了的10DG柱(BIO-RAD)精制样品。

(3)活性测定

使用利用将胆红素用于基质的波长460nm的吸光度变化的测定法。

(4)等电聚焦电泳

为了与未修饰BO的电荷的比较，进行了等电聚焦电泳。

(5)氨基的定量

使用TNBS定量氨基。

(6)蛋白质定量

根据Bradford法定量蛋白质含量。应予说明，以BSA为基准。

(7)抗洗发剂试验(牢固性试验)

将染发后的发束浸渍于10体积％的EMAL 20C(花王)溶液，进行30分钟超声波处理。其后，用水彻底地洗涤而干燥后，测定色差。抗洗发剂性以洗涤后的毛发的色差相对于洗涤前的毛发的色差(％)表示。

2.结果

(1)修饰反应、等电聚焦电泳、比活性的测定、氨基的定量

关于修饰反应，各样品的收率示于表8。收率为30％～50％。

[表8]

样品	(U/ml)	量	总单位数	收率(％)
					BO	2660	100mg	266	100
二胺(腐胺)	35	4ml	140	53
					三胺(3，3′-二氨基二丙胺)	26	4ml	104	39
四胺(硫酸胍基丁胺)	20	4ml	80	30

等电聚焦电泳的结果示于图7。未处理样品示出pI4，但修饰样品均提高了电荷。

比活性的测定结果示于表9。通过修饰，比活性成为一半左右。

[表9]

氨基的定量结果示于表10。可以确认修饰BO附加有氨基。

[表10]

样品	OD	Blank	ΔO.D.	氨基	相对于1个氨基的OD
						未修饰BO	0.99	0.445	0.545	8	0.0681
二胺修饰BO	2.14	0.445	1.696	25
						三胺修饰BO	4.11	0.445	3.665	54
四胺修饰BO	1.40	0.445	0.955	14

(2)利用染发试验确认染色效果

对制备的各修饰BO实施染发试验。方法和评价与B.的情况同样。但是，染色全部在pH9.0的条件进行。染发试验的结果示于表11和图8、9。已知通过修饰多胺可以得到高染色效果。尤其，修饰三胺而得的修饰BO的染发效果最高(图8左)。在最低的酶浓度中示出最大的色差，因此期望通过减小酶浓度进一步提高染色效果。

[表11]

(3)抗洗发剂试验的结果

抗洗发剂试验的结果示于表12和图10、11。利用修饰BO的染色的抗洗发剂性优异，与使用未修饰BO时相比显示出难以褪色的趋势。修饰BO的该特征在染发用途中极其重要且有意义。

[表12]

表12

洗涤前洗涤后

N＝3 N＝2

如上所述，通过使用于修饰的多胺的变更，能够使染发效果戏剧性地提高。此外，判明修饰BO除使染色效果提高以外，也使抗洗发剂性提高。

D.以吲哚类似物为发色基质时的染色效果1

研究以比对苯二胺等安全性高的吲哚化合物(4-氨基吲哚、5-氨基吲哚等)为发色基质时的染色效果。

1.方法

(1)氨基的修饰

对100mg的BO加入以摩尔比计为1000当量的3,3'-二氨基二丙胺、100当量的N-羟基琥珀酰亚胺和200当量的水溶性碳二亚胺(EDC)，用20mM HEPES(pH 6.5)制成10ml，于4℃使其反应1天。将精制该反应液而得的酶作为PMO(多胺修饰氧化酶，Polyamine ModifiedOxidase)使用。应予说明，添加3,3'-二氨基二丙胺后，用稀硫酸进行pH调节。

除了使用上述PMO作为修饰BO和使用吲哚化合物作为发色基质以外，试验方法和评价与B.的情况同样(在一部份的条件中并用2种发色基质)。此外，用与C.的情况同样的方法也实施了抗洗发剂试验。

2.结果

(1)利用染发试验确认染色效果

试验结果示于表13和图12。确认通过添加PMO，与使用未修饰BO、过氧化氢的情况相比，染发效果明显地高。通过混合4AI、5AI，能够将色彩变为接近黑的颜色(图12)。

[表13]

表13

4AI：4-氨基吲哚

5AI：5-氨基吲哚

(2)抗洗发剂试验的结果

试验结果示于表14和图13。与未修饰BO相比，PMO的染发效果较优异且褪色(牢固度高)也少。另一方面，存在以4AI＞4AI+5AI＞5AI的顺序牢固度增高的趋势。

[表14]

表14

E.以吲哚类似物为发色基质时的染色效果2

研究酶浓度和染色效果的关系，以及并用2种以上的吲哚化合物时的染色效果。

1.方法

使用PMO作为修饰酶。其它方法等与D.的情况同样。

2.结果

(1)染发试验的结果

试验结果示于表15、16和图14～16。在任一条件下，在酶浓度为50U/100g附近色差均为峰值(图14)。并用各种吲哚化合物后，未能确认色差存在显著的差异(图15)，但看到色彩的变化(表16、图16)。

[表15]

表15

4AI：4-氨基吲哚

5AI：5-氨基吲哚

6AI：6-氨基吲哚

4HI：4-羟基吲哚

[表16]

表16

基质1	L*(D65)	a*(D65)	b*(D65)
				4AI	36.9±1.7	-2.2±0.1	1.2±0.4
4AI+5AI	36.7±2.3	0.9±0.4	3.3±1.0
				4AI+6AI	34.8±1.7	-0.5±0.3	3.3±0.4
4AI+4HI	35.9±0.8	-1.1±0.1	0.3±0.4

4AI：4-氨基吲哚

5AI：5-氨基吲哚

6AI：6-氨基吲哚

4HI：4-羟基吲哚

(2)抗洗发剂试验的结果

试验结果示于表17和图17。使用5AI时，示出若增高酶浓度，则牢固度增高(褪色少)的趋势(图17A)。

[表17]

表17

4AI：4-氨基吲哚

5AI：5-氨基吲哚

6AI：6-氨基吲哚

4HI：4-羟基吲哚

如上所述，采用安全性高的吲哚化合物(4-氨基吲哚、5-氨基吲哚等)作为发色基质的情况下，若使用修饰酶，也能够比过氧化氢有效地染发。此外，通过使用的吲哚化合物的种类、组合，能够进行各种各样的色调的染色。

F.以吲哚类似物为发色基质时的染色效果3

研究以作为吲哚化合物的5,6-二羟基吲哚为发色基质时的染色效果。5,6-二羟基吲哚为黑素前体，在氧存在下进行聚合，形成黑素色素。此外，虽然安全性高，但其处理困难和染色效果低成为问题。

1.方法

除了使用0.3重量％的5，6-二羟基吲哚作为发色基质以外，试验方法和评价基于D.(以吲哚类似物为发色基质时的染色效果1)。

2.结果

(1)利用染发试验确认染色效果

试验结果示于表18和图18～20。

[表18]

表18

已知若使用PMO作为氧化剂，则可以得到优异的染色效果。与过氧化氢相比，PMO具有戏剧性的高氧化效果(图18)。另一方面，与使用过氧化氢时不同，使用P MO时，与pH9.0的条件相比，pH7.0的条件下的染色效果高(图18、19)。由该结果可以说，若使用PMO，则抑制毛发的损伤，同时可得到高染色效果。该特征在实用上具有很大优势。对于酶量和染色效果的关系，在最少的使用量(25U/100g)时示出最高的染色效果。该结果证实PMO示出高氧化效果(染色效果)。

如上所述，示出使用5,6-二羟基吲哚作为发色基质时PMO也有效，换句话说，若使用PMO，则能够有效地染色。

产业上的可利用性

本发明的染色剂利用于使用氧化染料的染色。本发明的染色剂能够适用于各种染色法。本发明尤其对毛发的染色有效。

该发明不限定于上述发明的实施方式以及实施例的说明。在不脱离专利请求的范围的记载，本领域技术人员可以容易地想到的范围内的各种变形方式也含于该发明。在本说明书中明示的论文、公开专利公报和专利公报等内容中，通过援用其全部内容进行引用。

Claims

1.一种染色剂，其特征在于，包含通过胺类的化学修饰对如下的酶附加正电荷而得到的修饰酶，所述酶是选自以EC 1.10.3.2编号的酶和以EC 1.3.3.5编号的酶中的酶，所述染色剂用于角蛋白纤维的染色。

2.如权利要求1所述的染色剂，其特征在于，将氧化染料和所述修饰酶组合而成。

3.如权利要求2所述的染色剂，是含有所述氧化染料和所述修饰酶的一剂型。

4.如权利要求2所述的染色剂，是由含有所述氧化染料的第1成分和含有所述修饰酶的第2成分形成的二剂型。

5.如权利要求1～4中的任一项所述的染色剂，其中，所述角蛋白纤维为人毛发。

6.如权利要求2～4中的任一项所述的染色剂，其中，所述氧化染料是选自苯二胺、氨基苯酚、甲酚、甲苯二胺、萘酚、吲哚、吲哚啉、2,6-二氨基吡啶、5-(2-羟乙基氨基)-2-甲苯二胺、对硝基邻苯二胺、对硝基-2’,4’-二氨基偶氮苯硫酸钠、4,4’-二氨基二苯基胺硫酸盐、对甲氨基苯酚硫酸盐、间苯二胺硫酸盐、2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐、间苯二胺盐酸盐、2,4-二氨基苯酚盐酸盐、3,3’-亚氨基二苯酚、1,5-二羟基萘、甲苯-3,4-二胺、对甲氨基苯酚、N,N’-双(4-氨苯基)-2,5-二氨基-1,4-醌二亚胺、2,4-二氨基苯酚硫酸盐、5,6-二羟基吲哚啉、N-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、N-乙基-5,6-二羟基吲哚啉、N-丁基-5,6-二羟基吲哚啉、4-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基-7-甲氧基吲哚啉、6,7-二羟基吲哚啉、4,5-二羟基吲哚啉、4-甲氧基-6-羟基吲哚啉、N-己基-5,6-二羟基吲哚啉、2-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、3-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、4-羟基吲哚啉、2,3-二甲基-5,6-二羟基吲哚啉、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚啉、2-甲基-5-羟基-6-β-羟乙基吲哚啉、4-羟丙基吲哚啉、2-羟基-3-甲氧基吲哚啉、6-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基吲哚啉、5-羟基吲哚啉、7-羟基吲哚啉、7-氨基吲哚啉、5-氨基吲哚啉、4-氨基吲哚啉、5,6-二羟基吲哚啉羧酸、1-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、4,5-二羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚、6,7-二羟基吲哚、N-甲基-5,6-二羟基吲哚、N-乙基-5,6-二羟基吲哚、N-己基-5,6-二羟基吲哚、2-甲基-5,6-二羟基吲哚、3-甲基-5,6-二羟基吲哚、4-羟基吲哚、2,3-二甲基-5,6-二羟基吲哚、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚、2-甲基-5-羟基-6-β-羟乙基吲哚、4-羟丙基吲哚、2-羟基-3-甲氧基吲哚、4-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基-7-甲氧基吲哚、6-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基吲哚、5-羟基吲哚、7-羟基吲哚、7-氨基吲哚、6-氨基吲哚、5-氨基吲哚、4-氨基吲哚、5,6-二羟基吲哚羧酸和1-甲基-5,6-二羟基吲哚中的一种以上的化合物。

7.如权利要求2～4中的任一项所述的染色剂，其中，所述氧化染料是选自对苯二胺、5-氨基邻甲酚、邻氨基苯酚、间氨基苯酚、对氨基苯酚、N,N-双(β-羟基)-对苯二胺硫酸盐、甲苯-2,5-二胺、5-氨基邻甲酚硫酸盐、对氨基苯酚硫酸盐、邻氯对苯二胺硫酸盐、对苯二胺硫酸盐、甲苯-2,5-二胺硫酸盐、甲苯-2,5-二胺盐酸盐、对苯二胺盐酸盐、N-苯基对苯二胺盐酸盐、N-苯基对苯二胺乙酸盐、邻氨基苯酚硫酸盐、间氨基苯酚硫酸盐和对甲苯二胺中的一种以上的化合物。

8.如权利要求5所述的染色剂，其中，所述氧化染料是选自苯二胺、氨基苯酚、甲酚、甲苯二胺、萘酚、吲哚、吲哚啉、2,6-二氨基吡啶、5-(2-羟乙基氨基)-2-甲苯二胺、对硝基邻苯二胺、对硝基-2’,4’-二氨基偶氮苯硫酸钠、4,4’-二氨基二苯基胺硫酸盐、对甲氨基苯酚硫酸盐、间苯二胺硫酸盐、2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐、间苯二胺盐酸盐、2,4-二氨基苯酚盐酸盐、3,3’-亚氨基二苯酚、1,5-二羟基萘、甲苯-3,4-二胺、对甲氨基苯酚、N,N’-双(4-氨苯基)-2,5-二氨基-1,4-醌二亚胺、2,4-二氨基苯酚硫酸盐、5,6-二羟基吲哚啉、N-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、N-乙基-5,6-二羟基吲哚啉、N-丁基-5,6-二羟基吲哚啉、4-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基-7-甲氧基吲哚啉、6,7-二羟基吲哚啉、4,5-二羟基吲哚啉、4-甲氧基-6-羟基吲哚啉、N-己基-5,6-二羟基吲哚啉、2-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、3-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、4-羟基吲哚啉、2,3-二甲基-5,6-二羟基吲哚啉、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚啉、2-甲基-5-羟基-6-β-羟乙基吲哚啉、4-羟丙基吲哚啉、2-羟基-3-甲氧基吲哚啉、6-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基吲哚啉、5-羟基吲哚啉、7-羟基吲哚啉、7-氨基吲哚啉、5-氨基吲哚啉、4-氨基吲哚啉、5,6-二羟基吲哚啉羧酸、1-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、4,5-二羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚、6,7-二羟基吲哚、N-甲基-5,6-二羟基吲哚、N-乙基-5,6-二羟基吲哚、N-己基-5,6-二羟基吲哚、2-甲基-5,6-二羟基吲哚、3-甲基-5,6-二羟基吲哚、4-羟基吲哚、2,3-二甲基-5,6-二羟基吲哚、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚、2-甲基-5-羟基-6-β-羟乙基吲哚、4-羟丙基吲哚、2-羟基-3-甲氧基吲哚、4-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基-7-甲氧基吲哚、6-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基吲哚、5-羟基吲哚、7-羟基吲哚、7-氨基吲哚、6-氨基吲哚、5-氨基吲哚、4-氨基吲哚、5,6-二羟基吲哚羧酸和1-甲基-5,6-二羟基吲哚中的一种以上的化合物。

9.如权利要求5所述的染色剂，其中，所述氧化染料是选自对苯二胺、5-氨基邻甲酚、邻氨基苯酚、间氨基苯酚、对氨基苯酚、N,N-双(β-羟基)-对苯二胺硫酸盐、甲苯-2,5-二胺、5-氨基邻甲酚硫酸盐、对氨基苯酚硫酸盐、邻氯对苯二胺硫酸盐、对苯二胺硫酸盐、甲苯-2,5-二胺硫酸盐、甲苯-2,5-二胺盐酸盐、对苯二胺盐酸盐、N-苯基对苯二胺盐酸盐、N-苯基对苯二胺乙酸盐、邻氨基苯酚硫酸盐、间氨基苯酚硫酸盐和对甲苯二胺中的一种以上的化合物。

10.如权利要求2～4中的任一项所述的染色剂，其中，所述氧化染料是选自对苯二胺、对氨基苯酚、对甲苯二胺、4-氨基吲哚、5-氨基吲哚、6-氨基吲哚、4-羟基吲哚和5,6-二羟基吲哚中的一种以上的化合物。

11.如权利要求5所述的染色剂，其中，所述氧化染料是选自对苯二胺、对氨基苯酚、对甲苯二胺、4-氨基吲哚、5-氨基吲哚、6-氨基吲哚、4-羟基吲哚和5,6-二羟基吲哚中的一种以上的化合物。

12.如权利要求1～4、8、9、11中的任一项所述的染色剂，其中，所述酶为胆红素氧化酶。

13.如权利要求5所述的染色剂，其中，所述酶为胆红素氧化酶。

14.如权利要求6所述的染色剂，其中，所述酶为胆红素氧化酶。

15.如权利要求7所述的染色剂，其中，所述酶为胆红素氧化酶。

16.如权利要求10所述的染色剂，其中，所述酶为胆红素氧化酶。

17.一种染色方法，其特征在于，包含用权利要求1～11中的任一项所述的染色剂将角蛋白纤维或角蛋白纤维加工品进行处理的步骤。

18.如权利要求17所述的染色方法，其中，所述角蛋白纤维为人毛发。

19.如权利要求18所述的染色方法，其中，在pH为7.0～8.0的条件下进行所述处理。