CN103503689A - 一种利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基 - Google Patents

一种利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基。实验证明,将蛹虫草在含有豆渣的蛹虫草栽培培养基中培养,当培养基质中豆渣的含量为10%-66%时,蛹虫草成熟子实体的产量可达到甚至超过对照(以常用的大米或小麦培养基进行培养)的产量;当培养基质全部为豆渣时,蛹虫草成熟子实体的产量为对照(以大米培养基进行培养)的39%。本发明为蛹虫草的栽培提供了一个新的可行的培养方法,同时为豆渣利用提供了一个新的途径,具有广阔的应用前景。

Description

一种利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基
技术领域
本发明涉及一种利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基。
背景技术
蛹虫草[Cordyceps militaris(L.)Link]又称北虫草、北冬虫夏草,是真菌寄生于鳞翅目等昆虫的虫体上形成的虫菌复合体,是一种具有滋补作用的中药和营养品。蛹虫草在生物分类上隶属于子囊菌门(Ascomycota)、子囊菌纲(Ascomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、虫草菌科(Cordicipitaceae)、虫草属[Cordyceps(Fr.)Link],与冬虫夏草同属异种,其药用价值与冬虫夏草(Cordyceps sinensis)相似。《新华本草纲要》称,蛹虫草“全草:味甘,性平。有益肺肾,补精髓,止血化痰的功能”,现代研究也证实了蛹虫草的多种药理功效,其特有的虫草素复合Pentostatin作为治疗白血病的药物已经在美国进入二期临床试验(http://clinicaltrials.gov/show/NCT00709215)。当前,它已经在东亚地区被广泛作为滋补品及药用菌使用,我国卫生部于2009年3月16日正式将其列为了新资源食品(中华人民共和国卫生部公告2009年第3号http:// www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/zwgkzt/pgg/200903/39591.htm)
蛹虫草是目前虫草属中几个可以利用的种类之一,也是目前唯一能够进行大规模产业化生产的种类。然而在蛹虫草的人工栽培中,所用培养基基质的主要原料是大米、小麦、小米、玉米等粮食,大量消耗粮食已经成为蛹虫草规模化栽培的一个明显弊端。
我国是一个大豆生产大国和消费大国,年处理大豆2500万吨左右,其中1400万吨左右为制油,而1000万吨左右用于制作豆制品或其他食品。豆制品加工中,每加工1kg的大豆就会产生湿重为1.3kg或干重为0.3-0.4kg的豆渣,因此所产生的豆渣数量相当惊人。研究表明,干豆渣中含蛋白15-25%,含膳食纤维40-60%。由于大豆蛋白和纤维素结合紧密,难以被消化道内的酶分解,所以难以用作食品或饲料,通常被废弃,造成水体富营养,严重污染环境,因此急需寻求豆渣的加工利用途径。
目前,豆渣在食用菌产业的应用也有一些研究和报道,而以豆渣为主要基质进行蛹虫草的栽培还未见有报道。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种蛹虫草栽培培养基,由培养基质和营养液组成,所述培养基质和所述营养液的质量比为1:(0.5-1.5);
所述培养基质为如下1)或2)的物质:
1)豆渣;
2)由豆渣、谷物和蚕蛹粉组成,所述培养基质中所述豆渣、谷物和蚕蛹粉的质量比为(10-100):(0-90):(0-3),所述谷物和蚕蛹粉的质量均不为0,所述谷物为小麦或大米;
所述营养液为如下A)或B)中的任一种:
A)溶质及其浓度分别为葡萄糖10—40g/L、蛋白胨0—15g/L、磷酸二氢钾1—5g/L、硫酸镁0.5—2.5g/L、柠檬酸铵0—2.5g/L和维生素B10—0.1g/L的水溶液;
B)不含琼脂的PDA培养基,即马铃薯200g煮汁和葡萄糖20g,用水定容至1000ml;
所述营养液的pH值为5.0—8.0。
在上述蛹虫草栽培培养基中,所述培养基质和所述营养液的质量比具体可为1:0.5、1:0.8、1:1.2或1:1.5。
在上述蛹虫草栽培培养基中,当所述培养基质为2)所述的物质时,所述培养基质中所述豆渣、谷物和蚕蛹粉的质量比具体可为10:88:2、32:65:3或66:33:1。
在上述蛹虫草栽培培养基中,当所述营养液为所述溶液A时,所述营养液中所述溶质及其浓度分别为葡萄糖10g/L、蛋白胨10g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁1g/L、柠檬酸铵1g/L和维生素B10.05g/L;或,
葡萄糖40g/L,蛋白胨15g/L,磷酸二氢钾5g/L,硫酸镁2.5g/L和维生素B10.1g/L;或,
葡萄糖20g/L,磷酸二氢钾1g/L,硫酸镁0.5g/L和柠檬酸铵2.5g/L。
在上述蛹虫草栽培培养基中,所述营养液的pH值具体可为5.0、5.5、6.5或8.0。
本发明的另一个目的是提供一种栽培蛹虫草的方法,包括将蛹虫草(Cordycepsmilitaris)接种于含豆渣的蛹虫草栽培培养基上进行培养获得所述蛹虫草的子实体的步骤。
在上述方法中,所述含豆渣的蛹虫草栽培培养基可为本发明在第一个目的中所阐述的蛹虫草栽培培养基中的任意一种,但不限于本发明所提供的上述蛹虫草栽培培养基。
在上述方法中,所述接种按照包括如下步骤的方法进行:将所述蛹虫草接种于种子培养基中,获得所述蛹虫草含量以菌丝球湿重计为60-120g/L的种子液,再按每100g所述蛹虫草栽培培养基接种13-27mL所述种子液将所述蛹虫草接种于所述蛹虫草栽培培养基上。
在上述方法中,将接种所述蛹虫草的所述蛹虫草栽培培养基依次于如下温度和光照条件下进行培养,获得所述蛹虫草的子实体:
a)16-22℃恒温、黑暗条件下培养至所述蛹虫草菌丝体充满培养基;
b)每天24小时中23℃光照10—16小时、其余时间为16℃黑暗的条件下培养至所述蛹虫草的子座原基形成;
c)20—25℃恒温、每天24小时中光照8—12小时其余时间为黑暗的条件下培养至获得所述蛹虫草的子实体。
本发明保护上述任一所述蛹虫草栽培培养基在培养蛹虫草(Cordycepsmilitaris)中的应用。
实验证明,将蛹虫草在含有豆渣的蛹虫草栽培培养基中培养,当培养基质中豆渣的含量为10%-66%时,蛹虫草成熟子实体的产量可达到甚至超过对照(以常用的大米或小麦培养基进行培养)的产量;当培养基质全部为豆渣时,蛹虫草成熟子实体的产量为对照(以大米培养基进行培养)的39%。本发明为蛹虫草的栽培提供了一个新的可行的培养方法,同时为豆渣利用提供了一个新的途径,具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
下述实施例中的%如无特别说明,均为质量百分含量。
蛹虫草(Cordyceps militaris):购自辽宁锦州亚泰微生物研究所。
豆渣:生产豆奶或豆腐过程中的副产品。下述实施例所用的豆渣来自北京仙源食品酿造有限公司;含水份70-85%。
蚕蛹粉:蚕蛹经过干燥、粉碎后的产品。下述实施例所用的蚕蛹粉购自辽宁省丹东市振安区群长土特产公司;无霉变及异味异臭;含水份10-12%,粗蛋白45-55%,粗纤维3-6%,粗灰分4-5%。
小麦:去掉内外稃且无霉变的小麦粒。
大米:去掉内外稃且无霉变的大米粒。
实施例1、利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基
一、利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基
1、培养基的制备
将豆渣100g,小麦200g和蚕蛹粉9g混合均匀,分装成10只罐头瓶,然后按1:1.5的质量比加入营养液A,封口,121℃灭菌1小时,待冷却至室温后备用,获得含蛹虫草栽培培养基的培养瓶。
上述营养液A的配方为:葡萄糖10g,蛋白胨10g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1g,柠檬酸铵1g,维生素B10.05g,用水定容至1000ml,调pH值5.0。
2、种子液的制备
将蛹虫草(Cordyceps militaris)接种于PDA平板上,20℃活化培养后,接种于500ml三角瓶中,瓶中装有150ml步骤1的营养液A,20℃、150rpm震荡培养4天,得到含蛹虫草(Cordyceps militaris)以菌丝球湿重计为80g/L的种子液。
3、接种
无菌条件下,在每个步骤1的培养瓶中接种10mL步骤2的种子液,即每100g蛹虫草栽培培养基接种13ml步骤2的种子液。
4、菌丝体培养
将步骤3的培养瓶放置于20℃、黑暗条件下培养8天后蛹虫草菌丝体充满培养基。
5、原基分化培养
将步骤4的培养瓶于每天24小时中23℃光照16小时、其余时间为16℃黑暗的条件下培养8天后蛹虫草的子座原基形成。
6、子实体生长培养
将步骤5的培养瓶放置于22℃条件下,每天光照8小时培养30天后获得蛹虫草的子实体。
上述步骤5和6中的光照培养为自然光照射培养,晚上用日光灯增加光照射时间(光照强度为300-500Lux)培养。
7、采收
采集步骤6的培养瓶中生长到8-10厘米长的成熟蛹虫草子实体,烘干得产品。
8、结果
随机取8个培养瓶,统计每瓶蛹虫草子实体的产量(湿重和干重,克),计算平均值±标准差,结果如表1所示。
表1.豆渣培养基中蛹虫草子实体产量统计结果
  培养瓶编号   湿重(克)   干重(克)
  1   24.992   4.658
  2   24.537   4.237
  3   19.972   3.934
  4   23.346   4.235
  5   25.933   4.127
  6   25.887   4.236
  7   17.824   4.351
  8   23.214   3.815
  平均   23.213±2.903   4.199±0.257
二、利用小麦培养基栽培蛹虫草(对照)
小麦培养基的制备:取小麦300g,分装成10只罐头瓶,然后按1:1.5的质量比加入营养液A,封口,121℃灭菌1小时,待冷却至室温后备用,获得含蛹虫草栽培培养基的培养瓶。
上述营养液A的配方为:葡萄糖10g,蛋白胨10g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1g,柠檬酸铵1g,维生素B10.05g,用水定容至1000ml,调pH值5.0。
其它实验条件和方法与步骤一相同。
结果:随机取8个培养瓶,统计每瓶中蛹虫草子实体的产量(湿重和干重,克),计算平均值±标准差,结果如表2所示。
表2.小麦培养基中蛹虫草的子实体产量统计结果
  培养瓶编号   湿重(克)   干重(克)
  1   24.138   4.342
  2   17.44   3.704
  3   24.325   4.558
  4   19.899   3.397
  5   20.74   4.253
  6   19.22   4.087
  7   25.174   4.725
  8   19.656   3.834
  平均   21.324±2.838   4.112±0.448
实施例2、利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基
一、利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基
1、培养基的制备
将豆渣200g,大米100g和蚕蛹粉3g混合均匀,分装成10只罐头瓶,然后按1:0.8的质量比加入营养液B,封口,121℃灭菌1小时,待冷却至室温后备用,获得含蛹虫草栽培培养基的培养瓶。
上述营养液B的配方为:不含琼脂的PDA培养基(即马铃薯200g煮汁和葡萄糖20g,用水定容至1000ml),调pH值6.5。
2、种子液的制备
将蛹虫草(Cordyceps militaris)接种于PDA平板上,18℃活化培养后,接种于500ml三角瓶中,瓶中装有150ml步骤1的营养液B,18℃、150rpm震荡培养5天,得到含蛹虫草(Cordyceps militaris)以菌丝球湿重计为120g/L的种子液。
3、接种
无菌条件下,在每个步骤1的培养瓶中接种8mL步骤2的种子液,即每100g蛹虫草栽培培养基中接种18mL步骤2的种子液。
4、菌丝体培养
将步骤3的培养瓶放置于16℃、黑暗条件下培养12天后蛹虫草菌丝体充满培养基。
5、原基分化培养
将步骤4的培养瓶于每天24小时中23℃光照10小时、其余时间为16℃黑暗的条件下培养10天后蛹虫草的子座原基形成。
6、子实体生长培养
将步骤5的培养瓶放置于20℃条件下,每天光照8小时培养40天后获得蛹虫草的子实体。
上述步骤5和6中的光照培养为自然光照射培养,晚上用日光灯增加光照射时间(光照强度为300-500Lux)培养。
7、采收
采集步骤6的培养瓶中生长到8-10厘米长的成熟蛹虫草子实体,烘干得产品。
8、结果
随机取8个培养瓶,统计每瓶中蛹虫草子实体的产量(湿重和干重,克),计算平均值±标准差,结果如表3所示。
表3.豆渣培养基中蛹虫草子实体的产量统计结果
  培养瓶编号   湿重(克)   干重(克)
  1   16.764   2.933
  2   19.736   3.127
  3   19.406   3.057
  4   18.357   3.102
  5   21.284   2.815
  6   19.788   3.029
  7   20.461   3.37
  8   19.494   3.58
  平均   19.411±1.361   3.126±0.243
二、利用大米培养基栽培蛹虫草(对照)
大米培养基的制备:取大米300g,分装成10只罐头瓶,然后按1:1.2的质量比加入营养液B,封口,121℃灭菌1小时,待冷却至室温后备用,获得含栽培蛹虫草栽培培养基的培养瓶。
上述营养液B的配方为:不含琼脂的PDA培养基(即马铃薯200g煮汁和葡萄糖20g,用水定容至1000ml),调pH值6.5。
其它实验条件和方法与步骤一的相同。
结果:随机取8个培养瓶,统计每瓶中蛹虫草子实体的产量(湿重和干重,克),计算平均值±标准差,结果如表4所示。
表4.大米培养基中蛹虫草子实体产量统计结果
  培养瓶编号   湿重(克)   干重(克)
  1   24.138   4.345
  2   17.22   3.837
  3   21.44   3.704
  4   19.325   3.55
  5   20.74   4.253
  6   19.899   3.397
  7   18.246   3.215
  8   17.882   3.36
  平均   19.861±2.247   3.707±0.414
实施例3、利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基
一、利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基
1、培养基的制备
将豆渣300g分装成10只罐头瓶,然后按1:0.5的质量比加入营养液A,封口,121℃灭菌1小时,待冷却至室温后备用,获得含蛹虫草栽培培养基的培养瓶。
上述营养液A的配方为:葡萄糖40g,蛋白胨15g,磷酸二氢钾5g,硫酸镁2.5g,维生素B10.1g,用水定容至1000ml,调pH值8.0。
2、种子液的制备
将蛹虫草(Cordyceps militaris)接种于PDA平板上,22℃活化培养后,接种于500ml三角瓶中,瓶中装有150ml步骤1的营养液A,22℃、100rpm震荡培养4天,得到含蛹虫草(Cordyceps militaris)以菌丝球湿重计为70g/L的种子液。
3、接种
无菌条件下,在每个步骤1的培养瓶中接种12mL步骤2的种子液,即每100g蛹虫草栽培培养基接种26.7mL步骤2的种子液。
4、菌丝体培养
将步骤3的培养瓶放置于22℃、黑暗条件下培养10天后蛹虫草菌丝体充满培养基。
5、原基分化培养
将步骤4的培养瓶将步骤4的培养瓶于每天24小时中23℃光照12小时、其余时间为16℃黑暗的条件下培养10天后蛹虫草的子座原基形成。
6、子实体生长培养
将步骤5的培养瓶放置于25℃条件下,每天光照12小时培养40天后获得蛹虫草的子实体。
上述步骤5和6中的光照培养为自然光照射培养,晚上用日光灯增加光照射时间(光照强度为300-500Lux)培养。
7、采收
采集步骤6的培养瓶中生长到8-10厘米长的成熟蛹虫草子实体,烘干得产品。
8、结果
结果:随机取8个培养瓶,统计每瓶中蛹虫草子实体的产量(湿重和干重,克),计算平均值±标准差,结果如表5所示。
表5.豆渣培养基中蛹虫草子实体产量统计结果
  培养瓶编号   湿重(克)   干重(克)
  1   8.023   1.716
  2   6.936   1.139
  3   6.829   1.567
  4   9.457   2.114
  5   7.637   1.876
  6   7.524   1.356
  7   8.023   1.967
  8   6.496   1.981
  平均   7.615±0.931   1.715±0.338
二、利用大米培养基栽培蛹虫草(对照)
大米培养基的制备:将大米300g,分装成10只罐头瓶,然后按1:1.2的质量比,加入营养液A,封口,121℃灭菌1小时,待冷却至室温后备用,获得含蛹虫草栽培培养基的培养瓶。
上述营养液A的配方为:葡萄糖40g,蛋白胨15g,磷酸二氢钾5g,硫酸镁2.5g,,维生素B10.1g,用水定容至1000ml,调pH值8.0。
其它实验条件和方法与步骤一的相同。
结果:随机取8个培养瓶,统计每瓶中蛹虫草子实体的产量(湿重和干重,克),计算平均值±标准差,结果如表6所示。
表6.大米培养基中蛹虫草子实体产量统计结果
  培养瓶编号   湿重(克)   干重(克)
  1   23.562   4.145
  2   18.227   3.421
  3   20.234   3.541
  4   19.825   3.425
  5   20.542   4.014
  6   19.214   3.142
  7   18.471   3.249
  8   17.218   3.173
  平均   19.661±1.927   3.514±0.376
实施例4、利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基
一、利用豆渣栽培蛹虫草的方法及其培养基
1、培养基的制备
将豆渣30g、小麦270g和蚕蛹粉5g混合均匀,分装成10只罐头瓶,然后按1:1.2的质量比加入营养液A,封口,121℃灭菌1小时,待冷却至室温后备用,获得含蛹虫草栽培培养基的培养瓶。
上述营养液A的配方为:葡萄糖20g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.5g,柠檬酸铵2.5g,用水定容至1000ml,调pH值5.5。
2、种子液的制备
将蛹虫草(Cordyceps militaris)接种于PDA平板上,20℃活化培养后,接种于500ml三角瓶中,瓶中装有150ml步骤1的营养液A,20℃、150rpm震荡培养4天,得到含蛹虫草(Cordyceps militaris)以菌丝球湿重计为60g/L的种子液
3、接种
无菌条件下,在每个步骤1的培养瓶中接种15mL步骤2的种子液,即每100g蛹虫草栽培培养基接种22.4mL步骤2的种子液。
4、菌丝体培养
将步骤3的培养瓶放置于20℃、黑暗条件下培养8天后蛹虫草菌丝体充满培养基。
5、原基分化培养
将步骤4的培养瓶于每天24小时中23℃光照14小时、其余时间为16℃黑暗的条件下培养8天后蛹虫草的子座原基形成。
6、子实体生长培养
将步骤5的培养瓶放置于22℃条件下,每天光照8小时培养30天后获得蛹虫草的子实体。
上述步骤5和6中的光照培养为自然光照射培养,晚上用日光灯增加光照射时间(光照强度为300-500Lux)培养。
7、采收
采集步骤6的培养瓶中生长到8-10厘米长的成熟蛹虫草子实体,烘干得产品。
8、结果
统计每瓶中蛹虫草子实体的产量(湿重和干重,克),随机取8个培养瓶,计算平均值±标准差,结果如表7所示。
表7.豆渣培养基中蛹虫草子实体的产量统计结果
  培养瓶编号   湿重(克)   干重(克)
  1   23.927   4.574
  2   25.243   4.617
  3   20.417   3.687
  4   24.454   4.147
  5   25.489   4.048
  6   23.463   4.069
  7   23.687   3.954
  8   24.274   3.974
  平均   23.869±1.564   4.133±0.315
二、利用小麦培养基栽培蛹虫草(对照)
小麦培养基的制备:将小麦300g,分装成10只罐头瓶,然后按1:1.2的质量比加入营养液A,封口,121℃灭菌1小时,待冷却至室温后备用,获得含蛹虫草栽培培养基的培养瓶。
上述营养液A的配方为:葡萄糖20g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.5g,柠檬酸铵2.5g,用水定容至1000ml,调pH值5.5。
其它实验条件和方法与步骤一的相同。
结果:随机取8个培养瓶,统计每瓶中蛹虫草子实体的产量(湿重和干重,克),计算平均值±标准差,结果如表8所示。
表8.小麦培养基中蛹虫草子实体的产量统计结果
  培养瓶编号   湿重(克)   干重(克)
  1   23.249   4.143
  2   19.587   3.126
  3   24.364   4.548
  4   20.187   3.412
  5   19.659   3.413
  6   18.674   3.257
  7   23.821   4.125
  8   18.643   3.516
  平均   21.023±2.382   3.692±0.501

Claims (10)

1.一种蛹虫草栽培培养基,由培养基质和营养液组成,所述培养基质和所述营养液的质量比为1:(0.5—1.5);
所述培养基质为如下1)或2)的物质:
1)豆渣;
2)由豆渣、谷物和蚕蛹粉组成,所述培养基质中所述豆渣、谷物和蚕蛹粉的质量比为(10-100):(0-90):(0-3),所述谷物和蚕蛹粉的质量均不为0,所述谷物为小麦或大米;
所述营养液为如下A)或B)中的任一种:
A)溶质及其浓度分别为葡萄糖10—40g/L、蛋白胨0—15g/L、磷酸二氢钾1—5g/L、硫酸镁0.5—2.5g/L、柠檬酸铵0—2.5g/L和维生素B10—0.1g/L的水溶液;
B)不含琼脂的PDA培养基;
所述营养液的pH值为5.0—8.0。
2.根据权利要求1所述的蛹虫草栽培培养基,其特征在于:所述培养基质和所述营养液的质量比为1:0.5、1:0.8、1:1.2或1:1.5。
3.根据权利要求1或2所述的蛹虫草栽培培养基,其特征在于:当所述培养基质为2)所述的物质时,所述培养基质中所述豆渣、谷物和蚕蛹粉的质量比为10:88:2、32:65:3或66:33:1。
4.根据权利要求1-3中任一所述的蛹虫草栽培培养基,其特征在于:当所述营养液为所述溶液A时,所述营养液中所述溶质及其浓度分别为葡萄糖10g/L、蛋白胨10g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁1g/L、柠檬酸铵1g/L和维生素B10.05g/L;或,
葡萄糖40g/L,蛋白胨15g/L,磷酸二氢钾5g/L,硫酸镁2.5g/L和维生素B10.1g/L;或,
葡萄糖20g/L,磷酸二氢钾1g/L,硫酸镁0.5g/L和柠檬酸铵2.5g/L。
5.根据权利要求1-4中任一所述的蛹虫草栽培培养基,其特征在于:所述营养液的pH值为5.0、5.5、6.5或8.0。
6.一种栽培蛹虫草的方法,包括将蛹虫草(Cordyceps militaris)接种于含豆渣的蛹虫草栽培培养基上进行培养获得所述蛹虫草子实体的步骤。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:所述含豆渣的蛹虫草栽培培养基为权利要求1-5中任一所述的蛹虫草栽培培养基。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:所述接种按照包括如下步骤的方法进行:将所述蛹虫草接种于种子培养基中,获得所述蛹虫草含量以菌丝球湿重计为60-120g/L的种子液,再按每100g所述蛹虫草栽培培养基接种13-27mL所述种子液将所述蛹虫草接种于所述蛹虫草栽培培养基上。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:所述种子培养基为权利要求1所述的营养液。
10.根据权利要求6-9中任一所述的方法,其特征在于:将接种所述蛹虫草的所述蛹虫草栽培培养基依次于如下温度和光照条件下进行培养,获得所述蛹虫草子实体:
a)16—22℃恒温、黑暗条件下培养至所述蛹虫草菌丝体充满培养基;
b)每天24小时中23℃光照10—16小时、其余时间为16℃黑暗的条件下培养至所述蛹虫草的子座原基形成;
c)20—25℃恒温、每天24小时中光照8—12小时其余时间为黑暗的条件下培养至获得所述蛹虫草的子实体。
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