CN103497262B - 一种提取肝素纳的生产制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提取肝素纳的生产制备方法，它是将新鲜的猪肠放入不锈钢刮肠机，去除内外污物和外部皮肤脂肪，用清水清洗干净后，将猪肠绞碎成糜状胰浆，胰浆在充分搅拌下，加入按胰浆重量的1.5-3%的蛋白酶或新鲜胰浆，作为酶解剂，搅拌后缓慢加温40-45度，继续搅拌，并保持料液PH=8-9，液温在45-55度下酶解2-3小时，再加入按原料液重量的0.5-1.5%的蛋白酶，充分搅拌后，二次升温至90度，静置10-15分钟，趁热过滤去除杂质，再经过吸附、洗脱、醇提制得肝素纳粗品。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗凝血的药物，确切的说是一种肝素纳提取的生产加工制备方法。
背景技术
心脑血管疾病是人类的头号疾病杀手，随着人们生活水平提高带来的营养过剩，全球环境的恶化，生活节奏的加快及人口老龄化的加剧，致使全球心脑血管疾病的发病率和死亡率正逐年增高，肝素纳的出现为众多心脑血管疾病患者创造了生命的奇迹。目前肝素纳是世界上最有效的抗凝血药物，主要应用于心脑血管疾病和血液透析治疗，其中在血液透析中是唯一有效的特效药物，据临床应用及研究显示，肝素纳除具有抗凝血作用外，还具有其他多种生物活性和临床用途，包括降血脂作用、抗中膜平滑肌细胞增生、促进纤维蛋白溶解等作用，低分子肝素是肝素原料药作为原料进一步加工成的一大类抗血栓的药物，具有广泛的临床医学用途，成为治疗急性静脉血栓和急性冠脉综合证、心绞痛、心肌梗塞等疾病的首选药物。
肝素是世界上迄今为止已知的分子结构最复杂的化学物，短期内无法人工化学合成，目前只有来源于猪小肠粘膜的肝素能够用于临床的治疗。
发明内容
我国生猪屠宰量占全球50%以上，健康生猪的小肠粘膜中含有大量杂质蛋白、杂质核酸、微生物等杂质，需经过物理和化学提取分离过程，定向获取天然结构基团完整的肝素，从而制成肝素原料药。
本发明的目的就是提供一种提取肝素纳的生产制备方法，以满足医药市场的用药需求。
本发明是选用新鲜的猪肠，经过绞碎加入清水、精盐混合搅拌，再经过酶解、升温、静置后，再加入树脂吸附、洗脱，用乙醇混合搅拌、沉淀后提取肝素纳粗品。
附图说明
图1为本发明肝素纳粗品工艺流程图。
具体实施方式
图1中示出的吸附有肝素成分的树脂，经二次盐水洗脱后，也可再进行第三、第四次加清水洗脱，第三次加清水洗脱时间为1小时，第四次加清水洗脱为半小时，二次洗脱的加清水量均与料液的体积比为1:1。二次洗脱后，洗脱水作为下一批的备用盐水。
本发明的提取加工步骤如下
一、原料处理
将新鲜的猪肠放入不锈钢刮肠机，去除内外污物和外部皮肤脂肪，用清水清洗干净后，将猪肠绞碎成糜状胰浆，胰浆与水按体积比1：5加入清水混合后，再加入按胰浆重量2.5-3.5%的精盐混合搅拌，调解PH值至8-9。
二、酶解提取
上述胰浆在充分搅拌下，加入按胰浆重量的1.5-3%的蛋白酶或新鲜胰浆，作为酶解剂，搅拌后缓慢加温40-45度，继续搅拌，并保持料液PH=8-9，液温在45-55度下酶解2-3小时，再加入按原料液重量的0.5-1.5%的蛋白酶，充分搅拌后，二次升温至90度，静置10-15分钟，趁热过滤去除杂质。
三、吸附
将过滤后的料液冷却至室温后，输入吸附罐，加入按料液重量2-5%的树脂，吸附料液中的肝素纳成分，加温至60度，搅拌吸附处理2-3个小时后，静置过滤，滤液可作为生产治疗冠心病的新药原料。
四、洗脱
将上述吸附有肝素成分的树脂送入洗脱罐，先用清水充分漂洗干净后，加入盐水，盐水与树脂按体积比为1:3，第一次洗脱时间为3-4小时；第二次洗脱加入盐水的用量与第一次相同，洗脱时间为2-3小时。或加入1-1.5倍的1.2mol/L氯化钠溶液作为洗脱液对树脂进行洗脱，第一次洗脱液为树脂体积的1.5倍，洗脱4小时；第二次洗脱液为树脂体积的0.5倍，洗脱时间为1小时。
五、醇提
滤干树脂，将两次的洗脱液合并，搅拌30分钟后，送入沉淀罐，加入为洗脱液重量的1.5-2倍量的90-95度乙醇，边加边搅拌，充分搅拌至检测酒精度40-45度时，静置12小时，抽取乙醇，用滤布滤干乙醇，装入烘盘，放入烘箱60-80度烘干，即得肝素纳粗品。
六、精制
将所得肝素钠粗品用2%的氯化钠溶液完全溶解，制成其溶度为8%的溶液，在此过程中可升温助溶。将上述料液用5mol/L氢氧化钠溶液精细地调节PH=8.0-8.2，升温至78-80度，按照每一亿单位加入0.15-0.2mol/L高锰酸钾溶液至紫红色不再褪色时即为第一次氧化操作的终点；再加入亚硫酸钠溶液调至以红色刚好褪尽时为止。待上述料液冷却后，精细过滤一次，当其滤液温度下降至36度时，复滤一次，将滤液用氢氧化钠溶液调节PH=10.5-11.0，在充分搅拌下，缓慢的加入3%-5%过氧化氢溶液，在25-27度下进行第二次氧化，时间为16-24小时，当氧化过程结束后，将料液用“除菌过滤器”过滤，滤液用盐酸调节至PH=5.8-6.5，加入0.9倍量的95%乙醇，于5-10度温度下沉淀24小时。收集上述沉淀物，用10%氯化钠溶液溶解后，再加上3-4倍的95%乙醇进行沉淀，收集沉淀物（乙醇加以回收、蒸馏、脱水后，可循环套用）。沉淀物经无水乙醇脱水，研细，再经丙酮脱水，研细，再经丙酮脱水，远红外线真空烘干（50-60度），即得肝素钠精品。
Claims (2)
1.一种肝素钠的提取方法，其特征在于：它包括下列步骤：
（一）原料处理
将新鲜的猪肠放入不锈钢刮肠机，去除内外污物和外部皮肤脂肪，用清水清洗干净后，将猪肠绞碎成糜状胰浆，胰浆与水按体积比1：5加入清水混合后，再加入按胰浆重量2.5-3.5%的精盐混合搅拌，调解pH值至8-9；
（二）酶解提取
上述胰浆在充分搅拌下，加入按胰浆重量的1.5-3%的蛋白酶或新鲜胰浆，作为酶解剂，搅拌后缓慢加温40-45度，继续搅拌，并保持料液pH=8-9，液温在45-55度下酶解2-3小时，再加入按原料液重量的0.5-1.5%的蛋白酶，充分搅拌后，二次升温至90度，静置10-15分钟，趁热过滤去除杂质；
（三）吸附
将过滤后的料液冷却至室温后，输入吸附罐，加入按料液重量2-5%的树脂，吸附料液中的肝素钠成分，加温至60度，搅拌吸附处理2-3个小时后，静置过滤，滤液可作为生产治疗冠心病的新药原料；
（四）洗脱
将上述吸附有肝素成分的树脂送入洗脱罐，先用清水充分漂洗干净后，加入盐水，盐水与树脂按体积比为1:3，第一次洗脱时间为3-4小时；第二次洗脱加入盐水的用量与第一次相同，洗脱时间为2-3小时，或加入1-1.5倍的1.2mol/L氯化钠溶液作为洗脱液对树脂进行洗脱，第一次洗脱液为树脂体积的1倍，洗脱4小时；第二次洗脱液为树脂体积的0.5倍，洗脱时间为1小时；
（五）醇提
滤干树脂，将两次的洗脱液合并，搅拌30分钟后，送入沉淀罐，加入为洗脱液重量的1.5-2倍量的90-95度乙醇，边加边搅拌，充分搅拌至检测酒精度40-45度时，静置12小时，抽取乙醇，用滤布滤干乙醇，装入烘盘，放入烘箱60-80度烘干，即得肝素钠粗品，将所得肝素钠粗品用2%的氯化钠溶液完全溶解，制成其浓度为8%的溶液，并升温助溶，将上述料液用5mol/L氢氧化钠溶液精细地调节pH=8.0-8.2，升温至78-80度，按照每一亿单位加入0.15-0.2mol/L高锰酸钾溶液至紫红色不再褪色时即为第一次氧化操作的终点；再加入亚硫酸钠溶液调至以红色刚好褪尽时为止，待上述料液冷却后，精细过滤一次，当其滤液温度下降至36度时，复滤一次，将滤液用氢氧化钠溶液调节PH=10.5-11.0，在充分搅拌下，缓慢的加入3%-5%过氧化氢溶液，在25-27度下进行第二次氧化，时间为16-24小时，当氧化过程结束后，将料液用“除菌过滤器”过滤，滤液用盐酸调节至pH=5.8-6.5，加入0.9倍量的95%乙醇，于5-10度温度下沉淀24小时，收集上述沉淀物，用10%氯化钠溶液溶解后，再加入3-4倍的95%乙醇进行沉淀，收集沉淀物，乙醇加以回收、蒸馏、脱水后，可循环套用，沉淀物经无水乙醇脱水，研细，再经丙酮脱水，研细，再经丙酮脱水，远红外线真空50-60度烘干，即得肝素钠精品。
2.根据权利要求1所述肝素钠的提取方法，其特征在于：所述吸附有肝素成分的树脂，经过二次盐水洗脱后，再进行第三、第四次加清水洗脱，第三次加清水洗脱时间为1小时，第四次加清水洗脱为半小时，二次洗脱的加清水量均与料液的体积比为1:1。
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