发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题在于提供一种可进行体内示踪研究的放射性核素标记的医用高分子材料。
本发明所要解决的第二个技术问题是现有技术中通过色谱法分离纯化放射性核素标记化合物时操作繁琐,导致放射性核素的衰变量增加;且会残留有机溶剂,从而提供一种操作简单且能保证标记化合物纯度的分离纯化方法,以实现所述放射性核素标记的医用高分子材料的高效、高纯度及高放射量的制备。
为解决上述技术问题,本发明是通过以下技术方案实现的:
一种放射性核素标记的医用高分子材料,其结构式为18F--SFB-医用高分子材料,所述医用高分子材料为分子量为4000-5000g/mol的含有裸露的-NH2的树枝状大分子。
一种制备所述放射性核素标记的医用高分子材料的方法,其特征在于,包括如下步骤:
S01:通过18O(p,n)18F反应生成无载体18F-,并将其富集在QMA柱上,用含K2CO3/K2,2,2的乙腈溶液将18F-洗脱到第一反应管中,通入氮气加热并将溶液蒸干;向所述第一反应管中加入乙腈,并通入氮气加热,将溶液蒸干,冷却第一反应管至35-45℃;
S02:向所述第一反应管中加入含有SFB前体的乙腈溶液,控制温度110-120℃反应500-600s,并间歇性的以氮气流将溶液混合;随后向反应管中加入NaOH,85-95℃反应水解300-400s,并间歇性的以氮气流将溶液混合;水解后,用HCl和乙腈的混合溶液中和碱,得到18F--FBA反应液;
S03:将步骤S02中得到的所述18F--FBA反应液过第一C18柱;用90℃氮气流干燥第一C18柱,并用无水乙腈将C18柱上的18F--FBA洗脱到第二反应管中,向所述第二反应管中通入氮气并加热除水;然后加入氢氧化四丙基铵TBOH的水溶液,通氮气并加热将所述第二反应管内液体蒸干,冷却所述第二反应管至35-45℃;
S04:向所述第二反应管中加入含有TSTU的乙腈溶液,85-95℃下密封反应300s;再加入HCl酸化,将得到的反应液过第二C18柱;再用85-95℃氮气流吹干第二C18柱;用乙腈洗脱第二C18柱,得到18F--SFB反应液;
S05:取溶解于DMF的医用高分子材料,加入三乙胺和步骤S04中得到的18F--SFB反应液,于20-30℃反应;冷却后将反应液加入盛有乙醚的离心管中,离心,弃上清夜;并再次加入乙醚洗涤并弃上清液,吹干所述离心管中的乙醚,管内的沉淀即为所需的放射性核素标记的医用高分子材料。
所述步骤S05中,所述医用高分子材料、三乙胺和18F-SFB反应液的摩尔比为10-12:7-8:7-9。
所述步骤S02中,第一次所述以氮气流混合溶液的步骤具体为每间隔200s以氮气流将反应液混合1次,每次5s;第二次所述以氮气流混合溶液的步骤具体为每间隔100s以氮气流将溶液混合1次,每次5s。
所述步骤S03中,所述TBOH的浓度为1mol/L。
所述步骤S04中,所述步骤S04中,所述含有TSTU的乙腈溶液中TSTU的浓度为12-15mg/mL。
所述步骤S05中,所述离心的转速为12000-15000rpm。
本发明还公开了一种根据所述的方法制备得到的放射性核素标记的医用高分子材料。
本发明还公开了一种PET示踪剂,为所述的放射性核素标记的医用高分子材料。
本发明还公开了所述的PET示踪剂在医用高分子材料对肿瘤的靶向性和代谢研究领域中的应用。
本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点:
(1)本发明所述的标记医用高分子材料的方法,采用离心析晶的方法分离纯化标记的医用高分子材料,离心后得到的产品为固体;上述方法有效避免了现有技术中色谱法操作繁琐,导致放射性核素的衰变量增加;且会残留有机溶剂的问题;
(2)本发明所述的标记医用高分子材料的方法,采用离心析晶的方法得到的产品纯度高,可以达到95%以上。
具体实施方式
实施例1
本实施例所制备的18F-标记的含氨基的、分子量为4000的医用高分子材料的制备过程包括如下步骤:
S01:通过18O(p,n)18F反应生成无载体18F-,并将其富集在QMA柱上,用含K2CO3/K2,2,2的乙腈溶液将18F-洗脱到第一反应管,通入氮气加热,将溶液蒸干;向所述反应管中加入乙腈2mL,通入氮气加热,将溶液蒸干,冷却第一反应管至40℃;
S02:向所述第一反应管中加入含有SFB前体的乙腈溶液,116℃反应600s,每200s用氮气流将溶液混合1次,每次5s;向反应管中加入0.5mL0.5mol/L的NaOH,90℃反应水解300s,每100s用氮气流将溶液混合1次,每次5s;用7.5mL0.1mol/L的HCl和1.5mL乙腈的混合溶液中和碱,得到18F--FBA反应液;
S03:将步骤S02中得到的所述18F--FBA反应液过第一C18柱;用90℃氮气流干燥第一C18柱,用2mL无水乙腈将第一C18柱上的18F--FBA洗脱到第二反应管中,向管中通入氮气并加热,共沸、除水;然后加入40uL_1mol/L的氢氧化四丙基铵TBOH的水溶液,通氮气并加热,将所述第二反应管内液体蒸干,冷却所述第二反应管至40℃;
S04:向所述第二反应管中加入1mL13mg/mL的含有TSTU的乙腈溶液,90℃下密封反应300s;再加入5mL0.1mol/L的HCl酸化,将得到的反应液过第二C18柱;再用90℃氮气流吹干第二C18柱;用2mL乙腈洗脱第二C18柱,得到18F--SFB反应液;
S05:取50μL10mg/mL的溶解于DMF的医用高分子材料,加入10μL三乙胺和步骤S04中得到的18F--SFB反应液0.2mL(所述医用高分子材料、三乙胺和18F-SFB的摩尔比为11:7:8),25℃反应30分钟;冷却1min,将反应液加入盛有4ml乙醚的离心管中,摇晃均匀,在13000rpm转速下离心5分钟,弃上清液;向所述离心管中再次加入2ml乙醚,摇晃洗涤后倒掉上层清液,用热的吹风机吹干所述离心管中的乙醚,管内的沉淀即为放射性核素18F-标记的医用高分子材料。
实施例2
本实施例所制备的18F-标记的含氨基的、分子量为5000的医用高分子材料的制备过程包括如下步骤:
S01:通过18O(p,n)18F反应生成无载体18F-,并将其富集在QMA柱上,用含K2CO3/K2,2,2的乙腈溶液将18F-洗脱到第一反应管,通入氮气加热,将溶液蒸干;向所述反应管中加入乙腈,通入氮气加热,将溶液蒸干,冷却第一反应管至35℃;
S02:向所述第一反应管中加入含有SFB前体的乙腈溶液,110℃反应600s,每200s用氮气流将溶液混合1次,每次5s;向反应管中加入0.25mL1mol/L的NaOH,85℃反应水解300s,每100s用氮气流将溶液混合1次,每次5s;用7.5mL0.1mol/L的HCl和1.5mL乙腈的混合溶液中和碱,得到18F--FBA反应液;
S03:将步骤S02中得到的所述18F--FBA反应液过第一C18柱;用85℃氮气流干燥第一C18柱,用2mL无水乙腈将第一C18柱上的18F--FBA洗脱到第二反应管中,向管中通入氮气并加热,共沸、除水;然后加入45uL_1mol/L的氢氧化四丙基铵TBOH的水溶液,通氮气并加热,将所述第二反应管内液体蒸干,冷却所述第二反应管至35℃;
S04:向所述第二反应管中加入12mg/mL的TSTU的乙腈溶液,85℃下密封反应300s;再加入5mL0.1mol/L的HCl,将得到的反应液过第二C18柱;再用85℃氮气流吹干第二C18柱;用2mL乙腈洗脱第二C18柱,得到18F--SFB反应液;
S05:取70μL7mg/mL的溶解于DMF的医用高分子材料,加入13μL三乙胺和步骤S04中得到的18F--SFB反应液0.2mL(所述医用高分子材料、三乙胺和18F-SFB的摩尔比为10:8:7),20℃反应40分钟;冷却,将反应液加入盛有4ml乙醚的离心管中,摇晃均匀,在12000rpm转速下离心5分钟,倒掉上层清夜;向所述离心管中再次加入2ml乙醚,摇晃洗涤后倒掉上层清液,用热的吹风机吹干所述离心管中的乙醚,管内的沉淀即为放射性核素18F-标记的医用高分子材料。
实施例3
本实施例所制备的18F-标记的含氨基的、分子量为4000的医用高分子材料的制备过程包括如下步骤:
S01:通过18O(p,n)18F反应生成无载体18F-,并将其富集在QMA柱上,用含K2CO3/K2,2,2的乙腈溶液将18F-洗脱到第一反应管,通入氮气加热,将溶液蒸干;向所述反应管中加入乙腈,通入氮气加热,将溶液蒸干,冷却第一反应管至45℃;
S02:向所述第一反应管中加入含有SFB前体的乙腈溶液,120℃反应600s,每200s用氮气流将溶液混合1次,每次5s;向反应管中加入0.5mL0.5mol/L的NaOH,95℃反应水解300s,每100s用氮气流将溶液混合1次,每次5s;用2.5mL0.3mol/L的HCl和1.5mL乙腈的混合溶液中和碱,得到18F--FBA反应液;
S03:将步骤S02中得到的所述18F--FBA反应液过第一C18柱;用95℃氮气流干燥第一C18柱,用2mL无水乙腈将第一C18柱上的18F--FBA洗脱到第二反应管中,向管中通入氮气并加热,共沸、除水;然后加入50uL_1mol/L的氢氧化四丙基铵TBOH的水溶液,通氮气并加热,将所述第二反应管内液体蒸干,冷却所述第二反应管至45℃;
S04:向所述第二反应管中加入0.9mL15mg/mL的TSTU的乙腈溶液,95℃下密封反应300s;再加入5mL0.1mol/L的HCl,将得到的反应液过第二C18柱;再用95℃氮气流吹干第二C18柱;用2mL乙腈洗脱第二C18柱,得到18F--SFB反应液;
S05:取45μL13mg/mL的溶解于DMF的医用高分子材料,加入15L三乙胺和步骤S04中得到的18F--SFB反应液0.3mL(所述医用高分子材料、三乙胺和18F-SFB的摩尔比为12:8:9),30℃反应20分钟;冷却,将反应液加入盛有4ml乙醚的离心管中,摇晃均匀,在15000rpm转速下离心3分钟,倒掉上层清夜;向所述离心管中再次加入2ml乙醚,摇晃洗涤后倒掉上层清液,用热的吹风机吹干所述离心管中的乙醚,管内的沉淀即为放射性核素18F-标记的医用高分子材料。
实施例4
本实施例所制备的具有18F--SFB-医用高分子材料结构的医用高分子材料是采用如说明书附图1所示的PET-MF-2V-IT-I型氟多功能合成模块,对所述医用高分子材料进行18F标记,具体制备工艺如下:
1、QAM柱活化:用10ml(0.5M)的NaHCO3溶液冲洗QAM柱,再用20ml水冲洗,然后吹干;A柱活化(C18柱):先用10ml乙腈冲洗,后用7.5ml(0.1M)的HCl和2.5ml乙腈冲洗,然后吹干;B柱活化(C18柱):先用10ml甲醇冲洗,再用20ml水冲洗,吹干;
2、B1反应管中加入1.5ml含K2CO3/K2,2,2的乙腈溶液;B2反应管中加入2.0ml超干燥的乙腈溶液;B3反应管中加入10mg SFB前体和1ml乙腈;B4反应管中加入0.5ml(0.5M)的NaOH溶液;B5反应管中加入7.5ml(0.1M)的HCl和1.5ml乙腈;B6反应管中加入2.5ml乙腈溶液;B7反应管中加入12mg TSTU和1ml超干燥的乙腈溶液;B8反应管中加入0.1M的HCl溶液5ml;B9反应管中加入2ml乙腈;3、传靶:由18O(p,n)18F反应生成的无载体18F(232mCi)富集在QMA柱上;
4、淋洗:开始洗脱,打开六通阀V1,用1ml K2CO3/K2,2,2的乙腈溶液将18F-洗脱进RV1号反应管中,QMA残留18F-(5mCi)。
5、干燥:5分钟后依次开V9、V8,116℃蒸发干燥除水;三分钟后打开V5,加入2.0ml超干燥的乙腈溶液,116℃蒸发二次干燥除水。
6、亲核反应:干燥完成后,打开P1冷却,打开V3,加入10mg SFB前体和1ml乙腈,开关数次后关V3,开V8鼓气搅拌,关V8,V9。90℃下密闭反应10min,每分钟开V9,V8通气5s后关V8,V9,关H1,停止加热,开P1冷却。开V9,V4加0.5ml(0.5M)的NaOH溶液,关V4,开V8鼓气数秒,关V8,V9。90℃下密闭反应5min,每分钟开V9,V8通气5s后关V8,V9。关H1,停止加热,开P1冷却。开V9,V5加7.5ml(0.1M)的HCl和1.5ml乙腈,关V5,开V8鼓气数秒钟。
7、水洗:第一步反应结束后,关V10,V7,V8,V3,传至第一根C18柱,肼63.7mCi。关V3,V8,V7,V10。开V9,V4,加乙腈3ml至1号反应管,开数次后关V4,V9。开V14,V16,V7,V8,V4洗脱,得到24.8mCi。
8、水洗:总共有38.9mCi入2号反应管,所述2号反应管在未传18F-之前已经加入1mol/L的40uL TBOH的水溶液。关V6,V8,V7,V16,V14。
开V14,V16,V21,设置116℃,开H2加热干燥。,关H2,停止加热,开P2冷却至48℃,开V14,V11加N,N-四甲基脲四氟硼酸盐TSTU(12mg,0.75ml),开关数次后关V11,开V16,V21鼓气。关V21,V16,V14。设置90℃,开H2,加热5分钟,每分钟开V14,V16,V21通气5s后关V21,V16,V14。关H2,停止加热,开P2冷却至48℃,开V14,V12加入0.1M的HCl溶液5ml,开V14,V16,V21鼓气后关V21,V16,V14。开V17,V15,V16,V12转移至2号C18,得到50.4mCi。关V12,V16,V15,V17。开V14,V13,加2ml乙腈,开关数次后关V13,V14。开V15,V16,V13洗脱,肼21.7mCi。总产品:28.7mCi。
9、取50ul高分子1储备液,加入10ul重蒸三乙胺和0.2mlSFB乙腈溶液中,25℃反应30分钟。冷却一分钟,将反应液加入盛有4ml乙醚的离心管中,摇晃均匀,在13000rpm转速下离心5分钟,将上层清夜倒掉;离心管中再加入2ml乙醚洗涤,摇晃洗涤,然后倒掉上层有机液,管内的有机溶剂用热的吹风机吹干,管内的沉淀即为放射性核素18F-标记的医用高分子材料。
实施例518F-标记的医用高分子材料的HPLC质控分析
对实施例1制备得到的18F-标记的医用高分子材料进行HPLC质控分析,所用的检测条件为:温度T=25℃,波长=254nm,其流速及流动相如表1所示。
表1HPLC质控分析的条件
HPLC质控分析的结果图如说明书附图2所示,对附图2进行分析可知,18Fˉ-SFB-高分子的放射化学纯度达到了79.58%,药物达到了注射老鼠的要求,说明此方法完全可以满足实验要求。
实施例6制备型HPLC纯化18Fˉ标记的医用高分子材料
用下述检测条件的制备型HPLC纯化实施例1中18Fˉ标记的医用高分子材料的放射化学纯度为68.67%,纯化结果见附图3,而明显低于实施例5中通过离心纯化得到的18Fˉ标记的医用高分子材料的放射化学纯度(79.58%)。
所述制备型HPLC所用的条件为:
流速15ml/min;
流动相%A(H2O):%B(CH3CN)=70:30。
实施例1中用沉淀离心法纯化18Fˉ标记的医用高分子材料,产率=1.7/2.8mci×100%=60.7%;
用本实施例所述制备型HPLC纯化18Fˉ标记的医用高分子材料,产率=1.4/2.8mci×100%=50%;
由上述数据可知,用沉淀离心法制备得到的18Fˉ标记的医用高分子材料的放射化学纯度和产率均高于用制备型HPLC制备得到的产品。
实施例7
本发明所述放射性核素标记的医用高分子材料用做示踪剂的PET扫描图。
将实施例1制备得到的18F-SFB-医用高分子材料进行了PET扫描,扫描方法为对荷瘤鼠模型(乳腺癌,通过皮下接种的方式建模)进行尾静脉注射(100uCi/0.125ml,为尾静脉注射(所述18F-SFB-医用高分子材料的混合物)10min后,采用小动物麻醉仪,通入异氟烷和氧气的混合气体麻醉小鼠,然后进行PET扫描,图像经OSEM3D重建,勾画个脏器的感兴趣区域,扫描结果如附图4所示;1h之后再次对同一只荷瘤鼠进行PET扫描,扫描结果如附图5所示,荷瘤鼠右上肢腋下即为肿瘤显像区,18F-SFB-医用高分子材料随着时间的推移在肿瘤内的摄取增加。
显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。