JP4989241B2 - ［１８ｆ］標識化合物及びその製造方法、並びに［１８ｆ］標識リポソーム及び［１８ｆ］標識リポソーム製剤の製造方法 - Google Patents
［１８ｆ］標識化合物及びその製造方法、並びに［１８ｆ］標識リポソーム及び［１８ｆ］標識リポソーム製剤の製造方法 Download PDFInfo
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Description
本発明は、［１８Ｆ］標識化合物及びその製造方法、並びに［１８Ｆ］標識リポソーム又は［１８Ｆ］標識リポソーム製剤の製造方法に関する。
陽電子放出型断層撮影（以下、ＰＥＴ）とは、陽電子を放出する核種（以下、ポジトロン核種）で標識した薬剤を体内に投与して、その体内分布を画像化する撮影法である。
サイクロトロンで生成された放射性同位元素から放出される陽電子は、電子と正反対のプラスの電荷を持っており、放出された陽電子はすぐに電子と結合して一対のγ線（消滅放射線）を放出するため、この消滅放射線をＰＥＴ装置で測定することにより、ポジトロン核種の体内分布を定量的に画像化することを可能にする。
サイクロトロンで生成されるポジトロン核種（１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ）は生体内に存在する元素であるため、水、酸素、ブドウ糖、アミノ酸などを直接標識して、生体内の生理的・生化学的情報を捉えることができ、これにより、病気の早期発見や治療後の経過を知ることを可能にする。特に、脳疾患、心臓疾患及び癌の診断において効果を発揮しており、急速に普及している（非特許文献１）。
最近では、医薬品の前臨床及び臨床試験において、ＰＥＴを利用して医薬品の体内動態をヒトで解析する必要性が指摘されている（非特許文献２）。医薬品は人体に対して用いるものであるため、薬物動態は、実験動物ではなく、ヒトで調べるべきものだからである。
一方、近年では、ペプチド、タンパク質、抗体、核酸などの生体高分子が医薬品として数多く開発され、その薬効が期待されている。しかし、これらの生体高分子は血液中で分解されやすく、標的臓器に到達しにくい性質を有しているために、血中での化学的安定性の付与を目的としてリポソームに生体高分子を包含して投与するリポソーム製剤の開発が進められている（非特許文献３）。
また、抗がん剤などの毒性の強い医薬品では、より多くの有効成分を標的部位に到達させ、副作用を低減させるために、Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ（以下、ＤＤＳ）の実現を目的としてリポソームに抗癌剤を包含して投与するリポソーム製剤の開発が進められている（非特許文献４）。
これまでにポジトロン核種でリポソームを標識し、実験動物における動態をＰＥＴで解析することを試みた例は１例だけある（非特許文献５）。この標識方法は、フルオロデオキシグルコースを［１８Ｆ］で標識し、得られた［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコースを標識プローブとしてリポソームを調製する際に添加し、リポソーム内部の水相に［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコースを封入することによりリポソームを標識するものである。
Ｇｉｂｓｏｎら、Ａｕｓｔｒａｌａｓｉａｎ ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅｅ、１９９９年、２２巻、４号、ｐ．１３６−１４４
Ｗａｎｇら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、５巻、１１号、ｐ．１０５３−１０７５
秋吉一成、辻井 薫、「リポソーム応用の新展開」、ＮＴＳ社、２００５年
Ｍｉｎｋｏら、２００５年、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、６巻、６号、ｐ．５３７−５５２
Ｏｋｕら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ、１９９５年、１２３８巻、ｐ．８６−９０
しかしながら、ポジトロン核種の半減期は数分から数時間と非常に短いために、リポソームを構成する物質や封入する薬剤をポジトロン核種で標識し、これらを用いてリポソーム製剤を製造した場合であっても、医薬品には品質保証を得るための検査などが必要であるため、ＰＥＴに必要な放射活性を有し、かつ、ヒトに投与可能な標識リポソーム製剤を製造することは不可能である。
また、実験動物への投与を目的とし、品質保証を得るための検査などを実施しない場合であっても、リポソームを構成する物質や封入する薬剤をポジトロン核種で標識する手法では、ポジトロン核種で標識され、かつ、医薬品を含有するリポソーム製剤の収率は多くとも１０〜１５％であり、これらを分離精製することはほとんど不可能であるため、ＰＥＴを利用した医薬品の体内動態の解析に使用できないのが現状である。
そこで本発明は、製造後のリポソーム又はリポソーム製剤を事後的にポジトロン核種標識することを可能とし、リポソーム又はリポソーム製剤のヒトにおける体内動態を、ＰＥＴを利用して解析できるようにすることを目的とする。
上記目的を達成するために、本発明は、下記の一般式（Ｉ）で表される［１８Ｆ］標識化合物を提供する。
（式中、ｎは７〜２５の整数、ｍは２〜２０の整数を表し、Ｘはメチレン又は下記の一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）若しくは（ＩＶ）で表される二価の基を表す。）
（式中、ｎ’は５〜２３の整数を表す。）
（式中、ｎ’’は７〜２５の整数を表す。）
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、リポソームの脂質二重膜に簡易かつ高効率に取り込まれる［１８Ｆ］標識化合物を見出した。製造後のリポソーム又はリポソーム製剤を事後的にポジトロン核種で標識する方法はこれまでなかったが、上記の［１８Ｆ］標識化合物はこれを可能とし、マウスを使った実験においてＰＥＴに使用できることが判明した。
上記［１８Ｆ］標識化合物を使用すれば、リポソーム、高分子ミセルなどの両親媒性分子集合体、及び脂質が集合してできる脂質集合体を、製造後に事後的に［１８Ｆ］で標識することができる。また、上記［１８Ｆ］標識化合物を使用すれば、両親媒性分子集合体又は脂質集合体をドラッグキャリアとして使用する医薬品であって、ヒトに投与するために必要な品質検査を終えた医薬品、例えば、リポソーム製剤、高分子ミセル製剤など、についても［１８Ｆ］で事後的に標識することが可能となるため、これらの製剤のヒトに対する体内動態をＰＥＴで解析することが可能となる。
上記［１８Ｆ］標識化合物は、下記の一般式（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）であることが好ましく、両親媒性分子集合体標識用プローブ、脂質二重膜標識用プローブ又はリポソーム標識用プローブとして好ましく使用できる。
一般式（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）で表される［１８Ｆ］標識化合物は、リポソーム、高分子ミセルなどの両親媒性分子集合体、脂質が集合してできる脂質集合体及びこれらをドラッグキャリアとして使用する医薬品をより効率よく［１８Ｆ］で標識することができるため、ＰＥＴを利用した動態解析の感度をさらに高めることができる。
本発明は、下記の一般式（ＩＸ）で表される化合物と、［１８Ｆ］標識フッ化カリウムとを反応させて、一般式（ＩＸ）で表される化合物を［１８Ｆ］で標識する標識ステップを備える、上記［１８Ｆ］標識化合物の製造方法を提供する。
（式中、ｎは７〜２５の整数、ｍは２〜２０の整数を表し、Ｘはメチレン又は下記の一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）若しくは（ＩＶ）で表される二価の基を表す。）
（式中、ｎ’は５〜２３の整数を表す。）
（式中、ｎ’’は７〜２５の整数を表す。）
上記製造方法によれば、リポソーム、高分子ミセルなどの両親媒性分子集合体、及び脂質が集合してできる脂質集合体を、製造後に事後的に［１８Ｆ］で標識することができる［１８Ｆ］標識化合物を、簡易に製造できる。上記製造方法で得られた［１８Ｆ］標識化合物によれば、リポソーム、高分子ミセルなどの両親媒性分子集合体、及び脂質が集合してできる脂質を使用すれば、両親媒性分子集合体又は脂質集合体をドラッグキャリアとして使用する医薬品であって、ヒトに投与するために必要な品質検査を終えた医薬品、例えば、リポソーム製剤、高分子ミセル製剤など、についても［１８Ｆ］で事後的に標識することが可能となるため、これらの製剤のヒトに対する体内動態をＰＥＴで解析することが可能となる。
本発明は、［１８Ｆ］標識リポソームの製造方法であって、上記の［１８Ｆ］標識化合物と、リポソームとを含む溶液を２０〜８０℃に加温する加温ステップと、加温ステップ後にこの溶液を０〜２５℃に冷却する冷却ステップと、冷却ステップ後にこの溶液を遠心分離して、［１８Ｆ］標識リポソームを沈殿として回収する若しくはカラムにより回収する回収ステップとを備える製造方法を提供する。また、本発明は、［１８Ｆ］標識リポソーム製剤の製造方法であって、上記の［１８Ｆ］標識化合物と、リポソーム製剤とを含む溶液を２０〜８０℃に加温する加温ステップと、加温ステップ後にこの溶液を０〜２５℃に冷却する冷却ステップと、冷却ステップ後にこの溶液を遠心分離して、［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を沈殿として回収する若しくはカラムにより回収する回収ステップとを備える製造方法を提供する。
上記製造方法によれば、上記の［１８Ｆ］標識化合物を６０％以上の高い効率でリポソーム又はリポソーム製剤に取り込ませることを可能とし、［１８Ｆ］標識リポソーム又は［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を短時間で製造できる。上記製造方法で得られた［１８Ｆ］リポソーム又は［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を使用すれば、これらのヒトに対する体内動態をＰＥＴで解析することが可能となる。
本発明は、上記の製造方法で製造されるＰＥＴ用［１８Ｆ］標識リポソーム又はＰＥＴ用［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を提供する。
ＰＥＴ用［１８Ｆ］標識リポソーム又はＰＥＴ用［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を、動植物又はこれらの培養細胞に投与又は処理すれば、投与又は処理した［１８Ｆ］標識リポソーム又は［１８Ｆ］標識リポソーム製剤をＰＥＴで追跡することが可能となり、これらの体内動態の解析及び分子イメージング画像の取得が可能となる。
本発明によれば、リポソーム、高分子ミセルなどの両親媒性分子集合体、及び脂質が集合してできる脂質集合体を、製造後に事後的に［１８Ｆ］で標識することができ、両親媒性分子集合体又は脂質集合体をドラッグキャリアとして使用する医薬品、例えばリポソーム製剤、のヒトに対する体内動態をＰＥＴで解析することが可能となる。
また本発明の［１８Ｆ］標識化合物は、脂質二重膜標識用プローブ及び両親媒性分子集合体標識用プローブとしての用途を提供し、細胞レベルから動物レベルでのトレーサー実験のツール及びＰＥＴ解析用薬剤の標識用プローブとして両親媒性分子集合体又は脂質集合体をドラッグキャリアとして使用する広範囲の医薬品に使用できる。
さらに、本発明によれば、上記［１８Ｆ］標識化合物を、簡易に製造でき、６０％以上の高い効率で［１８Ｆ］標識された［１８Ｆ］標識リポソーム又は［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を短時間で製造できる。
以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。
本発明の［１８Ｆ］標識化合物は、下記の一般式（Ｉ）で表されることを特徴としている。
（式中、ｎは７〜２５の整数、ｍは２〜２０の整数を表し、Ｘはメチレン又は下記の一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）若しくは（ＩＶ）で表される二価の基を表す。）
（式中、ｎ’は５〜２３の整数を表す。）
（式中、ｎ’’は７〜２５の整数を表す。）
一般式（Ｉ）中のｎは、７〜１５の整数であることが好ましく、１１〜１５の整数であることがより好ましく、ｍは２〜４の整数であることが好ましく、２であることがより好ましい。
一般式（ＩＩ）中のｎ’は、５〜１３の整数であることが好ましく、９〜１３の整数であることがより好ましい。
一般式（ＩＶ）中のｎ’’は、７〜１５の整数であることが好ましく、１１〜１５の整数であることがより好ましい。
一般式（Ｉ）で表される［１８Ｆ］標識化合物は、以下の反応スキームで化学合成できる。
化合物（１ａ）と化合物（２ａ）とをＹｂ（ＯＴｆ）３などのルイス酸の存在下で反応させることにより、化合物（３ａ）が得られる。本反応は、窒素、アルゴンなどの不活性気体の気流下又は雰囲気下で行うことができる。本反応に用いる溶媒としては、出発原料をある程度溶解し、かつ、反応を阻害しないものであれば、特に制限はないが、例えば、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン系溶媒を用いることができる。反応温度は、出発原料、溶媒などにより異なり、好適には２５〜７０℃である。反応時間は、出発原料、溶媒、反応温度などにより異なり、好適には１０〜１５０時間である。ルイス酸は、化合物（１ａ）に対して０．０５〜０．５倍モルの量を用いることが好ましい。
その後、化合物（３ａ）をトシル化し、化合物（４ａ）を得る。化合物（３ａ）のトシル化は、一般的なトシル化反応を適用でき、例えば、化合物（３ａ）をトルエンスルホン酸クロリドと反応させればよい。本反応に用いる溶媒としては、化合物（３ａ）を溶解し、かつ、反応を阻害しないものであれば、特に制限はなく、反応温度は、２５〜７０℃が好ましい。反応時間は、出発原料、溶媒、反応温度などにより異なり、好適には５〜４８時間である。
引き続き、化合物（４ａ）を［１8Ｆ］ＫＦと反応させることにより、本発明の［１８Ｆ］標識化合物（５ａ）が得られる。［１8Ｆ］ＫＦは、サイクロトロンのターゲットに［１８Ｏ］Ｈ２Ｏを充填し、プロトンビームを照射して１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ反応を引き起こさせ、これにより生じた［１８Ｆ］Ｆ−をＫ２ＣＯ３と反応させれば得ることができる。
化合物（４ａ）を［１8Ｆ］ＫＦと反応させる場合には、例えば、［１8Ｆ］ＫＦを４，７，１３，１６，２１，２４−Ｈｅｘａｏｘａ−１，１０−ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ［８，８，８］ｈｅｘａｃｏｓａｎｅ（商品名：Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）［２，２，２］、メルク社）と反応させて複合体（以下、［１8Ｆ］ＫＦ／Ｋ［２，２，２］）を製造し、この複合体を化合物（４ａ）と反応させればよい。
反応終了後は、例えば、反応残渣にアセトニトリル水溶液を加え、逆相ＨＰＬＣで分画すれば、化合物（５ａ）を分離精製できる。ＨＰＬＣの条件としては、以下の条件を例示できる。
＜ＨＰＬＣの条件＞
・ＨＰＬＣカラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ３（７．６×２５０ｍｍ、５ｍ）
・移動相：ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ＝８００：２００
流速：６ｍＬ／ｍｉｎ
＜ＨＰＬＣの条件＞
・ＨＰＬＣカラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ３（７．６×２５０ｍｍ、５ｍ）
・移動相：ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ＝８００：２００
流速：６ｍＬ／ｍｉｎ
上記［１８Ｆ］標識化合物は、リポソーム、高分子ミセルなどの両親媒性分子集合体、及び脂質が集合してできる脂質集合体を、製造後に事後的に［１８Ｆ］で標識することができ、ヒトを含む動物に標識された両親媒性分子集合体及び脂質集合体を投与すれば、両親媒性分子集合体及び脂質集合体の体内動態を、ＰＥＴを利用して解析することが可能となる。
上記［１８Ｆ］標識化合物に加えて、上記反応スキームに記載した化合物（１ａ）の代わりに、炭素数８〜２６、好ましくは炭素数８〜１６の直鎖又は分枝アルキル鎖（以下、親油性鎖）と、ベンゼン、ナフタレンあるいはアントラセンなどの炭化水素からなる芳香環、フラン、ピロール、チオフェン、インドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、キノリン、イソキノリンあるいはフタラジンなどの複素芳香環、シクロヘキサン、デカリンあるいはテトラリンなどの炭化水素環、又はテトラヒドロフラン、ピロリジンあるいはピペリジンなどの複素環を有する環状化合物（以下、リンカー化合物）とを結合した化合物（以下、化合物（１ｂ））を使用し、上記反応スキームにしたがって［１８Ｆ］標識化合物を化学合成すれば、こうして得られた［１８Ｆ］標識化合物についても、リポソーム、高分子ミセルなどの両親媒性分子集合体、及び脂質が集合してできる脂質集合体を、製造後に事後的に［１８Ｆ］で標識することができる。上記リンカー化合物は、芳香環、複素芳香環、炭化水素環又は複素環に、炭素数１〜５のアルキル基が１〜３個結合していてもよい。
リンカー化合物としては、以下の一般式で表されるリンカー化合物を例示できる。式中、Ｒ１及びＲ２は、親油性鎖と結合し、Ｌは反応スキームにおける化合物（２ａ）又は後述する化合物（２ｂ）と結合する。
上記の化合物（１ｂ）は、当業者であれば公知の方法で容易に化学合成でき、例えば、親油性鎖の末端を、メタンスルホニル基、ベンゼンスルホニル基、p-トルエンスルホニル基、トリフルオロメタンスルホニル基などのスルホン酸エステル、クロロ、ブロモ、ヨードのハロゲン基又は水酸基などの脱離基とし、リンカー化合物と、エーテル、エステルなどの含酸素結合、アミン、アミドなどの含窒素結合、炭素−炭素結合すればよい。
また、上記［１８Ｆ］標識化合物に加えて、上記反応スキームに記載した化合物（２ａ）の代わりに、ポリエチレングリコール、グリセリン、エタノールアミン又は２−アミノ−１，３−プロパンジオール（以下、化合物（２ｂ））を使用し、反応スキームにしたがって［１８Ｆ］標識化合物を化学合成すれば、こうして得られた［１８Ｆ］標識化合物についても、リポソーム、高分子ミセルなどの両親媒性分子集合体、及び脂質が集合してできる脂質集合体を、製造後に事後的に［１８Ｆ］で標識することができる。
化合物（２ｂ）として使用するポリエチレングリコールの鎖長は１〜１００であればよいが、１〜２０が好ましい。また、化合物（２ｂ）には、これらの水酸基がリン酸エステル結合したものが含まれ、リン酸エステルの末端にアミノアルキル基、Ｎ−アシルアミノアルキル基を有するものも含まれる。なお、化合物（２ｂ）は、当業者であれば公知の方法で容易に化学合成できる。
上記［１８Ｆ］標識化合物は、下記の一般式（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＸＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）であることが好ましい。
一般式（Ｖ）で表される化合物は、上記反応スキームにおいて、化合物（１ａ）の代わりに下記の一般式（１ｂ）を使用し、化合物（２ａ）の代わりにジエチレングリコールを使用すれば化学合成できる。
一般式（ＶＩ）で表される化合物は、上記反応スキームにおいて、化合物（１ａ）の代わりに下記の一般式（１ｃ）を使用し、化合物（２ａ）の代わりにジエチレングリコールを使用すれば化学合成できる。
一般式（ＶＩＩ）で表される化合物は、上記反応スキームにおいて、化合物（１ａ）の代わりに下記の一般式（１ｄ）を使用し、化合物（２ａ）の代わりにジエチレングリコールを使用すれば化学合成できる。
一般式（ＶＩＩＩ）で表される化合物は、上記反応スキームにおいて、化合物（１ａ）の代わりに下記の一般式（１ｅ）を使用し、化合物（２ａ）の代わりにジエチレングリコールを使用すれば化学合成できる。
上記［１８Ｆ］標識化合物は、脂質二重膜標識用プローブ及び両親媒性分子集合体標識用プローブとして好ましく使用できる。
ここで、「両親媒性分子集合体標識用プローブ」とは、脂質集合体、リポソーム、高分子ミセルのような両親媒性分子集合体の標識に使用できるプローブのことをいう。本明細書に記載する両親媒性分子集合体標識用プローブは、ポジトロン核種である［１８Ｆ］と結合した［１８Ｆ］標識化合物が両親媒性分子集合体に好適に取り込まれるため、両親媒性分子集合体を［１８Ｆ］で標識し、この標識を追跡することによって両親媒性分子集合体の追跡を可能とするものである。
また、「脂質二重膜標識用プローブ」とは、生物の細胞を構成する細胞膜のような天然の脂質二重膜や人為的に製造した脂質二重膜の標識に使用できるプローブのことをいう。本明細書に記載する脂質二重膜標識用プローブは、ポジトロン核種である［１８Ｆ］と結合した［１８Ｆ］標識化合物が脂質二重膜と好適に取り込まれるため、脂質二重膜を［１８Ｆ］で標識し、この標識を追跡することによって脂質二重膜の追跡を可能とするものである。
さらに、「リポソーム標識用プローブ」とは、リポソームの標識に使用できるプローブのことをいう。本明細書に記載するリポソーム標識用プローブは、ポジトロン核種である［１８Ｆ］と結合した［１８Ｆ］標識化合物がリポソームに好適に取り込まれるため、リポソームを［１８Ｆ］で標識し、この標識を追跡することによってリポソームの追跡を可能とするものである。
本発明の上記［１８Ｆ］標識化合物の製造方法は、下記の一般式（ＩＸ）で表される化合物と、［１８Ｆ］標識フッ化カリウムとを反応させて、一般式（ＩＸ）で表される化合物を［１８Ｆ］で標識する標識ステップを備えることを特徴としている。
（式中、ｎは７〜２５の整数、ｍは２〜２０の整数を表し、Ｘはメチレン又は下記の一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）若しくは（ＩＶ）で表される二価の基を表す。）
（式中、ｎ’は５〜２３の整数を表す。）
（式中、ｎ’’は７〜２５の整数を表す。）
一般式（ＶＩＩＩ）中のｎは、７〜１５の整数であることが好ましく、１２〜１５の整数であることがより好ましく、ｍは２〜４の整数であることが好ましく、２であることがより好ましい。
上記標識ステップは、一般式（ＩＸ）で表される［１８Ｆ］標識化合物を［１８Ｆ］標識フッ化カリウムと反応させて、一般式（ＩＸ）で表される化合物を［１８Ｆ］で標識する標識ステップは、上記の反応スキームに記載した化合物（４ａ）から化合物（５ａ）化学合成するステップに該当する。
すなわち、上記の反応スキームに記載した化合物（３ａ）をトシル化することにより得られた化合物（４ａ）を［１8Ｆ］ＫＦと反応させるステップである。化合物（４ａ）との反応に使用する［１8Ｆ］ＫＦは、サイクロトロンのターゲットに［１８Ｏ］Ｈ２Ｏを充填し、プロトンビームを照射して１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ反応を引き起こさせ、これにより生じた［１８Ｆ］Ｆ−をＫ２ＣＯ３と反応させれば得ることができ、例えば、［１8Ｆ］ＫＦ／Ｋ［２，２，２］）を化合物（４ａ）との反応に使用できる。
上記製造方法で製造された［１８Ｆ］標識化合物は、上記標識ステップ後に、逆相ＨＰＬＣで分画することにより分離精製できる。
本発明の［１８Ｆ］標識リポソームの製造方法は、上記の［１８Ｆ］標識化合物と、リポソームとを含む溶液を２０〜８０℃に加温する加温ステップと、加温ステップ後にこの溶液を０〜２５℃に冷却する冷却ステップと、冷却ステップ後にこの溶液を遠心分離して、［１８Ｆ］標識リポソームを沈殿として回収する若しくはカラムにより回収する回収ステップとを備えることを特徴としている。また、本発明の［１８Ｆ］標識リポソーム製剤の製造方法は、上記の［１８Ｆ］標識化合物と、リポソーム製剤とを含む溶液を２０〜８０℃に加温する加温ステップと、加温ステップ後にこの溶液を０〜２５℃に冷却する冷却ステップと、冷却ステップ後にこの溶液を遠心分離して、［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を沈殿として回収する若しくはカラムにより回収する回収ステップとを備えることを特徴としている。
上記加温ステップでは、上記の［１８Ｆ］標識化合物と、リポソーム又はリポソーム製剤とを含む溶液をバイヤル、ビーカー又試験管などの容器に入れ、その容器を密封して２０〜８０℃のお湯に浸漬したり、恒温室に入れたりして加温すればよい。加温する温度としては、製剤により適宜決めることができる。
冷却ステップでは、加温ステップ後の溶液の入った容器を０〜２５℃の水に浸漬したり、氷中に置いたりして冷却すればよい。冷却する温度としては、０〜２５℃が好ましく、０〜１０℃がより好ましい。
回収ステップでは、冷却ステップ後の溶液を遠心分離して、［１８Ｆ］標識リポソーム又は［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を沈殿として集め、上清を廃棄すれば回収できるが、遠心分離における遠心力は、１００，０００〜１，０００，０００×ｇが好ましく、２０，０００〜７００，０００×ｇがより好ましいが製剤の比重により適宜決めることができる。またゲルろ過クロマトグラフィーの分子篩カラムなどを用いて回収することが可能である。
本発明の製造方法で製造される［１８Ｆ］標識リポソーム又は［１８Ｆ］標識リポソーム製剤は、ＰＥＴ用リポソーム又はＰＥＴ用リポソーム製剤として好適に使用できる。
「陽電子放出型断層撮影（ＰＥＴ）用［１８Ｆ］標識リポソーム」又は「陽電子放出型断層撮影（ＰＥＴ）用［１８Ｆ］標識リポソーム製剤」とは、［１８Ｆ］標識リポソーム又は［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を体内に投与し、体内で［１８Ｆ］が放出する消滅放射線をＰＥＴ装置で測定することにより、［１８Ｆ］標識リポソーム又は［１８Ｆ］標識リポソーム製剤の体内分布を定量的に画像化するために使用する［１８Ｆ］標識リポソーム又は［１８Ｆ］標識リポソーム製剤のことである。
ＰＥＴ用［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を使用すれば、医薬品を包含し、医薬品のＤＤＳを実現可能とするリポソーム又は医薬品であるリポソーム製剤の体内動態を、ＰＥＴを利用してヒトで解析することが可能となる。
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
（実施例１）リポソーム標識用プローブの候補化合物のリポソームへの取り込み率
１．リポソーム標識用プローブの候補化合物の化学合成
１）７−［４−（Ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｏｃｔｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．２０ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）とｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ（０．３６ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（４ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（０．１１ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で６日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、有機層を水で洗浄し、ジクロロメタンで抽出した。回収した有機層に無水硫酸マグネシウムを加え、濾過後の液体を減圧下で濃縮乾固し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）することにより、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨ（０．１３６ｇ、５０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.89 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.29-1.32 (8H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.59-3.74 (8H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.50 (2H, s), 6.87 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.26 (2H, d, J = 8.0 Hz).
１．リポソーム標識用プローブの候補化合物の化学合成
１）７−［４−（Ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｏｃｔｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．２０ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）とｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ（０．３６ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（４ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（０．１１ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で６日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、有機層を水で洗浄し、ジクロロメタンで抽出した。回収した有機層に無水硫酸マグネシウムを加え、濾過後の液体を減圧下で濃縮乾固し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）することにより、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨ（０．１３６ｇ、５０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.89 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.29-1.32 (8H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.59-3.74 (8H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.50 (2H, s), 6.87 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.26 (2H, d, J = 8.0 Hz).
２）１３−［４−（Ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２−ｔｅｔｒａｏｘａｔｒｉｄｅｃａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ８−Ｎ４−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｏｃｔｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３１ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量２００）（１．０６ｇ、５．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（６．５ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（８２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３から１００％酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝１０：１）することにより、Ｃ８−Ｎ４−ＯＨ（０．１１０ｇ、２０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.28-1.49 (10H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.58-3.73 (16H, m), 3.93 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.0 Hz).
窒素気流下、４−ｏｃｔｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３１ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量２００）（１．０６ｇ、５．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（６．５ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（８２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３から１００％酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝１０：１）することにより、Ｃ８−Ｎ４−ＯＨ（０．１１０ｇ、２０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.28-1.49 (10H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.58-3.73 (16H, m), 3.93 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.0 Hz).
３）２２−［４−（Ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ｈｅｐｔａｏｘａｄｏｃｏｓａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ８−Ｎ７−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｏｃｔｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（１００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量３００）（０．５１ｇ、１．７ ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．１ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（２６ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２０時間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３から１００％酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝１０：１）することにより、Ｃ８−Ｎ７−ＯＨ（３２ｍｇ、１０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.89 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.29-1.45 (10H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.59-3.73 (28H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.0 Hz).
窒素気流下、４−ｏｃｔｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（１００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量３００）（０．５１ｇ、１．７ ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．１ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（２６ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２０時間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３から１００％酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝１０：１）することにより、Ｃ８−Ｎ７−ＯＨ（３２ｍｇ、１０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.89 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.29-1.45 (10H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.59-3.73 (28H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.0 Hz).
４）７−［４−（Ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１２−Ｎ２−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．４０ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）とｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ（０．５８ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（７．０ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（０．１７ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で４日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１からヘキサン：酢酸エチル＝１：１）することにより、Ｃ１２−Ｎ２−ＯＨ（０．１９ｇ、３６％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 6.5 Hz), 1.25-1.35 (16H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.0 Hz ), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.59-3.74 (8H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz ), 4.50 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.5 Hz); 13C NMR (CDCl3): δ14.1, 22.7, 26.0, 29.2, 29.3, 29.4, 29.5, 29.55, 29.60, 29.61, 31.9, 61.7, 67.9, 69.0, 70.4, 72.4, 72.9, 114.3, 129.4, 129.6, 158.8 . IR (KBr): 3599, 1612 cm-1. MS: 398 [(M+NH4)+], 403 [(M+Na)+], 419 [(M+K)+].
窒素気流下、４−ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．４０ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）とｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ（０．５８ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（７．０ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（０．１７ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で４日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１からヘキサン：酢酸エチル＝１：１）することにより、Ｃ１２−Ｎ２−ＯＨ（０．１９ｇ、３６％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 6.5 Hz), 1.25-1.35 (16H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.0 Hz ), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.59-3.74 (8H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz ), 4.50 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.5 Hz); 13C NMR (CDCl3): δ14.1, 22.7, 26.0, 29.2, 29.3, 29.4, 29.5, 29.55, 29.60, 29.61, 31.9, 61.7, 67.9, 69.0, 70.4, 72.4, 72.9, 114.3, 129.4, 129.6, 158.8 . IR (KBr): 3599, 1612 cm-1. MS: 398 [(M+NH4)+], 403 [(M+Na)+], 419 [(M+K)+].
５）１３−［４−（Ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２−ｔｅｔｒａｏｘａｔｒｉｄｅｃａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１２−Ｎ４−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．１０ｇ、０．３４ ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量２００；０．２７ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１．７ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（２２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を加え、室温で３日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３から１００％酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝５０：１）することにより、Ｃ１２−Ｎ４−ＯＨ（０．０３３ｇ、２０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 6.5 Hz), 1.14-1.44 (18H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.5 Hz), 3.58-3.79 (16H, m), 3.94 (2H, t, J = 6.5 Hz), 4.49 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.24 (2H, d, J = 8.0 Hz); 13C NMR (CDCl3): δ14.1, 22.7, 26.0, 29.2, 29.3, 29.4, 29.55, 29.57, 29.60, 29.63, 31.9, 61.7, 68.0, 69.0, 70.3, 70.5, 70.58, 70.60, 72.5, 72.9, 114.3, 129.4, 130.0, 158.7. IR (KBr): 3446, 1629 cm-1. MS: 486 [(M+NH4)+], 491 [(M+Na)+].
窒素気流下、４−ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．１０ｇ、０．３４ ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量２００；０．２７ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１．７ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（２２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を加え、室温で３日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３から１００％酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝５０：１）することにより、Ｃ１２−Ｎ４−ＯＨ（０．０３３ｇ、２０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 6.5 Hz), 1.14-1.44 (18H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.5 Hz), 3.58-3.79 (16H, m), 3.94 (2H, t, J = 6.5 Hz), 4.49 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.24 (2H, d, J = 8.0 Hz); 13C NMR (CDCl3): δ14.1, 22.7, 26.0, 29.2, 29.3, 29.4, 29.55, 29.57, 29.60, 29.63, 31.9, 61.7, 68.0, 69.0, 70.3, 70.5, 70.58, 70.60, 72.5, 72.9, 114.3, 129.4, 130.0, 158.7. IR (KBr): 3446, 1629 cm-1. MS: 486 [(M+NH4)+], 491 [(M+Na)+].
６）２２−［４−（Ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ｈｅｐｔａｏｘａｄｏｃｏｓａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１２−Ｎ７−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３０ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ） （平均分子量３００；１．２３ｇ、４．１ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（５．１ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（６４ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３から１００％酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝５０：１、酢酸エチル：メタノール＝１９：１）することにより、Ｃ１２−Ｎ７−ＯＨ（０．０７３ｇ、１２％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.261.44 (18H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.593.72 (28H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.48 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.24(2H, d, J = 8.5 Hz); 13C NMR (CDCl3): δ14.0, 22.6, 26.0, 29.2, 29.29, 29.35, 29.5, 29.58, 29.59, 31.9, 61.7, 68.0, 69.0, 70.2, 70.5, 70.6, 72.6, 72.9, 114.3, 129.3, 130.0, 158.7 IR (KBr): 3481 cm-1. MS: 618 [(M+NH4)+].
窒素気流下、４−ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３０ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ） （平均分子量３００；１．２３ｇ、４．１ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（５．１ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（６４ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３から１００％酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝５０：１、酢酸エチル：メタノール＝１９：１）することにより、Ｃ１２−Ｎ７−ＯＨ（０．０７３ｇ、１２％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.261.44 (18H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.593.72 (28H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.48 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.24(2H, d, J = 8.5 Hz); 13C NMR (CDCl3): δ14.0, 22.6, 26.0, 29.2, 29.29, 29.35, 29.5, 29.58, 29.59, 31.9, 61.7, 68.0, 69.0, 70.2, 70.5, 70.6, 72.6, 72.9, 114.3, 129.3, 130.0, 158.7 IR (KBr): 3481 cm-1. MS: 618 [(M+NH4)+].
７）（２８−［４−（Ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−ｎｏｎａｏｘａｏｃｔａｃｏｓａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１２−Ｎ９−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量４００）（１．２３ｇ、３．１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１．７ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（１１ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で４日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１からから１００％酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝１０：１）することにより、Ｃ１２−Ｎ９−ＯＨ（２１ｍｇ、１０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.22-1.36 (16H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.75 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.58-3.73 (36H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.5 Hz).
窒素気流下、４−ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量４００）（１．２３ｇ、３．１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１．７ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（１１ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で４日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１からから１００％酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝１０：１）することにより、Ｃ１２−Ｎ９−ＯＨ（２１ｍｇ、１０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.22-1.36 (16H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.75 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.58-3.73 (36H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.5 Hz).
８）６１−［４−（Ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０−ｈｅｎｈｅｘａｃｏｎｔａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１２−Ｎ２０−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量９００）（１．２３ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（１．７ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（１１ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離（アセトン：メタノール＝３０：１）することにより、Ｃ１２−Ｎ２０−ＯＨ（４０ｍｇ、１０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.85 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.24-1.38 (16H, m), 1.42 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.74 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.57-3.70 (80H, m), 3.91 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.46 (2H, s), 6.80 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.21 (2H, d, J = 8.5Hz).
窒素気流下、４−ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量９００）（１．２３ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（１．７ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（１１ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離（アセトン：メタノール＝３０：１）することにより、Ｃ１２−Ｎ２０−ＯＨ（４０ｍｇ、１０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.85 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.24-1.38 (16H, m), 1.42 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.74 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.57-3.70 (80H, m), 3.91 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.46 (2H, s), 6.80 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.21 (2H, d, J = 8.5Hz).
９）７−［４−（Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１６−Ｎ２−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．４０ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）とｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ（０．４８ｇ、４．６ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（５．７ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（０．１４ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加えて室温で４日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）することにより、Ｃ１６−Ｎ２−ＯＨ（０．０９２ｇ、１８％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 6.5 Hz), 1.25-1.45 (26H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.5 Hz), 3.59-3.74 (8H, m), 3.94 (2H, t, J = 6.5 Hz ), 4.50 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.5 Hz) ; 13C NMR (CDCl3): δ14.1, 22.7, 26.0, 29.2, 29.3, 29.4, 29.5, 29.56, 29.62, 29.7, 31.9, 61.7, 67.9, 69.0, 70.4, 72.4, 72.9, 114.3, 129.4, 129.6, 158.8 IR (KBr): 3601, 1611 cm-1. MS: 454 [(M+NH4)+], 459 [(M+Na)+], 475 [(M+K)+].
窒素気流下、４−ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．４０ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）とｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ（０．４８ｇ、４．６ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（５．７ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（０．１４ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加えて室温で４日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）することにより、Ｃ１６−Ｎ２−ＯＨ（０．０９２ｇ、１８％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 6.5 Hz), 1.25-1.45 (26H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.5 Hz), 3.59-3.74 (8H, m), 3.94 (2H, t, J = 6.5 Hz ), 4.50 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.5 Hz) ; 13C NMR (CDCl3): δ14.1, 22.7, 26.0, 29.2, 29.3, 29.4, 29.5, 29.56, 29.62, 29.7, 31.9, 61.7, 67.9, 69.0, 70.4, 72.4, 72.9, 114.3, 129.4, 129.6, 158.8 IR (KBr): 3601, 1611 cm-1. MS: 454 [(M+NH4)+], 459 [(M+Na)+], 475 [(M+K)+].
１０）１９−［４−（Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８−ｈｅｘａｏｘａｎｏｎａｄｅｃａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１６−Ｎ４−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．１８ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量２００）（０．４２ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．６ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（４９ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３から１００％酢酸エチル）することにより、Ｃ１６−Ｎ４−ＯＨ（５４ｍｇ、２０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.26-1.44 (26H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.58-3.73 (16H, m), 3.94(2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.86(2H, d, J = 8.0 Hz), 7.25(2H, d, J = 8.0 Hz).
窒素気流下、４−ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．１８ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量２００）（０．４２ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．６ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（４９ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３から１００％酢酸エチル）することにより、Ｃ１６−Ｎ４−ＯＨ（５４ｍｇ、２０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.26-1.44 (26H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.58-3.73 (16H, m), 3.94(2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.86(2H, d, J = 8.0 Hz), 7.25(2H, d, J = 8.0 Hz).
１１）２２−［４−（Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ｈｅｐｔａｏｘａｄｏｃｏｓａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１６−Ｎ７−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（１８０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量３００）（０．６２ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．６ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（３２ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で５日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ジクロロメタンからジクロロメタン：メタノール＝２０：１）することにより、Ｃ１６−Ｎ７−ＯＨ（３２ｍｇ、１０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.26-1.44 (26H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.59-3.73 (28H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.24 (2H, d, J = 9.0 Hz).
窒素気流下、４−ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（１８０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量３００）（０．６２ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．６ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（３２ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で５日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ジクロロメタンからジクロロメタン：メタノール＝２０：１）することにより、Ｃ１６−Ｎ７−ＯＨ（３２ｍｇ、１０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.26-1.44 (26H, m), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.59-3.73 (28H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.24 (2H, d, J = 9.0 Hz).
１２）２８−［４−（Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−ｎｏｎａｏｘａｏｃｔａｃｏｓａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１６−Ｎ９−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．１０ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量４００）（１．０３ｇ、２．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１．５ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（９ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で７日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（１００％酢酸エチルから酢酸エチル：メタノール＝９：１）することにより、Ｃ１６−Ｎ９−ＯＨ（２１ｍｇ、１０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.22-1.36 (24H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.78 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.58-3.73 (36H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.5 Hz).
窒素気流下、４−ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．１０ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量４００）（１．０３ｇ、２．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１．５ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（９ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で７日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（１００％酢酸エチルから酢酸エチル：メタノール＝９：１）することにより、Ｃ１６−Ｎ９−ＯＨ（２１ｍｇ、１０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.22-1.36 (24H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.78 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.58-3.73 (36H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.49 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, d, J = 8.5 Hz).
１３）６１−［４−（Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０−ｈｅｎｈｅｘａｃｏｎｔａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１６−Ｎ２０−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、４−ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．１８ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量９００）（１．８６ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．６ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（３２ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で６日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離（アセトン：メタノール＝３０：１）することにより、Ｃ１６−Ｎ２０−ＯＨ（６０ｍｇ、９％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.20-1.26 (28H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.73 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.10-3.73 (80H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.48 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.24 (2H, d, J = 8.5 Hz).
窒素気流下、４−ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．１８ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量９００）（１．８６ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．６ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（３２ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で６日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離（アセトン：メタノール＝３０：１）することにより、Ｃ１６−Ｎ２０−ＯＨ（６０ｍｇ、９％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.20-1.26 (28H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.73 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.10-3.73 (80H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.48 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.24 (2H, d, J = 8.5 Hz).
１４）３−［４−（Ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ］−ｐｒｏｐａｎ−１,２−ｄｉｏｌ（以下、Ｃ８−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨ）の化学合成
上記と同様にしてＣ８−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨを得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.251.34 (8H, m), 1.45 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.52 (1H, dd, J = 6.0, 10.0 Hz), 3.56 (1H, dd, J = 4.0, 10.0 Hz), 3.63 (1H, dd, J = 6.0, 11.0 Hz), 3.70 (1H, dd, J = 4.0, 11.0 Hz), 3.86-3.89 (1H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.48 (2H, s), 6.87 (2H, dd, J = 2.0, 8.5 Hz), 7.23 (2H, dd, J = 2.5, 8.5 Hz).
上記と同様にしてＣ８−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨを得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.251.34 (8H, m), 1.45 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.52 (1H, dd, J = 6.0, 10.0 Hz), 3.56 (1H, dd, J = 4.0, 10.0 Hz), 3.63 (1H, dd, J = 6.0, 11.0 Hz), 3.70 (1H, dd, J = 4.0, 11.0 Hz), 3.86-3.89 (1H, m), 3.94 (2H, t, J = 7.0 Hz), 4.48 (2H, s), 6.87 (2H, dd, J = 2.0, 8.5 Hz), 7.23 (2H, dd, J = 2.5, 8.5 Hz).
１５）３−［４−（Ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）−ｐｒｏｐａｎ−１，２−ｄｉｏｌ（以下、Ｃ１２−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨ）の化学合成
上記と同様にしてＣ１２−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨを得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.25-1.40 (16H, m), 1.45 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.52 (1H, dd, J = 6.0, 10 Hz), 3.57 (1H, dd, J = 4.0, 10.0 Hz), 3.63 (1H, dd, J = 6.0, 11.0 Hz), 3.71 (2H, dd, J = 4.0, 11.0 Hz), 3.88 (1H, m), 3.95 (2H, t, J = 6.5 Hz ), 4.48 (2H, s), 6.88 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.23 (2H, d, J = 8.5 Hz ).
上記と同様にしてＣ１２−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨを得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.25-1.40 (16H, m), 1.45 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 1.77 (2H, quint, J = 7.0 Hz), 3.52 (1H, dd, J = 6.0, 10 Hz), 3.57 (1H, dd, J = 4.0, 10.0 Hz), 3.63 (1H, dd, J = 6.0, 11.0 Hz), 3.71 (2H, dd, J = 4.0, 11.0 Hz), 3.88 (1H, m), 3.95 (2H, t, J = 6.5 Hz ), 4.48 (2H, s), 6.88 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.23 (2H, d, J = 8.5 Hz ).
１６）３−［４−（Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）−ｐｒｏｐａｎ−１，２−ｄｉｏｌ（以下、Ｃ１６−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨ）の化学合成
上記と同様にしてＣ１６−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨを得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.25-1.40 (24H, m), 1.44 (2H, m), 1.77 (2H, quint., J = 7.0 Hz), 3.53 (1H, dd, J = 6.0, 10.0 Hz), 3.56 (1H, dd, J = 3.5, 9.0 Hz), 3.64 (1H, dd, J = 5.5, 11.5 Hz), 3.70 (1H, dd, J = 4.0, 11.5 Hz), 3.86-3.89 (1H, m), 3.95 ( 2H, t, J = 7.0 Hz ), 4.48 (2H, s), 6.87 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.23 (2H, d, J = 8.0 Hz).
上記と同様にしてＣ１６−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨを得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.25-1.40 (24H, m), 1.44 (2H, m), 1.77 (2H, quint., J = 7.0 Hz), 3.53 (1H, dd, J = 6.0, 10.0 Hz), 3.56 (1H, dd, J = 3.5, 9.0 Hz), 3.64 (1H, dd, J = 5.5, 11.5 Hz), 3.70 (1H, dd, J = 4.0, 11.5 Hz), 3.86-3.89 (1H, m), 3.95 ( 2H, t, J = 7.0 Hz ), 4.48 (2H, s), 6.87 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.23 (2H, d, J = 8.0 Hz).
１７）２２−［３，４−Ｄｉ（ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ｈｅｐｔａｏｘａｄｏｃｏｓａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ８×２−Ｎ７−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、３，４−ｄｉ（ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３０ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量３００）（０．９９ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（４．１ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（５１ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２５時間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１から１００％酢酸エチルから酢酸エチル：メタノール＝１０：１）することにより、Ｃ８×２−Ｎ７−ＯＨ（１７２ｍｇ、３２％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (6H, t, J = 6.0 Hz), 1.28-1.33 (16H, m), 1.43-1.49 (4H, m), 1.77-1.84 (4H, m), 3.58-3.73 (28H, m), 3.96-4.00 (4H, m), 4.47 (2H, s), 6.83 (2H, s), 6.89 (1H, s).
窒素気流下、３，４−ｄｉ（ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３０ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量３００）（０．９９ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（４．１ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（５１ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２５時間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１から１００％酢酸エチルから酢酸エチル：メタノール＝１０：１）することにより、Ｃ８×２−Ｎ７−ＯＨ（１７２ｍｇ、３２％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (6H, t, J = 6.0 Hz), 1.28-1.33 (16H, m), 1.43-1.49 (4H, m), 1.77-1.84 (4H, m), 3.58-3.73 (28H, m), 3.96-4.00 (4H, m), 4.47 (2H, s), 6.83 (2H, s), 6.89 (1H, s).
１８）２８−［３，４−Ｄｉ（ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−ｎｏｎａｏｘａｏｃｔａｃｏｓａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ８×２−Ｎ９−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、３,４−ｄｉ（ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３０ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量４００）（１．３２ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（４．１ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（５１ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で６日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（１００％酢酸エチルから酢酸エチル：メタノール＝２：１）することにより、Ｃ８×２−Ｎ９−ＯＨ（０．２０ｇ、３２％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (6H, t, J = 6.0 Hz), 1.28-1.33 (16H, m), 1.43-1.49 (4H, m,), 1.78-1.83 (4H, m), 3.58-3.73 (36H, m), 3.96-4.00 (4H, m), 4.47 (2H, s), 6.83 (2H, s), 6.89 (1H, s).
窒素気流下、３,４−ｄｉ（ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３０ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量４００）（１．３２ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（４．１ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（５１ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で６日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（１００％酢酸エチルから酢酸エチル：メタノール＝２：１）することにより、Ｃ８×２−Ｎ９−ＯＨ（０．２０ｇ、３２％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (6H, t, J = 6.0 Hz), 1.28-1.33 (16H, m), 1.43-1.49 (4H, m,), 1.78-1.83 (4H, m), 3.58-3.73 (36H, m), 3.96-4.00 (4H, m), 4.47 (2H, s), 6.83 (2H, s), 6.89 (1H, s).
１９）６１−［３，４−Ｄｉ（ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０−ｈｅｎｈｅｘａｃｏｎｔａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ８×２−Ｎ２０−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、３,４−ｄｉ（ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３０ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量９００）（３．０ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（４．１ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（５１ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（１００％酢酸エチルから酢酸エチル：メタノール＝３：１）することにより、Ｃ８×２−Ｎ２０−ＯＨ（０．２０ｇ、２０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.25-1.36 (16H, m), 1.42-1.47 (4H, m,), 1.77-1.84 (4H, m), 3.59-3.73 (80H, m), 3.96-3.99 (4H, m), 4.47 (2H, s), 6.83 (2H, s), 6.89 (1H, s).
窒素気流下、３,４−ｄｉ（ｏｃｔｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３０ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量９００）（３．０ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（４．１ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（５１ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（１００％酢酸エチルから酢酸エチル：メタノール＝３：１）することにより、Ｃ８×２−Ｎ２０−ＯＨ（０．２０ｇ、２０％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.25-1.36 (16H, m), 1.42-1.47 (4H, m,), 1.77-1.84 (4H, m), 3.59-3.73 (80H, m), 3.96-3.99 (4H, m), 4.47 (2H, s), 6.83 (2H, s), 6.89 (1H, s).
２０）２８−［３，４−Ｄｉ（ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−ｎｏｎａｏｘａｏｃｔａｃｏｓａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１２×２−Ｎ９−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、３,４−ｄｉ（ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３２ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量４００）（１．１ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（３．２ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（４２ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で６日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（１００％酢酸エチルから酢酸エチル：メタノール＝５：１）することにより、Ｃ１２×２−Ｎ９−ＯＨ（０．３０ｇ、２１％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.25-1.32 (32H, m), 1.42-1.45 (4H, m), 1.77-1.83 (4H, m), 3.59-3.73 (36H, m), 3.96-4.00 (4H, m), 4.47 (2H, s), 6.83 (2H, s), 6.89 (1H, s).
窒素気流下、３,４−ｄｉ（ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３２ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量４００）（１．１ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（３．２ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（４２ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で６日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（１００％酢酸エチルから酢酸エチル：メタノール＝５：１）することにより、Ｃ１２×２−Ｎ９−ＯＨ（０．３０ｇ、２１％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.25-1.32 (32H, m), 1.42-1.45 (4H, m), 1.77-1.83 (4H, m), 3.59-3.73 (36H, m), 3.96-4.00 (4H, m), 4.47 (2H, s), 6.83 (2H, s), 6.89 (1H, s).
２１）６１−［３，４−（Ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０−ｈｅｎｈｅｘａｃｏｎｔａｎ−１−ｏｌ（以下、Ｃ１２×２−Ｎ２０−ＯＨ）の化学合成
窒素気流下、３,４−ｄｉ（ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３４ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量９００）（２．４ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（３．２ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（４５ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（１００％アセトンからアセトン：メタノール＝２：１）することにより、Ｃ１２×２−Ｎ２０−ＯＨ（０．５０ｇ、１３％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.26-1.36 (32H, m), 1.42-1.48 (4H, m), 1.78-1.82 (4H, m), 3.59-3.73 (80H, m), 3.96-4.00 (4H, m), 4.47 (2H, s), 6.82 (2H, s), 6.89 (1H, s).
窒素気流下、３,４−ｄｉ（ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ（０．３４ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）とｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）（平均分子量９００）（２．４ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（３．２ｍＬ）にＹｂ（ＯＴｆ）３（４５ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で２日間攪拌しながら反応させ、反応液にジクロロメタンを加えて希釈した。その後、Ｃ８−Ｎ２−ＯＨと同様の方法で有機層を回収し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで勾配溶離（１００％アセトンからアセトン：メタノール＝２：１）することにより、Ｃ１２×２−Ｎ２０−ＯＨ（０．５０ｇ、１３％）を得た。1H NMR (CDCl3): δ0.88 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.26-1.36 (32H, m), 1.42-1.48 (4H, m), 1.78-1.82 (4H, m), 3.59-3.73 (80H, m), 3.96-4.00 (4H, m), 4.47 (2H, s), 6.82 (2H, s), 6.89 (1H, s).
２．リポソームの調製
リポソームの調製は、凍結乾燥法及び凍結融解法（寺田弘、吉村哲郎 編著、「ライフサイエンスにおけるリポソーム実験マニュアル」、シェプリンガー・フェアラーク東京株式会社発行）にしたがって行った。ジステアロイルフォスファチジルコリン（日本精化株式会社）とコレステロール（日本精化株式会社）とを２：１のモル比で混合し、ｔｅｒｔ−ブタノール（関東化学株式会社）に溶解し、凍結乾燥を行った。凍結乾燥された脂質混合物は、０．３ｍｏｌ／Ｌのグルコース水溶液を用いて水和し、脂質二重膜からなるリポソームを作成した。リポソームは、２００ｎｍ及び５０ｎｍのポリカーボネート膜を透過させ、約８０〜９０ｎｍに整粒した。平均粒子径は、ゼータサイザーナノ（Ｍａｌｖｅｒｎ社）を用いて測定した。こうして調製したリポソームは、０．３ｍｏｌ／Ｌのグルコース水溶液若しくはリン酸緩衝生理食塩水で希釈し、１０ｍＭのリポソーム溶液として以下の実験に用いた。
リポソームの調製は、凍結乾燥法及び凍結融解法（寺田弘、吉村哲郎 編著、「ライフサイエンスにおけるリポソーム実験マニュアル」、シェプリンガー・フェアラーク東京株式会社発行）にしたがって行った。ジステアロイルフォスファチジルコリン（日本精化株式会社）とコレステロール（日本精化株式会社）とを２：１のモル比で混合し、ｔｅｒｔ−ブタノール（関東化学株式会社）に溶解し、凍結乾燥を行った。凍結乾燥された脂質混合物は、０．３ｍｏｌ／Ｌのグルコース水溶液を用いて水和し、脂質二重膜からなるリポソームを作成した。リポソームは、２００ｎｍ及び５０ｎｍのポリカーボネート膜を透過させ、約８０〜９０ｎｍに整粒した。平均粒子径は、ゼータサイザーナノ（Ｍａｌｖｅｒｎ社）を用いて測定した。こうして調製したリポソームは、０．３ｍｏｌ／Ｌのグルコース水溶液若しくはリン酸緩衝生理食塩水で希釈し、１０ｍＭのリポソーム溶液として以下の実験に用いた。
３．リポソーム標識用プローブの候補化合物のリポソームへの取り込み試験
リポソーム標識用プローブの各候補化合物は、０．１ｍＭになるようにアセトニトリル又はクロロホルムに溶解し、その１ｍＬを試験管に移し、遠心真空乾燥機で溶媒を除去し、そこに１０ｍＭのリポソーム溶液を加え、６５℃で１５分間混和した。その後、超遠心分離機（Ｈｉｔａｃｈｉ ＣＳ１２０ＥＸ）を用いて、５５００００×ｇで２０分間、混和したリポソーム溶液を遠心分離し、上清を除去後、リポソームに取り込まれてリポソームと共に沈殿した各候補化合物の量をＨＰＬＣで測定した。ＨＰＬＣの条件は、以下に示した通りである。
リポソーム標識用プローブの各候補化合物は、０．１ｍＭになるようにアセトニトリル又はクロロホルムに溶解し、その１ｍＬを試験管に移し、遠心真空乾燥機で溶媒を除去し、そこに１０ｍＭのリポソーム溶液を加え、６５℃で１５分間混和した。その後、超遠心分離機（Ｈｉｔａｃｈｉ ＣＳ１２０ＥＸ）を用いて、５５００００×ｇで２０分間、混和したリポソーム溶液を遠心分離し、上清を除去後、リポソームに取り込まれてリポソームと共に沈殿した各候補化合物の量をＨＰＬＣで測定した。ＨＰＬＣの条件は、以下に示した通りである。
＜ＨＰＬＣ測定条件＞
・カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＣＫ Ｃ１８ ＴＹＰＥ ＵＧ１２０、５μｍ、４．６ｍｍ（ＩＤ）×１５．０ｃｍ（Ｌ）（資生堂）
・移動相：ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ＝１／１、１ｍＬ／ｍｉｎ
・検出：２２０ ｎｍ（ＨＩＴＡＣＨＩ ＵＶ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ Ｌ−２４００）
・温度：４０℃
・インジェクシヨンボリューム：１０μＬ
・カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＣＫ Ｃ１８ ＴＹＰＥ ＵＧ１２０、５μｍ、４．６ｍｍ（ＩＤ）×１５．０ｃｍ（Ｌ）（資生堂）
・移動相：ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ＝１／１、１ｍＬ／ｍｉｎ
・検出：２２０ ｎｍ（ＨＩＴＡＣＨＩ ＵＶ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ Ｌ−２４００）
・温度：４０℃
・インジェクシヨンボリューム：１０μＬ
図１は、リポソーム標識用プローブの各候補化合物のリポソームへの取り込み効率を示したグラフである。
その結果、以下の一般式（Ｘ）で表すことができるＣ８−Ｎ２−ＯＨ、Ｃ８−Ｎ４−ＯＨ、Ｃ８−Ｎ７−ＯＨ、Ｃ１２−Ｎ２−ＯＨ、Ｃ１２−Ｎ４−ＯＨ、Ｃ１２−Ｎ７−ＯＨ、Ｃ１２−Ｎ９−ＯＨ、Ｃ１２−Ｎ２０−ＯＨ、Ｃ１６−Ｎ２−ＯＨ、Ｃ１６−Ｎ４−ＯＨ、Ｃ１６−Ｎ７−ＯＨ、Ｃ１６−Ｎ９−ＯＨ及びＣ１６−Ｎ２０−ＯＨ、以下の一般式（ＸＩ）で表すことができるＣ８−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨ、Ｃ１２−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨ及びＣ１６−Ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ−ＯＨ、以下の一般式（ＸＩＩ）で表すことができるＣ８×２−Ｎ７−ＯＨ、Ｃ８×２−Ｎ２０−ＯＨ、Ｃ１２×２−Ｎ９−ＯＨ及びＣ１２×２−Ｎ２０−ＯＨは、リポソームに効率よく取り込まれ、いずれも７０％以上の取り込み効率を示した。
（式中、ｎは７〜２５の整数、ｍは２〜２０の整数を表す。）
（式中、ｎは７〜２５の整数を表す。）
（式中、ｎ’’は７〜２５の整数、ｍは２〜２０の整数を表す。）
（実施例２）リポソーム標識用プローブの候補化合物が取り込まれた標識リポソームの安定性
リポソームに高効率で取り込まれた候補化合物のうち、Ｃ１２−Ｎ２−ＯＨ、Ｃ１６−Ｎ２−ＯＨ、Ｃ８−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｃ１２−Ｇｌｙ−ＯＨ及びＣ１２×２−Ｎ９−ＯＨについて、リポソームに取り込まれた状態における血清中での安定性を調べた。
リポソームに高効率で取り込まれた候補化合物のうち、Ｃ１２−Ｎ２−ＯＨ、Ｃ１６−Ｎ２−ＯＨ、Ｃ８−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｃ１２−Ｇｌｙ−ＯＨ及びＣ１２×２−Ｎ９−ＯＨについて、リポソームに取り込まれた状態における血清中での安定性を調べた。
Ｃ１２−Ｎ２−ＯＨ、Ｃ１６−Ｎ２−ＯＨ、Ｃ８−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｃ１２−Ｇｌｙ−ＯＨ及びＣ１２×２−Ｎ９−ＯＨのいずれかが取り込まれた各リポソームを、５０％牛血清（株式会社ジャパン・バイオシーラム）又はリン酸緩衝液中でそれぞれ１時間インキュベートし、回収した各リポソームをゲルろ過カラムで分画し、リポソーム画分を回収した。その後、リポソーム画分に含まれる各候補化合物の量をＨＰＬＣで定量し、リン酸緩衝液中でインキュベートしたリポソームに保持されている候補化合物の量と血清中でインキュベートしたリポソームに保持されている候補化合物の量とを比較することにより、血清中での安定性を評価した。ＨＰＬＣの条件は実施例１に記載した条件と同じである。
図２は、リポソームに取り込まれたリポソーム標識用プローブの各候補化合物の血清中での安定性を示したグラフである。図中の残存率とは、リン酸緩衝液でインキュベートしたリポソームに保持されている各候補化合物の量に対する血清中でインキュベートしたリポソームに保持されている各候補化合物の量の割合を示しており、残存率が高いほど血清に対する安定性が高いと評価できる。
その結果、上記の一般式（Ｘ）で表すことができるＣ１２−Ｎ２−ＯＨ及びＣ１６−Ｎ２−ＯＨ、上記の一般式（ＸＩ）で表すことができるＣ８−Ｇｌｙ−ＯＨ及びＣ１２−Ｇｌｙ−ＯＨ、上記の一般式（ＸＩＩ）で表すことができる１２×２−Ｎ９−ＯＨの残存率は、いずれも９０％以上の値を示した。これらの化合物は、血清中で分解を受けることなくリポソームに安定して保持されることが判明し、リポソーム標識用プローブとして使用できることが示唆された。
（実施例３）［１８Ｆ］標識化合物のリポソームへの取り込み率
１．［１８Ｆ］標識化合物の化学合成
１）１−［１８Ｆ］Ｆｌｕｏｒｏ−７−［４−（ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔａｎｅ（以下、Ｃ１２−Ｎ２−１８Ｆ）の化学合成
実施例１に記載した方法で化学合成しＣ１２−Ｎ２−ＯＨ（４０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）に１ｍＬのトルエンを加え、減圧濃縮して水分を共沸除去し、更に１ｍｍＨｇで３０分間減圧乾燥し、これに０．１ｍＬの無水テトラヒドロフランを加えた。その後、こうして得られたＣ１２−Ｎ２−ＯＨのテトラヒドロフラン溶液を、窒素気流下、水素化ナトリウム（０．５２ｍｍｏｌ）と流動パラフィンとの混合物（流動パラフィンを約５５％（ｗ／ｗ）含有）と無水テトラヒドロフラン（０．１ｍＬ）の入った別のナス形フラスコに氷冷下で注ぎ入れ、室温で１時間攪拌した。引き続き、そこに０．３１ｍｍｏｌのトルエンスルホン酸クロリドを含有する無水テトラヒドロフラン溶液（０．１ｍＬ）加えて室温で１７時間攪拌し、氷冷下でメタノール（５滴）、水（１ｍＬ）、酢酸エチル（５ｍＬ）を順次加え、室温で２０分間攪拌し、有機層を回収した。回収した有機層は、飽和食塩水で洗浄し、分離した有機層に無水硫酸マグネシウムを加え、濾過後の液体を減圧下で濃縮乾固し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製し、７−［４−（Ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔｙｌ Ｔｏｌｕｅｎｅ−４−ｓｕｌｆｏｎａｔｅ（以下、Ｃ１２−Ｎ２−ＯＴｓ）（３３ｍｇ、６０％）を得た。得られたＣ１２−Ｎ２−ＯＴｓの分析結果を以下に記す。
１．［１８Ｆ］標識化合物の化学合成
１）１−［１８Ｆ］Ｆｌｕｏｒｏ−７−［４−（ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔａｎｅ（以下、Ｃ１２−Ｎ２−１８Ｆ）の化学合成
実施例１に記載した方法で化学合成しＣ１２−Ｎ２−ＯＨ（４０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）に１ｍＬのトルエンを加え、減圧濃縮して水分を共沸除去し、更に１ｍｍＨｇで３０分間減圧乾燥し、これに０．１ｍＬの無水テトラヒドロフランを加えた。その後、こうして得られたＣ１２−Ｎ２−ＯＨのテトラヒドロフラン溶液を、窒素気流下、水素化ナトリウム（０．５２ｍｍｏｌ）と流動パラフィンとの混合物（流動パラフィンを約５５％（ｗ／ｗ）含有）と無水テトラヒドロフラン（０．１ｍＬ）の入った別のナス形フラスコに氷冷下で注ぎ入れ、室温で１時間攪拌した。引き続き、そこに０．３１ｍｍｏｌのトルエンスルホン酸クロリドを含有する無水テトラヒドロフラン溶液（０．１ｍＬ）加えて室温で１７時間攪拌し、氷冷下でメタノール（５滴）、水（１ｍＬ）、酢酸エチル（５ｍＬ）を順次加え、室温で２０分間攪拌し、有機層を回収した。回収した有機層は、飽和食塩水で洗浄し、分離した有機層に無水硫酸マグネシウムを加え、濾過後の液体を減圧下で濃縮乾固し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製し、７−［４−（Ｄｏｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔｙｌ Ｔｏｌｕｅｎｅ−４−ｓｕｌｆｏｎａｔｅ（以下、Ｃ１２−Ｎ２−ＯＴｓ）（３３ｍｇ、６０％）を得た。得られたＣ１２−Ｎ２−ＯＴｓの分析結果を以下に記す。
1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.24-1.30 (16H, m), 1.46 (2H, quint, J = 7.5 Hz), 1.77 (2H, quint, J = 7.5 Hz), 2.43 (3H, s), 3.52-3.54 (4H, m), 3.68 (2H, t, J = 5.0 Hz), 3.94 (2H, t, J = 6.5 Hz), 4.17 (2H, t, J = 5.0 Hz), 4.45 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.22 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.31(2H, d, J = 8.0 Hz), 7.79 (2H, d, J = 8.5 Hz); 13C NMR (CDCl3): δ14.1, 21.6, 22.7, 26.0, 29.2, 29.3, 29.5, 29.6, 29.6, 29.6, 31.9, 68.0, 68.6, 68.9, 69.2, 70.8, 72.9, 114.4, 127.9, 129.3, 129.8, 129.9, 130.0, 133.0, 144.7, 158.8. IR (KBr): 1612 cm-1.
その後、予め準備した［１8Ｆ］ＫＦ／Ｋ［２，２，２］に、Ｃ１２−Ｎ２−ＯＴｓのアセトニトリル溶液を加え、１００℃で１０分間反応させ、フッ素化を行うことにより［１8Ｆ］標識を行った。反応終了後、反応残渣にアセトニトリル水溶液（アセトニトリル：水＝５０：５０（ｗ／ｗ））を加え、以下の条件でＨＰＬＣを行うことにより、Ｃ１２−Ｎ２−１８Ｆを精製した。ＨＰＬＣで分取したＣ１２−Ｎ２−１８Ｆのフラクションは、減圧濃縮し、残渣にエタノールを加え再溶解して以下の実験に使用した。
＜ＨＰＬＣの条件＞
・ＨＰＬＣカラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ３（７．６×２５０ｍｍ、５ｍ）
・移動相：ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ＝８００：２００
流速：６ｍＬ／ｍｉｎ
＜ＨＰＬＣの条件＞
・ＨＰＬＣカラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ３（７．６×２５０ｍｍ、５ｍ）
・移動相：ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ＝８００：２００
流速：６ｍＬ／ｍｉｎ
なお、［１8Ｆ］ＫＦ／Ｋ［２，２，２］は、以下のようにして合成した。
まず、サイクロトロンのターゲットに［１８Ｏ］Ｈ２Ｏを充填し、ヘリウムガスで１．２ＭＰａに加圧した後にプロトンビーム（２０μＡ）を照射し、１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ反応によって［１８Ｆ］Ｆ−を製造した。その後、カラムに充填した陰イオン交換樹脂（ＡＧ１−Ｘ８、ＣＯ２−ｆｏｒｍ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社）に製造した［１８Ｆ］Ｆ−を吸着させ、４０ｍＭ Ｋ２ＣＯ３水溶液で溶出し、溶出液を反応容器に回収した。回収した溶出液に１．５ｍｇの４，７，１３，１６，２１，２４−Ｈｅｘａｏｘａ−１，１０−ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ［８，８，８］ｈｅｘａｃｏｓａｎｅ（商品名：Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）［２，２，２］、メルク社）を含むアセトニトリルを２ｍＬ加え、１１０℃で共沸脱水を行い、溶出液がほぼ乾固した後に１ｍＬのアセトニトリルを加え、共沸脱水を２度繰り返した。その後、減圧下で残存溶媒を９０秒間留去し、さらに９０秒間ヘリウムガス（２００ｍＬ／ｍｉｎ）で反応容器内をパージして水分を完全に除去し、室温まで冷却することにより［１8Ｆ］ＫＦ／Ｋ［２，２，２］を得た。
２）１−［１８Ｆ］Ｆｌｕｏｒｏ−７−［４−（ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔａｎｅ（以下、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ）の化学合成
Ｃ１２−Ｎ２−ＯＴｓの合成法と同様にして、実施例１に記載した方法で化学合成したＣ１６ｎ２−ＯＨ（３２ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）から７−［４−（Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔｙｌ Ｔｏｌｕｅｎｅ−４−ｓｕｌｆｏｎａｔｅ（以下、Ｃ１６−Ｎ２−ＯＴｓ）（３０ｍｇ、６９％）を得た。得られたＣ１６−Ｎ２−ＯＴｓの分析結果を以下に記す。
Ｃ１２−Ｎ２−ＯＴｓの合成法と同様にして、実施例１に記載した方法で化学合成したＣ１６ｎ２−ＯＨ（３２ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）から７−［４−（Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ］−３，６−ｄｉｏｘａｈｅｐｔｙｌ Ｔｏｌｕｅｎｅ−４−ｓｕｌｆｏｎａｔｅ（以下、Ｃ１６−Ｎ２−ＯＴｓ）（３０ｍｇ、６９％）を得た。得られたＣ１６−Ｎ２−ＯＴｓの分析結果を以下に記す。
1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J=8.0 Hz), 1.26-1.31 (26H, m), 1.44 (2H, quint, J = 7.5 Hz), 1.77 (2H, quint, J = 7.5 Hz), 2.43 (3H, s), 3.53 (2H, quint, J = 3.0 Hz) , 3.58 (2H, quint, J = 4.0), 3.69 (2H, t, J = 4.5 Hz), 3.94 (2H, t, J = 6.5 Hz), 4.17 (2H, t, J = 5.5 Hz), 4.45 (2H, s), 6.85 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.22 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.31 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.79 (2H, d, J = 8.0 Hz); 13C NMR (CDCl3): δ14.1, 21.6, 22.7, 26.0, 29.3, 29.3, 29.4, 29.6, 29.6, 29.7, 31.9, 68.0, 68.7, 69.0, 69.2, 70.8, 73.0, 114.4, 128.0, 129.3, 129.8, 129.9, 144.7, 158.8. IR (KBr): 1610 cm-1.
その後、予め準備した［１8Ｆ］ＫＦ／Ｋ［２，２，２］に、Ｃ１６−Ｎ２−ＯＴｓのアセトニトリル溶液を加え、１００℃で１０分間反応させ、フッ素化を行うことにより［１8Ｆ］標識を行った。反応終了後、反応残渣にアセトニトリル水溶液（アセトニトリル：水＝５０：５０（ｗ／ｗ））を加え、上記と同じ条件でＨＰＬＣを行うことにより、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆを精製した。ＨＰＬＣで分取したＣ１６−Ｎ２−１８Ｆのフラクションは、減圧濃縮し、残渣にエタノールを加え再溶解して以下の実験に使用した。
３）１−［１８Ｆ］Ｆｌｕｏｒｏ−３，６−ｄｉｏｘａｔｅｔｒａｃｏｓａｎｅ（以下、ｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１8Ｆ）の化学合成
Ｃ１２−Ｎ２−ＯＴｓの合成法と同様にして、実施例１に記載した方法で化学合成したｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−ＯＨ（１５０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）から３，６−Ｄｉｏｘａｔｅｔｒａｃｏｓａｎｙｌ Ｔｏｌｕｅｎｅ−４−ｓｕｌｆｏｎａｔｅ（以下、ｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−ＯＴｓ）（１３７ｍｇ、６４％）を得た。得られたｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−ＯＴｓの分析結果を以下に記す。
Ｃ１２−Ｎ２−ＯＴｓの合成法と同様にして、実施例１に記載した方法で化学合成したｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−ＯＨ（１５０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）から３，６−Ｄｉｏｘａｔｅｔｒａｃｏｓａｎｙｌ Ｔｏｌｕｅｎｅ−４−ｓｕｌｆｏｎａｔｅ（以下、ｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−ＯＴｓ）（１３７ｍｇ、６４％）を得た。得られたｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−ＯＴｓの分析結果を以下に記す。
1H NMR (CDCl3): δ0.88 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.22-1.33 (30H, m), 1.52-1.58 (2H, m), 2.45 (3H, s), 3.41 (2H, t, J = 7.0 Hz), 3.50 (2H, m), 3.57 (2H, m), 3.69 (2H, t, J = 5.0 Hz), 4.17 (2H, t, J = 5.0 Hz), 7.34 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.80 (2H, d, J = 8.0 Hz); 13C NMR (CDCl3): δ14.0, 21.6, 22.7, 26.0, 29.3, 29.5, 29.6, 29.6, 29.6, 29.7, 31.9, 68.6, 69.2, 69.9, 70.7, 71.5, 127.9, 129.8, 132.9. MS: 530 [(M+NH4)+], 535 [(M+Na)+].
その後、予め準備した［１8Ｆ］ＫＦ／Ｋ［２，２，２］に、ｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−ＯＴｓのアセトニトリル溶液を加え、１００℃で１０分間反応させ、フッ素化を行うことにより［１8Ｆ］標識を行った。反応終了後、反応残渣にアセトニトリル水溶液（アセトニトリル：水＝５０：５０（ｗ／ｗ））を加え、上記と同じ条件でＨＰＬＣを行うことにより、ｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１8Ｆを精製した。ＨＰＬＣで分取したｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１8Ｆのフラクションは、減圧濃縮し、残渣にエタノールを加え再溶解して以下の実験に使用した。
２．［１８Ｆ］標識化合物のリポソームへの取り込み試験（リポソームの［１８Ｆ］による標識試験）
上記のようにして合成した［１８Ｆ］標識化合物（エタノール溶液）の放射活性を、キューリーメーター（アロカ社）で測定し、１００ＭＢｑ相当量の［１８Ｆ］標識化合物（エタノール溶液）を試験管に移し取り、ヘリウムガス送流下で５５℃に加熱して溶媒を除去した。そこに、実施例１に記載した方法で調製したリポソーム溶液を１ｍＬ添加し、６５℃で１５分間攪拌してリポソームへの取り込みを誘導し、リポソームを［１８Ｆ］で標識することにより、した。その後、リポソーム溶液を、超遠心分離器（日本ベックマン株式会社）を用いて、７０，０００ｒｐｍで２０分間、遠心分離し、上清を除去後、沈殿したリポソームを１ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水に懸濁した。こうして得られたリポソームの縣濁液は、新しい試験管に移し、リポソームに取り込まれた［１８Ｆ］標識化合物の放射活性をキュリーメーターで測定した。［１８Ｆ］標識化合物のリポソームへの取り込み効率は、リポソーム溶液に加えた［１８Ｆ］標識化合物の放射活性に対する、リポソームに取り込まれた［１８Ｆ］標識化合物の放射活性の割合で示した。
上記のようにして合成した［１８Ｆ］標識化合物（エタノール溶液）の放射活性を、キューリーメーター（アロカ社）で測定し、１００ＭＢｑ相当量の［１８Ｆ］標識化合物（エタノール溶液）を試験管に移し取り、ヘリウムガス送流下で５５℃に加熱して溶媒を除去した。そこに、実施例１に記載した方法で調製したリポソーム溶液を１ｍＬ添加し、６５℃で１５分間攪拌してリポソームへの取り込みを誘導し、リポソームを［１８Ｆ］で標識することにより、した。その後、リポソーム溶液を、超遠心分離器（日本ベックマン株式会社）を用いて、７０，０００ｒｐｍで２０分間、遠心分離し、上清を除去後、沈殿したリポソームを１ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水に懸濁した。こうして得られたリポソームの縣濁液は、新しい試験管に移し、リポソームに取り込まれた［１８Ｆ］標識化合物の放射活性をキュリーメーターで測定した。［１８Ｆ］標識化合物のリポソームへの取り込み効率は、リポソーム溶液に加えた［１８Ｆ］標識化合物の放射活性に対する、リポソームに取り込まれた［１８Ｆ］標識化合物の放射活性の割合で示した。
図３は、［１８Ｆ］標識化合物のリポソームへの取り込み効率を示したグラフである。
その結果、以下の一般式（ＸＩＩＩ）で表すことができるＣ１２−Ｎ２−１８Ｆ及びＣ１６−Ｎ２−１８Ｆ、以下の一般式（ＸＩＶ）で表すことができるＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆは、リポソームに効率よく取り込まれ、いずれも７０％以上の取り込み効率を示した。
（式中、ｎは７〜２５の整数、ｍは２〜２０の整数を表す。）
（式中、ｎは７〜２５の整数、ｍは２〜２０の整数を表す。）
（実施例４）［１８Ｆ］標識リポソームの安定性
リポソームへの［１８Ｆ］標識化合物の取り込みは実施例３と同様に行った。リポソーム溶液は、５０％牛血清中又はリン酸緩衝液中で1時間インキュベートした。溶液は、ゲルろ過クロマトグラフィーにより分画した。リポソーム画分に含まれる化合物量をＨＰＬＣにより測定した。測定条件は上記と同様である。血清中での安定性は、リポソーム画分に含まれるリン酸緩衝液中での化合物量に対する血清中での化合物量の割合で評価した。
リポソームへの［１８Ｆ］標識化合物の取り込みは実施例３と同様に行った。リポソーム溶液は、５０％牛血清中又はリン酸緩衝液中で1時間インキュベートした。溶液は、ゲルろ過クロマトグラフィーにより分画した。リポソーム画分に含まれる化合物量をＨＰＬＣにより測定した。測定条件は上記と同様である。血清中での安定性は、リポソーム画分に含まれるリン酸緩衝液中での化合物量に対する血清中での化合物量の割合で評価した。
リポソームに高効率で取り込まれたＣ１２−Ｎ２−１８Ｆ、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ及びＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆについて、リポソームに取り込まれた状態における血清中での安定性を調べた。
Ｃ１２−Ｎ２−１８Ｆ、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ及びＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆのいずれかが取り込まれた各リポソームを、５０％牛血清（株式会社ジャパン・バイオシーラム）又はリン酸緩衝液中でそれぞれ１時間インキュベートし、回収した各リポソームをゲルろ過カラムで分画し、リポソーム画分を回収した。その後、リポソーム画分に含まれる各［１８Ｆ］標識化合物の量をＨＰＬＣで定量し、リン酸緩衝液中でインキュベートしたリポソームに保持されている［１８Ｆ］標識化合物の量と血清中でインキュベートしたリポソームに保持されている［１８Ｆ］標識化合物の量とを比較することにより、血清中での安定性を評価した。ＨＰＬＣの条件は、実施例１に記載した条件と同じである。
図４は、リポソームに取り込まれた［１８Ｆ］標識化合物の血清中での安定性を示したグラフである。図中の残存率とは、リン酸緩衝液でインキュベートしたリポソームに保持されている［１８Ｆ］標識化合物の量に対する血清中でインキュベートしたリポソームに保持されている［１８Ｆ］標識化合物の量の割合を示しており、残存率が高いほど血清に対する安定性が高いと評価できる。
その結果、上記の一般式（ＸＩＩＩ）で表すことができるＣ１２−Ｎ２−１８Ｆ及びＣ１６−Ｎ２−１８Ｆ並びに上記の一般式（ＸＩＶ）で表すことができるＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆの残存率は、いずれも７５％以上の値を示した。これらの化合物は、血清中で分解を受けることなくリポソームに安定して保持されることが判明し、リポソームを［１８Ｆ］で標識可能なリポソーム標識用プローブとして使用できることが示唆された。
（実施例５）［１８Ｆ］標識リポソームを投与したマウスにおける［１８Ｆ］標識リポソームの組織分布
６週齢のＢａｌｂ／ｃ系マウス（雄性；日本ＳＬＣ株式会社）を飽水クロラールで麻酔し、尾静脈内にカニュレーターを設置し、［１８Ｆ］の検出装置である高感度プラナーイメージング装置（浜松ホトニクス株式会社）に固定し、実施例３及び４と同じ方法でリポソームにＣ１６−Ｎ２−１８Ｆ又はＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆは［１８Ｆ］を取り込ませ、［１８Ｆ］で標識した［１８Ｆ］標識リポソーム（約２．５ＭＢｑ／マウス）をカニュレーターからマウスに投与した。投与開始後、１分、１０分、２０分、３０分、４０分、５０分及び１時間目に［１８Ｆ］標識リポソームのマウス体内での分布を高感度プラナーイメージング装置（浜松ホトニクス株式会社）で測定し、投与開始から１時間経過後には、マウスから各臓器を摘出し、各臓器の放射活性をＡＲＣ２０００（アロカ社）で測定した。対照には、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ又はＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆを単独でマウスに投与し、マウス体内での分布及び各臓器の放射活性を同様に測定した。
６週齢のＢａｌｂ／ｃ系マウス（雄性；日本ＳＬＣ株式会社）を飽水クロラールで麻酔し、尾静脈内にカニュレーターを設置し、［１８Ｆ］の検出装置である高感度プラナーイメージング装置（浜松ホトニクス株式会社）に固定し、実施例３及び４と同じ方法でリポソームにＣ１６−Ｎ２−１８Ｆ又はＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆは［１８Ｆ］を取り込ませ、［１８Ｆ］で標識した［１８Ｆ］標識リポソーム（約２．５ＭＢｑ／マウス）をカニュレーターからマウスに投与した。投与開始後、１分、１０分、２０分、３０分、４０分、５０分及び１時間目に［１８Ｆ］標識リポソームのマウス体内での分布を高感度プラナーイメージング装置（浜松ホトニクス株式会社）で測定し、投与開始から１時間経過後には、マウスから各臓器を摘出し、各臓器の放射活性をＡＲＣ２０００（アロカ社）で測定した。対照には、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ又はＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆを単独でマウスに投与し、マウス体内での分布及び各臓器の放射活性を同様に測定した。
図５は、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆで標識したリポソーム（Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ標識リポソーム）のマウス体内での分布の変動を経時的に示した図である。図６は、Ｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆで標識したリポソーム（Ｓｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆ標識リポソーム）のマウス体内での分布の変動を経時的に示した図である。
その結果、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ又はＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆを単独でマウスに投与した場合には、投与開始１０分以内にそのほとんどが肝臓に集まり、２０分以降は速やかに膀胱に蓄積する傾向が認められた。このことは、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ及びＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆが血中で分解され、６０分以内に代謝され、尿中として排泄されたことを示唆している。
一方、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ標識リポソーム又はＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆ標識リポソームをマウスに投与した場合には、投与開始から６０分の間を通じて、一部の臓器に集中して蓄積することなく、血液と共に全身に拡散される傾向が認められた。
図７は、投与開始１時間経過後におけるマウスの各臓器へのＣ１６−Ｎ２−１８Ｆ標識リポソームの分布を示した図である。図８は、投与開始１時間経過後におけるマウスの各臓器へのＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆ標識リポソームの分布を示した図である。
その結果、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ又はＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆを単独でマウスに投与した場合には、その大部分が尿として排泄されており、残りの約３０％のほとんどが肝臓及び脾臓に蓄積し、血中には５％以下しか存在していなかった。
一方、Ｃ１６−Ｎ２−１８Ｆ標識リポソーム又はＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆ標識リポソームをマウスに投与した場合には、尿として排泄されたのはわずかであり、肝臓及び脾臓に顕著な蓄積が認められるものの、血中にも約２５％が存在していた。これらの結果は、マウスの体内においてもＣ１６−Ｎ２−１８Ｆ及びＳｔｅａｒｙｌ−Ｎ２−１８Ｆがリポソームに保持され、血中で分解を受けることなく、リポソームと同じ動態を示すことを示唆している。
（実施例６）従来法での［１８Ｆ］によるリポソームの標識と本発明の［１８Ｆ］標識化合物によるリポソームの標識との比較
ポジトロン核種でリポソームを標識する方法はほとんど知られていなかったが、水溶性のポジトロン標識物質である［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース（以下、［１８Ｆ］ＦＤＧ）をリポソーム内部の水相に封入して標識する方法が１９９５年のＢｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａに報告されている（Ｏｋｕら、１２３８巻、ｐ．８６−９０）。
ポジトロン核種でリポソームを標識する方法はほとんど知られていなかったが、水溶性のポジトロン標識物質である［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース（以下、［１８Ｆ］ＦＤＧ）をリポソーム内部の水相に封入して標識する方法が１９９５年のＢｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａに報告されている（Ｏｋｕら、１２３８巻、ｐ．８６−９０）。
そこで、この文献に記載された方法にしたがって、［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）を製造し、標識効率、リポソーム製剤の標識に必要な操作、標識に要する時間、作業従事者の被曝、標識操作前後のリポソームの性質変化を調べ、実施例３〜５に示した本発明の［１８Ｆ］標識化合物によるリポソームの標識と比較した。
その結果、従来法では、リポソーム内部の水相に水溶性の［１８Ｆ］ＦＤＧを外部から入れるため、凍結融解を繰り返すことによりリポソームの脂質二重膜構造を破壊し、［１８Ｆ］ＦＤＧを生じた隙間から封入し、その後リポソームを再構築し調製することが必要であった。また、このステップの後には予め調製されていたリポソームの粒子径は保持されないため、再度、粒子径を揃えるための作業が必要となった。さらに、リポソーム内部への［１８Ｆ］ＦＤＧの取り込みは、濃度勾配による拡散を原理とするため、効率は最大でも１５％に止まるものであった。
一方、本発明の方法では、リポソームの標識に両親媒性の［１８Ｆ］標識化合物を用いるものである。両親媒性化合物は、他の物質を介さずに直接リポソームと混合することで、脂質二重膜に移行する性質を有するものであり、この移行に要する時間は、従来法とは比較にならないほど早く、１５分以内で十分なものであった。この操作は、リポソームの粒子径やその他物理化学的性質に影響を与えず、製剤化されたリポソームそのものの性質を解析することが可能であることを意味するものであった。さらに、ポジトロン核種を用いる上で大きな問題となる作業従事者の被曝についても、標識に要する時間とリポソーム製の標識に必要な操作ステップの数の減少に応じて格段に低減することが可能となった。
表１は、これらの特徴をまとめたものである。
Claims (9)
- 下記の一般式（Ｉ）で表される、［１８Ｆ］標識化合物。
- 下記の一般式（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）で表される、請求項１記載の［１８Ｆ］標識化合物。
- 請求項１又は２記載の［１８Ｆ］標識化合物からなる、両親媒性分子集合体標識用プローブ。
- 請求項１又は２記載の［１８Ｆ］標識化合物からなる、脂質二重膜標識用プローブ。
- 請求項１又は２記載の［１８Ｆ］標識化合物からなる、リポソーム標識用プローブ。
- 下記の一般式（ＩＸ）で表される化合物と、［１８Ｆ］標識フッ化カリウムとを反応させて、一般式（ＩＸ）で表される化合物を［１８Ｆ］で標識する標識ステップを備える、請求項１又は２記載の［１８Ｆ］標識化合物の製造方法。
- ［１８Ｆ］標識リポソームの製造方法であって、
請求項１又は２記載の［１８Ｆ］標識化合物と、リポソームとを含む溶液を２０〜８０℃に加温する加温ステップと、
前記加温ステップ後に前記溶液を０〜２５℃に冷却する冷却ステップと、
前記冷却ステップ後に前記溶液を遠心分離して、［１８Ｆ］標識リポソームを沈殿として回収する若しくはカラムにより回収する回収ステップと、
を備える、製造方法。 - ［１８Ｆ］標識リポソーム製剤の製造方法であって、
請求項１又は２記載の［１８Ｆ］標識化合物と、リポソーム製剤とを含む溶液を２０〜８０℃に加温する加温ステップと、
前記加温ステップ後に前記溶液を０〜２５℃に冷却する冷却ステップと、
前記冷却ステップ後に前記溶液を遠心分離して、［１８Ｆ］標識リポソーム製剤を沈殿として回収する若しくはカラムにより回収する回収ステップと、
を備える、製造方法。 - 請求項６記載の製造方法で製造される、陽電子放出型断層撮影用［１８Ｆ］標識リポソーム又は陽電子放出型断層撮影用［１８Ｆ］標識リポソーム製剤。
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