CN103478403B - 一种花生多肽及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种花生多肽及其制备方法，包括以下步骤：(1)淀粉酶蒸煮：取脱脂脱壳干燥花生粕，粉碎过40目筛后，按照料液比1∶5-1∶10加入纯净水，加入高温淀粉酶10u/g，搅拌均匀后在温度为110℃条件下蒸煮30min；(2)蛋白酶1次水解：蒸煮液冷却，调整pH至8.0，按照花生粕重量的0.3%-0.9%加入中性蛋白酶，在50℃的条件下，酶解0.5-2h；(3)蛋白酶2次水解：酶解液在10000rpm条件下离心15min，残渣继续加入5-10倍的水，加入花生粕重量0.3%的中性蛋白酶，在温度50℃、pH8.0、水解0.5-1h，离心，合并2次上清液，即得到粗制多肽溶液。本发明原料采用淀粉酶蒸煮进行预处理，可以打破花生粕中淀粉和蛋白质的网状结构。

Description

一种花生多肽及其制备方法

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，涉及一种花生多肽及其制备方法。

背景技术

花生蛋白是一种营养价值较高的植物蛋白，其生物价（Bv）为58，效率值为117，含有人体所需的8种必需氨基酸，尤其富含精氨酸（9%），而精氨酸具有免疫促进功能，对维护人体健康和幼儿发育具有重要作用。研究发现，蛋白质经水解得多肽比蛋白质更好的营养性能；实验证实肽的吸收率比氨基酸高，且比氨基酸更易，更快地通过小肠黏膜被人体吸收利用。花生蛋白活性多肽在营养保健领域具有多种卓越的生理功能：一是多肽可由肠道不经降解直接吸收，其吸收速度和吸收率比蛋白质和氨基酸都高，因而可作为肠道营养剂和流质食物的形式提供给处于特殊身体状况下的人群；二是它不仅提供人体必须的蛋白营养，还能有效降低血液中胆固醇和甘油三脂的含量，加快体内耗能，燃烧脂肪，抵抗肥胖；三是花生蛋白活性多肽能够为人体内的自由基与重金属，改善细胞代谢，为免疫系统制备与对抗细菌和感染的抗体。此外，在提高人体免疫功能方面，花生多肽与其它多肽有显著不同，花生多肽含有白藜芦醇，它对心血管疾病和动脉硬化有明显的抑制作用，亦可藉此促进人类肿瘤细胞的凋亡，或是通过肿瘤抑制因子P53的表现来达到抗肿瘤活性。

目前，多肽的生产主要有合成与蛋白质体外水解两种方法，合成法主要有化学合成，DNA重组技术合成，酶法合成三种方法。合成法虽然可按人们的意愿合成任意活性肽，但目前因为成本高，副反应物多及残留物等问题制约其发展；而重组DNA技术如果有望成功，将会有广阔前景。体外水解蛋白质为肽有三种方法：酸水解，碱水解及酶法水解，前两种方法简单易操作，但可能存在营养和毒理方面有害的效应，因此其应用收到了一定的限制；蛋白质酶法水解能在一定的条件下进行定位水解产生特定的肽，且易于控制水解进程，并且具有高度的专一性，一般不会导致营养方面的损失，也不会产生毒理上的问题；同时酶具有特异性，可在温和条件下进行，能耗低，因而能较好的满足肽的生产需要。在多肽生产中酶的选择是关键，它不仅影响最后产品的得率，反应速度，而且直接影响产品的风味和理化特征。但是花生中蛋白、淀粉组成复杂的网络结构，阻碍了水解的进程，因此目前酶水解花生多肽存在得率低、能耗大等缺陷。

发明内容

本发明的目的是提供一种淀粉酶蒸煮制备花生多肽的方法，其制备方法条件温和、无污染、效率技高，不仅原料预处理步骤可以最大限度的将花生蛋白溶解释放，而使后期蛋白酶水解速度快、水解度高、多肽得率高，从而进一步实现提高脱脂花生粕的附加值。

本发明另外提供一种由上述方法制备的花生多肽。

为了实现上述目的，通过大量试验研究，本发明提出如下技术方案：

一种制备花生多肽的方法，包括以下步骤： 

(1) 淀粉酶蒸煮：取脱脂脱壳干燥花生粕，粉碎过40目筛后，花生粕和水按照料液比1:5-1:10加入纯净水，料液比单位为g/ml，以花生粕重量计，加入耐高温α-淀粉酶10u/g，搅拌均匀后在温度为110℃条件下蒸煮30min；

(2) 蛋白酶1次水解：蒸煮液冷却，调整pH至8.0，按照花生粕重量的0.3%-0.9%加入中性蛋白酶，在50℃的条件下，酶解0.5-2h；

(3) 蛋白酶2次水解：酶解液在10000rpm条件下离心15min，取下层残渣，继续加入残渣重量5-10倍的水，加入花生粕重量0.3%的中性蛋白酶，在温度50℃、pH8.0、水解0.5-1h，离心，合并2次上清液，即得到粗制多肽溶液。 

优选的，所述耐高温α-淀粉酶规格为2000 u/g。

优选的，所述中性蛋白酶规格为20,000u/g。

本发明另外提供一种由上述方法制备的花生多肽。

本发明还包括提纯分离步骤，如下：将粗制多肽溶液先后经滤纸过滤、100nm微滤膜过滤、10KDa纳滤膜过滤，纳滤液在－45℃真空冷冻干燥，得花生多肽。

本发明技术方案材料：脱脂脱壳干燥花生粕、中性蛋白酶(20,000u/g)，耐高温α-淀粉酶(2000 u/g)。

本发明的有益效果在于：本发明提供了淀粉酶蒸煮制备花生多肽的方法，原料采用淀粉酶蒸煮进行预处理，可以打破花生粕中淀粉和蛋白质的网状结构。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但不能理解为对本发明的限制。

实施例 1

取脱脂脱壳干燥花生粕500克，粉碎过40目筛后，按照料液比5L加入纯净水，加入耐高温α-淀粉酶2.5g，搅拌均匀后在温度为121℃条件下蒸煮30min；蒸煮液冷却，调整pH至8.0，加入中性蛋白酶1.5g，在50℃的条件下，酶解2h。酶解液在10000rpm条件下离心15min，残渣继续加入2.5L的水，再次加入1.5g中性蛋白酶，在温度50℃、pH8.0、水解1h后，离心，合并2次上清液，即得到粗制多肽溶液, 采用双缩脲法检测溶液中多肽的含量，计算脱脂脱壳花生多肽的转化率为85%。

粗制多肽溶液超滤分离，截留分子量为10KDa以下的多肽，将多肽溶液经过凝胶层析、离子交换层析和RT-HPLC后收集的活性组分进行醋酸纤维素薄膜电泳，电泳为一条单一条带，说明收集的活性多肽纯度较高，质谱测定其分子量为8251.2Da。 

检测方法：游离氨基酸采用甲醛滴定法;蛋白质采用凯氏定氮法。多肽采用双缩脲法检测。 

多肽转化率计算公式: 转化率＝T2-T1/P1-P2。

式中:T2为酶解后多肽含量;T1为酶解前多肽含量;P1为酶解前总蛋白含量;P2为酶解前酸溶性蛋白含量。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.一种制备花生多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤： 

(1) 淀粉酶蒸煮：取脱脂脱壳干燥花生粕，粉碎过40目筛后，花生粕和水按照料液比1:5-1:10加入纯净水，料液比单位为g/ml，以花生粕重量计，加入耐高温α-淀粉酶10u/g，搅拌均匀后在温度为110℃条件下蒸煮30min；

(2) 蛋白酶1次水解：蒸煮液冷却，调整pH至8.0，按照花生粕重量的0.3%-0.9%加入中性蛋白酶，在50℃的条件下，酶解0.5-2h；

(3) 蛋白酶2次水解：酶解液在10000rpm条件下离心15min，取下层残渣，继续加入残渣重量5-10倍的水，加入花生粕重量0.3%的中性蛋白酶，在温度50℃、pH8.0、水解0.5-1h，离心，合并2次上清液，即得到粗制多肽溶液；

（4）将粗制多肽溶液先后经滤纸过滤、100nm微滤膜过滤、10KDa纳滤膜过滤，纳滤液在－45℃真空冷冻干燥，得花生多肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述耐高温α-淀粉酶规格为2000 u/g。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述中性蛋白酶规格为20,000u/g。

4.权利要求1－3任一项所述的方法制备的花生多肽。