CN102517364B - 一种利用海参制备ace抑制肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其是以包括鲜海参、或干海参、或水发参、或高压参在内的海参为原料，脱盐、软化处理，制浆后加水，加热灭除微生物，冷却后加入复合蛋白水解酶或风味蛋白水解酶中的一种进行酶解，灭酶，冷却后离心去除不溶物，上清液管滤，滤过液过3000Dalton的有机膜截留分级，3000Dalton以下的截留液通过纳滤，干燥，得ACE抑制肽。其酶解技术方案实现了最佳优化，经管滤、超滤、纳滤进行分离提取技术，其提取的效率高，所得的ACE抑制肽降压效果好。本发明的方法工艺合理、操作简便、可操作性强，易实现工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种肽的制备，尤其涉及一种利用海参制备ACE抑制肽的方法。
背景技术
降血压肽，又称为血管紧张素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme， EC3.4.15.1, 简称ACE)抑制肽，是从食物蛋白中分离出的一类具有显著降低血压功效的肽，通常为小分子肽。在众多降压物质中，降血压肽因其无毒副作用的降压功能成为活性肽研究的热点。现在已经从乳酪蛋白中的干酪素、乳清蛋白等；动植物蛋白中的鸡肉、明胶、猪肉、鸡蛋、荞麦、玉米、椰菜、大蒜等；鱼贝藻类蛋白中的沙丁鱼、金枪鱼、鳝鱼头、牡蛎、裙带菜等分离出ACE抑制肽；国内一些研究者还从中国传统的食品即墨老酒，豆腐乳中发现ACE抑制肽。目前，许多研究己经通过体内实验验证ACE抑制肽具有较好的降压活性，且对正常血压无影响。
海参隶属于棘皮动物门海参纲。在明代《食物本草》中，早已指出海参具有主补元气、滋益五脏六腑和祛虚损等诸多养生功能。现代医学研究证明，海参富含多糖、海参素、海参皂甙、谷氨酸、甘氨酸、精氨酸、硒、锌、铁、碘、钙、超氧化物歧化酶（SOD）、硫酸软骨素等50多种对人体有益的营养成分，是一座天然的营养宝库。经实验测定，海参水解肽也具有ACE抑制活性，是潜在的可开发的降血压活性物质。目前，还未见有利用海参制备ACE抑制肽的研究报道。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种利用海参制备ACE抑制肽的方法。该方法提取所得的海参活性肽具有ACE抑制活性和降压功效。该制备ACE抑制肽的方法工艺合理、操作简便、可操作性强、易实现工业化生产。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其是以包括鲜海参、或干海参、或水发参、或高压参在内的海参为原料，进行脱盐、软化处理，制浆后加入海参重量10～30倍的纯净水，加热灭除微生物，冷却后加入蛋白水解酶进行酶解，酶解液加热灭酶，冷却后离心去除不溶物，上清液通过管膜过滤脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000Dalton的有机膜截留分级，3000Dalton以下的截留液通过纳滤浓缩脱盐，干燥，得海参ACE抑制肽。
所述的蛋白水解酶为复合蛋白水解酶或风味蛋白水解酶中的一种，其用量为海参重量的2～10‰ 。
本发明是将海参原料经脱盐、软化处理，制浆后加水，加热灭除微生物，冷却后酶解，加热灭酶，冷却后离心，取上清液通过管滤、超滤、纳滤，干燥，得海参ACE抑制肽。所分离得到的具有ACE抑制活性的短肽保存了完好的结构和有效的生物活性。实验表明，采用此方法分离出的ACE抑制肽经原发性高血压大鼠实验，能有效降低大鼠舒张压。该方法利用可控的酶解条件，并结合膜分离技术将具有ACE抑制功效的短肽片段分离出来，其酶解技术方案实现了最佳优化，经管滤、超滤、纳滤技术进行分离提取，其提取的效率高。分离出的具有降压活性的短肽片段具有较高的利用价值。其制备ACE抑制肽的方法工艺合理、操作简便、可操作性强，易实现工业化生产。
具体实施方式
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下：
a、原料的选取与处理 其是以鲜海参为原料，将鲜海参去肠后，放入沸水浴水煮10min以上，捞出沥干水分去除参嘴，然后利用高压锅或杀菌锅进行软化处理；
或是以干海参为原料，将干海参放入冷水中浸泡24h以上去除盐分，放入沸水浴水煮10min以上，捞出沥干水分去除参嘴，然后利用高压锅或杀菌锅进行软化处理；
或是以水发海参为原料；
或是以高压海参为原料；
将上述经过脱盐、软化处理的鲜海参、或干海参、或水发海参、或高压海参原料采用打浆机进行打浆处理，然后采用胶体磨将物料进一步细化处理，得浆状物；
b、酶解 将步骤（a）得到的浆状物加入海参重量10～30倍的纯净水，加热至溶液中心温度达到95～100℃，持续10min，灭除微生物；冷却至50～55℃，加入蛋白水解酶进行酶解，其用量为海参重量的2～10‰，酶解时间为1～3h，得酶解液；其中，所述的蛋白水解酶为复合蛋白水解酶或风味蛋白水解酶中的一种；
c、灭酶：将步骤（b）酶解所得的酶解液加热至溶液中心温度达到95～100℃，持续10～30min，进行灭酶处理，得灭酶的酶解液；
d、去除不溶物 将步骤（c）所得的灭酶酶解液冷却至4℃，采用离心机离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤 将步骤（d）收集的上清液采用管膜过滤脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000Dalton的有机膜截留分级，收集3000Dalton以下截留液；
f、纳滤 将步骤（e）收集的3000Dalton以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，收集纳滤截留液；
g、干燥 将步骤（f）收集的纳滤截留液进行干燥处理，得ACE抑制肽。
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下：
a、原料的选择与处理 选取鲜海参100kg为原料，去肠后，放入沸水浴水煮20min，捞出沥干水分去除参嘴，然后采用杀菌锅0.1Mpa 121℃ 30min进行软化处理，软化处理的海参为7kg，将该软化的海参使用打浆机进行打浆处理，然后采用胶体磨将物料进一步细化处理，得到粒度很小的海参浆状物；
b、酶解 将所得的海参浆状物加入200L的纯净水，加热至溶液中心温度达到100℃，持续10min，灭除微生物；冷却至50℃，加入复合蛋白水解酶40g，酶解2h，得酶解液；其中复合蛋白水解酶可为市购的商品酶，如Protamex复合蛋白酶，也可以自行配制，配制的复合蛋白水解酶中含有木瓜蛋白酶、淀粉酶等多种酶；
c、灭酶 将酶解液加热至溶液中心温度达到100℃，持续10min，进行灭酶处理；
d、去除不溶物 将灭酶后的酶解液冷却至4℃，采用三足式离心机，控制转速2000 rpm，离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤 将收集的上清液采用管膜过滤进一步脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000Dalton的有机膜截留分级，收集3000Dalton以下截留液；
f、纳滤 将收集的3000Dalton以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，最终浓液电导达到300μs/cm以下时，停止纳滤，收集纳滤截留液；
g、FD冻干 将收集的纳滤截留液加到杀过菌的料盘中，厚度在5mm-30mm之间均可，然后放到冻结隧道中，进行冻结，时间在6－12个小时左右，冻结后马上进入冻干仓进行冻干处理，冻干后采用粉碎机进行粉碎，所得粉状物即为ACE抑制肽。
实施例2
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下：
a、原料的选择与处理：选取干海参5kg为原料，放入冷水中浸泡1天，捞出放入沸水中煮20min，捞出后采用杀菌锅0.1Mpa 121℃ 20min进行软化处理，软化处理的海参采用打浆机进行打浆处理，然后采用胶体磨将物料进一步细化处理，得到粒度很小的海参浆状物；
b、酶解：将所得的海参浆状物加入100L的纯净水，加热至溶液中心温度达到95℃，持续30min，灭除微生物；冷却至55℃，加入风味蛋白水解酶50g，酶解1h，得酶解液；
c、灭酶 将酶解液加热至溶液中心温度达到95℃，持续10min，进行灭酶处理；
d、去除不溶物 将灭酶后的酶解液冷却至4℃，采用管式离心机，控制转速3000 rpm，离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤 将收集的上清液采用管膜过滤进一步脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000Dalton的有机膜截留分级，收集3000Dalton以下的截留液；
f、纳滤：将收集的3000Dalton以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，最终浓液电导达到300μs/cm以下时，停止纳滤，收集纳滤截留液；
g、喷雾干燥：将收集的纳滤截留液进行喷雾干燥，所得粉状物即为ACE抑制肽。
实施例3
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下：
a、原料的选择与处理 其是选取水发参20kg为原料，使用打浆机进行打浆处理，再采用胶体磨将物料进一步细化处理，得到粒度很小的海参浆状物；
b、酶解：将所得到的海参浆状物加入200L的纯净水，加热至溶液中心温度达到100℃，持15min，灭除微生物；冷却至50℃，加入复合蛋白水解酶50g，酶解2h，得酶解液；复合蛋白水解酶为市购的Protamex复合蛋白酶；
c、灭酶 将酶解液加热至溶液中心温度达到100℃，持续10min，进行灭酶处理；
d、去除不溶物 将灭酶后的酶解液冷却至4℃，采用三足式离心机，控制转速2000 rpm，离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤 将收集的上清液采用管膜过滤进一步脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000Dalton的有机膜截留分级，收集3000Dalton以下截留液；
f、纳滤 将收集的3000Dalton以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，最终浓液电导达到300μs/cm以下时，停止纳滤，收集纳滤截留液；
g、冻干 将收集的纳滤截留液进行采用冷冻干燥法冻干，冻干后粉碎，所得粉状物即为ACE抑制肽。
实施例4
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下：
a、原料的选择与处理 其是选取高压参20kg为原料，采用打浆机进行打浆处理，再采用胶体磨进一步将物料细化处理，得到粒度很小的海参浆状物；
b、酶解 将所得的海参浆状物加入300L的纯净水，加热至溶液中心温度达到95℃，持续10min，灭除微生物；冷却至53℃，加入风味蛋白水解酶60g，酶解2h，得酶解液；
c、灭酶 将酶解液加热至溶液中心温度达到95℃，持续10min，进行灭酶处理；
d、去除不溶物 将灭酶后的酶解液冷却至4℃，采用三足式离心机，控制转速2000 rpm，离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤 将收集的上清液采用管膜过滤进一步脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000Dalton的有机膜截留分级，收集3000Dalton以下截留液；
f、纳滤 将收集的3000Dalton以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，最终浓液电导达到300μs/cm以下时，停止纳滤，收集纳滤截留液；
g、干燥 将收集的纳滤截留液进行采用微波干燥法进行干燥，粉碎后所得粉状物即为ACE抑制肽。
实施例5
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下：
a、原料的选择与处理 其是选取盐渍海参10kg为原料，放入冷水中浸泡12小时去盐处理，捞出放入沸水中煮20min，捞出后采用杀菌锅0.1Mpa 121℃ 20min进行软化处理，软化处理后的海参采用打浆机进行打浆处理，然后采用胶体磨将物料进一步细化处理，得到粒度很小的海参浆状物；
b、酶解 将所得的海参浆状物加入250L的纯净水，加热至溶液中心温度达到97℃，持续20min，灭除微生物；冷却至50℃，加入风味蛋白水解酶50g，酶解2h，得酶解液；
c、灭酶 将酶解液加热至溶液中心温度达到100℃，持续10min，进行灭酶处理；
d、去除不溶物 将灭酶后的酶解液冷却至4℃，采用三足式离心机，控制转速2000 rpm，离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤 将收集的上清液采用管膜过滤进一步脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000Dalton的有机膜截留分级，收集3000Dalton以下截留液；
f、纳滤 将收集的3000Dalton以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，最终浓液电导达到300μs/cm以下时，停止纳滤，收集纳滤截留液；
g、干燥 将收集的纳滤截留液进行采用微波干燥法进行干燥，粉碎后所得粉状物即为ACE抑制肽。
下面结合动物实验进一步说明本发明所制备的ACE抑制肽的降压效果。
本动物实验是将24只SHR随机分为空白对照组8只，阳性对照组8只、ACE抑制肽样品组8只，阳性对照组：给予卡托普利0.54 mg/kg·d剂量灌胃。ACE抑制肽样品组：ACE抑制肽溶液以0.48g/kg·d剂量灌胃，给药时间均为4周。每周测定尾动脉收缩压一次，数据见附表。
附表 各给药组对SHR尾动脉收缩压的影响( 
±s, mmHg)
| 组 别 | 第1周 | 第2周 | 第3周 | 第4周 |
| 空白对照组 | 199.25±5.12 | 183.60±10.38 | 178.00±13.61 | 175.00±11.66 |
| 阳性对照组 | 171.66±10.24 | 185.90±9.58 | 193.55±7.10 | 140.15±10.98** |
| ACE抑制肽组 | 180.80±10.43 | 174.60±3.27 | 177.60±4.81 | 148.26±12.61* |
注：与空白对照组相比，* P＜0.05，** P＜0.01
从表1可以看出，与空白对照组相比。ACE抑制肽组给药4周后的SHR尾动脉收缩压均明显降低，降低32.54 mmHg，与阳性对照组相差不多。经统计学分析，与空白对照组相比，具有显著的降血压效果(P<0.05)。
Claims (1)
1.一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其特征在于：其具体工艺步骤如下：
a、原料的选取与处理 其是以鲜海参为原料，将鲜海参去肠后，放入沸水浴水煮10min以上，捞出沥干水分去除参嘴，然后利用高压锅或杀菌锅进行软化处理；
或是以干海参为原料，将干海参放入冷水中浸泡24h以上去除盐分，放入沸水浴水煮10min以上，捞出沥干水分去除参嘴，然后利用高压锅或杀菌锅进行软化处理；
或是以水发海参为原料；
或是以高压海参为原料；
将上述经过脱盐、软化处理的鲜海参，或经过脱盐、软化处理的干海参，或水发海参，或高压海参原料采用打浆机进行打浆处理，然后采用胶体磨将物料进一步细化处理，得浆状物；
b、酶解 将步骤（a）得到的浆状物加入海参重量10～30倍的纯净水，加热至溶液中心温度达到95～100℃，持续10min，灭除微生物；冷却至50～55℃，加入蛋白水解酶进行酶解，其用量为海参重量的2～10‰，酶解时间为1～3h，得酶解液；其中，所述的蛋白水解酶为复合蛋白水解酶或风味蛋白水解酶中的一种；
c、灭酶：将步骤（b）酶解所得的酶解液加热至溶液中心温度达到95～100℃，持续10～30min，进行灭酶处理，得灭酶的酶解液；
d、去除不溶物 将步骤（c）所得的灭酶酶解液冷却至4℃，采用离心机离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤 将步骤（d）收集的上清液采用管膜过滤脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000Dalton的有机膜截留分级，收集3000Dalton以下截留液；
f、纳滤 将步骤（e）收集的3000Dalton以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，收集纳滤截留液；
g、干燥 将步骤（f）收集的纳滤截留液进行干燥处理，得ACE抑制肽。
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