CN103462885A - 一种稳定的罗库溴铵注射液制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种稳定的罗库溴铵（rocuronium）注射液制剂处方及其制备方法，注射液含有活性成分罗库溴铵和稳定剂、渗透压调节剂、pH调节剂及注射用水，包括2.5ml：25mg和5ml：50mg两种规格。本发明将罗库溴铵加入到适宜的稳定剂中，解决了稳定性问题；并采用了121℃热压灭菌，辅助过滤除菌的方式确保无菌。本发明处方合理，工艺简单，质量稳定，适宜工业化生产。该注射剂用于手术患者的肌肉松弛。

Description

一种稳定的罗库溴铵注射液制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种稳定的罗库溴铵（rocuronium）注射液制剂及其制备方法。 

背景技术

罗库溴铵为维库溴铵的去酰氧基衍生物，属于甾族非去极化肌松药，化学名称为1-[(2β，3α，5α，16β，17β)-17-(乙酰氧基)-3-羟基-2-（4-吗啉基）雄甾烷-16-基]-1-（2-丙烯基）吡咯烷溴化物，其结构式如下： 

罗库溴铵是中短时效的肌松药，但起效快，恢复迅速，是迄今起效最快的一种非去极化肌松药。罗库溴铵的特点同时体现在进人体内后主要被肝脏摄取，以经胆汁排泄为主，经肾排泄次之，对肝、肾功能影响较小；能降低眼内压，用于眼科急诊手术，同时对颅内压无影响，故可安全用于颅脑手术；几乎没有心血管副反应，心率或血压几乎无或微小改变；没有组胺的释放；对体内代谢及离子平衡影响小；无过敏及类过敏反应；反复给药也无蓄积作用；提高了病人用药过程中的安全性。

作为一种安全有效的肌松药，罗库溴铵受到了广泛的关注。WO0044334公开了罗库溴铵与其它传统肌松药组成复方注射剂。US5767112公开了一种含有肌松药和重量比为2-30%且等离子点不大于7的两性离子物质的罗库溴铵的肠外给药组合物。DE19903894公开了一种含有维库溴铵和罗库溴铵且具有协同作用的复方制剂。CN1864667A中公开了一种采用冻干法制备罗库溴铵冻干制剂的方法提高罗库溴铵在制备和储存过程中的稳定性。CN101653412A中公开了一种稳定的罗库溴铵注射用组合物。 

目前文献报道和上市的品种均为含量为10mg/ml的水针剂，荷兰Organon Teknika B.V.公司生产的Esmeron注射液（2.5ml：25mg和5ml：50mg两个规格）于2000年在我国取得进口批准文号。到目前为止，国内有两个厂家取得该产品的批准文号，分别为浙江仙琚制药股份有限公司（国药准字H20093186，规格为5ml：50mg）和华北制药股份有限公司（国药准字H20103235，规格为5ml：50mg及国药准字H20103495，规格为2.5ml：25mg）。 

由于罗库溴铵在水中的稳定性差，直接影响了该药物在临床中的应用。CN1864667A采用冻干法提高罗库溴铵在生产和储存中的稳定性，但是仍存在以下问题：1、冻干工艺耗时长，成本高；2、冻干粉针的生产工艺对设备要求比较高，需要在无菌条件下生产；3、无菌保证水平低，不能采用热压灭菌（终端灭菌）；4、冻干粉针在临床应用时需用水溶解，可能因药物溶解不充分，在给人注射时产生一定危险。CN101653412A通过采用控制药液的pH和加入金属螯合剂为稳定剂的办法来提高罗库溴铵水溶液的稳定性，但存在的主要问题是采用了金属螯合剂依地酸二钠（EDTA-2Na）或者依地酸钙钠（EDTA-2Na-Ca）。 

众所周知，为了在制备注射液的过程中防止金属离子与药物分子的作用，需要加入一定量的金属离子螯合剂，但注射剂应尽可能少的加入辅料以减轻可能对人体造成的危害，特别是对金属螯合剂更要慎用并严格控制。王亚敏在《药品技术评价文集》(中国医药科技出版社，2006年第一版)第一辑第478页中曾提出如下建议：1、静脉给药制剂，尤其是输液产品中如果使用金属离子螯合剂，建议首选依地酸钠钙；2、静脉给药制剂中如果必须使用依地酸二钠，需要充分考虑给药后依地酸二钠引起血钙下降的程度及其引发的临床方面的问题；对依地酸二钠单次绝对用量的合理性，药品适应症及其给药频率和使用时间等进行充分的考虑和分析，必要时可能还需要提供相应的资料进行证明。 

   因此，如何根据罗库溴铵分子的结构特点，设计合理的药物处方及制备方法，避免使用金属螯合剂，制备出在制备和储存过程中稳定的注射液是迫切需要解决的问题。 

发明内容

本发明的目的是提供了一种稳定的具体涉及一种稳定的罗库溴铵（rocuronium）注射液制剂，包含有效治疗量的罗库溴铵和pH调节剂、稳定剂、渗透压调节剂。 

本发明的另一目的是提供了一种制备罗库溴铵注射液制剂的方法。 

CN101653412A在解决罗库溴铵水溶液稳定性的问题时，采用了同时控制溶液的pH和加入金属螯合剂的办法来提高罗库溴铵水溶液的稳定性。该专利发现，EDTA-2Na-Ca或EDTA-2Na作为稳定剂可以在高温灭菌的制备过程中以及储藏过程中延缓17位酯键的水解，从而减少杂质C的产生。此外，该专利的制备特征是称取处方量的柠檬酸或醋酸，加入适量注射用水溶解；加入氢氧化钠进行调节pH至4.0，再依次加入稳定剂、药物，搅拌溶解。但存在的主要问题是采用了金属螯合剂依地酸二钠（EDTA-2Na）或者依地酸钙钠（EDTA-2Na-Ca）。 

 为了解决罗库溴铵注射液在不使用金属螯合剂情况下的稳定性问题，根据罗库溴铵分子结构特点，重点考察pH值对溶液稳定性的影响。因为其分子结构中存在酯基，水解程度受pH影响较大。在不加人金属螯合剂的情况下，实验过程中我们惊奇的发现，在柠檬酸盐缓冲体系、磷酸盐缓冲体系中，控制适当的pH值下，酯基的水解可以有效得到抑制，其含量、总杂质及杂质C等测试结果见表1。 

表1  缓冲液考察结果 

由表1可以看出，三元酸与三元酸盐组成的缓冲体系较好，三元酸与一元酸盐或者一元酸与三元酸盐组成的缓冲体系次之，这可能与多元酸具有较强的缓冲能力有关。其中，三元酸与三元酸盐组成的缓冲体系中，柠檬酸与柠檬酸钠组成的缓冲溶液好于磷酸与磷酸二氢钠组成的缓冲溶液，这可能与柠檬酸为有机酸而磷酸为无机酸有关；醋酸（盐）缓冲体系最差；但均能满足欧洲药典标准要求，说明在没有金属螯合剂的情况下，可以制备符合药典要求的罗库溴铵注射液。本发明的稳定剂为无机及有机缓冲液，如磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液等。本发明的pH调节剂可选用无机酸（如盐酸、硫酸、磷酸等）、有机酸（如醋酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、抗坏血酸、琥珀酸、丁二酸、乳酸等）、天然氨基酸及其盐（如L-半胱氨酸、L-精氨酸、L-甘氨酸等及其盐）、无机碱（氢氧化钠/钾、碳酸氢钠/钾、碳酸钠/钾等）、无机及有机缓冲液（如磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液等）中的任何一种或多种。若选用磷酸-磷酸二氢钠为缓冲溶液做稳定剂，本发明优选磷酸或磷酸氢盐做pH调节剂；如果选用柠檬酸-柠檬酸钠为缓冲溶液做稳定剂，本发明优选柠檬酸或柠檬酸钠做pH调节剂，这样既可以减少辅料的种类又可以达到调节pH的目的。

作为注射液，其渗透压必须在人体生理渗透压范围内，否则会造成溶血、疼痛等不良反应的发生。本发明调节渗透压的物质可选用氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、乳酸钠、硫酸钠、硫酸铵、甘油、甘露醇、无水葡萄糖、含水葡萄糖、木糖醇、山梨醇、速溶山梨醇、果糖、右旋糖酐等中的任何一种或多种，优选氯化钠。 

本发明的罗库溴铵注射液制剂的方法，主要包括以下过程： 

(a)、量取一定量无机或有机缓冲液，加入适量注射用水，混合均匀；

(b)、加入一定量渗透压调节剂调节溶液的渗透压，搅拌或振摇至完全溶解；

(c)、将罗库溴铵加入，搅拌或振摇使其溶解，然后用适宜pH调节剂调节pH至3.0～5.0；

(d)、加入一定量针用活性炭，室温下搅拌一定时间后滤过；

(e)、定量，过滤除菌；

(f)、灌装，全压胶塞，轧盖；

(g)、121℃热压灭菌；

(h)、检验，印字，包装；

(i)、置于0～10℃条件下储存。

为说明本发明技术效果，发明人进行了以下研究。 

一、罗库溴铵注射液稳定性试验研究如下： 

1.试验目的：考查本产品的稳定性，包括影响因素试验、加速试验及长期试验。

2.按实施例2配制三批样品：精密量取pH为3.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，加注射用水适量，混合均匀；加入氯化钠，搅拌或振摇使完全溶解；将罗库溴铵加入，搅拌或振摇至完全溶解后，用1mol/L柠檬酸或1mol/L氢氧化钠调节pH至4.0；然后加入针用活性炭0.05%（w/v），室温下搅拌30min，粗滤；定量，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌；灌装，每瓶2.5ml或5ml，全压胶塞，轧盖；121℃热压灭菌20min；检验，印字，包装，置于冰箱中2～8℃储存。 

3.试验方法：主要考察样品的pH值及含量、有关物质的变化情况。 

A. pH值：取本品，照中国药典2005年版二部附录Ⅵ H测定。 

B.含量用HPLC法测定： 

（1）色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.04mol/L四甲基氢氧化铵溶液（用磷酸调节pH值为7.4）（90:10）为流动相，检测波长210nm，柱温30℃，流速1.2ml/min，理论板数以罗库溴铵计，不得少于5000，罗库溴铵与杂质峰的分离度应符合规定。

（2）测定法：取装量差异项下的内容物适量，加流动相稀释制成每1ml中约含罗库溴铵1mg的溶液，作为供试品溶液；精密称取罗库溴铵对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含罗库溴铵1mg的溶液，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算含量。 

C.杂质用HPLC法测定： 

（1）色谱条件与系统适用性试验，同含量测定。

（2）测定法：精密量取本品1ml，置适宜容器中，在室温下吹干或旋转蒸发至干。精密加入乙腈2ml，超声溶解1分钟，离心，取上清液作为供试品溶液（5mg/ml）。 

4.测定结果： 

A.高温40℃：据文献报道，本品应在2~8℃的条件下保存，表明本品对温度较敏感，故选择40℃时进行影响因素试验。取供试品，除去外包装，40℃条件下放置，于第5、10天取样检测各项指标，与0天的数据比较。部分结果如下表2：                  

表2  影响因素试验结果—1

试验结果：自制品（第一批）在40℃放置10天，样品仍为无色透明液体，含量有所降低，有关物质增加，但在合格范围，其他各项均符合规定。由表1可知，自制品（柠檬酸盐）杂质C的变化趋势同华药产品基本一致，且优于华药产品。

B.强光照射：取供试品除去外包装，在4500Lx±500Lx的光照度下放置，于第5、10天取样检定各项指标，与0天的数据比较。部分结果见下表3： 

表3   影响因素试验结果—2

试验结果表明：自制品（第一批）经强光照射10天，样品仍为无色澄明液体，含量有所降低，有关物质有所增加，比高温影响小些，但在合格范围。自制品中杂质C及总杂的变化趋势同华药产品基本一致，质量好于华药产品。

C.加速试验：据说明书要求本品应在2℃~8℃的条件下贮存，故选择在温度25℃±2℃的条件下进行加速试验。取供试品，在管制抗生素瓶包装条件下，于温度25℃±2℃时放置6个月，分别于0、1、2、3、6个月取样，考察其pH值、有关物质、含量的变化情况，部分结果见表4。 

表4     加速试验结果 

由表中数据可见，自制品经6个月的加速试验，各项检测指标无显著变化，说明罗库溴铵注射液的质量稳定，且同华药产品相比，罗库溴铵的柠檬酸盐注射液的稳定性更好。

D.长期试验：参照说明书要求选择在温度2℃~8℃的条件下进行长期试验。取供试品（醋酸盐样品）三批，及华药产品和欧加农产品，于该条件下放置，分别于0、3、6、9、12月取样，考察其pH值、有关物质、含量的变化情况。部分实验结果见表5。 

表5 长期试验结果 

由表中数据可见，自制品（柠檬酸盐）经12个月的长期试验，各项检测指标均在质量标准规定的范围内，且同华药产品相比，罗库溴铵的柠檬酸盐注射液的稳定性更好。

此外，研究实验还表明罗库溴铵的磷酸盐注射液与罗库溴铵的柠檬酸盐注射液质量相近，其杂质C及总杂质的含量均低于华药产品。 

二、罗库溴铵注射液（柠檬酸盐）特殊安全性试验 

1、罗库溴铵注射液全身过敏试验

[摘要]罗库溴铵注射液0.15mg/kg和0.30mg/kg剂量致敏豚鼠，隔日1次。共5次，于末次致敏后第10天，两组均用2倍致敏剂量攻击，即刻、30分钟至3小时，各只动物过敏反应级数为0级，平均反应级数为0，即过敏反应阴性。

[目的]观察罗库溴铵注射液的全身过敏反应。 

[药物]罗库溴铵注射液，50mg/5ml，为无色透明液体，河北凯盛医药科技有限公司提供。实验时用生理盐水配成适宜的浓度。 

[动物]豚鼠，雄性，体重300-400g，购自河北省实验动物中心。 

[方法]取豚鼠24只，雄性，300-400g，随机分为4组（生理盐水、5%卵蛋白、罗库溴铵注射液高剂量组、罗库溴铵注射液低剂量组），每组6只。 

致敏：

致敏途径：腹腔注射

致敏次数：隔日1次，共5次。

致敏剂量： 

    阴性对照：给予生理盐水1ml/kg。

    阳性对照：给予5%卵白蛋白1ml/kg。 

    低剂量组：根据预实验结果罗库溴铵0.15mg/kg。 

    高剂量组：根据预实验结果罗库溴铵0.30mg/kg。 

激发：

激发途径：静脉内给药。

激发次数：末次注射后第10天一次激发。 

激发剂量：为致敏剂。 

低剂量组：0.30ml/kg； 

高剂量组：0.60ml/kg。

观察指标：

    1、致敏期间：每日观察每只动物的症状。初次，最后一次致敏和激发当日测定各组每只动物的体重。

2、激发：静脉注射后即刻至30分钟，按下表症状详细观察每只动物的反应，症状出现及消失时间。最长应观察3小时。 

表6：过敏反应症状 

表7：全身致敏性评价标准

 [结果]1、罗库溴铵注射液致敏期间各组动物均未观察到异常症状。初次、最后一次致敏和激发当日，各组动物体重增长，受试物组与生理盐水组比较无显著差异。

2、激发反应时，受试药物低剂量组动物激发即刻、30分钟至3小时5只动物未见过敏症状，反应级数为0级；受试药物高剂量组动物激发即刻、30分钟至3小时5只动物未见过敏症状，反应级数为0级；生理盐水组动物激发即刻、30分钟至3小时5只动物未见过敏症状，反应级数为0级；5%卵蛋白组激发期间，1号动物搔鼻、步态不稳、痉挛、死亡，评分20分；2号动物发抖、搔鼻，评分4分；3号动物立毛、发抖、搔鼻、步态不稳，评分14分；4号动物立毛、发抖、搔鼻、喷嚏、步态不稳、喘息，评分16分；5号动物立毛、搔鼻、步态不稳，评分14分。5只动物平均积分13.6分，结果见表3。 

表8：罗库溴铵注射液对豚鼠过敏反应的影响 

[结论]罗库溴铵注射液在本实验条件下全身过敏反应阴性。

  

2、罗库溴铵注射液被动皮肤过敏试验

[摘要]罗库溴铵注射液0.60mg/kg和1.20mg/kg两个剂量给大鼠肌肉注射，隔日1次。共5次，制备抗血清，经1：2，1：4，1：8，1：16稀释后给大鼠皮内注射，48小时后进行抗原攻击，各组大鼠分别注射液与致敏剂量相同的激发抗原1.0ml（用1.0%伊文思蓝染料配制），30分钟后将动物处死，剪开背部皮肤，观察各注射点皮肤内层的蓝斑直径，阳性药组蓝斑直径为10.6±10.8、7.8±8.8、6.9±6.6、4.8±7.6；罗库溴铵注射液0.6mg/kg和1.20mg/kg两个剂量未见蓝斑出现。即被动皮肤过敏反应阴性。

[目的]观察罗库溴铵注射液的皮肤被动过敏反应。 

[药物]罗库溴铵注射液，50mg/5ml，河北凯盛医药科技有限公司提供。实验时用生理盐水配成适宜的浓度。 

[动物]Wistar大鼠，体重200±40g，购自河北省实验动物中心。 

[方法]致敏：取Wistar大鼠8只，体重180±20g，雄性，随机分为4组，每组2只。分别为：阴性对照组（生理盐水），阳性对照组（5%卵蛋白生理盐水溶液），受试药物低剂量组（0.60mg/kg），受试药物高剂量组（1.20mg/ml）。各组分别腹腔注射生理盐水1.0ml/kg、5%卵蛋白生理盐水溶液1.0ml/kg、罗库溴铵（高、低两个剂量）1.0ml/kg，隔日1次，共5次。末次致敏后10天腹主动脉采血，3000转/分离心10分钟，分离血清，-20℃保存备用。 

激发：取Wistar大鼠32只，雌雄各半，体重180±20g，随机分为阴性对照组（生理盐水），阳性对照组（5%卵蛋白生理盐水溶液），罗库溴铵（高、低两个剂量）。在各组大鼠背部中线两侧距离脊柱1.5cm处脱毛，每侧2点，按顺序皮内注入各组相应抗血清（左：1：2，1：8；右：1：4，1：16）0.1ml。48小时后进行抗原攻击，各组大鼠分别腹腔注射与致敏剂量相同的激发抗原1.0ml（用1.0%伊文思蓝染料配制）。30分钟后将动物处死，剪开背部皮肤，测量各注射点皮肤内层的蓝斑直径，大于5mm者判定为阳性。 

[结果]罗库溴铵注射液同种被动皮肤致敏反应结果见表9。罗库溴铵0.6mg/kg、1.20mg/kg组和生理盐水组大鼠背部皮肤均未见明显蓝色反应斑点。而卵蛋白组各不同稀释浓度注射点均出现明显蓝色反应斑。结果表明，在本实验条件下，罗库溴铵注射液未观察到被动皮肤致敏作用。 

表9：罗库溴铵注射液对大鼠被动皮肤过敏试验的影响 

3、罗库溴铵注射液溶血试验

[摘要]0.2%不同体积罗库溴铵注射液供试品液加于盛有不同体积生理盐水和2%家兔血红球混悬液的试管中，置37℃恒温箱放置4小时，观察溶液的颜色，4小时内上层溶液均呈无色透明，红细胞全部下沉，震荡能分散，表明该药无溶血、凝血现象发生。

[目的]观察罗库溴铵注射液的体外溶血、凝血情况，判断罗库溴铵注射液对红细胞有无溶血或凝血反应，能否作为静脉注射用。 

[药物]罗库溴铵注射液，50mg/5ml，为无色透明液体。河北凯盛医药科技有限公司提供。实验时用生理盐水配成0.2%的浓度。 

[动物]新西兰家兔，购自河北省实验动物中心。 

[方法]取家兔1只，雄性，2.5kg，自心脏取血10ml，放入盛有玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白，使成脱纤血液，加入10倍量的生理盐水，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水如上法洗涤2-3次，至上清液不显示红色为止。用生理盐水配成2%（v/v）的红细胞混悬液备用。 

取试管7支，按表中列出的配比量依次加入2%红细胞混悬液和生理盐水及蒸馏水，混匀后，于37℃恒温箱放置30分钟，然后分别加入0.2%不同量罗库溴铵注射液供试品液，第6管不加供试品溶液，作为空白对照管，第7管仍不加供试品溶液，并用蒸馏水代替生理盐水，作为溶血的阳性对照，摇匀后，置37℃恒温箱中。开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每小时观察1次，共观察4小时。 

结果判断： 

    全溶血：溶液澄明红色，管底无细胞残留。

    部分溶血：溶液澄明红色或棕色，管底少量红细胞残留。 

    无溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。 

    凝聚：虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 

凡2小时内第三管或第三管以前的各管出现溶血，部分溶血或出现凝集反应，不宜作静脉注射用。 

[结果]0.2%罗库溴铵注射液溶血试验结果见表5。1-5管加入受试药液的各试管与第6管相同，在37℃，15min到4小时内上层溶液呈无色透明，红细胞下沉，表明无溶血反应；下沉的红细胞经振摇很快分散，无棕红色或红棕色絮状沉淀，表明无凝血反应发生。 

表10：罗库溴铵注射液溶血实验结果 

[结论]根据实验结果判断，0.2%罗库溴铵注射液不引起溶血和凝血反应，可供静脉注射使用。

  

4、罗库溴铵注射液局部刺激试验

（1）肌肉刺激试验

[摘要]家兔股四头肌注射生理盐水组4个标本刺激评分均为0级，总和为0级。供试品组4块股四头肌标本中，4个为0级，总和为0级。罗库溴铵注射液对肌肉刺激试验符合规定。

[目的]将罗库溴铵注射液注入家兔股四头肌，观察其对肌肉局部刺激性。 

[药物]罗库溴铵注射液，50mg/5ml，为无色透明液体。河北凯盛医药科技有限公司提供。实验时用生理盐水配成0.025%的浓度。 

[动物]新西兰家兔，雌雄兼用，购自河北省实验动物中心。 

[方法]新西兰家兔4只，雌雄兼用，饲养3天后开始实验。分别剪去家兔两侧股四头肌处被毛，按无菌操作于左侧股四头肌注入0.025%罗库溴铵生理盐水液1.0ml左右，右侧股四头肌注入1.0ml生理盐水作对照。于注射后48小时处死动物，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位刺激反应（必要时做病理检查）并按表6的标准换算出相应的反应级数[陈奇，中药药理研究方法学，1993：163-164]，如4块股四头肌反应级的总和小于10时，认为供试品的局部刺激试验符合规定。 

表11：刺激反应（肌肉）评分标准 

[结果]两组4块股四头肌标本中，生理盐水组0级4个，总和为0级。罗库溴铵注射液组4个标本均为0级，总和为0分，供试品的局部肌肉刺激试验符合规定。

2）血管刺激试验 

[摘要]0.6mg/100ml的罗库溴铵注射液静脉滴入家兔耳静脉（25ml/kg），滴注速度为10μg/min，滴注后48小时，处死动物，解剖，取兔耳血管做病理切片观察，血管内皮完整，无明显充血及炎症刺激反应。

[目的]将罗库溴铵注射液静脉注入家兔耳静脉，观察其对血管的刺激性。 

[药物]罗库溴铵注射液，50mg/5ml，为无色透明液体。河北凯盛医药科技有限公司提供。实验时用生理盐水配成0.6mg/100ml的浓度作为供试品溶液使用。 

[动物]新西兰家兔，雌雄兼用，购自河北省实验动物中心。 

[方法]新西兰家兔3只，2.0-2.5kg，雌雄兼用，饲养3天后，在无菌操作下给左耳静脉注射0.6mg/100ml的罗库溴铵供试品液25ml/kg，注射速度为10μg/min，右耳静脉注射灯亮生理盐水作为对照。观察注射时动物有无挣扎或嘶叫等刺激反应症状，给药后48小时对动物和注射部位进行肉眼观察，观察针孔的向心端有无红肿等刺激现象，观察期结束时处死动物，取静脉注射进针位置1cm以上的静脉血管做病理切片，并进行病理组织学检查。 

[结果]家兔静滴0.6mg/100ml的罗库溴铵供试品液25ml/kg后，肉眼观察，血管无充血、水肿、硬结等现象；注射时动物无嘶叫和挣扎等刺激反应；病理组织学检查可见，受试物组动物耳静脉内皮细胞完整，血管无明显充血及炎症表现，与对照组比较未见明显差异。 

[结论]根据《化学药物研究技术指导原则》-2005判断，罗库溴铵注射液肌肉刺激、血管刺激试验符合规定。 

具体实施方式

以下实施用于进一步说明和解释本发明，但不能限制本发明的范围。 

实施1：精密量取pH为3.7的柠檬酸酸-磷酸二氢钠缓冲液，加注射用水适量，混合均匀；加入氯化钠，搅拌或振摇使完全溶解；将罗库溴铵加入，搅拌或振摇至完全溶解后，用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠调节pH至3.7；然后加入针用活性炭0.1%（w/v），室温下搅拌30min，粗滤；定量，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌；灌装，每瓶2.5ml或5ml，全压胶塞，轧盖；121℃热压灭菌12min；检验，印字，包装，置于冰箱中2～8℃储存。 

实施2：精密量取pH为3.8的柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液，加注射用水适量，混合均匀；加入氯化钠，搅拌或振摇使完全溶解；将罗库溴铵加入，搅拌或振摇至完全溶解后，用1mol/L柠檬酸或1mol/L氢氧化钠调节pH至4.0；然后加入针用活性炭0.05%（w/v），室温下搅拌30min，粗滤；定量，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌；灌装，每瓶2.5ml或5ml，全压胶塞，轧盖；121℃热压灭菌20min；检验，印字，包装，置于冰箱中2～8℃储存。 

实施3：精密量取pH为4.0的磷酸-磷酸二氢钠缓冲液，加注射用水适量，混合均匀；加入氯化钠，搅拌或振摇使完全溶解；将罗库溴铵加入，搅拌或振摇至完全溶解后，用1mol/L磷酸或1mol/L氢氧化钠调节pH至4.3；然后加入针用活性炭0.15%（w/v），室温下搅拌30min，粗滤；定量至50ml；经0.22μm微孔滤膜过滤除菌；灌装，每瓶2.5ml或5ml，全压胶塞，轧盖；121℃热压灭菌15min；检验，印字，包装，置于冰箱中2～8℃储存。 

实施例4：量取pH为3.8的醋酸-磷酸二氢钠缓冲液适量，加入氯化钠，搅拌或振摇使完全溶解；将罗库溴铵加入，搅拌或振摇使其完全溶解，用醋酸或磷酸二氢钠溶液调节pH调节至4.0；然后加入针用活性炭0.05%（w/v），室温下搅拌30min，粗滤；定量至50ml；经0.22μm微孔滤膜过滤除菌；灌装，每瓶2.5ml或5ml，全压胶塞，轧盖；121℃热压灭菌15min；检验，印字，包装，置于冰箱中2～8℃储存。 

实施例5：量取pH为3.9的柠檬酸-醋酸钠缓冲液适量，加入氯化钠，搅拌或振摇使完全溶解；将罗库溴铵加入，搅拌或振摇使其完全溶解，用柠檬酸或醋酸钠溶液调节pH调节至4.0；然后加入针用活性炭0.05%（w/v），室温下搅拌30min，粗滤；定量至50ml；经0.22μm微孔滤膜过滤除菌；灌装，每瓶2.5ml或5ml，全压胶塞，轧盖；121℃热压灭菌15min；检验，印字，包装，置于冰箱中2～8℃储存。 

  

Claims (6)

1.一种稳定的罗库溴铵注射液制剂，其特征在于：由含有效治疗量的罗库溴铵、稳定剂、渗透压调节剂、pH调节剂和注射用水组成。

2.权利要求1所述的稳定剂选自磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液等。

3.权利要求1所述的pH调节剂选自以下物质中的一种或多种：无机酸选自如盐酸、硫酸、磷酸等；有机酸选自醋酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、L-半胱氨酸、L-精氨酸、L-甘氨酸等；无机碱选自氢氧化钠或钾。

4.利要求1所述的渗透压调节剂选自以下物质中的一种或多种：氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、乳酸钠、硫酸钠、硫酸铵、甘油、甘露醇、葡萄糖、木糖醇、山梨醇、果糖、右旋糖酐等，优选氯化钠。

5.权利要求2所述的稳定剂的pH值范围为1.0～7.0，优选pH3.0～5.0。

6.权利要求1所述一种稳定的罗库溴铵注射液制剂的制备方法，其特征在于：

(a)、量取一定量稳定剂，加入适量注射用水，混合均匀；

(b)、加入一定量渗透压调节剂调节溶液的渗透压，至完全溶解；

(c)、将罗库溴铵加入，使其溶解，然后用适宜pH调节剂调节pH至3.0～5.0；

(d)、加入一定量针用活性炭，搅拌，滤过；

(e)、定量，过滤除菌，灌装，压塞，轧盖；

(f)、121℃热压灭菌；检验，印字，包装；置于0～10℃条件下储存。