CN107126418A - 供注射用双氯芬酸钠药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种供注射用双氯芬酸钠药物组合物，用于治疗轻、中、重度的疼痛，由包含以下组分或优选由下列组分组成的配方配置的溶液经冷冻干燥工艺制备：双氯芬酸钠、水溶性环糊精衍生物、稳定剂和注射用水，其中所述稳定剂可增加组合物的放置稳定性。本发明的供注射用双氯芬酸钠药物组合物克服了现有双氯芬酸钠制剂长期稳定性差、易发生析晶和降解、毒副作用大的问题，通过本发明，获得了稳定安全、质量可靠、毒副作用小、起效快的供注射用双氯芬酸钠的药物组合物。

Description

供注射用双氯芬酸钠药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种供注射用双氯芬酸钠药物组合物及该制剂的制备方法。

背景技术

双氯芬酸钠(Diclofenac Sodium)属于苯乙酸类衍生物，为第三代强效非甾体抗炎镇痛药，又名双氯灭痛、服他林、阿米雷尔，为白色结晶性粉末，无臭，易溶于丙酮，溶于甲醇和乙醇，微溶于水，有引湿性，其分子式为C₁₄H₁₀Cl₂NNaO₂，分子量为318。双氯芬酸钠结构式如下：

双氯芬酸钠主要作用机制为抑制环氧化酶活性，从而阻断花生四烯酸转化为前列腺素。同时，也能促进花生四烯酸与甘油三酯结合，降低胞内游离的花生四烯酸浓度而间接抑制白三烯的合成，从而达到镇痛和消炎的目的。其临床解热镇痛疗效确切，广泛应用于风湿类风湿、腰椎间盘突出、颈椎痛、牙痛等领域。

目前市售双氯芬酸钠的剂型主要为片剂、胶囊剂等常用口服剂型，擦剂、栓剂、凝胶剂等局部用药以及注射液，尚未见双氯芬酸钠的注射用冻干制剂上市。上述市售双氯芬酸钠制剂均存在着明显不足：口服和局部用药剂型在生物利用度和起效速率等方面还不是很理想，而且给药常会引起较严重的胃肠道反应及首过效应。双氯芬酸钠注射液可克服上述不足，但由于双氯芬酸钠在水中溶解度较低(一般在9mg/mL，25℃)，达不到制剂浓度要求，且双氯芬酸钠的结构中含有易被氧化的基团，将其制备成注射液后药物的稳定性下降。目前，诺华制药公司开发的双氯芬酸钠注射液(Voltarol，75mg/3mL)，其给药方式为肌肉注射或静脉滴注，制剂中以丙二醇和苯甲醇作为增溶剂，对血管有较强刺激性，给药时病人疼痛感强，长期应用易引起静脉炎症，临用前，必须稀释、用碳酸氢钠缓冲，静脉滴注前必须针对每位病人重新配液，并且需要长时间(120-240min)缓慢滴注以降低静脉炎副作用的发生率。双氯芬酸钠环糊精包合注射液(Dyloject，75mg/2mL)经Shimoda Biotech公司许可，由Javelin制药公司采用环糊精技术开发而成，于2007年12月在英国上市，用于治疗急性疼痛，可以肌肉注射或静脉注射两种方式给药。该剂型用羟丙基-β-环糊精包合双氯芬酸钠，有效地解决了主成分溶解度差的问题，并使用了硫代甘油作为抗氧剂防止药物的氧化降解。但2010年5月，该制剂由于某些批次的制剂瓶内发现不明白色颗粒而被全部召回从而暂时撤出英国市场，这与环糊精水溶液对双氯芬酸钠包合长期放置稳定性不佳，药物泄漏析出结晶有关。2014年12月FDA批准Hospira公司37.5mg/mL规格Dyloject上市，用于治疗轻、中、重度疼痛，给药方式为静脉给药，该制剂处方与75mg/2mL规格相同，使用羟丙基-β-环糊精提高药物溶解度(333mg/mL)，使用硫代甘油为抗氧剂(5mg/mL)，注射时间需大于15s，同样存在长期放置稳定性的问题，在其FDA说明书中剂量和用法项下明确规定在使用前应观察是否有肉眼可见微粒和变色情况，如有微粒或变色情况出现则不能使用，说明制剂存在药物析晶和氧化降解的风险。

现有公知技术多选择将供注射用双氯芬酸钠制备成注射液的制剂形式，并在其中加入一定量的表面活性剂、抗氧剂等添加剂，不能解决制剂的刺激性或析晶和氧化降解问题，同时制剂中羟丙基-β-环糊精等増溶物质用量较大，长期应用毒副作用大。专利CN 94118042公开了一种包含双氯芬酸或其盐和2-羟丙基-β-环糊精的可注射药物组合物或兽用组合物，该组合物制备时需对水溶液进行酸化，未添加pH缓冲剂，组合物pH值下限偏酸性，且未对组合物长期放置稳定性进行研究；该组合物中双氯芬酸钠最高浓度仅为25mg/ml，此外溶液中还含有偏亚硫酸氢钠、氯丁醇等防腐剂。中国专利CN 1711996A公开了一种含有双氯芬酸钠和β-环糊精的可注射药物组合物，该组合物为水溶液形式，含有双氯芬酸钠、β-环糊精和聚山梨醇酯，仅适合于皮下和肌肉给药。中国专利CN 200410024064公开了一种含有双氯芬酸盐和利多卡因的冻干制剂及其制备方法，该发明通过双氯芬酸盐和利多卡因两种具有药理活性的成分发挥作用，该技术采用表面活性剂吐温80作为增溶剂，在处方中加入防腐剂，对病人的刺激性和毒副作用较大，未考虑药物的氧化降解问题。专利CN 101244278A公开了一种可供静脉注射的双氯芬酸钠注射用制剂及其制备方法，该技术采用羟丙基-β-环糊精对双氯芬酸钠进行包合，在制剂中加入抗氧剂，未考虑制剂稳定性和毒副作用问题，该制剂与市售Dyloject相比无明显改进。专利CN 101123957A公开了一种双氯芬酸及其药学上可接受盐的注射剂，该制剂为溶液形式，含醇类共溶剂、抗氧剂、防腐剂等大量添加剂，具有较大副作用，且只能用于肌注和缓慢静脉推注。

发明内容

[技术问题]

为了克服现有供注射用双氯芬酸钠制剂的长期稳定性差、易发生析晶和降解、毒副作用大的问题，本发明采用特定的双氯芬酸钠药物组合物和制备方法，从而获得了稳定安全、质量可靠、毒副作用小的供注射用双氯芬酸钠的药物组合物。

本发明提供的供注射用双氯芬酸钠药物组合物复溶后可直接静脉注射，可用于治疗轻、中、重度的疼痛，其中环糊精衍生物用量低，少量溶剂复溶后与人体血液等渗，可明显减轻注射位点的疼痛，加快药物注射时间(5～10s)，提高镇痛效果；此外，处方中无需添加抗氧剂，还可避免注射液在放置过程中析出结晶的风险，显著增加了制剂稳定性，提高了临床应用的安全性，增加了病人给药的顺应性，创造了更高的临床治疗效益。

[技术方案]

因此，本发明的一个目的在于提供一种稳定性好、有效安全的供注射用双氯芬酸钠药物组合物，该药物组合物含有双氯芬酸钠、水溶性环糊精衍生物、稳定剂。本发明的供注射用双氯芬酸钠药物组合物，是一种冻干粉针剂，由包含双氯芬酸钠、水溶性环糊精衍生物、稳定剂、注射用水的配方配制的溶液经冷冻干燥工艺制成，其中所述溶液含有下列组分或优选由下列组分组成：

其中，由所述配方配置的溶液经过滤、冷冻干燥制备冻干粉针剂时，将残氧量控制为低于2％，溶氧量控制为低于1mg/L。

优选地，所述配方含有下列组分或优选由下列组分组成：

所述水溶性环糊精衍生物可以是选自羟丙基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊精和葡糖基-β-环糊精中的至少一种的可注射用的水溶性环糊精衍生物，优选为羟丙基-β-环糊精。

本发明是通过水溶性环糊精衍生物对双氯芬酸钠的包合形成包合物以提高双氯芬酸钠的溶解度，其中，本发明的发明人发现，将双氯芬酸钠与水溶性环糊精衍生物加水溶解后，在双氯芬酸钠浓度为37.5mg/mL的溶液中，维持体系pH范围为7-10，可显著提高双氯芬酸钠的包合程度，这可能是因为碱性环境可影响包合物的立体结构，增加环糊精提供的空洞数，从而促进对双氯芬酸钠的包合。其中，溶液的碱性越强，双氯芬酸钠的包合作用越强，综合考虑最终制剂的刺激性，故而选择维持溶液pH值至7.0-10.0范围内，优选pH值为8.0-9.0。

所述稳定剂为药学上可接受的可注射用盐类，例如，各类缓冲盐体系(如氨丁三醇、磷酸盐(如磷酸氢二钠)、柠檬酸-柠檬酸钠等)，或所述缓冲盐体系与氢氧化钠、盐酸等的组合。优选地，所述稳定剂为氨丁三醇或磷酸盐缓冲体系，或它们与氢氧化钠的组合。

本发明的包含双氯芬酸钠的处方中，水溶性环糊精衍生物与双氯芬酸钠的包合作用呈动态平衡，该平衡受多种因素影响。其中，本发明的发明人发现采用具有缓冲能力的所述稳定剂，可减少或避免制得的冻干制剂再溶解后的析晶现象，并显著提高包合物稳定性。包合物析晶现象的发生可能与冻干制剂再溶解后的溶液放置过程中pH值下降，从而破坏包合物动态平衡有关，动态平衡被破坏后水溶性环糊精衍生物无法完全包合双氯芬酸钠，使得包和物稳定性差，进而导致药物析晶。采用根据本发明的稳定剂控制处方的pH范围，可避免体系pH值发生显著变化，维持包合物的动态平衡状态，减少或避免上述析晶现象，提高包合物稳定性，同时缓冲盐还可与冻干制剂中残留的水分子结合，避免水分子与双氯芬酸钠竞争性结合环糊精衍生物范德华(Vander Waals)力作用位点。

本发明的另一个目的在于提供一种便于工业化大批量生产、工艺简单的供注射用双氯芬酸钠药物组合物的制备方法，其包括以下步骤：

1)根据上述配方制备溶液：将水溶性环糊精衍生物溶于部分的注射用水中，再加入双氯芬酸钠，搅拌至完全溶解，加入稳定剂搅拌溶解，补加剩余量的注射用水；

2)加入活性炭，继续搅拌15-30min，过滤，制得中间溶液；

3)测定所述中间溶液中双氯芬酸钠的含量；

4)根据步骤3)所述双氯芬酸钠含量的测定结果，向瓶中充入惰性气体，将残氧量控制为低于2％，溶氧量控制为低于1mg/L，按制剂单位灌装(分装)入各个所述瓶中，半加塞；

5)将步骤4)得到的药液冷冻干燥、压塞，在无菌条件下压盖，密封，即得双氯芬酸钠药物组合物。

所述步骤1)中，搅拌时间优选为1-3h，从而完成水溶性环糊精衍生物对双氯芬酸钠的包合，提高双氯芬酸钠的溶解度。

研究发现，溶液的碱性越强，水溶性环糊精衍生物对药物的包合増溶能力越强，综合考虑给药刺激性等因素，所述步骤1)中，优选地，加入所述稳定剂以使得在将所述供注射用双氯芬酸钠药物组合物加水复溶为双氯芬酸钠浓度为37.5mg/mL的溶液时，所述稳定剂可将溶液的pH值范围控制为7-10，优选8.0-9.0。

所述步骤1)中，所述稳定剂为药学上可接受的可注射用盐类，例如，各类缓冲盐体系(如氨丁三醇、磷酸盐(如磷酸氢二钠)、柠檬酸-柠檬酸钠等)，或所述缓冲盐体系与氢氧化钠、盐酸等的组合。优选地，所稳定剂为氨丁三醇或磷酸盐缓冲体系，或它们与氢氧化钠的组合。在这里，具有缓冲能力的偏碱性稳定剂有利于确保药物的稳定包合和保证产品稳定性。

所述步骤2)中，活性炭用量优选为步骤1)所述处方溶液总重的0.02％-0.1％，活性炭用量太少，将不能完全将溶液脱色、去热原和除杂质，用量过多，则会吸附溶液中的活性成分，所以活性炭的用量应控制在合理范围内。

所述步骤4)中，充入惰性气体可用于控制残氧量和溶氧量，保护双氯芬酸不发生氧化降解，提高产品稳定性，所述惰性气体优选为氮气。

所述步骤5)中，所述冷冻干燥工艺为本领域的常规冻干工艺，例如，所述冻干工艺可优选为：将已分装好的瓶放至冻干箱中，降温至-40℃，于-40℃恒温预冻1-3h，然后抽真空；升温至-29℃，保持3-5h；升温至-10℃，保持4-6h；升温至0℃，保持1h；升温至25℃，保持5-8h。但本发明并不仅限于此。

所述步骤5)中，压塞前可选择真空压塞或充入一定压力的惰性气体后压塞，上述两种条件的压塞使得瓶中均无氧存在，这可避免制得的产品在放置过程中发生氧化降解反应。在这里，不能选择充入无菌空气后压塞，氧气的引入会影响本品稳定性。通过长期和加速6月稳定性研究表明产品稳定性良好，氧化降解杂质未增加，组合物外观未发生由氧化反应引起的颜色变化。

所述供注射用双氯芬酸钠药物组合物中活性药物双氯芬酸钠的含量为75mg每瓶或37.5mg每瓶。

所述供注射用双氯芬酸钠药物组合物加水复溶制成含活性药物双氯芬酸钠37.5mg/mL的溶液时，pH范围为7.0-10.0，优选8.0-9.0。

本发明的另一个目的在于提供一种稳定性好、有效安全的供注射用双氯芬酸钠药物组合物，所述双氯芬酸钠药物组合物是一种冻干粉针剂，其由以上方法制备。

本发明的另一个目的在于提供一种用于制备所述的供注射用双氯芬酸钠药物组合物的溶液，其中，所述溶液包含如下组分：双氯芬酸钠；水溶性环糊精衍生物；稳定剂；和注射用水。

本发明的另一目的在于提供所述供注射用的双氯芬酸钠药物组合物用于治疗轻、中、重度的疼痛的用途。

[有益效果]

本发明的供注射用双氯芬酸钠药物组合物及其制备方法，具有如下优点：

1、安全性高，环糊精用量较现有市售品Dyloject显著降低，从而降低肾毒性和溶血等毒副作用；处方溶液中无需使用抗氧剂，降低了安全隐患。制剂中辅料的种类和用量较少，降低了对人体的损害，其安全性符合国家相关法规的要求；

2、所述药物组合物加水复溶后所得的37.5mg/mL双氯芬酸钠浓度的注射液与人体血液等渗，与生理盐水的渗透压摩尔浓度比为0.9～1.1，可直接静脉注射，并可减少注射液对血管的刺激性和病人的疼痛感，而现有市售品Dyloject(75mg/2mL)与人体不等渗；

3、稳定性好，冻干粉针的制剂形式可避免注射液在长期放置过程中析出晶体沉淀的风险；采用特殊的缓冲体系控制制剂pH值，增强水溶性环糊精衍生物对双氯芬酸钠的包合作用；控制残氧量，氧化反应发生可能性低；冻干制剂中的杂质低于0.2％，显著增加制剂稳定性，使其质量可靠；

4、疗效及病人顺应性良好，复溶后的注射液具有与Dyloject相同的医药性质，且相比于Dyloject需大于15s的注射时间，可进一步加快药物的注射时间(5～10s)，显著加快药物起效时间，可用于治疗轻、中、重度疼痛，快速减轻病人的疼痛，此外还减轻注射位点的疼痛不适感，增加病人给药的顺应性；

5、运输携带和临床应用方便，制备成冻干制剂后，运输更加便捷和安全，减少了损失，降低了运输成本，携带方便，使用便捷；

6、成本低廉，本发明制得的药物组合物中辅料种类少、用量低，制得的冻干制剂却能达到甚至超过其它同类型的药物，充分证明了本发明所述药物的突出优势；

7、本发明的供注射用双氯芬酸钠药物组合物的制备方法工艺简单、高效，成本低廉，适宜工业化应用。

附图说明

图1是显示了根据本发明的制备实施例1的处方(除注射用水外)简单混合的物理混合物的X-射线衍射图。

图2是显示了根据本发明的制备实施例1制备的供注射用双氯芬酸钠药物组合物0个月的X-射线衍射图。

图3是显示了根据本发明的制备实施例1制备的供注射用双氯芬酸钠药物组合物加速6个月的X-射线衍射图。

图4是显示了根据本发明的制备实施例1制备的供注射用双氯芬酸钠药物组合物长期24个月的X-射线衍射图。

图5是采用根据本发明的制备实施例4制备的供注射用双氯芬酸钠药物组合物和对比实施例1制备的双氯芬酸钠药物注射液对犬静脉注射给药后的药时曲线图。

图6是图5所示的药时曲线图中前2h的局部放大图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例，进一步阐述本发明。应当理解的是，这些实施例仅用于说明本发明而非以任何方式限制本发明的范围。在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。

以下实施例中：双氯芬酸钠(安阳九州药业有限责任公司)；羟丙基-β-环糊精(罗盖特(中国)精细化工有限公司)；磺丁基-β-环糊精(美国Captisol公司)；氢氧化钠(湖南尔康制药股份有限公司)；氨丁三醇(武汉顶辉化工有限公司)；磷酸氢二钠(湖南九典制药有限公司)；注射用水(自制)；以及常规未标注试剂购自国药集团化学试剂有限公司。

制备实施例

制备实施例1

制备方法为：

1)将羟丙基-β-环糊精溶于部分的注射用水中，再加入双氯芬酸钠，搅拌至完全溶解，加入氨丁三醇和氢氧化钠搅拌溶解，补加剩余量的注射用水；

2)加入0.1％的活性炭，搅拌15min，以钛棒过滤器脱炭，再以0.22μm滤膜过滤除菌，制得中间溶液；

3)以HPLC法检测所述中间溶液中双氯芬酸钠含量；

4)向玻璃瓶中充入氮气，控制残氧量1.7％，溶氧量0.7mg/L，根据所述双氯芬酸钠含量的测定结果，将所得药液按制剂单位分装入各个玻璃瓶中，半加塞；

5)将已灌装好的玻璃瓶放至冻干箱中，降温至-40℃，于-40℃恒温预冻2h，然后抽真空；升温至-29℃，保持3h；升温至-10℃，保持4h；升温至0℃，保持1h；升温至25℃，保持5h。充氮气至-0.08MPa后压塞。在无菌条件下压盖，铝封，即得供注射用双氯芬酸钠药物组合物。

制备实施例2

制备方法为：

1)将磺丁基-β-环糊精溶于部分的注射用水中，再加入双氯芬酸钠，搅拌至完全溶解，加入氨丁三醇搅拌溶解，补加剩余量的注射用水；

2)加入0.05％的活性炭，搅拌20min，以钛棒过滤器脱炭，再以0.22μm滤膜过滤除菌，制得中间溶液；

3)以HPLC法检测所述中间溶液中双氯芬酸钠含量；

4)向玻璃瓶中充入氮气，控制残氧量1.6％，溶氧量0.6mg/L，根据所述双氯芬酸钠含量的测定结果，将所得药液按制剂单位分装入各个玻璃瓶中，半加塞；

5)将已灌装好的玻璃瓶放至冻干箱中，降温至-40℃，于-40℃恒温预冻3h然后抽真空；升温至-29℃，保持5h；升温至-10℃，保持6h；升温至0℃，保持1h；升温至25℃，保持8h。充氮气至-0.06MPa后压塞。在无菌条件下压盖，铝封，即得供注射用双氯芬酸钠药物组合物。

制备实施例3

制备方法为：

1)将葡糖基-β-环糊精溶于部分的注射用水中，再加入双氯芬酸钠，搅拌至完全溶解，加入磷酸氢二钠搅拌溶解，补加剩余量的注射用水；

2)加入0.05％的活性炭，搅拌30min，以钛棒过滤器脱炭，再以0.22μm滤膜过滤除菌，制得中间溶液；

3)以HPLC法检测所述中间溶液中双氯芬酸钠含量；

4)向玻璃瓶中充入氮气，控制残氧量1.5％，溶氧量0.5mg/L，根据所述双氯芬酸钠含量的测定结果，将所得药液按制剂单位分装入各个玻璃瓶中，半加塞；

5)将已灌装好的玻璃瓶放至冻干箱中，降温至-40℃，于-40℃恒温预冻2h，然后抽真空；升温至-29℃，保持4h；升温至-10℃，保持5h；升温至0℃，保持1h；升温至25℃，保持5h。在真空条件下压塞。在无菌条件下压盖，铝封，即得供注射用双氯芬酸钠药物组合物。

制备实施例4

制备方法为：

1)将羟丙基-β-环糊精溶于部分的注射用水中，再加入双氯芬酸钠，搅拌至完全溶解，加入磷酸氢二钠和氢氧化钠搅拌溶解，补加剩余量的注射用水；

2)加入0.1％的活性炭，搅拌15min，以钛棒过滤器脱炭，再以0.22μm滤膜过滤除菌，制得中间溶液；

3)以HPLC法检测所述中间溶液中双氯芬酸钠含量；

4)向玻璃瓶中充入氮气，控制残氧量1.6％，溶氧量0.5mg/L，根据所述双氯芬酸钠含量的测定结果，将所得药液按制剂单位分装入各个玻璃瓶中，半加塞；

5)将已灌装好的玻璃瓶放至冻干箱中，降温至-40℃，于-40℃恒温预冻2h，然后抽真空；升温至-29℃，保持3h；升温至-10℃，保持4h；升温至0℃，保持1h；升温至25℃，保持5h。充氮气至-0.08MPa后压塞。在无菌条件下压盖，铝封，即得供注射用双氯芬酸钠药物组合物。

对比实施例

对比实施例1(Dyloject制剂)

制备方法为：将羟丙基-β-环糊精溶于部分(约90％)的注射用水中，再加入双氯芬酸钠，搅拌至完全溶解，加入氢氧化钠搅拌溶解，补加剩余量(约10％)的注射用水；再以0.22μm滤膜过滤除菌，按1mL/瓶灌装、加塞、压盖，于116℃灭菌15min，即得双氯芬酸钠注射液。

本发明人发现，采用市售Dyloject处方制备的双氯芬酸钠注射液，在高温灭菌步骤时制剂产生大量降解物质(由0.05％增至1.27％)，表明本品对高温敏感。本发明的制备方法无需注射液的高温灭菌步骤，可显著减少本品的杂质量，提高稳定性。

对比实施例2

制备方法为：

1)将羟丙基-β-环糊精溶于部分(约90％)的注射用水中，再加入双氯芬酸钠，搅拌至完全溶解，加入氢氧化钠搅拌溶解，补加剩余量(约10％)的注射用水；

2)加入0.05％的活性炭，搅拌15min，以钛棒过滤器脱炭，再以0.22μm滤膜过滤除菌，制得中间溶液；

3)以HPLC法检测所述中间溶液中双氯芬酸钠含量；

4)向玻璃瓶中充入氮气，控制残氧量1.7％，溶氧量0.7mg/L，根据所述双氯芬酸钠含量的测定结果，将所得药液按制剂单位分装入各个玻璃瓶中，半加塞；

5)将已灌装好的玻璃瓶放至冻干箱中，降温至-40℃，于-40℃恒温预冻1h，然后抽真空；升温至-29℃，保持3h；升温至-10℃，保持4h；升温至0℃，保持1h；升温至25℃，保持5h。充氮气至-0.08MPa后压塞。在无菌条件下压盖，铝封，即得。

对比实施例3

制备方法为：

1)将羟丙基-β-环糊精溶于部分的注射用水中，再加入双氯芬酸钠，搅拌至完全溶解，加入磷酸氢二钠搅拌溶解，补加剩余量的注射用水；

2)加入0.05％的活性炭，搅拌15min，以钛棒过滤器脱炭，再以0.22μm滤膜过滤除菌，制得中间溶液；

3)以HPLC法检测所述中间溶液中双氯芬酸钠含量；

4)根据所述双氯芬酸钠含量的测定结果，将所得药液按制剂单位分装入各个玻璃瓶中，半加塞；

5)将已灌装好的玻璃瓶放至冻干箱中，降温至-40℃，于-40℃恒温预冻1h，然后抽真空；升温至-29℃，保持3h；升温至-10℃，保持4h；升温至0℃，保持1h；升温至25℃，保持5h。充无菌空气至-0.08MPa后压塞。在无菌条件下压盖，铝封，即得。

实验实施例

实验实施例1(复溶稳定性)

取制备实施例1所得的供注射用双氯芬酸钠药物组合物若干瓶，每瓶加1ml水复溶，考察制剂的复溶稳定性。考察时间为0h、2h、4h、8h、12h、24h，考察指标为澄清度、碱度、含量、有关物质、可见异物和不溶性微粒，测定结果见表1。

表1供注射用双氯芬酸钠药物组合物复溶稳定性考察结果

试验结果表明：本发明的供注射用双氯芬酸钠药物组合物复溶后24h内稳定性良好。

实验实施例2(制剂稳定性)

按照国家食品药品监督管理局发布的化学药物(原料药和制剂)稳定性研究技术指导原则进行稳定性试验，取制备实施例1、制备实施例2制备的供注射用双氯芬酸钠药物组合物和对比实施例1制得的双氯芬酸钠注射液(与市售Dyloject处方相同)、对比实施例2、对比实施例3制得的双氯芬酸钠冻干制剂，进行加速(40℃±2℃/75％RH±5％RH)6个月和长期(25℃±2℃/60％RH±5％RH)24个月试验研究，对样品的关键指标：性状、澄清度、碱度(加注射用水复溶制成含双氯芬酸钠37.5mg/ml的溶液)、可见异物、不溶性微粒、有关物质及含量进行检验，检测结果见表2。

表2供注射用双氯芬酸钠药物组合物稳定性考察结果

由结果可见，制备实施例1和2制备的产品在加速、长期试验中各项关键指标无明显变化，样品外观未发生任何颜色变化，复溶后可见异物和不溶性微粒均符合规定，复溶后样品24h内稳定性良好，未出现任何析晶现象，杂质未出现显著增加；而对比实施例1制备的双氯芬酸钠注射液在放置过程中出现pH下降、有关物质显著增加的现象，加速条件样品出现析出物、颜色发生显著变化；对比实施例2的未加稳定剂的双氯芬酸钠冻干制剂在放置过程中出现pH下降、有关物质显著增加的现象，加速条件下样品复溶后可见异物，从而不符合规定；以及对比实施例3的未进行溶氧、残氧控制且未在惰性气体或真空条件下压塞的双氯芬酸钠冻干制剂在放置过程中出现pH下降、有关物质显著增加的现象，加速条件下样品复溶后可见异物，从而不符合规定。可见本发明制得的供注射用双氯芬酸钠药物组合物具有质量保证，且稳定性良好。

实验实施例3

取制备实施例1所制得的供注射用双氯芬酸钠药物组合物0个月、加速6个月和长期24个月的稳定性样品以及按制备实施例1的处方(除注射用水外)简单混合的物理混合物粉末，进行X-射线衍射检测，考察羟丙基-β-环糊精对药物的包合情况。检测条件为3.0～40.0°，0.01°/秒，加速电压：40KV，电流40mA。检测结果见图1～图4。结果表明，制备实施例1中双氯芬酸钠均以无定型形式存在，羟丙基-β-环糊精对双氯芬酸钠包合完全，药物放置过程中稳定性良好。

实验实施例4

取本发明的制备方法获得的供注射用双氯芬酸钠药物组合物进行特殊安全性试验：溶血性试验、刺激性试验和过敏性试验。具体操作为：取本发明制备实施例4制得的供注射用双氯芬酸钠药物组合物每瓶加1ml注射用水复溶，制得浓度为37.5mg/mL的受试液，进行动物溶血性、刺激性和过敏性试验。以对比实施例1制得的双氯芬酸钠注射液为对照制剂。

1、溶血性试验

2％兔红细胞混悬液制备：取试验兔(动物：家兔，来源：上海药物研究所实验动物中心)一只，清醒状态下心室内取血约20ml，用棉签搅拌约10分钟以除去纤维蛋白原，再倒入试管中加约10倍量的0.9％氯化钠注射液摇匀，1,500转/分钟离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9％氯化钠注射液洗涤离心3次以上，至上清液不呈红色为止。将所得红细胞用0.9％氯化钠注射液配成2％红细胞混悬液，供试验用。

取二批清洁试管各7支，按表3配比量依次加入2％红细胞混悬液、0.9％氯化钠注射液或蒸馏水和37.5mg/ml受试液，混匀后置于37℃±0.5℃的恒温水浴箱中进行温育，开始时每隔15分钟观察1次，1小时后每隔1小时观察1次，观察3个小时内各试管溶液有无溶血及红细胞凝聚作用，判断标准见表4。

表3供注射用双氯芬酸钠药物组合物的溶血性试验

表4溶血判断标准

如出现红细胞凝聚现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在振荡后以能均匀分散，或将凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘加2滴0.9％氯化钠溶液，置显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，相反，凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚。

结果判断：当6号试管(阴性对照管)无溶血和凝聚现象，7号试管(阳性对照管)有溶血现象时，若1-5号试管中溶液在3小时内不发生溶血和凝聚现象，则试验药物可供注射使用；若1-5号试管中溶液在3小时内发生溶血和凝聚现象，则试验药物不可供注射使用。

溶血试验结果为：7号试管加入蒸馏水后即刻呈红色澄明，管底无红细胞残留，表明全部溶血。1-6号试管溶液15min时红细胞开始下沉，随时间延长则下沉红细胞逐渐增多，上清液逐渐增多，上清液呈淡黄色澄明，表明受试液和对照品氯化钠注射液均无溶血作用，3小时后振摇各试管，1-6号试管红细胞均可均匀散开，无红细胞凝聚现象。具体试验结果见表5。

表5供注射用双氯芬酸钠药物组合物的溶血试验结果

结果表明本发明的供注射用氯芬酸钠药物组合物在试管内的最高终浓度为37.5mg/ml时对兔红细胞无溶血或凝聚现象。

2、刺激性试验

剂量设计：双氯芬酸钠临床推荐剂量为37.5mg/次，折算为兔用剂量为1.9mg/kg，因此兔试验剂量确定为2mg/kg。

取试验兔(动物：家兔，来源：上海药物研究所实验动物中心)8只，分为实验组和对照组2组，4只/组，雌雄各半，分别用兔固定箱固定，左右耳缘去毛，酒精消毒，从耳缘静脉最远心端开始进针，试验组左右两侧耳缘静脉分别静脉注射0.9％氯化钠注射液(对照侧)和本发明的供注射用双氯芬酸钠药物组合物的受试液(给药侧)，静脉注射量为2mg/kg体重，注射速度约为5～10s内完成注射；对照组左右两侧耳缘静脉分别静脉注射0.9％氯化钠注射液(对照侧)和对比实施例1制得的双氯芬酸钠对照制剂(给药侧)，静脉注射量为2mg/kg体重，注射速度约为大于15s完成注射。各组每日进针一次，连续5天，每日给药部位由耳缘静脉远心端向近心端逐次前移，肉眼观察兔耳缘静脉反应，包括血管是否清晰，有无血管扩张或收缩，血管内是否有淤血，血管周围组织有无水肿等。

每组试验兔于末次给药后48小时将二只试验兔放血处死，取下两耳，在末次注射部位的近心端附近(距末次注射部位约1cm，a段)和近心端远侧(距末次注射部位约3cm，b段)各取一段标本，首先进行肉眼观察，判断药物对血管壁有无刺激性，观察标准见表6，判断标准见表7。然后用4％甲醛固定，进行组织病理学检查，检查标准见表8，判断标准见表9。末次给药后96小时将每组一只试验兔放血处死，按上述方法进行检查。末次给药后14天将每组最后一只试验兔放血处死，按上述方法进行检查。

表6血管刺激性试验肉眼目检观察评分标准

表7血管刺激性试验肉眼目检刺激强度判断标准

表8血管刺激性试验显微镜检查评分标准

表9血管刺激性试验显微镜检查刺激强度判断标准

给药期间，每天给药后1小时观察，实验组的试验兔给药侧耳缘静脉血管纹路清晰，无血管扩张或收缩，血管内无明显淤血，血管周围组织无水肿，较对照侧耳缘静脉有明显改善。

选取兔耳缘静脉标本前观察，实验组的试验兔给药侧耳缘静脉均未见明显充血、水肿症状，评分值均为0，较对照侧耳缘静脉有明显改进。结果见表10。

表10血管刺激性试验肉眼目检观察结果

组织切片检查结果表明，实验组末次给药后48小时、96小时及14天，试验兔给药侧耳缘静脉a、b段血管结构均基本正常，无明显血管扩张充血现象，无明显血栓形成，血管内皮细胞基本正常，无肿胀、坏死脱落等现象，血管周围组织无水肿，无炎细胞浸润，平均分值均为0，与对照侧比较无明显差异。对照组末次给药后48小时、96小时及14天，试验兔给药侧耳缘静脉a、b段血管结构均基本正常，部分出现血管扩张充血现象，无明显血栓形成，血管内皮细胞基本正常，无肿胀、坏死脱落等现象，血管周围组织部分出现水肿，无炎细胞浸润，平均分值均为0.75，表现出轻度刺激性。

上述试验结果表明，制备实施例4制备的双氯芬酸钠受试液37.5mg/ml耳缘静脉注射，每日一次，连续5天，对兔耳缘静脉未见明显局部刺激反应。按市售处方制备的对比实施例1的对照制剂37.5mg/ml耳缘静脉注射，每日一次，连续5天，对兔耳缘静脉表现出轻度刺激反应。可见，本发明的双氯芬酸钠药物组合物对刺激性有显著改善，安全性良好。

3、主动过敏性试验

剂量设计：双氯芬酸钠临床推荐剂量为37.5mg/次，折算为豚鼠用剂量为2.9mg/kg，因此豚鼠全身主动过敏试验剂量低剂量确定为3.0mg/kg，高剂量确定为6.0mg/kg。

豚鼠(动物：豚鼠，来源：上海药物研究所实验动物中心)24只，按体重性别随机分为4组，每组6只，雌雄各半。第一组作为阴性对照组，腹腔注射0.9％氯化钠注射液0.2ml/100g，隔日注射一次，共3次。第二组作为阳性对照组，腹腔注射5％新鲜鸡蛋清溶液0.2ml/100g，隔日注射一次，共3次。第三组作为低剂量给药组，腹腔注射双氯芬酸钠试验制剂低剂量溶液(取37.5mg/ml双氯芬酸钠受试液1ml置于25ml容量瓶中，加0.9％氯化钠注射液溶解定容)0.2ml/100g，隔日注射一次，共3次。第四组作为高剂量给药组，腹腔注射双氯芬酸钠试验制剂高剂量溶液(取37.5mg/ml双氯芬酸钠受试液2ml置于25ml容量瓶中，加0.9％氯化钠注射液溶解定容)0.2ml/100g，隔日注射一次，共3次。各组豚鼠在末次致敏后第14天及第21天各取3只豚鼠分别自足跖静脉或耳静脉注射2倍量的原药液进行激发，观察3小时内豚鼠是否有抓鼻、喷嚏、竖毛、抽搐等过敏症状，按表11、表12标准判断过敏反应发生程度，计算过敏反应发生率。

激发注射后，若发现过敏反应症状时，可取健康未致敏豚鼠2只，自静脉注射激发剂量药物，观察有无由于受试药物作用引起的类似过敏反应症状。

表11豚鼠过敏反应症状

0正常	7呼吸急促	14步态不稳
			1躁动	8排尿	15跳跃
2竖毛	9排粪	16喘息
			3颤抖	10流泪	17痉挛
4搔鼻	11呼吸困难	18旋转
			5喷嚏	12哮鸣音	19潮式呼吸
6咳嗽	13紫癜	20死亡

表12主动全身过敏性评价标准

0	-	过敏反应阴性
			1-4症状	+	过敏反应弱阳性
5-10症状	++	过敏反应阳性
			11-19症状	+++	过敏反应强阳性
20	++++	过敏反应极强阳性

首次致敏、末次致敏及激发当日各组豚鼠体重比较均无明显差异，结果见表13。激发给药后3小时内，阴性对照组、低剂量给药组、高剂量给药组均未见明显过敏症状，反应均为阴性；阳性对照组豚鼠于激发注射后迅速出现躁动、竖毛、颤抖、搔鼻、喷嚏、咳嗽、呼吸急促、步态不稳、喘息、痉挛、排尿、排粪、潮式呼吸等明显过敏反应甚至死亡，死亡时间均在激发注射后3分钟内，致敏率为100％，反应为极强阳性(结果见表14)。

表13豚鼠平均体重(n＝6)

表14主动全身过敏反应试验结果

上述试验结果表明，在本试验条件下，本发明的供注射用双氯芬酸钠药物组合物对豚鼠无明显主动全身致敏作用。

4、被动过敏试验

抗血清制备：取豚鼠8只，按体重性别随机分为4组，每组2只，雌雄各半。第一组作为阴性对照组，腹腔注射0.9％氯化钠注射液0.2ml/100g，隔日注射一次，共5次。第二组作为阳性对照组，腹腔注射2mg/kg卵蛋白溶液0.2ml/100g，隔日注射一次，共5次。第三组作为低剂量给药组，腹腔注射上述双氯芬酸钠试验制剂低剂量溶液0.2ml/100g，隔日注射一次，共5次。第四组作为高剂量给药组，腹腔注射上述双氯芬酸钠试验制剂高剂量溶液0.2ml/100g，隔日注射一次，共5次。各组豚鼠在末次致敏后第14天股动脉取血，室温自然凝固，2000rpm离心20min分离血清后按分组一同贮存于-18℃冰箱内备用。

被动皮肤过敏试验：取豚鼠24只，按体重性别随机分为4组，每组6只，雌雄各半，分别为阴性对照组、阳性对照组、低剂量给药组、高剂量给药组。用动物脱毛器将豚鼠背部皮肤脱毛，同时用0.9％氯化钠注射液分别配制上述各组抗血清稀释液(1:2、1:8、1:32，v/v)，各组豚鼠自脱毛处背部分别皮内注射相应的抗血清稀释液，每点注射0.1ml，二点之间间隔约2.5cm。激发注射：24小时后按致敏时同样方法配制各组相应溶液，并与1％伊文思兰溶液按1:1比例混合后，静脉注射给药0.4ml/100g。激发注射30min后放血处死豚鼠，剪取背部皮肤，用游标卡尺测定皮肤内层的斑点直径，不规则斑点的直径为长径与短径之和的一半，直径大于5mm者为阳性，并计算阳性反应百分率。

激发给药30min后，阴性对照组、低剂量给药组、高剂量给药组的豚鼠背部皮肤内层的蓝斑直径均小于5mm，反应均为阴性；阳性对照组豚鼠激发给药30min后，背部皮肤内层的蓝斑直径均大于5mm，反应均为阳性，致敏率为100％，反应为极强阳性，结果见表15。

表15被动皮肤过敏反应试验结果(n＝6)

上述试验结果表明，在本试验条件下，本发明的供注射用双氯芬酸钠药物组合物对豚鼠无明显被动皮肤致敏作用。

实验实施例5

取制备实施例4所制得的供注射用双氯芬酸钠药物组合物，每瓶加1ml水复溶，制得浓度为37.5mg/ml的供试液，在疼痛动物模型中考察药物的镇痛效果。以对比实施例1所制得的双氯芬酸钠注射液为对照液。分别量取供试液和对照液各1ml分别置于50ml容量瓶中，加生理盐水定容，其浓度均被稀释为0.75mg/ml。取健康的昆明系小鼠(动物：小鼠，来源：上海药物研究所实验动物中心)30只，体重20g左右，雌雄各半，随机分为3组，按7.5mg/kg尾静脉注射小鼠，各组小鼠于给药后10min腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2mL，立即计时，观察15min内小鼠的扭体反应次数，计算扭体反应的抑制率。具体分组及给药方式见表16，试验结果见表17。

表16试验分组及处理(n＝10)

表17各组小鼠扭体反应结果(n＝10)

注：“^*”表示与空白对照组比较P＜0.01。

由试验结果可见，制备实施例4和对比实施例1的试验组的小鼠扭体反应与空白对照组相比均显著减少，其中制备实施例4为根据本发明制备的溶液，对比实施例1为根据市售Dyloject配制的溶液，因此，两种双氯芬酸钠制剂均对小鼠疼痛反应有显著缓解作用。

实验实施例6

取制备实施例4所制得的供注射用双氯芬酸钠药物组合物，每瓶加1ml水复溶，制得浓度为37.5mg/ml的供试液，以犬为动物模型考察药物的药代动力学行为。以对比实施例1所制得的双氯芬酸钠注射液为对照液。

比格犬3只(动物：犬，来源：上海药物研究所实验动物中心)，雄性，体重10～12kg。受试动物在试验日前3-7天应在试验场所进行适应性饲养。采用自身对照交叉试验设计，分别用制备实施例4加水复溶后的供试液和对比实施例1的注射液配制给药溶液。给药剂量为37.5mg/只。两周期间间隔不少于5天。制备实施例4的给药溶液在5～10s内完成注射，对比实施例1的给药溶液注射时间大于15s。给药前(0h)及给药后2min、5min、15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h和12h的时间点经四肢静脉取静脉血1mL，置于EDTA抗凝试管中，3500rpm离心10min(4℃)，分离血浆，-70℃冰箱中冷冻保存待测。

以LC-MS测定血浆中药物浓度。色谱条件：色谱柱选用Agilent XDB C18(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-水(含4mM乙酸铵，0.08％甲酸)(75:25，V/V)，流速为0.8mL·min^-1，柱温25℃，进样体积为5μL。质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，气帘气(CUR)压力为20psi，喷雾气(GS1)压力为55psi，干燥气(GS2)压力为55psi，源喷射电压(IS)为-4000V，离子源温度(TEM)为400℃。双氯芬酸及内标的扫描离子反应(MRM)分别为293.6→249.9、284.9→185.9，碰撞能量(CE)分别为-14.8、-23.8V。

比格犬分别静脉注射给予37.5mg双氯芬酸钠的两种不同制剂后，血浆中双氯芬酸钠的药动学参数见表18，药时曲线见图5。

表18比格犬经静脉注射不同制剂后的药动学参数

由试验结果可知，与对比实施例1相比，本发明的制备实施例4制备的制剂药物达峰时间由4min减至2min，C_max值为对比实施例1的1.28倍，AUC值为对比实施例1的1.29倍。可见，根据本发明制备的双氯芬酸钠制剂可使药物快速达峰，增加药物暴露量，提高药物镇痛效果。

Claims (9)

1.一种供注射用双氯芬酸钠药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为由包含下列组分的配方配置的溶液经冷冻干燥制备的冻干粉针剂，

其中，由所述配方配置的溶液经冷冻干燥制备冻干粉针剂时，将残氧量控制为低于2％，溶氧量控制为低于1mg/L。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述配方包含下列组分：

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述水溶性环糊精衍生物为选自羟丙基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊精和葡糖基-β-环糊精中的至少一种，

优选地，所述水溶性环糊精衍生物为羟丙基-β-环糊精。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述稳定剂为氨丁三醇、磷酸盐或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系，或它们与氢氧化钠或盐酸的组合，

优选地，所述稳定剂为氨丁三醇或磷酸盐缓冲体系，或它们与氢氧化钠的组合。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中，在将所述药物组合物加水复溶为双氯芬酸钠浓度为37.5mg/mL的复溶溶液时，所述稳定剂将所述复溶溶液的pH值范围控制为7-10，优选8.0-9.0。

6.一种供注射用双氯芬酸钠药物组合物的制备方法，其包括以下步骤：

1)根据权利要求1至5中任一项所述的配方制备溶液：将水溶性环糊精衍生物溶于部分的注射用水中，再加入双氯芬酸钠，搅拌至完全溶解，加入稳定剂搅拌溶解，补加剩余量的注射用水；

2)加入活性炭，继续搅拌15-30min，过滤，制得中间溶液；

3)测定所述中间溶液中双氯芬酸钠的含量；

4)根据步骤3)所述双氯芬酸钠含量的测定结果，向瓶中充入惰性气体，将残氧量控制为低于2％，溶氧量控制为低于1mg/L，按制剂单位分装入各个所述瓶中，半加塞；

5)将步骤4)得到的药液冷冻干燥、压塞，在无菌条件下压盖，密封，即得所述双氯芬酸钠药物组合物。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述步骤1)中，搅拌时间为1-3h。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述步骤2)中，活性炭用量为所述处方溶液总重的0.02％-0.1％。

9.一种用于制备权利要求1至5中任一项所述的供注射用双氯芬酸钠药物组合物的溶液，其中，所述溶液包含如下组分：

双氯芬酸钠；

水溶性环糊精衍生物；

稳定剂；和

注射用水。