CN103399102B - 一种测定烟草及烟草制品总茄尼醇的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定烟草及烟草制品总茄尼醇的方法，其步骤包括：一、烟草茄尼醇的同时超声提取、皂化：取烟草或烟草制品碾成烟草粉末，置于离心玻璃管中，分别加入提取溶剂和皂化剂，同时超声提取、皂化烟草茄尼醇；二、烟草茄尼醇提取液的洗涤、分离：提取液冷却至室温，加入一定体积的水，充分振荡，离心；三、移取上层溶液0.500mL，流动相稀释至5.000mL，用0.22um有机滤膜过滤至液相色谱安培瓶中，待测；四、对所得待测液进行液相色谱测定。本发明提取、皂化、分离均在离心管中完成，溶剂用量少，操作简单，节约成本，减少污染，提高工作效率，适用于批量样品分析，且测定结果准确性及精密度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种烟草活性物质的检测方法，尤其涉及一种测定烟草及烟草制品总茄尼醇的方法。
背景技术
烟草是茄尼醇含量最高的植物，茄尼醇具有抗菌、消炎、治疗心血管疾病及抗溃疡等作用，是合成辅酶Q10、维生素K2不可替代的中间体，并可合成抗癌增效剂SDB。
目前，烟草茄尼醇检测一般采用色谱分析方法，由于茄尼醇分子量大，沸点高，气相色谱测定需进行复杂的衍生化处理，液相色谱法是茄尼醇普遍采用的方法。
茄尼醇在烟草体内以游离醇和化合态（主要以乙酸酯、棕榈酸酯、亚油酸酯）两种形式存在，因此，烟草茄尼醇提取物，需通过皂化反应，将化合态茄尼醇游离出来，才能准确测定烟草总茄尼醇含量。现有的烟草茄尼醇测定一般应用非极性溶剂（正己烷、石油醚等）索式提取法提取，提取液在水浴加热回流条件下进行皂化，皂化后的提取液再通过液液萃取获得总茄尼醇测定液，方法繁琐，步骤复杂，测定周期长，检测效率低，不利于批量操作，且消耗大量有机溶剂。
发明内容
本发明为了克服现有技术中存在的上述缺点，提供一种测定烟草及烟草制品总茄尼醇的方法。该方法应用超声波技术，降低了烟草茄尼醇的提取、皂化温度，使烟草茄尼醇的提取、皂化、分离均在离心管中完成，适用于批量检测，且溶剂用量少，操作简单，节约成本，减少污染，提高工作效率，测定结果准确性及精密度高。
为达到上述目的，本发明所采用的技术解决方案是：一种测定烟草及烟草制品总茄尼醇的方法，其步骤包括：
一、烟草茄尼醇的同时超声提取、皂化：取烟草或烟草制品碾成烟草粉末，置于离心玻璃管中，分别加入提取溶剂和皂化剂，同时超声提取、皂化烟草茄尼醇；
二、烟草茄尼醇提取液的洗涤、分离：提取液冷却至室温，加入一定体积的水，充分振荡，离心；
三、移取上层溶液0.500mL，流动相稀释至5.000mL，用0.22um有机滤膜过滤至液相色谱安培瓶中，待测；
四、对所得待测液进行液相色谱测定。
进一步的，所述步骤一中烟草或烟草制品包括各种类型的调制后烟叶、青烟叶、烟梗以及提取烟碱后的烟草残渣，烘干粉碎成烟草粉末，称量0.1g，精确至0.0001 g，所用提取溶剂为正己烷，加入量为5.000 ml，所用皂化剂为0.1moL/L的氢氧化钠乙醇溶液，加入量为1.0ml。
进一步的，所述步骤一中，所用离心管体积等于或大于20 ml，并带有聚四氟乙烯密封盖，茄尼醇在提取、皂化过程中，应旋紧密封盖，以防止溶剂挥发影响结果测定的准确性。
进一步的，所述步骤一中，超声提取、皂化的条件是：超声频率45KHz，温度40℃-50℃，时间30min；提取皂化完成后，冷却至室温，加入8 ml水，充分振荡，3000转/分离心10min，利用液液分配原理，将烟草中的茄尼醇转移至上层正己烷相中，提取后样品残渣、皂化剂保留在下层水相中。
进一步的，步骤四中液相色谱测定条件是：使用超高效液相色谱仪，色谱柱：BEH C18 1.7um 2.1*100mm，流动相：甲醇：乙腈=50：50，流速：0.5 mL/min，柱温：30℃，检测波长：210nm。
本发明的有益效果是：应用超声波技术，降低了烟草茄尼醇的提取、皂化温度，且烟草茄尼醇的提取、皂化、分离均在离心管中完成，溶剂用量少，操作简单，节约成本，减少污染，提高工作效率，适用于批量样品分析，且测定结果准确性及精密度高。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。
图1为本发明烟草茄尼醇标准品及样品的液相色谱图。
具体实施方式
一种测定烟草及烟草制品总茄尼醇的方法，其步骤包括：
一、烟草茄尼醇的同时超声提取、皂化：取烟草或烟草制品碾成烟草粉末，置于离心玻璃管中，分别加入提取溶剂和皂化剂，同时超声提、皂化烟草茄尼醇；
二、烟草茄尼醇提取液的洗涤、分离：提取液冷却至室温，加入一定体积的水，充分振荡，离心；
三、移取上层溶液0.500mL，流动相稀释至5.000mL，用0.22um有机滤膜过滤至液相色谱安培瓶中，待测。
四、对所得待测液进行液相色谱测定。
进一步的，所述步骤一中烟草或烟草制品包括各种类型的调制后烟叶、青烟叶、烟梗以及提取烟碱后的烟草残渣，烘干粉碎成烟草粉末，称量0.1g，精确至0.0001 g，所用提取溶剂为正己烷，加入量为5.000 ml，所用皂化剂为0.1moL/L的氢氧化钠乙醇溶液，加入量为1.0ml。
进一步的，所述步骤一中，所用离心管体积等于或大于20 ml，并带有聚四氟乙烯密封盖，茄尼醇在提取、皂化过程中，应旋紧密封盖，以防止溶剂挥发影响结果测定的准确性。
进一步的，所述步骤一中，超声提取、皂化的条件是：超声频率：45KHz，温度40℃-50℃，时间30min；提取皂化完成后，冷却至室温，加入8 ml水，充分振荡，3000转/分离心10min，利用液液分配原理，将烟草中的茄尼醇转移至上层正己烷相中，提取后样品残渣、皂化剂保留在下层水相中。
进一步的，步骤四中液相色谱测定条件是：使用超高效液相色谱仪，色谱柱：BEH C18 1.7um 2.1*100mm，流动相：甲醇：乙腈=50：50，流速：0.5 mL/min，柱温：30℃，检测波长：210nm。
称取过40目筛烟草粉末样品0.1g(精确至0.0001g)于20mL带有聚四氟乙烯密封盖的离心玻璃管中，加入1.0mL0.1moL/L的氢氧化钠乙醇溶液，5.000 mL正己烷溶液，盖上密封盖，振荡，混匀，放入恒温超声提取器中，在超声频率45KHz，温度40℃-50℃条件下，提取30min，取出，冷却至室温，旋开密封盖，加入8 mL去离子水，盖紧瓶盖，充分振荡后， 3000转/分离心10min，移取0.500mL上层正己烷茄尼醇提取液，流动相稀释至5.000 mL，用0.22um有机滤膜过滤至液相色谱安培瓶中，应用液相色谱进行检测，如图1所示。
表一、添加回收率试验结果
表2 精密度试验结果
2.1 不同烟草样品的平行试验结果
2.2 同一烟草样品不同测定日期试验结果
| 时间 | 第一天 | 第二天 | 第三天 | 第四天 | 第五天 | 第六天 | 平均值 | RSD% |
| 测定值% | 0. 860 | 0.887 | 0.892 | 0.912 | 0.934 | 0.878 | 0.900 | 2.49 |
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本专利揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种测定烟草及烟草制品总茄尼醇的方法，其特征在于，步骤包括 ：
一、烟草茄尼醇的同时超声提取、皂化 ：取烟草或烟草制品碾成烟草粉末，置于离心玻璃管中，分别加入提取溶剂和皂化剂，同时超声提取、皂化烟草茄尼醇 ；
二、烟草茄尼醇提取液的洗涤、分离 ：提取液冷却至室温，加入一定体积的水，充分振荡，离心 ；
三、移取上层溶液 0.500mL，流动相稀释至 5.000mL，用 0.22um 有机滤膜过滤至液相色谱安培瓶中，待测 ；
四、对所得待测液进行液相色谱测定；
所述步骤一中烟草或烟草制品包括各种类型的调制后烟叶、青烟叶、烟梗以及提取烟碱后的烟草残渣，烘干粉碎成烟草粉末，称量0.1g，精确至0.0001 g，所用提取溶剂为正己烷，加入量为5.000 ml，所用皂化剂为 0.1moL/L 的氢氧化钠乙醇溶液，加入量为 1.0ml；
所述步骤一中，超声提取、皂化的条件是 ：超声频率 45KHz，温度 40℃ -50℃，时间 30min ；提取皂化完成后，冷却至室温，加入 8 ml 水，充分振荡，3000 转 / 分离心 10min，利用液液分配原理，将烟草中的茄尼醇转移至上层正己烷相中，提取后样品残渣、皂化剂保留在下层水相中；
步骤四中液相色谱测定条件是 ：使用超高效液相色谱仪，色谱柱 ：BEH C18 1.7um 2.1*100mm，流动相 ：甲醇 ：乙腈 =50 ：50，流速 ：0.5 mL/min，柱温 ：30℃，检测波长 ：210nm。
2. 根据权利要求 1 所述的测定烟草及烟草制品总茄尼醇的方法，其特征在于 ：所述步骤一中，所用离心管体积等于或大于 20 ml，并带有聚四氟乙烯密封盖，茄尼醇在提取、皂化过程中，应旋紧密封盖，以防止溶剂挥发影响结果测定的准确性。
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