CN103393710A - 一种发酵虫草菌粉多糖复合物的制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种发酵虫草菌粉多糖复合物的制备方法及用途，本发明的虫草多糖复合物，其由胞内多糖和胞外多糖混合而成，两者重量比例为1:20～20:1，其中所述胞内多糖以发酵虫草菌粉为原料，经过提取制备而成，其中所述胞外多糖以虫草菌丝体发酵过程中的留下的发酵培养液作为原料，经过提取制备而成，该虫草多糖复合物具有增强非特异性免疫、体液免疫、细胞免疫功能。

Description

一种发酵虫草菌粉多糖复合物的制备方法及用途

技术领域

本发明涉及一种药物复合物，特别涉及涉及一种从发酵虫草菌粉、虫草发酵液中提取得到的发酵虫草菌粉胞内多糖、胞外多糖及多糖复合物及其制备方法，以及该虫草多糖复合物用于改善免疫力，作为免疫力低下的疾病辅助治疗药物。 

背景技术

多糖作为冬虫夏草中一种重要的活性化合物，具有抗肿瘤、调节免疫、抗病毒、抗辐射及延缓衰老等药理作用。从天然冬虫夏草及人工虫草子实体或菌丝体中得到的多糖称为胞内多糖，而从虫草发酵液中得到的为胞外多糖。受自然环境所限制，目前冬虫夏草多糖主要通过人工发酵培养获取。工业生产人工虫草的培养液一般均弃之不用，对之研究报道甚少，但培养液中仍存在着大量有效成分，我们从培养液中分离提取得到多糖组分(胞外多糖)，将其和胞内多糖采用粒子分散混合技术制备成多糖复合物，可以充分利用资源，并发挥对免疫功能的调节作用。 

本研究所用的胞内多糖、胞外多糖从发酵虫草菌粉及发酵液分离纯化所得，其中在生产中发酵液作为废弃液处理，本研究液可以将虫草发酵液充分利用，达到节省原料、资源充分利用的作用。 

研究考察了人工虫草胞内与胞外多糖对非特异性和特异性免疫 功能的影响。结果表明人工虫草胞内及胞外多糖均有增强单核巨噬细胞吞噬功能的作用，将胞内多糖和胞外多糖制成多糖复合物后，其药理作用增强。 

发明内容

本发明提供一种虫草多糖的复合物，其由胞内多糖和胞外多糖混合而成，两者重量比例为1:20～20:1，优选1:10～10:1，更优选1:5～5:1，特别优选1:2～2:1，最优选1:1。 

其中所述胞内多糖以发酵虫草菌粉为原料，经过提取制备而成， 

其中所述胞外多糖以虫草菌丝体发酵过程中的留下的发酵培养液作为原料，经过提取制备而成， 

本发明所述胞内多糖和胞外多糖的提取可以采用现有技术中的任何方法进行，可以采用相同方法，也可以采用不同方法，优选如下方法：原料用乙醇脱脂、脱脂后的原料经过水提醇沉、得到的沉淀物再用sevage试剂沉淀除蛋白、得到上清液，上清液浓缩经乙醇沉淀，得到沉淀物，经洗涤干燥得到多糖。 

本发明最优选的多糖制备方法见实施例。 

经以上方法可分别制备胞外多糖、胞内多糖。 

本发明进一步将胞外多糖、胞内多糖比例混合制备成本发明的虫草多糖复合物。所述混合可以采用以下方法： 

将胞外多糖、胞内多糖分别粉碎，按1:20～20:1的比例混合均匀；将微粉硅胶粉碎至一定粒径后（粒径在1μm～50μm范围），采用粒子分散混合技术按一定比例和多糖混合均匀，即得。 

优选的混合方法如下： 

将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按比例混合均匀得到混合多糖；将微粉硅胶超微粉碎5-20分钟，按混合多糖重量5-20%的比例加入到混合多糖中，研磨混合5-30分钟，制成本发明的多糖复合物。 

本发明的虫草多糖复合物，可以直接服用，也可以制备成适合服用的制剂形式，如经口服或不经口服的制剂形式。经口服给药时，可直接或首先使该类化合物与常规的药用辅剂混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等形式；非经口给药时，可以注射液、输液剂等形式给药。制备上述制剂时，可使用常规的制剂技术。 

药理实验表明本发明的虫草多糖复合物有调节免疫力及增加免疫力的活性。有关实验如下： 

发酵虫草菌粉多糖复合物药理作用研究： 

药物采用本发明实施例1和2的方法制备的多糖复合物以及单独的胞内多糖和胞外多糖，以作对照比较。 

实验1.胞内多糖、胞外多糖及多糖复合物对小鼠的碳粒廓清指数和吞噬指数的影响 

取18～22g SPF级Balb/c小鼠，雌雄各半，随机分组。给药剂量如表1所示，每天1次，连续15天。给药第8天，除空白组外，其余各组腹腔注射CTX40mg/Kg，连续3d。于末次给药1小时，称重，各鼠尾静脉注入4倍稀释的印度墨汁，每10g体重0.1mL（0.01ml/g），于注入墨汁后第1、5min，分别从眼内眦静脉丛取血20μL，立即将血液加入到盛有2mL的Na₂CO₃（1g/L）溶液的试管中（试管及吸管 均用肝素钠试液冲洗）；取血完毕后，再取20μL正常小鼠的血液加入到2mL的Na₂CO₃溶液中作为空白对照；用紫外可见分光光度计于650nm波长处测光密度值(OD)，以此测定小鼠血液碳粒廓清速率。结果见表1 

表1多糖及复合物对CTX致免疫力低下小鼠血液碳粒廓清速率的影 

响

n=10） 

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01 

实验结果表明胞内多糖和胞外多糖及多糖复合物对免疫力低下小鼠的脏器指数及吞噬指数均有提升作用，呈现一定的剂量依赖关系，且多糖复合物较胞内多糖、胞外多糖单独使用效果较好。 

实验2.胞内多糖、胞外多糖及多糖复合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 

取Balb/c小鼠，随机分组。各给药组动物灌胃给药20ml/Kg，每日1次，正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，连续15d。给药第8d，除正常组外，其余各组腹腔注射CTX40mg/Kg，连续3d。给药第15d，每鼠腹腔注射5%鸡红细胞0.2mL/10g，于注射鸡红细胞6h和末次给药2h后，脱颈处死小鼠，用酒精消毒腹部皮肤，腹腔注射Hank’s液2.5mL，轻揉小鼠腹部，腹膜上剪一小孔，吸出腹腔液后滴少许在载玻片推片，晾干后瑞氏染色液染色，自来水冲洗，晾干，显微镜下观察，计算小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数（吞噬百分率=（吞噬鸡红细胞的巨噬细胞的个数/100个巨噬细胞）×100%），吞噬指数=巨噬细胞所吞噬的鸡红细胞的个数/100个巨噬细胞）。结果见表2 

表2多糖及复合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

n=12） 

注:与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01 

从表2可知，各给药组均能提高免疫低下小鼠的吞噬百分率，其中多糖复合物中剂量组可明显提高由CTX致免疫低下小鼠的吞噬百分率，甚至恢复至正常组的吞噬百分率，且多糖复合物较胞内多糖、胞外多糖单独使用效果较好。 

实验3.多糖复合物对二硝基氯苯诱导的迟发型变态反应的影响 

动物及分组方法见实例2。各给药组动物灌胃给药20mg·Kg^-1，每日1次，正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，连续灌胃15d。给药第10d，除空白组外，其余各组腹腔注射CTX40mg·Kg^-1，每天1次，连续3d。给药第5d，小鼠皮下注射1.5%DNCB-丙酮麻油（1:1）溶液0.1mL·只^-1，间隔2天同剂量再致敏1次。第1次致敏后第10d，用1.5%DNCB-丙酮溶液0.02mL涂于右耳攻击，左耳作为对照，24h后处死动物，用6mm直径打孔器打下双耳同一部位的圆耳片称重，计算耳肿胀度（=耳片重量之差）。结果见表3 

表3多糖复合物对二硝基氯苯致小鼠耳肿胀的影响（n=12，x±s) 

注：与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01 

结果表明，发酵虫草菌粉多糖复合物各剂量组具有极显著的提高小鼠耳肿胀度的作用（p＜0.01），说明发酵虫草菌粉多糖复合物对二硝基氯苯诱导小鼠的迟发型变态反应具有一定的增强作用。 

实验4.多糖复合物对免疫低下小鼠的血清溶血素的影响 

动物及分组方法见实例2。各给药组动物灌胃给药20ml·Kg^-1，每日1次，正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，连续16d。于给药第8d除空白组外其余给药组均注射40mg/kg新配制的环磷酰胺生理盐水，连续3d。给药第11d各组小鼠腹腔注射5%的绵羊红细胞悬液0.2mL只进行免疫，连续6d，末次给药后1h摘眼球取血，4℃冷藏2h后离心分离血清，血清:生理盐水1:100稀释后取1mL，加入5%绵羊红细胞悬液0.5mL和10%补体1mL混匀，37℃水浴中温育10min，置冰浴中终止反应，离心取上清液1mL加入3mL都氏试剂，混匀。用紫外分光光度计于波长540nm处比色，测定吸光度值测定5%SRBC半数溶血值：取5%SRBC0.25mL加都氏试剂至4mL，比色读取吸光度值。计算血清HC₅₀=样品的吸光度值/SRBC半数溶血值×稀释倍数。以不加血清的空白管作为对照。结果见表4 

表4多糖复合物对免疫低下小鼠血清溶血素生成的影响（n=12,x±s） 

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。 

结果可见发酵虫草菌粉多糖复合物可显著的提高免疫低下小鼠的血清溶血素水平（P＜0.05），其中发酵虫草菌粉多糖复合物高剂量组具有显著提高小鼠的血清溶血素水平（P＜0.01），并且呈剂量依赖性，该实验可证明发酵虫草菌粉多糖复合物对调节特异性体液免疫中的血清溶血素水平具有一定的增强作用。 

实验5.多糖复合物对小鼠白细胞的影响 

动物及分组方法见实例2。各给药组动物灌胃给药20mL·Kg^-1，每日1次，正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，连续16d。于给药第8d除空白组外其余给药组均注射40mg/kg新配制的环磷酰胺生理盐水，连续3d，于第16d给药后1h进行眼眶取血，将血置于真空采血管中待测。实验结果见表5： 

表5多糖复合物对小鼠白细胞种类及数量的影响 

注：与模型组比较*p<0.05，**p<0.01 

表5可知，多糖复合物高剂量组对小鼠白细胞数量具有显著性提升作用，中剂量组和低剂量组同样具有显著作用，并且能将免疫低下小鼠的白细胞数量恢复到和空白组小鼠的白细胞数量等同，甚至高于空白组小鼠的白细胞数量。证明发酵虫草菌粉多糖复合物对白细胞数量具有明显的提升作用。 

实验6.多糖复合物对小鼠细胞免疫的影响 

6.1E-玫瑰花环实验 

动物及分组方法见实例2。各给药组动物灌胃给药20mL·Kg^-1，每日1次，正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，连续15d。给药第8天，除空白组外，其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺40mg/kg，每天1次，连续3天。末次给药2小时后，小鼠眼眶取血1mL加入到预先经过肝素处理过的试管中，再在试管中加入1mL Hank’s液（不含钙、镁），倾倒法混匀。用移液枪吸取混匀后的细胞悬浮液2mL轻轻滴加到2mL的淋巴细胞分离液上，2000rpm离心20min后小心取出试管，用移液枪吸出上下两层液体之间呈灰白色的单个核细胞层，移入另一试管中，用2mL的Hank’s液混匀。将混匀后的单核细胞混悬液2000rpm离心10min，弃上清，再加入Hank’s液离心洗涤1次，离心后，弃上清；加入定量的Hank’s液混匀，计数；将计数后的细胞悬液用Hank’s液配成1×10⁶/mL。吸取1mL于试管中，2000rpm离心10min后弃 上清，留约0.1mL压积细胞。用0.1mL预先经SRBC吸收的10%小牛血清将上述的压积细胞重新悬浮，后加入0.2mL1%的SRBC，轻轻摇匀。37℃预温5分钟,再500-1000rpm离心5分钟。4℃冰箱中放置2h以上。取出孵育后的细胞，吸弃部分上清，留约0.1-0.2mL，轻轻旋转、搓捻使细胞悬浮，滴加0.8%戊二醛0.1mL，混匀，4℃冰箱中放置15min。取出上述细胞悬液后，再轻轻旋转、搓捻混匀，涂片，自然干燥。滴3-5滴瑞士染液染色，约1min后，加2～3倍蒸馏水，用洗耳球混匀。约10min后，用细流水冲洗，吸水纸吸干，显微镜下观察结果。计数200个淋巴细胞，周围粘附3个或3个以上SRBC的淋巴细胞为E花结形成细胞（即T细胞）。 

表6多糖复合物对小鼠血液中T淋巴细胞的影响 

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01 

实验结果，发酵虫草菌粉多糖复合物对小鼠的T淋巴细胞具有明显的增殖作用。并且在所使用的发酵虫草菌粉多糖复合物的剂量范围内（0.12-0.48g/kg）呈现剂量依赖性。 

6.2T淋巴细胞转化实验 

动物及分组方法见实例2。各给药组动物灌胃给药20mL·Kg^-1，每日1次，正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，连续15d。给药第8天，除空白组外，其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺40mg/kg，每天1次，连续3天。末次给药2小时后，脱颈处死小鼠，75%酒精中浸泡2～3分钟。无菌环境下摘取小鼠脾脏，放入加有5mL Hank’s液的灭菌培养皿中，去除结缔组织。后将脾脏放于200目的不锈钢细胞筛网上；置于盛有适量无菌Hank’s液的培养皿中，用镊子轻轻将脾撕碎，用注射器针芯轻轻研压脾脏；制成单细胞悬浮液，经200目筛网过滤后用Hank’s液洗3次，每次离心1000r/min，10min后过筛，用含10%小牛血清的RPMI1640培养液将细胞调至浓度1×10⁷/mL。 

将细胞悬液分两孔加入至24孔培养板中，每孔1mL，一孔加75μL ConA液(5μg/mL)，另一孔不加ConA液作为阴性对照，置37℃、5%CO₂培养箱中培养72小时。培养结束前4小时,每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL0.01M的酸性-异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解后用酶标仪在570nm波长处测定光密度值。实验结果见表7。 

转化值=实验组的平均OD值-对照组的平均OD值 

表7多糖复合物对T淋巴细胞转化率的影响 

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01 

试验结果表明，发酵虫草菌粉多糖复合物中剂量组能极显著的增强免疫低下小鼠的T淋巴细胞转化率。说明虫草菌粉的多糖复合物可以显著提高T淋巴细胞转化率，并且对由环磷酰胺所致的免疫力低下小鼠的免疫力不仅具有恢复作用，同时也大大增强其免疫力。 

实验7.发酵虫草菌粉多糖复合物对小鼠腹腔巨噬细胞NO释放的影响 

将Balb/c小鼠眼球放血处死（减少血细胞的干扰），然后用75%的酒精消毒小鼠皮肤。腹腔注射6～8mL的Hank’s液（或RPMI1640培养基），轻柔小鼠腹部2～3min，从侧腹壁小心抽出液体（液体呈淡黄色）。在4℃以1000r/min离心5min，弃上清液（留下底部少量白色沉淀），用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基将细胞重新悬浮后接种到96/24孔培养板中，于37℃5%的CO₂培养箱中培养。12h后用Hank’s液洗去未贴壁细胞即得纯化的腹腔巨噬细胞，供试验用（细胞密度1×10⁵cells/mL）。实验分组为对照组（细胞悬液）、多糖复合物组（细胞悬液+多糖复合物）、LPS组（细胞悬液+LPS）、LPS+多糖复合物组（细胞悬液+LPS+多糖复合物）、1400W+LPS组、 1400W+LPS+多糖复合物组，每组设5个复孔。将制备好的细胞悬液接种于96孔板中，每孔180μL悬液，20μL多糖（多糖终浓度为10mg/mL），20μL LPS（给药4h后加），20μL1400W（培养结束前30min加，终浓度为10μmol/L）。培养24h后离心（1500r/pm,5min），取50μL上清液于96孔培养板中，按照Griess试剂盒说明书进行检测，与酶标仪与540nm处检测吸光值（A_540nm）。同时按Griess试剂盒说明书绘制标准曲线，计算得出各组产生NO的量，结果见表8。 

表8多糖复合物对巨噬细胞NO释放的影响

n=5） 

结果表明多糖复合物剂量（10mg/mL）不能明显提高腹腔巨噬细胞释放NO的作用，有促进的倾向，具体还有待进一步研究。 

实验8.发酵虫草菌粉多糖复合物对小鼠腹腔巨噬细胞ROS释放的影响 

同[7.]项下取得腹腔巨噬细胞，实验设对照组（仅细胞悬液）、 多糖组、LPS组（细胞悬液+LPS）和LPS+多糖组，每组5个复孔。将制备好的腹腔巨噬细胞悬液接种到96孔板中，每孔添加180μL的细胞悬液，并加入20μL的多糖（终浓度为10μg/mL，菌粉多糖用RPMI1640溶解）。于37℃5%CO2的培养箱中培养4h。加入20μL的LPS（终浓度为10μg/mL），于37℃5%的CO₂培养箱中培养24h。弃上清液，每孔加50μL终浓度为10μmoL/L的DCFH-DA染液，避光室温染色10min。用PBS多次洗涤，以去除残余染液。（每孔加PBS100μL混匀后）用时间荧光分辨仪进行检测，其发射光波长为485nm，检测波长为535nm。结果见表9。 

表9多糖复合物对腹腔巨噬细胞ROS释放的影响n=5） 

注：与对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01 

结果表明多糖复合物明显能降低腹腔巨噬细胞释放ROS的作用，无论是否存在介质的刺激。 

本发明以发酵虫草菌粉和发酵液为原料，采用简便易行的提取方法获得虫草胞内多糖和胞外多糖，并将二者加一定辅料采用粒子分散混合技术制备了一种发酵虫草菌粉多糖复合物。药理实验表明该虫草菌粉多糖复合物具有明显调节免疫作用，且药理作用优于胞外多糖、胞内 多糖单用，具有协同增效作用。因此虫草菌粉多糖复合物可以以增加免疫力的保健产品或免疫制剂或治疗药物的辅佐药物而用于临床。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步阐述 

实施例1发酵虫草菌粉胞内多糖、胞外多糖的制备 

取发酵虫草菌粉500g，用95%的乙醇浸泡3次，每次10个小时，过滤，常温条件下晾干，脱脂后的干品用5%NaOH溶液，提取时间为60min，提取3次，每次加蒸馏水5000mL，硫酸-苯酚法检测提取液的糖含量，直至糖反应不明显。将每次的提取液合并，过滤，减压浓缩至1000mL，加入4000mL的95%的乙醇静置9小时，离心，取沉淀，用500mL蒸馏水溶解，加入250mL的sevage（氯仿：正丁醇=4:1）试剂混合后搅拌15min脱蛋白，静置半小时，离心去除沉淀，得上清液，重复此操作4次。将得到的上清液对流动水透析3天，透析液浓缩至300mL，加入1200mL95%乙醇，在常温下静置9小时，离心收集沉淀，依次用丙酮、无水乙醇洗涤数次后，用冷冻干燥法进行脱水，得发酵虫草菌粉胞内多糖。 

取一定量的虫草发酵液浓缩至原溶液1/10至1/5，重复上述操作，得发酵虫草菌粉胞外多糖。 

实施例2发酵虫草菌粉多糖复合物的制备 

将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按1:1比例混合均匀；将微粉硅胶超微粉碎10min，按多糖10%比例加入，研磨混合15min，制成发酵虫草菌粉多糖复合物。 

实施例3发酵虫草菌粉多糖复合物的制备 

将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按5:1比例混合均匀；将微粉硅胶超微粉碎5min，按多糖10%比例加入，研磨混合15min，制成发酵虫草菌粉多糖复合物。 

实施例4发酵虫草菌粉多糖复合物的制备 

将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按1:5比例混合均匀；将微粉硅胶超微粉碎20min，按多糖5%比例加入，研磨混合5min，制成发酵虫草菌粉多糖复合物。 

实施例5发酵虫草菌粉多糖复合物的制备 

将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按10:1比例混合均匀；将微粉硅胶超微粉碎10min，按多糖20%比例加入，研磨混合30min，制成发酵虫草菌粉多糖复合物。 

实施例6发酵虫草菌粉多糖复合物的制备 

将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按1:10比例混合均匀；将微粉硅胶超微粉碎10min，按多糖10%比例加入，研磨混合10min，制成发酵虫草菌粉多糖复合物。 

实施例7发酵虫草菌粉多糖复合物的制备 

将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按20:1比例混合均匀；将微粉硅胶超微粉碎15min，按多糖8%比例加入，研磨混合20min，制成发酵虫草菌粉多糖复合物。 

实施例8发酵虫草菌粉多糖复合物的制备 

将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按1:20比例混合均匀；将微 粉硅胶超微粉碎10min，按多糖12%比例加入，研磨混合15min，制成发酵虫草菌粉多糖复合物。 

实施例9 

以实施例2的发酵虫草菌粉多糖复合物作为药物活性成分根据制剂学常规技术制备成片剂。 

实施例10 

以实施例2的发酵虫草菌粉多糖复合物作为药物活性成分根据制剂学常规技术制备成胶囊剂。 

实施例11 

以实施例2的发酵虫草菌粉多糖复合物作为药物活性成分根据制剂学常规技术制备成口服液。 

实施例12 

以实施例2的发酵虫草菌粉多糖复合物作为药物活性成分根据制剂学常规技术制备成颗粒剂。 

Claims (10)

1.一种虫草多糖复合物，其由胞内多糖和胞外多糖混合而成，两者重量比例为1:20～20:1，其中所述胞内多糖以发酵虫草菌粉为原料，经过提取制备而成，其中所述胞外多糖以虫草菌丝体发酵过程中的留下的发酵培养液作为原料，经过提取制备而成。

2.根据权利要求1的虫草多糖复合物，其特征在于，胞内多糖和胞外多糖两者重量比例为1:10～10:1。

3.根据权利要求1的虫草多糖复合物，其特征在于，胞内多糖和胞外多糖两者重量比例为1:5～5:1。

4.根据权利要求1的虫草多糖复合物，其特征在于，胞内多糖和胞外多糖两者重量比例为1:2～2:1。

5.根据权利要求1的虫草多糖复合物，其特征在于，胞内多糖和胞外多糖两者重量比例为1:1。

6.根据权利要求1的虫草多糖复合物，其特征在于，所述胞内多糖和胞外多糖的提取方法，步骤如下：原料用乙醇脱脂、脱脂后的原料经过水提醇沉、得到的沉淀物再用sevage试剂沉淀除蛋白、得到上清液，上清液浓缩经乙醇沉淀，得到沉淀物，经洗涤干燥得到多糖。

7.根据权利要求1的虫草多糖复合物，其特征在于，所述混合方法如下：将胞外多糖、胞内多糖分别粉碎，按1:20～20:1的比例混合均匀；将微粉硅胶粉碎，和多糖混合均匀，即得。

8.根据权利要求1的虫草多糖复合物，其特征在于，胞所述混合方法如下：将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按比例混合均匀得到混合多糖；将微粉硅胶超微粉碎5-20分钟，按混合多糖重量5-20%的比例加入到混合多糖中，研磨混合5-30分钟，制成多糖复合物。

9.根据权利要求1的虫草多糖复合物，其特征在于，制备成适合服用的制剂形式，如口服液、片剂（包括片剂、口含片、分散片、咀嚼片等）、散剂、颗粒剂等口服剂型及注射液、输液等非口服剂型。

10.根据权利要求1的虫草多糖复合物，其特征在于，制备方法如下：取发酵虫草菌粉500g，用95%的乙醇浸泡3次，每次10个小时，过滤，常温条件下晾干，脱脂后的干品用5%NaOH溶液，提取时间为60min，提取3次，每次加蒸馏水5000mL，硫酸-苯酚法检测提取液的糖含量，直至糖反应不明显。将每次的提取液合并，过滤，减压浓缩至1000mL，加入4000mL的95%的乙醇静置9小时，离心，取沉淀，用500mL蒸馏水溶解，加入250mL的sevage试剂混合后搅拌15min脱蛋白，静置半小时，离心去除沉淀，得上清液，重复此操作4次。将得到的上清液对流动水透析3天，透析液浓缩至300mL，加入1200mL95%乙醇，在常温下静置9小时，离心收集沉淀，依次用丙酮、无水乙醇洗涤数次后，用冷冻干燥法进行脱水，得发酵虫草菌粉胞内多糖；

取虫草发酵液浓缩至原溶液1/10至1/5，重复上述操作，得发酵虫草菌粉胞外多糖；

将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按1:1比例混合均匀；将微粉硅胶超微粉碎10min，按多糖10%比例加入，研磨混合15min，制成发酵虫草菌粉多糖复合物。