CN103382474A - 一种棉花纤维和花粉特异表达启动子和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种棉花纤维和花粉特异表达启动子和应用；本发明利用基因工程技术成功地分离了棉花纤维和花粉特异表达的GhFBP7基因的FPP1启动子，所述FPP1启动子含1283bp片段；本发明还验证了所述FPP1启动子序列在棉花中具有花粉和纤维表达特异性，能够指导报告基因在棉花纤维和花粉中的特异性表达，为基因工程改良棉花的产量和品质提供了可能性和有效的途径。

Description

一种棉花纤维和花粉特异表达启动子和应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉一种棉花纤维和花粉特异表达启动子及其应用。

背景技术

我国是棉花生产和消费大国，棉花生产在我国国民经济中占有重要的地位。利用传统的育种方法曾在棉花品种改良上取得了较大的成功，但近20年来，世界棉花品种的产量已经达到平台期。因此，利用现有的遗传资源和传统育种手段难以再大幅度提高棉花产量。基因工程方法具有后代易于稳定，育种周期短等优点，可以打破物种间的遗传障碍，实现优良目的基因的定向转移。利用基因工程改良棉花产量和纤维品质是解决这一难题的有效途径。但基因工程在作物改良中的作用发挥取决于三个方面的进展程度：目标基因的功能、调控目标性状的分子机理和控制目标基因在特定部位表达的特异启动子。在棉花纤维品质和产量的基因工程改良中，常常需要在纤维细胞中超量或抑制一些基因的表达，来达到提高产量或改良品质的目的。同时棉花纤维产量的重要指标是棉花育性，而花粉育性是棉花育性的重要指标，直接关系到棉花成铃率、座果率和产量，因此需要有纤维花粉特异的启动子来控制目标基因的表达。在棉花纤维发育的分子机理研究中，也需要纤维细胞特异表达启动子来上调或下调目标基因的表达，进而分析其在纤维细胞中的功能。最大限度地减少目标基因对其他组织和器官的不良影响。但是，目前已报道的具有棉花纤维特异性的启动子非常有限。因此，棉花纤维特异启动子的克隆，对棉花纤维发育相关基因功能研究和棉花纤维的基因工程改良，具有十分重要的意义。

近年来，植物组织器官和发育特异性表达的研究成为植物分子生物学的一个重要研究领域，特别是在植物基因工程的实用化阶段中，为了使目的基因在特定的组织器官和特定的发育阶段优先表达，对组织特异性表达的研究更是成为热点。由于棉花种子和纤维是棉花的经济器官，花粉育性是棉花产量的一个重要因子，纤维的发育直接影响纤维的品质和产量。因此，研究和筛选纤维和花粉特异表达的启动子不仅有助于解析基因表达调控的分子机制，并可为植物基因工程提供有用的调控元件，有着重要的理论意义和应用价值。

由于棉花纤维是胚珠外珠被表皮细胞经极性伸长而成，因此纤维细胞是胚珠表皮细胞的一部分。为了筛选棉花纤维特异或优势表达的启动子，发明人根据前人的研究克隆了来源于矮牵牛的FBP7基因的启动子，通过构建启动子分析植物表达载体和棉花的遗传转化，利用转基因棉花分析了FBP7基因启动子在转基因棉花中的表达特性。结果显示FBP7基因启动子在棉花胚珠表皮和发育早期的纤维细胞中特异表达，同时利用其控制油菜素类固醇合成酶基因GhDET2在转基因棉花中表达，对改良棉花纤维的产量和品质具有较好的作用【Luo,M.,Xiao,Y.H.,Li,X.B.,Lu,X.F.,Deng,W.,Li,D.M.,Hou,L.,Hu,M.Y.,Li,Y.,andPei,Y..GhDET2,a steroid5a-reductase,plays an important role in cotton fiber cellinitiation and elongation.Plant J.2007，51:419-430.】。为了明确棉花中FBP7同源基因的启动子在棉花中的表达特性，我们克隆了棉花的FBP7同源基因，命名为GhFBP7。然后通过染色体步行，获得了GhFBP7基因5’-上游调控序列1283bp，最初命名为GhFBP7P1。通过克隆和序列分析、构建启动子分析植物表达和棉花遗传转化，以及利用转基因棉花分析GUS活性。明确了GhFBP7P1在棉花中的表达特性：在纤维细胞和花粉中特异表达，是一个纤维和花粉特异表达启动子。于是本申请中将这个启动子序列重新命名为FPP1（Fiber-Pollenspecific Promoter1）。

发明内容

本发明的目的是提供一种棉花纤维和花粉特异性的启动子，本发明称FPP1，所述启动子具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

进一步地，本发明还提供了含所述FPP1启动子的表达载体，其中所述表达载体优选植物表达载体，更优选具有如图3所示结构的载体。

进一步地，本发明还提供了含上述表达载体的转化体。

本发明的另一个目的是提供所述的FPP1启动子在制备转基因植物中的应用。

本发明的另一个目的是提供上述表达载体在制备转基因植物中的应用，其中所述。转基因植物为转基因棉花。

本发明的又一个目的是提供一种利用FPP1启动子制备转基因植物的方法，包括以下步骤：

（1）构建具有如SEQ ID NO.1所示序列的启动子；

（2）将所述启动子可操作地插入到表达载体中，构建植物表达载体；

（3）将步骤（2）获得植物表达载体转化宿主，获得转化体；

（4）将所述转化体转化植物，经培养获得转基因植物。

进一步地，本发明提供了一种利用FPP1启动子制备转基因棉花的方法，包括以下步骤：

（1）构建具有如SEQ ID NO.1所示序列的启动子；

（2）将所述启动子可操作地插入到表达载体中，构建植物表达载体；

（3）将步骤（2）获得植物表达载体转化到棉花的愈伤再生组织中；

（4）培养所述棉花愈伤再生组织，经筛选和诱导获得含棉花纤维和花粉特异性的启动子的棉花植株。

本发明成功地分离了棉花纤维和花粉特异表达的GhFBP7基因的FPP1启动子，并证实了所述FPP1启动子序列在棉花中具有花粉和纤维表达特异性，为基因工程改良棉花的产量和品质提供了可能性和有效途径。

附图说明

图1显示GhFBP7基因在棉花不同器官和组织中以及纤维和胚珠不同发育时期的表达；

其中，误差棒表示6次生物学重复的标准差。

图2显示了FPP1启动子序列上具有的顺式调控元件；

其中，序列分析在PlantCare数据库进行（http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/）。

图3是pBI121-FPP1::GUS植物表达载体图谱；

其中，LB:T-DNA区段左边界；RB：T-DNA区段右边界；Kan^r，卡拉霉素抗性基因；GUS：β-葡萄糖酸苷酶基因；Nos-T:冠瘿碱合成酶基因终止子。

图4是启动子分析植物表达载体的酶切验证；

其中，M：DNA Marker15（MBI）；P:pBI121-FPP1::GUS质粒。

图5是电泳验证转基因棉花中的GUS基因；

其中，M15：DNA Marker15（MBI）；+：阳性对照（煮沸过的pBI121-FPP1::GUS农杆菌液）；1-5：转基因后再生的Kan抗性苗；C：未转基因棉花；W：水为模板的扩增产物。

图6是FPP1启动子在转基因棉花幼苗中的表达情况；

其中，A:整株转基因棉花幼苗；B：种子根和下胚轴纵切；C:下胚轴纵切（出示生长点）；D:下胚轴横切。

图7是FPP1启动子在转基因棉花叶中的表达情况；

其中，A:叶片；B:叶柄纵切；C:叶柄横切。

图8是FPP1启动子在转基因棉花茎中的表达情况；

其中，A:茎尖纵切；B:老茎纵切；C:老茎横切；D:幼茎横切。

图9是FPP1启动子在转基因棉花花蕾（开花前）中的表达情况；

其中，A:花蕾不同发育时期的染色情况；B:花粉囊横断面的染色情况；C:雌蕊；D:一个花粉囊的染色情况；E:花粉粒；F:子房和胚珠的染色情况。

图10是FPP1在转基因棉花开花当天花器官各部分的表达情况；

其中，A:转基因棉花萼片；B:转基因棉花苞叶；C:转基因棉花柱头；D:转基因棉花雄蕊（花丝上沾有花粉粒）；E:转基因棉花果柄纵切；F:转基因棉花果柄横切；G:转基因棉花开花当天的子房纵切（示子房壁、胚珠和中柱）；H:转基因棉花花瓣；I:野生型棉花花粉粒；J:转基因棉花花粉粒

图11是FPP1在转基因棉花胚珠和纤维发育过程中的表达情况；

其中，A:开花后2天的转基因棉花胚珠和纤维；B:开花后10天的转基因棉花胚珠和纤维；C:开花后18天的转基因棉花胚珠和纤维；D:开花后10天的转基因棉花胚珠（含纤维）横切；E:开花后18天的转基因棉花胚珠（含纤维）横切。

具体实施方式

以下结合附图对本发明进行进一步的详细说明，以下的描述并不对本发明进行限定，任何对本发明的变形和改变，只要不脱离本发明的精神,均应属于本发明所附权利要求的范围。

除非另有说明，本发明实例中的试剂、药品、材料均为市售可得，方法均参考《分子克隆实验指南》(Sambrook和Russell,2001)。

在本发明的下述实例中，所用的棉花实验材料为徐州142（Gossypiumhirsutum L.cv徐州142），来源于中国农业科学院棉花研究所。

【实施例1】棉花RNA的提取

选取约3g新鲜棉花材料（根、下胚轴、子叶、茎、雄蕊、叶、雌蕊、开花当天的胚珠（包含突起的纤维细胞）、开花后4天的胚珠（包含突起的纤维细胞）、开花后6天的纤维、开花后10天的纤维、开花后18天的纤维、开花后6天的胚珠、开花后10天的胚珠或开花后18天的胚珠）。在液氮中迅速磨成精细粉末，装入50mL离心管，加入15mL65℃预热的RNA提取液（2%（W/V）CTAB，2%（W/V）PVP，100mmol/L Tris-HCl（pH8.0），0.5g/L亚精胺（Spermidine），2.0mol/L NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入），颠倒混匀。65℃水浴3min，期间混匀2～3次。氯仿:异戊醇（24:1）抽提2次（10,000r/min，室温，5min）。取上清，加入1/4体积10mol/L LiCl溶液，4℃放置6h，以酚(pH4.5):氯仿:异戊醇（25:24:1）和氯仿:异戊醇（24:1）各抽提1次（10,000r/min，室温，5min）。加2倍体积的无水乙醇，在-70℃沉淀30min以上。12,000r/min，4℃离心20min，弃上清。沉淀用200μL的DEPC水溶解。酚（pH4.5）:氯仿:异戊醇（25:24:1）、氯仿:异戊醇（24:1）各抽提1次（10,000r/min，室温，5min）。加1/10体积3mol/L NaAc溶液和2.5倍体积的无水乙醇，在-70℃沉淀30min以上。12,000r/min，4℃离心20min，弃上清。沉淀用70%的酒精漂洗一次，风干。加200μL的DEPC水溶解。用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测RNA的质量。

【实施例2】cDNA第一链的合成

取约10μg总RNA加入到DEPC-处理的扩增管中，65℃水浴10min使RNA变性后，立即冰浴3min。然后向扩增管中依次加入2μL10×RNA ReactionBuffer，4μL25mmol/L MgCl₂，2μL10mmol/L dNTPs，5U AMV RTase，0.5μLRNase抑制剂(20U)和1μL2.5μmol/L Oligo-dT3'接头，加入经DEPC处理的水至终体积20μL。反转录反应程序为：30℃，10min；50℃，45min；95℃，5min；5℃，5min。程序结束后，于-20℃冻存产物。

【实施例3】GhFBP7基因在棉花不同组织器官和纤维胚珠不同发育时期中的表达模式

运用Quantitative Real-time PCR分析GhFBP7的表达水平，用cDNA第一链合成试剂盒（MBI）合成不同器官和组织总RNA的第一链cDNA（样品包括棉花幼苗的根、下胚轴、子叶、真叶、雄蕊和雌蕊以及从开花当天（0DPA）至开花后18天（18DPA）的种子和纤维），操作均按试剂盒说明书进行。采用实时定量PCR试剂盒（Bio-Rad）进行PCR，在20μL的反应体系中包括10μL MIX缓冲液（包括PCR缓冲液、DNA聚合酶、dNTPs和MgCl₂），5'-端和3'-端引物各1μL（5μmol/L）。循环参数为94℃预变性3min；94℃，30sec，55℃，30sec，72℃，30sec，预设循环数为40。用棉花Histone3基因作内标，Histone3的5'-引物是GhHIS1（5'-GAAGCCTCATCGATACCGTC-3'），3'-引物为GhHIS2（5'’-CTACCACTACCATCATGGC-3'）。扩增GhFBP7基因的5'-引物序列为GhFBP7p-1（5'-ACGAACTGTCAGTCCTGTGTG-3'），3'-引物序列为GhFBP7p-2（5'-TTGCCTGCTGAAGCCTCTCTA-3'）。

按上述实施例1-2的方法获得棉花不同组织器官和纤维胚珠不同发育时期的总RNA进行实时定量RT-PCR分析。在运行实时定量PCR前，用相同引物和模板在相同的温度调控程序中扩增一次，通过扩增产物的电泳，确保扩增产物是单带，并确认哪一个样品扩增产物较多。在实时定量PCR中以扩增产物较多的样品10倍稀释4级，并将此设为标样。每个样品重复6次，计算GhFBP7基因的RNA与Histone3RNA的相对含量。

结果如图1所示，GhFBP7基因在棉花根、下胚轴、子叶、茎和雌蕊中都不表达，在雄蕊、纤维和胚珠中有较高的表达。而且在纤维发育过程中，随着纤维的生长，该基因的表达水平逐渐增加，在18DPA纤维中的表达量最高；随着胚珠的发育，该基因的表达水平也有所增加，但表达峰值出现在10DPA，然后有所降低。说明GhFBP7基因在雄蕊、纤维和胚珠中特异表达，而且在纤维中具有较强的表达优势。

【实施例4】棉花基因组DNA的提取

采用改良的CTAB法提取棉花基因组DNA。取0.5g棉花幼叶，在液氮中迅速研磨成粉，加入3mL65℃预热的CTAB提取液，快速振荡混匀。65℃水浴30min，然后加入1mL5mol/L KAc，冰浴20min后，用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（12,000r/min，4℃离心5min），取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min，挑出絮状沉淀，75%的乙醇反复漂洗3次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重溶于500μL TE中。加入1μL RNaseA（10mg/mL），37℃处理1h。再用酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（12,000r/min，4℃离心5min），取上清，加入2倍体积的无水乙醇沉淀DNA。-20℃放置约30min，离心（12,000r/min，4℃离心5min），弃上清，沉淀用75%的乙醇漂洗，风干，溶于200μL TE中，-20℃保存备用。

【实施例5】GhFBP7基因5'-上游调控序列的获得

采用YADE（Y-shaped Adaptor Dependant Extension）（肖月华,罗明,方卫国,罗克明,侯磊,罗小英,裴炎。利用YADE法进行棉花基因组PCR步行.遗传学报，2002,29（1），62-66）法进行GhFBP7基因的步行。

酶切目标基因组DNA：将2μg DNA用10U的内切酶按说明书的条件在20μL体系中酶切过夜，70℃灭活10min。

准备接头：向扩增管中加入2μL接头短链（100μmol/L）（接头序列与使用的内切酶酶切位点相匹配），5U T4多聚核苷酸激酶，1μL10mmol/L ATP，10μL体系，37℃保温30min，70℃灭活10min。加入2μL10×退火缓冲液，2μL接头长链（100μmol/L）（5'-CGGTAGGATCCCGCAGAACGACGGCCAG-3'）和6μL水，65℃保温10min，缓慢冷却到室温，使长短链退火形成接头。

连接接头：取2μL以上方法准备好的接头（10μmol/L）和5ng酶切产物，加5U T4连接酶，16℃连接16hr。

线性扩增：第一步为线性扩增，25μL体系中含1μL连接产物，1×Ex TaqBuffer（无Mg²⁺），200μmol/L dNTPs，2mmol/L MgCl₂，200μmol/L特异引物GhFBP7-SP2(5′-CGTAAGCTTTCTTCAGCAGGCC-3′)，1U Ex Taq DNA聚合酶（在94℃预变性时加入）。循环参数为：94℃预变性5min；94℃，30sec，56℃，30sec，72℃，2min30sec，40个循环。

指数扩增：取1μL线性扩增产物进行第二步指数扩增，除引物为接头引物（5'-CGGTAGGATCCCGCAGAAC-3'）和特异引物GhFBP7-SP1(5′-CCTCTTCCCATTCTCTTTG-3′)外，反应体系中其他成分同线性扩增。反应扩增35个循环后，72℃延伸10min。

经过一次YADE延伸，获得1362bp的5'-上游调控序列，如SEQ ID NO.14所示。

【实施例6】克隆GhFBP7基因的启动子FFP1序列

根据已经获得的GhFBP7基因的5'-上游调控序列，设计特异引物FPP1-up（5'-CAACAGGTCCCCTAATGTAG-3'）和FPP1-down（5'-CCCGATCTGCCTGTTTAGAA-3'），以徐州142基因组DNA为模板进行扩增，25μL的反应体系包含约50ng棉花DNA，2.5μL10×PCR缓冲液，2μL2.5mmol/L dNTPs，1.5μL25mmol/L MgCl₂，5μmol/L的上下游引物各1μL，1U TaqDNA聚合酶（Progema）。扩增程序为：94℃，5min；94℃，30sec，56℃，30sec，72℃，1.5min，35个循环；72℃延伸10min。扩增产物经过电泳回收、将其连接在克隆载体pMD18(TaKaRa)上，形成pMD18-FPP1载体，该载体经过转化大肠杆菌、验证和测序，结果表明扩增片段长度为1283bp，命名为FPP1，如SEQ ID NO.1所示。

【实施例7】FPP1启动子分析植物表达载体pBI121-FPP1::GUS的构建

用HindIII(部分酶切)和XbaI内切酶从pMD18-FFP1载体上切下FPP1片段，连接到用HindIII和XbaI双酶切的pBI121载体片段上，从而使FPP1片段置换了pBI121载体中的CaMV35S启动子。通过酶切验证，构建成植物表达载体pBI121-FPP1::GUS（图3和图4）。

【实施例8】棉花的遗传转化

用电激法将构建的植物表达载体质粒导入农杆菌LBA4404菌株并进行棉花遗传转化。

参考Bio-RAD MicroPulser用户说明书,将上述载体通过电激转化法导入农杆菌LBA4404菌株。

上述的植物表达载体通过农杆菌介导棉花下胚轴转化方法导入棉花。具体方法如下：

冀棉14（河北农业大学提供）种子剥去外壳，用0.1%的升汞（HgCl₂）灭菌10min，用大量无菌水冲洗8次。在125ml三角瓶中加入约35ml无菌水震荡过夜，次日换一次无菌水。当种子长出下胚轴根后，播种于种子萌发培养基上，在28℃，黑暗条件下萌发2-3d，此时种子下胚轴开始进入快速伸长的时期，适宜进行遗传转化。

转化用的含pBI121-FPP1::GUS植物表达载体的农杆菌菌株在含50mg/L Km和125mg/L Sm的YEB固体培养基上活化。挑取其单菌落，接种于5ml含相同抗生素的YEB液体培养基中，28℃、200r/min震荡培养过夜。培养后的农杆菌菌液按1：20的比例转接到25ml含相同抗生素的YEB液体培养基中，继续培养至OD600值约为0.6-0.8，10,000r/min、1min离心收集菌体，菌体用等体积的液体共培养基重悬备用。

转化时，将棉花下胚轴切成1.5-2.0cm的小段，放入三角瓶中用制备好的农杆菌菌液侵染，条件为28℃摇床120r/min侵染30min。然后吸干菌液，将下胚轴段转到共培养基上，28℃暗培养2-3天。

共培养后，下胚轴段转入到下胚段筛选培养基，28℃光照培养，约20天继代一次，直到出现大量愈伤组织。愈伤组织连同下胚段转移到胚性愈伤诱导培养基，约15天继代一次，直到出现大量的浅黄色胚性愈伤。胚性愈伤挑到胚性愈伤悬浮培养基中，28℃、120r/min摇床培养一周左右。用减去尖头的1.0mL枪头吸取细沙状的体胚平铺于体胚伸长培养基，20-30天后出现大量的绿色小体胚。挑取生长状态良好的体胚继代培养，待体胚伸长到1-2cm时，将其转移到成苗培养基生根出苗。幼苗生长到3-5cm高时，通过嫁接或者移栽的方式转移到温室花钵中生长。其中，本实验例中所用的培养基如表1所示。

表1:根癌农杆菌介导的棉花下胚轴遗传转化所用培养基

MS:Murashige&Skoog,1962

B5:Gamborg,1986

【实施例9】转基因棉花的分子验证

用简易的CTAB法或任何本领域已知的方法提取实施例9获得的棉花抗性幼苗的DNA。以GUS基因的两个引物GUS-up（5'-TCATTGTTTGCCTCCCTGCG-3'）和GUS-down（5'-GGGGACTCTAGAGGATCCC-3'）扩增抗性棉花基因组DNA，预计扩增片段大约1.8kb。25μL的反应体系包含约50ng基因组DNA，2.5μL10×PCR缓冲液，2μL2.5mmol/L dNTPs，1.5μL25mmol/L MgCl₂，5μmol/L的上下游引物各1μL，1U Taq DNA聚合酶。扩增程序为：94℃，5min；94℃，30sec，56℃，30sec，72℃，2min，35个循环；72℃延伸10min。琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。

如图5可见，从5株抗性棉花植株中扩增出了约1.8kb的GUS基因特异带，说明外源片段已经整合到转基因棉花植株的基因组中。

【实施例10】转基因棉花中GUS活性的检测

对3株PCR阳性的转基因棉花植株进行全面的GUS活性检测,GUS的表达特性基本一致。首先萌发T3代纯合植株的种子，将幼苗进行GUS染色，结果显示在子叶、根、下胚轴和生长点都没有GUS信号（图6）。其次检测了叶和茎的表达情况，在检测样品中都没有检测到阳性信号（图7和图8）。进而检测了花蕾（开花前）发育过程中GUS的表达情况，结果表明在花粉中具有GUS信号，在其他检测部位没有明显的GUS信号（图9）。在开花当天的花中，也只在花粉中检测到GUS信号（图10）。最后检测了胚珠和纤维不同发育时期的GUS表达情况，在开花后2天的转基因棉花胚珠和纤维中的没有GUS信号；在开花后10天的转基因棉花纤维中具有较强的GUS表达水平；在开花后18天的转基因棉花纤维中表达最强，在18DPA胚珠中的表达主要集中在胚珠表皮，在胚珠其它部分没有GUS信号（图11）。

Claims (10)

1.一种棉花纤维和花粉特异性的启动子，所述启动子具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.一种含权利要求1所述启动子的表达载体。

3.如权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为植物表达载体。

4.如权利要求2所的表达载体，其特征在于，所述表达载体具有如图3所示的结构。

5.如权利要求1所述的启动子在制备转基因植物中的应用。

6.一种含如权利要求2-4中任一项所述的表达载体的转化体。

7.如权利要求2-4中任一项所述的表达载体在制备转基因植物中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述转基因植物为转基因棉花。

9.一种利用权利要求1所述启动子制备转基因植物的方法，包括以下步骤：

（1）构建具有如SEQ ID NO.1所示序列的启动子；

（2）将所述启动子可操作地插入到表达载体中，构建植物表达载体；

（3）将步骤（2）获得植物表达载体转化宿主，获得转化体；

（4）将所述转化体转化植物，经培养获得转基因植物。

10.一种利用权利要求1所述启动子制备转基因棉花的方法，包括以下步骤：

（1）构建具有如SEQ ID NO.1所示序列的启动子；

（2）将所述启动子可操作地插入到表达载体中，构建植物表达载体；

（3）将步骤（2）获得植物表达载体转化到棉花的愈伤再生组织中；

（4）培养所述棉花愈伤再生组织，经筛选和诱导获得含棉花纤维和花粉特异性的启动子的棉花植株。

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