CN103981217B - 表达生长素代谢基因iaaL的载体及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及表达生长素代谢基因iaaL的载体及其用途。本发明要解决的技术问题是为改良棉花的品质提供一种新选择。本发明的技术方案是表达生长素代谢基因iaaL的载体。本发明还提供了含有所述载体的宿主细胞。本发明还提供了所述的载体在改良棉花中的用途。利用本发明载体对棉花进行改良，能够实现棉花籽棉产量，纤维产量，种子质量以及纤维品质的明显提高。

Description

表达生长素代谢基因iaaL的载体及其用途

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及表达生长素代谢基因iaaL的载体及其用途。

背景技术

棉花是世界上最重要的天然纤维作物，也是最重要的经济作物。我国是世界上最大的纺织品生产国和消费国，棉花产业在我国的国民经济中具有举足轻重的地位。近年来，随着人民生活水平的提高和纺织技术的革新，对棉花纤维品质的要求也相应提高；尤其是近年来以气流纺纱取代环锭纺纱的技术革命，要求更长、更强、更细和更整齐的纤维。

目前我国棉花推广品种大都纤维品质偏低，长度单一，纤维强度偏低，纤维较粗，缺乏纺60支以上的高档棉纱的品种，远不能满足市场的需要。这直接导致了我国原棉在国际市场上缺乏竞争力。同时也导致了我国棉花生产近年来一直处于一种结构性矛盾的困境：一方面原棉产量逐年下降，而库存原棉仍不断增加，造成大量资金积压；另一方面进口棉花数量却不断上升。随着我国加入世界贸易组织，我国原棉的结构性矛盾变得更为突出。能否迅速提高我国棉花品种的纤维产量和品质，直接关系到我国棉花产业的兴衰和纺织品生产加工业的生存与发展。

棉花的产量和品质性状为多基因控制的数量性状，且产量与品质性状之间存在遗传上的负相关。棉花栽培品种主要是陆地棉，而优良纤维品质基因主要源于二倍体的瑟伯氏棉(纤维强度)、异常棉(纤维强度与细度)以及四倍体的海岛棉(纤维强度与细度)等。这些优良性状基因的利用，却在常规育种中受到诸多限制,单靠现有的棉花遗传种质资源和常规育种手段已经难以大幅度提高棉花产量,难以满足快速发展的纺织工艺革命对纤维品质的要求。

利用基因工程技术育种可以打破物种间的遗传障碍，实现优良目的基因的定向转移，同时具有后代易于稳定，育种周期短等优点，这为棉花纤维产量和品质的改良提供了新的途径。但是目前人们还未得到与棉花纤维形成，以及产量和品质(强度、细度和长度等)直接相关的基因,使得利用基因工程改良棉花纤维缺乏有效的目的基因。人们对棉花纤维发生、发育和品质形成的分子机理也知之甚少。这些都极大的阻碍了对棉花纤维进行产量和品质改良的进程。

迄今仅有少数研究在棉花纤维品质改良方面取得了进展。2009年Wang等利用在棉花中下调肌动蛋白解聚因子(GhADF1)的表达，成功提高了转基因棉花纤维长度和强度(Wang,H.,etal.,Down-regulationofGhADF1geneexpressionaffectscottonfibreproperties.PlantBiotechnologyJournal,2009.7(1):p.13-23)。向棉花中导入醋杆菌的纤维素合成的基因acsA和acsB，纤维长度和强度提高约15％，而纤维细度降低了约12％(Li,X.,etal.,ImprovementofcottonfiberqualitybytransformingtheacsAandacsBgenesintoGossypiumhirsutumL.bymeansofvacuuminfiltration.PlantCellReports,2004.22(9):p.691-697)。但是，这些研究仅表明纤维品质得到了改良，产量如何未尝可知。近期，通过在纤维起始阶段的胚珠表皮特异表达来源于农杆菌的生长素合成酶基因iaaM，实现了纤维产量和马克隆值的同步改良(ZhangM,ZhengX,SongS,ZengQ,HouL,LiD,ZhaoJ,WeiY,LiX,LuoM,XiaoY,LuoX,ZhangJ,XiangC,PeiY(2011)Spatiotemporalmanipulationofauxinbiosynthesisincottonovuleepidermalcellsenhancesfiberyieldandquality.NatBiotechnol29:453-458)。尽管这是在基因工程改良棉花纤维产量和品质的重大突破，但该转基因棉花在总产量，纤维长度、强度等方面均和野生型无明显差别。尚有待寻求新的改良方案。

植物激素是植物体内重要的信号物质，调控了几乎所有组织器官的发育进程。在棉花纤维的发育中也有它们的参与。其中就包括重要的植物激素生长素，它主要以吲哚乙酸的形式存在于植物体内。目前研究发现，生长素是促进离体培养的胚珠产生纤维的重要激素(Beasley,C.A.,Hormonalregulationofgrowthinunfertilizedcottonovules.Science,1973.179(4077):p.1003-1005)。在纤维从胚珠表皮分化起始的时候，细胞中会聚集高浓度的生长素，这对纤维细胞的大量产生有促进作用(Zhang,M.,etal.,Spatiotemporalmanipulationofauxinbiosynthesisincottonovuleepidermalcellsenhancesfiberyieldandquality.NatureBiotechnology,2011.29(5):p.453-458)。此外，纤维大量合成纤维素的时候，细胞中生长素含量也会明显提高。这些都表明生长素是调控纤维发育过程中的重要作用(Yang,Y.,etal.,Effectsofplantgrowthregulatorsonsecondarywallthickeningofcottonfibres.PlantGrowthRegulation,2001.35(3):p.233-237)。不仅如此，由于纤维细胞着生于胚珠(种子)表面，是其一部分。纤维细胞和植物主体间的大量物质和能量的交换势必依赖于胚珠进行。因此，胚珠发育的优劣直接关系着纤维发育的状况，影响其产量和品质。大量的研究已经表明，生长素在调控胚珠发育过程中发挥着重要作用(Perrot-Rechenmann,C.,R.M.Napier,andL.Gerald,Auxins,inVitamins&Hormones.2005,AcademicPress.p.203-233)。

尽管如此，利用调控生长素水平改良棉花纤维品质的尝试并非水到渠成。早在1999年JohnME就在纤维中分别特异控制生长素IAA生物合成的两个酶基因iaaM和iaaH表达,实现了纤维细胞中生长素含量的大幅上调(高于野生型2-8倍)，但纤维品质却无显著改良(BasraAS等,1999,CottonFiber,NewYork:FoodProductsPress,271-292)。直到2011年，zhang等才利用胚珠表皮特异启动子调控iaaM基因的表达实现了纤维产量和细度的同步改良(Zhang,M.,etal.,Spatiotemporalmanipulationofauxinbiosynthesisincottonovuleepidermalcellsenhancesfiberyieldandquality.NatureBiotechnology,2011.29(5):p.453-458)。这表明了在调控棉花纤维过程中生长素水平适时、适地、适度调控的重要性，也表明启动子的选择在利用植物激素基因工程改良棉花品种中的显著作用。同时也可以看到单纯利用胚珠表皮特异调控生长素水平的在改良棉花品种方面的局限，种子减小，不能提高总产量，对除马克隆值以外的纤维品质性状无明显改良效果等。这些都有待新的基因工程改良方法予以解决。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为改良棉花的品质提供一种新选择。

本发明的技术方案是表达生长素代谢基因iaaL的载体。

具体的，所述的载体为植物表达载体。

具体的，所述的生长素代谢基因的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。

具体的，所述的生长素代谢基因在AtALP启动子的介导下表达。

具体的，所述AtALP启动子的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。

本发明还提供了含有所述载体的宿主细胞。

本发明还提供了所述的载体在改良棉花中的用途。

本发明还提供了所述的载体在改良棉花种子中的用途。

本发明还提供了所述的载体在改良棉花纤维中的用途。

本发明还提供了所述的载体在提高棉花产量中的用途。

本发明的有益效果：

利用本发明载体对棉花进行改良，产量性状表现为总产量提高、纤维产量提高、子指(百粒种子重)增大、衣指(百粒纤维重)提高；纤维品质性状表现为纤维长度增加、强度提高，同时马克隆值略有下降。本发明通过对生长素代谢基因在棉花中的特异调控，能够实现棉花籽棉产量，纤维产量，种子质量的明显提高。同时，纤维长度、强度提高，马克隆值降低，纤维品质得到明显改良。本发明方法简便易行,效果显著，具有很好的市场前景。

附图说明

图1：植物表达载体构建路线。

植物表达载体p5是从常用植物表达载体pBI121改造获得的一个双元载体，在其右边界(RB)附近有组成型启动子CaMV35S控制的标记基因NPTII和报告基因GUS的融合基因，以及Nos终止子序列。在其左边界(LB)附近有组成型启动子CaMV35S和polyA(具有转录终止的作用)。本发明的载体是将AtALP启动子(pAtALP)调控下的iaaM基因表达元件替换掉其左边界附近的组成型启动子CaMV35S。

图2：AtALP::iaaL转基因棉花iaaL基因的PCR鉴定结果；M:Marker2000；1～7分别为转基因棉花不同单株；NG:野生型gDNA为模板的扩增对照。

图3：AtALP::iaaL转基因棉花开花当天胚珠中iaaL的表达量，纵坐标表示表达量；WT：野生型；AL4：AtALP::iaaL转基因棉花4号转化子。

图4：AtAlp::iaaL转基因棉花和野生型种子比较；WT：野生型；AL4：AtALP::iaaL转基因棉花4号转化子。

具体实施方式

以下结合附图对本发明进行进一步的详细说明，但以下说明并不对本发明进行限定，任何对本发明的变形和改变，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求所定义的范围。

本发明实例中的试剂药品未做具体说明的均为普通市售。材料方法未做具体说明的均参考《分子克隆实验指南》(Sambrook和Russell,2001)。

实施例1本发明载体的构建

1.1基因组DNA的提取

取棉花叶片0.5-1.0g，在液氮中迅速研磨成粉，加入3mL65℃预热的CTAB提取液(100mmol/LTris-HCl(pH8.0)，20mmol/LEDTA(pH8.0)，1.5mol/LNaCl,2％CTAB(W/V)，4％PVP40(W/V)和2％巯基乙醇(V/V)，PVP和巯基乙醇使用前加入)，快速振荡混匀。65℃水浴30min，然后加入1mL5mol/LKAc，冰浴20min后，用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000r/min，4℃离心5min)，取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇，混匀，静置约30min，用玻棒挑出絮状沉淀,用75％的乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重悬于500μLTE中。加入1μLRNaseA(10mg/mL)，37℃处理1h。再用酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000r/min，4℃离心5min)，取上清，乙醇沉淀。沉淀用75％的乙醇漂洗，风干，溶于200μLTE中，-20℃保存备用。

1.2基因组序列的PCR扩增

扩增体系(25μL)如下：10×ExPCRbuffer(Mg²⁺free)2.5μL，2.5mmol/LdNTPs2μL，25mmol/LMgCl22μL，引物1(5μmol/L)1μL，引物2(5μmol/L)1μL，ExTaqDNA聚合酶1U，基因组DNA约60ng，补ddH₂O至25μL。

扩增程序为：94℃，5min；94℃，30sec，56℃，30sec，72℃，1.5min，35个循环；72℃延伸10min。

1.3特异启动子(AtALP)的获得

根据拟南芥铝诱导蛋白(AtALP，GenBank登录号：At5g19140)，设计引物(SEQIDNO.3和SEQIDNO.4)，从拟南芥基因组中PCR扩增获得一个1900bp左右的片段(见序列SEQIDNO.1)，即得到AtALP启动子，来源于拟南芥。主要茎和叶中表达，在果实中表达较低，并且受生长素诱导。

基因组DNA提取及扩增可参照前述1.1和1.2。

SEQIDNO.3：AtALP启动子克隆、构建用上游引物cccgggtagtattctttctttacatttccagttg

SEQIDNO.4：AtALP启动子克隆、构建用下游引物ggtacctttctctctctcctccggtg

SEQIDNO.1：AtALP启动子，来源于拟南芥。主要茎和叶中表达，在果实中表达较低，并且受生长素诱导。

1.4丁香假单孢杆菌iaaL基因的获得

根据丁香假单孢杆菌iaaL基因序列(SEQIDNO.2，GenBank登录号：K02554)由金斯特公司合成iaaL基因置于pUC载体上。同时设计带KpnI和EcoRI酶切位点的引物(见SEQIDNO.5和SEQIDNO.6)从pUC载体上扩增得到iaaL基因序列，用于后续载体构建使用。

SEQIDNO.5：iaaL基因序列克隆、构建用上游引物ggtaccatgactgcctacgatatgg

SEQIDNO.6：iaaL基因序列克隆、构建用下游引物gaattctcagtttcggcggtcgatg

SEQIDNO.2：基因iaaL(GenBank登录号：K02554)，来源于丁香假单孢杆菌，翻译蛋白可以使植物中的生长素IAA失活，转变为IAA-lys，从而达到降低内源生长素水平的目的。

1.5特异表达生长素代谢基因的载体的构建

载体构建流程见图1。所有限制性内切酶购自Roche公司，按照使用说明书应用。

将植物表达载体p5(植物表达载体p5是从常用植物表达载体pBI121改造获得的一个双元载体，在其右边界(RB)附近有组成型启动子CaMV35S控制的基因标记NPTII和报告基因GUS的融合基因，以及Nos终止子序列，在其左边界(LB)附近有组成型启动子CaMV35S和polyA)用HindIII酶切，然后T4聚合酶补平，然后KpnI酶切；扩增得到的特异启动子AtALP经T/A克隆后，用SmaI和KpnI酶切得到AtALP片段，然后将AtALP片段连接到p5上，得到p5-AtALP。

将扩增得到iaaL基因序列经T/A克隆后，KpnI和EcoRI酶切，得到iaaL基因序列片段；p5-AtALP用KpnI和EcoRI酶切，然后与iaaL基因序列片段连接，即得到p5-AtALP-iaaL载体。

实施例2转化棉花

2.1用电激法将构建的植物表达载体质粒导入农杆菌LBA4404。

参考Bio-RADMicroPulser用户说明书，将上述p5-AtALP-iaaL载体通过电激转化法导入农杆菌LBA4404。

2.2特异表达植物激素合成相关基因的载体整合到棉花基因组

通过根癌农杆菌介导的方法进行棉花的遗传转化(转化过程中所用的培养基见表1)，上述的表达载体的T-DNA区段通过农杆菌介导胚性愈伤的方法导入棉花。具体方法如下：

(1)棉花胚性愈伤组织的诱导：棉花种子(冀棉14)剥壳，用0.1％升汞(HgCl₂)消毒10min，无菌水漂洗6次，播种于种子萌发培养基(培养基成分见表1)上。28℃、黑暗条件下萌发5-7天，以获得无菌棉花幼苗。选取生长健壮的无菌幼苗下胚轴，切成长约0.4cm的小段，接种于棉花愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织，28℃,16h光照下培养，每3-4周继代一次。选取松散的愈伤组织接种到胚性愈伤组织诱导培养基上，诱导胚性愈伤组织的产生，28℃，16h光照下培养。

(2)转化农杆菌的培养:挑取含上述表达载体的农杆菌菌株，在含50mg/L卡那霉素和125mg/L链霉素的YEB固体培养基(0.5％蔗糖(W/V)，0.1％细菌用酵母提取物(W/V)，1％细菌用胰化蛋白胨(W/V)，0.05％MgSO₄·7H₂O(W/V)，1.5％的琼脂粉(W/V)pH7.0)上划线培养。挑农杆菌单菌落，接种于5mL含相同抗生素的YEB液体培养基中，28℃、200r/min振荡培养过夜。培养后的农杆菌菌液按1:20的比例转接到50mL含相同抗生素的YEB液体培养基中，继续在28℃、200r/min振荡培养3-5h。6,000r/min离心10min后，菌体用液体MSB(含100μmol/L乙酰丁香酮)培养基重悬，调整OD₆₀₀值为0.3-0.5备用。

(3)浸染和共培养:用无菌吸水纸吸去胚性愈伤组织表面的液体，放入调整好浓度的农杆菌菌液中，浸染20-30min。倾去菌液，将侵染过的胚性愈伤转移到共培养培养基上，于24℃黑暗条件下共培养4天。

(4)转化子的筛选:共培养完成后把胚性愈伤组织转移到筛选培养基上进行脱菌和选择培养，28℃,16h光照下培养,每3周继代一次。1-2个月后大部分愈伤组织褐化死亡，少部分表现出卡那霉素抗性，生长出新鲜的胚性愈伤组织。将愈伤组织块进行继代，每块组织增殖到2.0-3.0g时接入液体悬浮培养基中，在摇床上120r/min振荡悬浮培养以获得大量体胚。悬浮2周后用30目筛网过滤悬浮培养组织，网下沉淀物转接入体胚成熟培养基。萌发的成熟胚转入体胚伸长诱导培养基上，于28℃黑暗条件下培养2周以诱导体胚伸长、萌发。取较大的萌发胚(>0.5㎝)转接入SH培养基成苗,28℃,16h光照下培养。待幼苗长到约2cm高时，剪取幼苗嫁接到有3-4片真叶的棉花幼苗上。

表1根癌农杆菌介导的棉花遗传转化用培养基

上表中：MS:Murashige&Skoog,1962；B5:Gamborg,1986；Gelrite:Sigma,货号:G1910；SH:Schenk&Hildebrandt,1972。

2.3获得纤维性状改良的棉花

嫁接的棉花培养在温室中，常规管理。成熟后收集种子和纤维进行性状分析。获得的转基因棉花在表型和生长发育上与野生型的对照没有明显区别。

实施例3目的基因整合到转基因植株的PCR鉴定

根据丁香假单孢杆菌iaaL基因序列(见SEQIDNO.2，GenBank登录号：K02554)设计引物(见SEQIDNO.7和SEQIDNO.8)，以转基因棉花基因组DNA为模板进行PCR扩增鉴定转化子。鉴定的7个转基因棉花单株均能扩增出一个约500bp左右的片段，而以非转基因棉花gDNA为模板的对照无法扩增出相应片段(图2)。

SEQIDNO.7：转基因植株iaaL基因序列扩增验证、表达量分析用上游引物GAACAAGTCTCCATCGTCG

SEQIDNO.8：转基因植株iaaL基因序列扩增验证、表达量分析用下游引物TTCTGATACGCCTCTTTG

实施例4转基因植株目的基因表达量的筛选

4.1RNA的提取

选取约3g新鲜棉花材料，在液氮中迅速磨成精细粉末，装入50mL离心管，加入15mL65℃预热的RNA提取液(2％CTAB(W/V)，2％PVP(W/V)，100mmol/LTris-HCl(pH8.0)，0.5g/LSpermidine，2,0mol/LNaCl，2％巯基乙醇(V/V，使用前加入)，颠倒混匀。65℃水浴3～10min，期间混匀2～3次。氯仿:异戊醇(24:1)抽提2次(10,000r/min，室温，5min)。取上清，加入1/4体积10mol/LLiCl溶液，4℃放置6h，以氯仿:异戊醇(25:24:1)各抽提1次(10,000r/min，室温，5min)。加2倍体积的无水乙醇，在-70℃冰箱沉淀30min以上。12,000r/min，4℃离心20min，弃上清。沉淀用200μL的DEPC处理水溶解。酚(pH4.5):氯仿:异戊醇(25:24:1)、氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000r/min，室温，5min)。加1/10体积3mol/LNaAc溶液和2.5倍体积的无水乙醇，在-70℃冰箱沉淀30min以上。12,000r/min，4℃离心20min，弃上清。沉淀用70％的酒精漂洗一次，风干。加200μL的DEPC处理水溶解。用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量。

4.2cDNA一链合成

取质量好的RNA约1μg，按照cDNA一链合成试剂盒(ReverAid^TMFirstStrandcDNASynthesisKit,MBI)操作合成。

4.3iaaL基因表达量的实时定量PCR分析

在20μL体系中添加10μL反应预混液(1×iQ^TMSYBRGreenSupermix,Bio-rad)，10μM上、下游引物各1μL，以及1μLcDNA一链合成产物用于表达量分析。仪器为CFX96^TMReal-TimeSystem(Bio-rad)，反应循环参数为95℃预变性3min；94℃，30sec，56℃，30sec，72℃，30sec，40循环。iaaL基因的检测引物为SEQIDNO.7和SEQIDNO.8。用棉花内源组蛋白编码基因His3作为内标，检测引物为SEQIDNO.9和SEQIDNO.10。结果显示，在AtALP::iaaL转基因棉花胚珠中能检测到目的基因iaaL的明显表达，而野生型的阴性对照无明显信号检出(图3)。

SEQIDNO.9：内标基因His3表达量分析用上游引物gaagcctcatcgataccgtc

SEQIDNO.10：内标基因His3表达量分析用下游引物ctaccactaccatcatggc

实施例5田间试验及产量因子统计

AtALP::iaaL转基因棉花和转基因受体棉种冀棉14种植于西南大学转基因基地，随机区组设计，每个株系设置3个小区，常规田间管理。待棉花生长4个月时，统计每株棉花的开花5天后的棉铃数目。棉铃成熟裂开后，分小区采收，进行产量统计。籽棉产量为纤维和种子的总产量；衣分指纤维产量在籽棉产量中所占比重；子指为100粒种子的平均重量；衣指为100粒种子的纤维平均重量。

结果显示(表2)，AtALP::iaaL转基因棉花小区籽棉产量为7.47kg，较野生型提高11.0％。小区纤维产量为2.93kg，比野生型增产11.4％。此外，转基因棉花的铃重、子指(图4)、衣指等指标也都相较野生型有明显提高。

这表明AtALP::iaaL转基因棉花的种子增大，纤维量提高，在提高棉花产量方面具有巨大价值。

表2AtAlp::iaaL转基因棉花实验产量相关结果

实施例6成熟纤维品质检测

将棉纤维样品送农业部棉花品质监督检测测试中心(安阳)，依据ASTMD5867-95《HVI900大容量纤维测试仪试验方法》，采用HFT9000在温度20℃相对湿度65％的环境条件下，对上半部平均长度、整齐度指标、断裂比强度、伸长率、马克隆值5指标进行测试。

结果显示(表3)，AtALP::iaaL转基因棉花纤维长度为31.39mm，比野生型增长0.63mm。纤维强度为32.6cN/tex，比野生型增加1.4cN/tex。同时，转基因棉花的纤维马克隆值为4.70，也比野生型降低了0.19个单位。马克隆值是衡量纤维细度的重要指标。根据国家棉花分级标准，按照马克隆值差异将棉花分为A、B、C三级，B为标准级。A级取值范围在3.7-4.2，品质最好；B级取值范围为3.5-3.6和4.3-4.9；C级取值范围为3.4及以下和5.0及以上，品质最差。野生型棉花的马克隆值为4.89在B级分类的边缘，AtALP::iaaL转基因棉花相比其略有降低，对纤维细度有一定改善。此外，据美国农部专家估计，棉花纤维的马克隆值每降低0.1，可使美国棉农增加0.34亿美元的收入，也表明该转基因棉花在对纤维马克隆的改良具有重要价值。而其它两个指标整齐度和伸长率的测定结果表明，转基因棉花和野生型对照并无明显差别。

这些结果表明，AtALP::iaaL转基因棉花在纤维长度、强度和马克隆值三项品质指标上得到明显改良。

表3AtAlp::iaaL转基因棉花成熟纤维品质

上述实施例表明，本发明通过对生长素代谢基因在棉花中的特异调控，能够实现棉花籽棉产量，纤维产量，种子质量的明显提高。同时，纤维长度、强度提高，马克隆值降低，纤维品质得到明显改良。本发明方法简便易行，效果显著，具有很好的市场前景。

Claims (6)

1.表达生长素代谢基因iaaL的载体，其特征在于：所述的生长素代谢基因在AtALP启动子的介导下表达，生长素代谢基因的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，AtALP启动子的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；所述的载体为植物表达载体；

2.含有权利要求1所述载体的宿主细胞。

3.权利要求1所述的载体在改良棉花性状中的用途。

4.权利要求1所述的载体在改良棉花种子中的用途。

5.权利要求1所述的载体在改良棉花纤维中的用途。

6.权利要求1所述的载体在提高棉花产量中的用途。