CN103333213B

CN103333213B - 从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法

Info

Publication number: CN103333213B
Application number: CN201310312833.7A
Authority: CN
Inventors: 蒋元勇; 文继承; 雍小军; 朱仰辉; 易华
Original assignee: GUILIN MINGXING BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: SANYUAN JINRUI NATURAL INGREDIENTS Co.,Ltd.
Priority date: 2013-07-24
Filing date: 2013-07-24
Publication date: 2015-10-07
Anticipated expiration: 2033-07-24
Also published as: CN103333213A

Abstract

本发明提供了一种从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法，该方法为：取油橄榄叶粉碎，加水煎煮2～3次，每次煎煮至沸腾后维持微沸2～3h，合并煎煮液，过滤，得到滤液；将滤液上大孔吸附树脂柱层析，水洗柱，再用乙醇洗柱，收集乙醇洗脱液；向乙醇洗脱液中加活性炭脱色，过滤，将滤液浓缩成浸膏；将浸膏溶于乙醇，浓缩，趁热加入有机溶剂调节极性，搅拌，冷却，析晶，干燥，即为橄榄苦甙。本发明采用水提法可将植物中橄榄苦甙与其它成分相结合的键断开，让更多的橄榄苦甙溶于水中，提取更完全，大大提高终产品的收率。

Description

从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法

技术领域

本发明涉及植物活性成分的提取方法，具体涉及从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法。

背景技术

油橄榄叶为木犀科木犀榄属油橄榄（Olea europae L.）的叶子，油橄榄叶中含有大量的生物活性物质，如裂环烯醚萜类、黄酮及其苷、双黄酮及其苷、低分子单宁等，其中以裂环烯醚萜类为主要活性物质。裂环烯醚萜类是一类苦涩物质，其活性最高的成分为橄榄苦甙（Oleuropein）。

橄榄苦甙是一种双分子结构酚类和黄酮类物质，具有天然的抗氧化、抗肿瘤、延缓衰老、增强心血管功能、治疗慢性前列腺炎、增强免疫力、调节内分泌系统、护肝、抗炎等重要的保健功能，同时还有降血脂、降血糖的药理作用，广泛应用于食品、化妆和生物制药等领域。橄榄苦甙具有强力的抗细菌和抗病毒特性，可用于制造治疗病毒、细菌、原生动物类、寄生虫和吸血虫等所引起的疾病和治疗感冒的药物。橄榄苦甙还可以保护皮肤细胞不受紫外线的伤害，防止紫外线对皮肤膜脂质的分解，促进纤维细胞生成胶原蛋白，减少纤维细胞胶原酶的分泌，组织细胞膜的抗聚糖反应，从而高度保护纤维细胞，自然抵御因氧化而导致的肌肤破坏，更免受UV紫外线伤害，有效维持肌肤柔嫩与弹性，达到护肤、嫩肤的功效。

目前公开的橄榄苦甙的提取分离技术较多，一般采用醇提或碱提法提取橄榄叶中的有效成分，然后进行上柱层析等一系列分离纯化步骤，得到高纯度的橄榄苦甙。如公开号为CN102702287A的发明专利《从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法》，该方法用pH值为8～10的碱液对橄榄叶进行常温浸提，将所得提取液经分子筛型大孔吸附树脂柱层析，然后用体积浓度为50～80%的乙醇洗柱，收集含目标成分的洗脱液，浓缩干燥，得到低含量的橄榄苦甙；再将低含量的橄榄苦甙用极性值为3.8～4.2的极性溶液溶解，抽滤，滤液浓缩，得到浓缩液；再向浓缩液中加入有机溶剂调节极性，低温条件下放置析出晶体，干燥，得到高纯度的橄榄苦甙。碱液提取时碱会使橄榄苦甙水解成羟基洛醇盐，提取时间越久，水解程度越高，最终产品的收率较低，仅为4%左右。当采用乙醇作为溶媒会将植物中的色素、黄酮类、萜类等物质提取出来，提取液中杂质较多，需要浓缩、离心沉淀之后才能上柱，会增加能耗，提高生产成本，不利于大规模工业化生产。同时，乙醇不易让橄榄苦甙在植物中与其他成分相结合的键完全断开，橄榄苦甙的提取率不高，产品的收率一般在2～3%之间。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法，以该方法制得的橄榄苦甙收率高，纯度大。

本发明提供的技术方案是从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法，包括以下步骤：

1）取油橄榄叶粉碎，加水煎煮2～3次，每次煎煮至沸腾后维持微沸2～3h，合并煎煮液，过滤，得到滤液；

2）将滤液上大孔吸附树脂柱层析，先用不超过1BV的水洗柱，再用体积浓度为60～70%的乙醇洗柱，收集乙醇洗脱液；

3）向乙醇洗脱液中加入其重量1～1.5‰的活性炭，加热回流脱色20～30min，过滤，将滤液浓缩为15～18波美度的浸膏；

4）向浸膏中加入其3～4倍重量的乙醇，搅拌溶解，然后将溶液浓缩至原体积的1/3～1/2，趁热加入有机溶剂调节极性至4.0～4.1，搅拌，静置冷却，析出晶体，干燥，即为橄榄苦甙。

上述方法中：

步骤1）中，油橄榄叶粉碎至10～30目；水的加入量为油橄榄叶重量的6～8倍。

步骤2）中，所述大孔吸附树脂的型号为HPD-100+。HPD-100+型大孔树脂是申请人根据生产实际需求，在原HPD-100型树脂的基础上调整了平均孔径和比表面积两项技术指标参数得到的，HPD-100+型树脂对橄榄苦甙的吸附及解吸附效果更佳。申请人发现，将HPD-100+型树脂层析后的乙醇洗脱液浓缩干燥，即为粗橄榄苦甙，检测其纯度为50～55%、收率可到14～15%。

HPD-100+型树脂是苯乙烯型非极性共聚体，其技术指标参数如下：

1、产品名称：大孔吸附树脂

2、外观：乳白色不透明球状颗粒

3、粒径范围：（60～16目）0.3～1.25mm≥90%

4、含水量：65～75%

5、比表面积：710-750㎡/g；

6、堆积密度：0.65-0.75g/ml(湿态)

7、湿视密度：0.68-0.7g/ml

8、湿真密度：1.03-1.07g/ml

9、平均孔径：

水洗柱时，用不超过1BV的水洗柱，洗脱速度为0.2～0.5BV/h，至洗脱液澄清。乙醇洗脱时，采用体积分数为65～70%的乙醇的洗脱效果最好，因为乙醇洗脱效果随着乙醇体积分数的增加而增加，当乙醇体积分数到达65～70%时，洗脱效果已经达到顶点，再提高乙醇体积分数会造成一定的资源浪费。乙醇的洗脱速度为0.2～0.5BV/h。

步骤4）中，向浸膏中加入乙醇溶解，所采用乙醇的体积浓度为90～95%，作为优选乙醇的体积浓度为95%。这是因为乙醇浓度越高，浸膏溶解效果越好，因此乙醇体积浓度为95%为最优。

采用极性较小的有机溶液来降低溶液的极性至4.0～4.1，此时溶液中橄榄苦甙的溶解度降低而析出，所述有机溶液可以是极性较低的石油醚、乙醚、苯或二甲苯。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1）以水为溶媒，加热煎煮得到的煎煮液冷却后无杂质，不需要经过浓缩的程序就可以直接上柱层析，既节约时间又节省能耗，可降低生产成本。

2）以水为溶媒更易于让油橄榄叶中橄榄苦甙与其他成分相结合的键断开，让更多的橄榄苦甙溶于水中，提取更完全，收率更高。

3）本发明采用HPD-100+型树脂，是在原HPD-100树脂的基础上调整了平均孔径和比表面积两项技术指标参数得到的，对橄榄苦甙的吸附与解吸附效果更强，更有针对性，能进一步提高产品的收率和纯度。

4）本方法工艺简单，成本低廉，适合大规模工业化生产，制得的橄榄苦甙收率高、纯度大，收率可达6%以上、纯度可达95%以上。

具体实施方式

以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。

实施例1

1）取油橄榄叶粉碎至10目，加入油橄榄叶重量6倍的水煎煮2次，每次煎煮至沸腾后维持微沸2h，合并煎煮液，过滤，得到滤液；

2）将滤液上HPD-100+大孔吸附树脂柱层析，上柱流速为0.3BV/h，先用不超过1BV的水洗柱，洗脱速度为0.5BV/h；再用体积浓度为60%的乙醇洗柱，洗脱速度为0.5BV/h，收集含目标成分的乙醇洗脱液；

3）向乙醇洗脱液中加入其重量1‰的活性炭，加热回流脱色20min，过滤，将滤液浓缩至15波美度的浸膏；

4）向浸膏中加入其3倍重量的90v%乙醇，搅拌溶解，然后将溶液浓缩至原体积的1/2，趁热加入石油醚调节极性至4.0，搅拌，静置冷却，析出晶体，干燥，即为橄榄苦甙，检测其纯度为95.12%、收率为6.03%。

实施例2

1）取油橄榄叶粉碎至30目，加入油橄榄叶重量8倍的水煎煮3次，每次煎煮至沸腾后维持微沸3h，合并煎煮液，过滤，得到滤液；

2）将滤液上HPD-100+大孔吸附树脂柱层析，上柱流速为0.5BV/h，先用不超过1BV的水洗柱，洗脱速度为0.5BV/h；再用体积浓度为70%的乙醇洗柱，洗脱速度为0.6BV/h，收集含目标成分的乙醇洗脱液；

3）向乙醇洗脱液中加入其重量1.5‰的活性炭，加热回流脱色30min，过滤，将滤液浓缩为18波美度的浸膏；

4）向浸膏中加入其4倍重量的95v%乙醇，搅拌溶解，然后将溶液浓缩至原体积的1/3，趁热加入乙醚调节极性至4.1，搅拌，静置冷却，析出晶体，干燥，即为橄榄苦甙。检测其纯度为95.65%，收率为6.18%。

实施例3

1）取油橄榄叶粉碎至20目，加入油橄榄叶重量7倍的水煎煮3次，每次煎煮至沸腾后维持微沸2.5h，合并煎煮液，过滤，得到滤液；

2）将滤液上HPD-100+大孔吸附树脂柱层析，上柱流速为0.4BV/h，先用不超过1BV的水洗柱，洗脱速度为0.5BV/h；再用体积浓度为65%的乙醇洗柱，洗脱速度为0.55BV/h，收集含目标成分的乙醇洗脱液；

3）向乙醇洗脱液中加入其重量1.2‰的活性炭，加热回流脱色25min，过滤，将滤液浓缩为16波美度的浸膏；

4）向浸膏中加入其3.5倍重量的95v%乙醇，搅拌溶解，然后将溶液浓缩至原体积的2/5，趁热加入苯调节极性至4.05，搅拌，静置冷却，析出晶体，干燥，即为橄榄苦甙。检测其纯度为96.09%，收率为6.35%。

实施例4

1）取油橄榄叶粉碎至10目，加入其重量10倍的水煎煮2次，每次煎煮至沸腾后维持微沸3h，合并煎煮液，过滤，得到滤液；

2）将滤液上HPD-100+大孔吸附树脂柱层析，上柱流速为0.3BV/h，先用不超过1BV的水洗柱，洗脱流速为0.5BV/h，再用体积浓度为70%的乙醇洗柱，洗脱速度为0.5BV/h，收集含目标成分的乙醇洗脱液；

3）向乙醇洗脱液中加入其重量1.5‰的活性炭，加热回流脱色20min，过滤，将滤液浓缩为18波美度的浸膏；

4）向浸膏中加入其3倍重量的95v%乙醇，搅拌溶解，然后将溶液浓缩至原体积的1/3，趁热加入二甲苯调节极性至4.1，搅拌，静置冷却，析出晶体，干燥，即为橄榄苦甙。检测其纯度为95.38%，收率为6.09%。

Claims

1.从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)取油橄榄叶粉碎，加水煎煮2～3次，每次煎煮至沸腾后维持微沸2～3h，合并煎煮液，过滤，得到滤液；

2)将滤液上HPD-100+型大孔吸附树脂柱层析，先用不超过1BV的水洗柱，再用体积浓度为60～70％的乙醇洗柱，收集乙醇洗脱液；所述HPD-100+型树脂是苯乙烯型非极性共聚体，其技术指标参数如下：

a、产品名称：大孔吸附树脂

b、外观：乳白色不透明球状颗粒

c、粒径范围：(60～16目)0.3～1.25mm≥90％

d、含水量：65～75％

e、比表面积：710-750㎡/g；

f、堆积密度：0.65-0.75g/ml(湿态)

g、湿视密度：0.68-0.7g/ml

h、湿真密度：1.03-1.07g/ml

i、平均孔径：

3)向乙醇洗脱液中加入其重量1～1.5‰的活性炭，加热回流脱色20～30min，过滤，将滤液浓缩为15～18波美度的浸膏；

4)向浸膏中加入其3～4倍重量的乙醇，搅拌溶解，然后将溶液浓缩至原体积的1/3～1/2，趁热加入有机溶剂调节极性至4.0～4.1，搅拌,静置冷却，析出晶体，干燥，即为橄榄苦甙。

2.根据权利要求1所述从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤1)中，将油橄榄叶粉碎至10～30目。

3.根据权利要求1所述从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤1)中，水的加入量为油橄榄叶重量的8～10倍。

4.根据权利要求1所述从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤2)中，滤液上柱流速为0.3～0.5BV/h，水的洗脱流速为0.5BV/h，乙醇的洗脱速度为0.5～0.6BV/h。

5.根据权利要求1所述从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤4)中，乙醇的体积浓度为90～95％。

6.根据权利要求5所述从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法，其特征在于：乙醇的体积浓度为95％。

7.根据权利要求1所述从油橄榄叶中提取橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤4)中，所述有机溶液为石油醚、乙醚、苯或二甲苯。