CN102702287A - 从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法，属于植物活性成分提取技术领域。本发明所述方法为：用pH=8～10的碱液对橄榄叶进行常温浸提，所得提取液进分子筛型大孔吸附树脂柱层析，用体积浓度为50～80%的乙醇洗柱，收集含目标成分的洗脱液，浓缩，干燥，得到低含量的橄榄苦甙；将低含量的橄榄苦甙用极性值为3.80～4.20的极性溶剂溶解，抽滤，滤液浓缩，得到浓缩液；向浓缩液中加入有机溶剂调节其极性，然后置于低温条件下放置析晶，分离出晶体，干燥，得到高纯度的橄榄苦甙。与现有技术相比，本发明所述方法操作简单易控，生产周期短，生产成本低；由本发明所述方法得到的橄榄苦甙纯度高。
Description
技术领域
本发明涉及植物中活性成分的提取方法，具体涉及从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法。
背景技术
橄榄叶为木犀科木犀榄属油橄榄树（Olea europaea L）的叶子。油橄榄树主要分布在欧洲地中海沿岸国家和美国加州地区，50年代少量传入我国，我国西部和西北地区甘肃、陕西、四川、重庆、福建、广西、广东、湖南等省市有引种栽培。现代生物技术分析表明，油橄榄叶中含有大量的生物活性物质(油橄榄叶中主要含有裂环烯醚萜及其苷、黄酮及其苷、双黄酮及其苷、低分子单宁等成分，以裂环烯醚萜类为主要活性成分)，其抗氧化活性成分较橄榄果更为突出,尤其是裂环烯醚萜类(以橄榄苦甙（Oleuropein）为主要成分)主要存在于油橄榄叶中。
橄榄苦甙可以保护皮肤细胞不受紫外线的伤害，防止紫外线对皮肤膜脂质的分解，促进纤维细胞生成胶元蛋白，减少纤维细胞胶元酶的分泌，阻止细胞膜的抗聚糖反应，从而高度保护纤维细胞，自然抵御由氧化而导致肌肤的破坏，更免受UV紫外线伤害，有效维持肌肤柔嫩与弹性，达到扶肤、嫩肤的功效。已有的橄榄叶提取物的公开报道中，橄榄苦甙的含量均不高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种工艺简单、生产周期短且所得产品纯度高的从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法，包括以下步骤：
1)以橄榄叶为原料，加入pH=8～10的碱液于常温下浸提，过滤，收集提取液；
2)提取液进分子筛型大孔吸附树脂柱层析，先用水洗柱，然后用体积浓度为50～80%的乙醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得到低含量的橄榄苦甙；
3)将所得的低含量的橄榄苦甙用极性值为3.80～4.20的极性溶剂溶解，抽滤，滤液浓缩，得到浓缩液；
4)向浓缩液中加入有机溶剂调节其极性，然后置于低温条件下放置析晶，分离出晶体，干燥，得到高纯度的橄榄苦甙。
上述方法中：
步骤1)中，浸提的时间通常为3～5h；所述的碱液可以是氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸氢钠的水溶液；所述碱液的加入量通常为原料重量的3～10倍。该步骤中，进行浸提前，最好是将橄榄叶进行粉碎以提高后续浸提工序中的提取率；粉碎的粒度通常为10～30目。
步骤2)中，所述的分子筛型大孔吸附树脂的型号为LX-20B、LX-2000、SP-850或SP-825。该步骤中，先用水洗柱直至流出液无色，然后再用乙醇洗柱；在用水和乙醇洗柱时，流速一般控制在0.5～2BV/h。
步骤3)中，所述的极性值为3.80～4.20的极性溶剂具体可以是乙酸乙酯、醋酸丁酯或正丁醇等。该步骤中，滤液一般是浓缩至7～10波美。
步骤4)中，所述的有机溶剂为苯、甲苯或二乙醚等，所述有机溶剂的加入量为浓缩液体积的1～3倍。
步骤4)中，所述的低温为0～5℃；放置的时间通常为12～72h。
上述方法中，所述干燥的温度与现有技术相同，通常不超过50℃，一般采用真空减压干燥。
与现有技术相比，本发明所述方法的特点在于：
1、将橄榄叶在常温条件下用碱液浸泡提取，提取过程中不需加热，生产能耗低；
2、整个方法操作简单易控，生产周期短且洗脱剂用量少，进一步降低生产成本；
3、由本发明所述方法得到的橄榄苦甙纯度高，可达95%(HLPC法)以上。
具体实施方式
下面以具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
1)将橄榄叶粉碎至10目，取60kg置于提取罐中，室温下加入300kg、PH=9的碳酸钠水溶液浸泡提取5h，过滤，去除不溶物，收集提取液；
2)提取液进LX-20B分子筛型大孔吸附树脂(树脂重量150kg，进柱流速1.2BV/h)，水洗树脂柱至流出液无色(流速为1.5BV/h)，再用体积浓度为60%的乙醇(用量为350kg)洗柱(流速为1.0BV/h)，用TLC色谱法跟踪检测，收集含有目标成分的洗脱液；洗脱液浓缩至浸膏，干燥，得到低含量的橄榄苦甙；
3)将所得的低含量的橄榄苦甙用25kg乙酸乙酯溶解，抽滤，滤液浓缩至6kg(浓缩液的波美度为7)；
4)向浓缩液中加入18kg甲苯调节浓缩液的极性，然后置于2℃条件下放置20h析晶，抽滤，所得晶体在40℃条件下真空减压干燥，得橄榄苦甙2.8kg。产品外观为淡黄色微小晶体，HPLC法检测含量为95.30%。
实施例2
1)将橄榄叶粉碎至20目，取100kg置于提取罐中，常温下加入1000kg、PH=10的碳酸氢钠水溶液浸泡提取4h，过滤，去除不溶物，收集提取液；
2)提取液进SP-850分子筛型大孔吸附树脂(树脂重量为350kg，进柱流速为1.0BV/h)，水洗树脂柱至流出液无色(流速为1.5BV/h)，再用体积浓度为70%的乙醇(用量为100kg)洗柱(流速为1.0BV/h)，用TLC色谱法跟踪检测，收集含有目标成分的洗脱液；洗脱液浓缩至浸膏，干燥，得到低含量的橄榄苦甙；
3)将所得的低含量的橄榄苦甙用28kg正丁醇加热溶解，冷却，抽滤，滤液浓缩至10kg(浓缩液的波美度为7)；
4)向浓缩液中加入16kg二乙醚调节浓缩液的极性，然后置于3℃条件下放置24h析晶，抽滤，所得晶体在40℃条件下真空减压干燥，得橄榄苦甙4.2kg。产品外观为淡黄色微小晶体，HPLC法检测含量为95.50%。
实施例3
1)将橄榄叶粉碎至10目，取50kg置于提取罐中，常温下加入400kg、PH=8的氢氧化钠水溶液浸泡提取3h，过滤，去除不溶物，收集提取液；
2)提取液进SP-825分子筛型大孔吸附树脂(树脂重量为150kg，进柱流速为1.5BV/h)，水洗树脂柱至流出液无色(流速为1.5BV/h)，再用体积浓度为50%的乙醇(用量为350kg)洗柱(流速为0.5BV/h)，用TLC色谱法跟踪检测，收集含有目标成分的洗脱液；洗脱液浓缩至浸膏，干燥，得到低含量的橄榄苦甙；
3)将所得的低含量的橄榄苦甙用20kg醋酸丁酯加热溶解，冷却，抽滤，滤液浓缩至4kg(浓缩液的波美度为8)；
4)向浓缩液中加入苯7.6kg调节浓缩液的极性，然后置于5℃条件下放置30h析晶，抽滤，所得晶体在35℃条件下真空减压干燥，得橄榄苦甙2.5kg。产品外观为淡黄色微小晶体，HPLC法检测含量为96.10%。
实施例4
1)将橄榄叶粉碎至30目，取200kg置于提取罐中，常温下加入1800kg、PH=9.5的碳酸氢钠水溶液浸泡提取4.5h，过滤，去除不溶物，收集提取液；
2)提取液进LX-2000分子筛型大孔吸附树脂(树脂重量为400kg，进柱流速为2.0BV/h)，水洗树脂柱至流出液无色(流速为1.0BV/h)，再用体积浓度为80%的乙醇(用量为900kg)洗柱(流速为1.0BV/h)，用TLC色谱法跟踪检测，收集含有目标成分的洗脱液；洗脱液浓缩至浸膏，干燥，得到低含量的橄榄苦甙；
3)将所得的低含量的橄榄苦甙用90kg正丁醇加热溶解，冷却，抽滤，滤液浓缩至15kg(浓缩液的波美度为7.6)；
4)向浓缩液中加入27kg二乙醚调节浓缩液的极性，然后置于1℃条件下放置60h析晶，抽滤，所得晶体在30℃条件下真空减压干燥，得橄榄苦甙8.5kg。产品外观为淡黄色微小晶体，HPLC法检测含量为95.10%。
实施例5
1)取10kg橄榄叶置于提取罐中，常温下加入25kg、PH=9的氢氧化钾水溶液浸泡提取4.5h，过滤，去除不溶物，收集提取液；
2)提取液进LX-20B分子筛型大孔吸附树脂(树脂重量为40kg，进柱流速为1.2BV/h)，水洗树脂柱至流出液无色(流速为1.5BV/h)，再用体积浓度为60%的乙醇(用量为100kg)洗柱(流速为1.0BV/h)，用TLC色谱法跟踪检测，收集含有目标成分的洗脱液；洗脱液浓缩至浸膏，干燥，得到低含量的橄榄苦甙；
3)将所得的低含量的橄榄苦甙用5kg乙酸乙酯加热溶解，冷却，抽滤，滤液浓缩至1kg(浓缩液的波美度为7.2)；
4)向浓缩液中加入1kg二乙醚调节浓缩液的极性，然后置于5℃条件下放置32h析晶，抽滤，所得晶体在40℃条件下真空减压干燥，得橄榄苦甙0.3kg。产品外观为淡黄色微小晶体，HPLC法检测含量为96.45%。
Claims (8)
1.从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法，其特征在于包括以下步骤：
1)以橄榄叶为原料，加入pH=8～10的碱液于常温下浸提，过滤，收集提取液；
2)提取液进分子筛型大孔吸附树脂柱层析，先用水洗柱，然后用体积浓度为50～80%的乙醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得到低含量的橄榄苦甙；
3)将所得的低含量的橄榄苦甙用极性值为3.80～4.20的极性溶剂溶解，抽滤，滤液浓缩，得到浓缩液；
4)向浓缩液中加入有机溶剂调节其极性，然后置于低温条件下放置析晶，分离出晶体，干燥，得到高纯度的橄榄苦甙。
2.根据权利要求1所述的从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤1)中，浸提的时间为3～5h。
3.根据权利要求1所述的从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤1)中，所述的碱液为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸氢钠的水溶液。
4.根据权利要求1所述的从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤1)中，所述碱液的加入量为原料重量的3～10倍。
5.根据权利要求1所述的从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤2)中，所述的分子筛型大孔吸附树脂的型号为LX-20B、LX-2000、SP-850或SP-825。
6.根据权利要求1所述的从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤3)中，所述的极性溶剂为乙酸乙酯、醋酸丁酯或正丁醇。
7.根据权利要求1所述的从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤4)中，所述的有机溶剂为苯、甲苯或二乙醚，所述有机溶剂的加入量为浓缩液体积的1～3倍。
8.根据权利要求1所述的从橄榄叶中提取纯化橄榄苦甙的方法，其特征在于：步骤4)中，所述的低温为0～5℃。
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