CN103315127A - 提取水产品下脚料胶原蛋白纤维体制备肠衣的生产工艺 - Google Patents

Abstract

本发明属于农副产品深加工技术领域，公开了一种提取水产品下脚料胶原蛋白纤维体制备肠衣的生产工艺。该工艺主要包括材料的初处理、酶解及灭活、脱腥脱色、蒸发浓缩、胶原浆的制备，此外，该发明公开了材料预处理过程中脱钙的最佳条件，提高了胶原蛋白的提取率。在胶原蛋白提取过程中主要采用中性蛋白酶和风味蛋白酶联合应用的方法，在保证胶原蛋白较高提取率的基础上改善其口感。

Description

提取水产品下脚料胶原蛋白纤维体制备肠衣的生产工艺

技术领域

本发明属于农副产品深加工技术领域，具体而言涉及在水产品下脚料鱼骨、鱼鳞、鱼皮中提取胶原蛋白并将其制成肠衣的工艺。

背景资料

我国是水产大国，水产品拥有广泛的国际市场，被农业部列为重点产业化开发项目。每年我国水产品总产量可达万吨，因此推动了水产品深加工技术的迅速发展，主要包括冷冻干制品、各种鱼糜制品、水产罐头及腌制品等。加工过程产生大量的下脚料，如鱼骨、鱼皮、鱼鳍及一些边角料，约占鱼体重量的30％～50％，其中废弃鱼骨在总废弃物中所占比例最高，约30％～60％。我国每年生产的鱼副产物中，下脚料大约可达到几十万吨，然而这些下脚料并没有得到很好的利用，每年约有万吨的下脚料作为废弃物被丢弃，这不仅造成了资源的浪费，也对环境造成了污染。因此对水产品下脚料的开发利用备受关注。

下脚料并不是废物，其中含有大量的蛋白质和钙盐，如骨骼中含有丰富的蛋白、多肽、氨基酸及钙、磷、镁、铁等物质；鱼鳞中富含胶原蛋白。其中蛋白质主要是胶原蛋白，约占20％-40％，同时，由于下脚料中脂质含量少，因此这样的化学组成比传统的皮类原料更适合于提取胶原蛋白。即可以有效的提高水产品加工的经济效益，同时也解决了口蹄疫、疯牛病可能带来的胶原蛋白安全问题。

胶原是细胞外基质的一种结构蛋白质，分布于机体的各个器官，是生物体内最多、最丰富的蛋白质，相对分子量约在300kDa，最普遍的结构特征是由3条α多肽链组成的三螺旋结构。单条α链上有1000多个氨基酸残基，含有数个“Gly-X-Y”重复序列的多肽片段，是胶原的基本单位。α多肽链自身为左手螺旋构型，而3条链又以右手螺旋的方式交错缠绕着，形成稳定的三螺旋结构。目前，胶原蛋白被广泛的运用于化妆品、保健品和医疗领域，此外，胶原蛋白还可以用于制作人工肠衣、肉类保鲜膜等。

发明内容

本发明的目的在于研究水产品下脚料鱼鳞、鱼骨、鱼皮中胶原蛋白的生物提取方法并将其加工成可食用性肠衣的中试工艺。

由于下脚料中鱼鳞和鱼骨的胶原纤维与羟基磷灰石紧密粘结，提取胶原蛋白前对其进行脱钙处理，可以有利于胶原蛋白的溶出，因此本发明开发了使用柠檬酸对鱼鳞和鱼骨进行脱钙的工艺。并且去除了其中的少量脂肪以及杂蛋白，提高了胶原蛋白的纯度。

本发明考察了柠檬酸浓度对脱钙率的影响，结果显示，脱钙率随着柠檬酸浓度的增加而提高。当柠檬酸质量浓度超过8％(W/W)后，脱钙率的提高幅度趋于平缓，因此选择柠檬酸的浓度为8％(W/W)。

本发明考察了振荡脱钙时间对脱钙率的影响，结果显示振荡脱钙时间对水产品下脚料脱钙率的影响。可以观察到，当柠檬酸质量浓度为8％时，脱钙率随着振荡脱钙时间的增加而升高。当振荡脱钙时间达到2h后，脱钙率的提高趋于平缓，因此选择的震荡脱钙时间为2h。

本发明考察了固液比对脱钙率的影响，准确称取1g鱼鳞，置于锥形瓶中，分别测定固液比为1∶4、1∶8、1∶12、1∶16、1∶20、1∶24、1∶28(W/V单位为g/ml)下的脱钙率，考察固液比对脱钙率的影响，结果显示当固液比为1∶4(W/V单位为g/ml)时，脱钙液与鱼鳞形成较为粘稠的液体，不利于钙离子的脱除，因此鱼鳞脱钙率较低。当脱钙液体积增加，使得鱼麟在脱钙液中更好地分散开，有利于钙离子从鱼鳞表面脱除，因此脱钙率迅速提高。当固液比超过1∶16(W/V单位为g/ml)时，进一步提高固液比不能提高脱钙率。因此固液比为1∶16W/V单位为g/ml较合适。

所以本发明优化后的脱钙工艺为：固液比1∶16(W/V单位为g/ml)，质量浓度为8％柠檬酸中，震荡脱钙2h，脱钙率可达78.6％。

由于本发明提取的胶原蛋白用于制作可食性肠衣，添加风味蛋白酶可以提高肠衣的口感，因此，我们在提取胶原蛋白的过程中添加风味蛋白酶。本发明主要研究中性蛋白酶复合蛋白酶浓度、温度、提取时间、固液比等因素对胶原蛋白提取率的影响。

中性蛋白酶水解时间的确定，将脱钙、除脂、粉碎后的水产品下脚料加水稀释到6％(W/V g/ml)，温度升至50℃，pH7.0的条件下，按酶与底物的质量比(E/S)4％加入中性蛋白酶，按酶与底物的质量比2％加入风味蛋白酶进行水解，每隔30min吸出2ml胶原蛋白提取液测定其中羟脯氨酸的含量，以确定最佳水解时间，结果显示反应初始阶段水解速度较快，羟脯氨酸的含量增长迅速，2h后水解度增长缓慢，3h后更慢，水解度变化不大。故选择水解时间3h。

中性蛋白酶用量的确定，在水解时间确定为3h，其它条件固定不变的情况下，改变中性蛋白酶的酶用量，分别加入1％、2％、3％、4％、6％、8％的中性蛋白酶，考察中性蛋白酶不同的加酶量对水解度的影响。结果显示随着加酶量的增大，水解度增加较大，到加酶量为4％时水解度增大很缓慢，因此从节约成本和提高效率两方面考虑，选择E/S为4％。

底物浓度的确定，在水解时间为3h，加酶量为4％，其它条件固定的情况下，改变底物浓度，考察不同底物浓度对水解度的影响，结果显示底物浓度过低时，能作用的底物有限，所以水解度也很低，底物浓度过高时，造成水解液粘度增加，影响酶的扩散，反而不利于水解，选取8％的底物浓度最为适宜。

中性蛋白酶酶解温度的确定，在水解时间为3h，加酶量为4％，底物浓度为8％，酶解pH值固定的情况下，改变酶解温度，分别设为30℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、70℃，考察不同酶解温度对水解度的影响，结果显示，温度对酶解效果的影响非常大，温度过低时酶的活性没有完全发挥，使得水解度较低，温度过高时酶失活的较快，不利于水解。结果显示水解温度为50℃时水解效果最好。

中性蛋白酶水解pH的确定，在水解时间为3h，加酶量为4％，底物浓度为8％，酶解温度为50℃的条件下，改变水解液的pH条件，pH值设为6、6.5、7、7.5、8，考察不同pH对水解度的影响。结果中性蛋白酶在水解脱钙后的鱼鳞时pH值为7时的水解效果最好。

所以本发明确定了复合蛋白酶工作时最佳条件为：按酶与底物质量比加入4％中性蛋白酶，加入2％风味蛋白酶进行水解，底物浓度8％，温度50℃，pH7.0，酶水解时间3h。

通过上述研究，本发明所述的提取水产品下脚料胶原蛋白纤维体制备肠衣的生产工艺包括以下步骤：

1、水产品下脚料的初处理：将新鲜的或解冻的冷冻鱼皮分拣，将鱼鳞和鱼骨与鱼皮分离；分离后的鱼鳞和鱼骨浸泡在50℃温水中10～30min，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，之后用柠檬酸浸泡、振荡脱钙2小时，其中柠檬酸的浓度优选8％(w/w)，鱼鳞和鱼骨与柠檬酸的比例优选1∶16(W/V单位为g/ml)，之后用清水冲洗至中性，沥干粉碎备用；将去杂后的鱼皮浸入50℃温水中10～30分钟，去除表面的粘性物质及脂肪，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，将沥干后的鱼皮粉碎；

2、酶解及灭活：将粉碎后的鱼鳞和鱼骨与粉碎后的鱼皮混合均匀后，加水稀释到8％，在搅拌器上预热至50℃，用30％(w/v g/ml)的氢氧化钠调节PH7.0，按下脚料的投料重量的4％加入中性蛋白酶，按下脚料的投料重量的2％加入风味蛋白酶进行水解，恒温50℃左右，在搅拌器搅拌的条件下反应3h，然后加热至80℃反应5min。

3、脱腥脱色：在灭酶后加入下脚料的投料重量0.5％～1.5％的复合活性炭搅拌40～60min进行脱色脱腥，过滤得脱腥脱色后的鱼胶原蛋白上清液；

4、蒸发浓缩：将步骤3得到的鱼胶原蛋白上清液，在旋转蒸发仪上蒸发浓缩至原体积的25～30％，即得鱼胶原蛋白浓缩液，调节鱼胶原蛋白浓缩液的PH值至PH7～9，在高速匀浆条件下，加入乙醇，沉淀鱼胶原蛋白，过滤收集沉淀的鱼胶原蛋白，并用沉淀蛋白重量2～4倍的水溶解沉淀的鱼胶原蛋白，得到鱼胶原蛋白溶解液。

5、胶原浆的制备：鱼胶原蛋白溶解液在250Mpa压力下，用孔径为0.5mm的过滤机孔板过滤净化，然后加入3％～3.5％(w/w)可食性竹纤维素，3％～3.5％(w/w)食用甘油，1.5～2.5％(w/w)食用明胶和10％(w/w)柠檬酸，搅拌混合均匀，4℃冷藏10h以上备用。进入高速旋刀搅拌器，在搅拌器切刀旋速为2000rpm/min下，搅拌20min，形成胶原蛋白纤维体。在磁力线的作用下迅速冷冻，然后在-10℃下冷藏。

6、采用国外进口的制肠设备，把胶原蛋白纤维体升温至4℃，直接用于红肠、香肠等的生产。

附图说明

图1钙标准曲线；

图2酸浓度对脱钙率的影响；

图3振荡脱钙时间对脱钙率的影响；

图4固液比对脱钙率的影响；

图5羟脯氨酸标准曲线；

图6酶法提取胶原蛋白提取时间的确定；

图7酶法提取胶原蛋白加酶量的确定；

图8酶法提取胶原蛋白底物浓度的确定；

图9酶法提取胶原蛋白酶解温度的确定；

图10酶法提取胶原蛋白水解pH的确定。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明的保护范围不限于此。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例一水产品下脚料的清洗和脱脂

收集新鲜的水产品下脚料，分检、去杂后浸泡在50℃温水中10～30min，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干待用。用粉碎机将沥干后的鱼鳞、鱼骨和鱼皮分别粉碎；

实施例二鱼鳞和鱼骨的脱钙工艺研究

将实施例1中得到的鱼鳞和鱼骨，以脱钙率为指标研究鱼鳞和鱼骨的脱钙工艺。

(1)钙标准曲线绘制

首先配制2mg/ml钙标准溶液：准确称取110℃下烘干至恒重的无水碳酸钙5.00g于100ml烧杯中，加入少量蒸馏水，滴加1mol/L的盐酸溶液，直至完全溶解。定容至1L，摇匀备用。此溶液含钙离子的浓度为2mg/ml。

准确吸取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、6.00ml钙标准溶液，用0.01mol/L的EDTA标准溶液滴定。绘制钙标准曲线，求取钙标准回归方程为y＝2.507x-0.003，回归系数R²＝0.999。

(2)鱼鳞脱钙率的测定

准确称取1g鱼鳞，置于50ml锥形瓶中，加入一定浓度、体积的盐酸溶液后，振荡脱钙。一定时间后，过滤脱钙液至50ml容量瓶中。用水定容，摇匀备用。

准确吸取1.00ml上述脱钙液于锥形瓶中，记录EDTA消耗体积。根据钙标准回归方程计算脱钙液中的钙离子浓度，并计算脱钙率。

(3)单因素试验

①酸浓度对脱钙率的影响

准确称取1g鱼鳞和鱼骨粉碎颗粒，置于50ml锥形瓶中，分别加入质量浓度为2％，4％，6％，8％，10％、12％(W/W)的柠檬酸溶液，振荡脱钙，测定脱钙率，结果如图2所示。

由图2中可以看出，脱钙率随着柠檬酸浓度的增加而提高。当柠檬酸质量浓度超过8％(W/W)后，脱钙率的提高幅度趋于平缓，因此选择柠檬酸的浓度为8％(W/W)。

②振荡脱钙时间对脱钙率的影响

准确称取1g鱼鳞和鱼骨粉碎颗粒，置于锥形瓶中，加入一定量质量浓度为8％(W/W)柠檬酸溶液，分别振荡脱钙0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h、3h，考察振荡脱钙时间对脱钙率的影响，结果如图3所示。

由图3中可以看出，振荡脱钙时间对鱼鳞和鱼骨脱钙率的影响。可以观察到，脱钙率随着振荡脱钙时间的增加而升高。当振荡脱钙时间达到2h后，脱钙率的提高趋于平缓，因此选择的震荡脱钙时间为2h。

③固液比对脱钙率的影响

准确称取1g鱼鳞和鱼骨粉碎颗粒，置于锥形瓶中，分别测定固液比为1∶4、1∶8、1∶12、1∶16、1∶20、1∶24、1∶28(W/V单位为g/ml)下的脱钙率，考察固液比对脱钙率的影响，结果如图4所示。

由图4中可以看出，固液比对脱钙效果影响显著。当固液比为1∶4(W/V单位为g/ml)时，脱钙液与底物形成较为粘稠的液体，不利于钙离子的脱除，因此鱼鳞和鱼骨的脱钙率较低。当脱钙液体积增加，有利于钙离子从鱼鳞表面脱除，因此脱钙率迅速提高。当固液比超过1∶16W/V单位为g/ml时，进一步提高固液比不能提高脱钙率。因此固液比为1∶16W/V单位为g/ml较合适。

因此，优化后的脱钙工艺为：固液比1∶16(W/V单位为g/ml)，质量浓度为8％柠檬酸中，震荡脱钙2h，脱钙率可达78.6％，缩短了脱钙时间，提高了脱钙的效率。

实施例三水产品下脚料中胶原蛋白的提取工艺研究

本发明主要以胶原蛋白提取率为指标研究：蛋白酶浓度、温度、提取时间、固液比等因素对提取率的影响。并确定酶法提取最佳工艺。

(1)羟脯氨酸标准曲线绘制

参照Woessnert比色法，对前处理过程中，各种不同处理条件下所制得的胶原蛋白溶液中羟脯氨酸的含量进行测定。

羟脯氨酸标准溶液：准确称取L-羟脯氨酸标准品100mg，加入0.01mol/L盐酸中溶解，稀释并定容到100ml，在冰箱中保存，使用前稀释。

柠檬酸缓冲液：柠檬酸钠120g、冰醋酸12ml、柠檬酸46g、氢氧化钠34g溶解于蒸馏水中，调整pH值至6.0，然后定容至1000ml。

氯胺T溶液：称取氯胺T1.4g，溶于20ml蒸馏水中，加入30ml乙二醇独甲醚和50ml柠檬酸缓冲液混合均匀。因氯胺T不稳定，必须在使用前配制。

对二甲基氨基苯甲醛溶液：20g对二甲基氨基苯甲醛，用乙二醇独甲醚溶解并加至总量为100ml，冷藏保存，有结晶析出时使用前需加热溶解。

高氯酸溶液：70％高氯酸27ml，以蒸馏水定容到100ml。

羟脯氨酸标准曲线的绘制：将羟脯氨酸标准溶液稀释成7个不同的浓度梯度，分别为：1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0μg/ml，以蒸馏水为空白对照，分别吸取上述溶液1ml，加入1ml柠檬酸缓冲液和1ml氯胺T溶液，混匀后室温静置20min，加入高氯酸1ml，放置5min，加入对二甲基氨基苯甲醛试剂1ml、混匀，65℃水浴显色10min，冷却后在561nm处测吸光度。以吸光度为纵坐标，羟脯氨酸浓度为横坐标绘制标准曲线。

(2)胶原蛋白的提取率的测定

①原材料中羟脯氨酸含量的测定

称取4g原材料(精确至0.001g)于锥形瓶中，加入6mol/L HCI溶液10ml，抽真空充氮，105℃水解24h，水解完成后过滤定容至250ml，取其中1ml，调pH值到6.0，再定容至250ml，按上述方法测定吸光度并从标准曲线上查找对应的羟脯氨酸的吸光度，代入回归方程，求取样品中羟脯氨酸的浓度。再按照如下公式计算原材料中羟脯氨酸的含量。

$w_1-\frac{c1\×250\×250}{m1}$

式中：w₁-原材料中羟脯氨酸的含量，mg/g

c₁-样品液中羟脯氨酸的浓度，mg/ml

m₁一原材料的质量，g。

②胶原蛋白提取液中羟脯氨酸含量的测定

称取一定质量的原材料提取胶原蛋白后，定容胶原蛋白提取液(体积v)。移取2ml溶液于锥形瓶中，加入10ml浓度为6mol/L的盐酸溶液中，抽真空充氮，105℃水解24h后稀释至50ml。取其中5ml溶液，用浓度为20％的NaOH溶液调至pH＝6.0，定容至50ml。测定样品液中羟脯氨酸的浓度C，计算提取液中羟脯氨酸的含量。

$w2=\frac{c2\×50\×50\×v}{m2\×2\×5}$

式中：w₂-取液中羟脯氨酸的含量，mg/g

c₂一样品液中羟脯氨酸的浓度，mg/ml

v一胶原蛋白提取液的体积，ml

m₂-原材料的质量，g。

③原材料胶原蛋白提取率的计算

胶原蛋白的提取率可通过下式计算：

式中：k一原材料中胶原蛋白的提取率，％

w₁-原材料中羟脯氨酸的含量，mg/g

w₂-提取液中羟脯氨酸的含量，mg/g。

(3)单因素试验

由于提取的胶原蛋白用于制作可食性肠衣，添加风味蛋白酶可以提高肠衣的口感，因此，我们在提取胶原蛋白的过程中添加风味蛋白酶。

影响酶水解效果的因素很多，如水解温度、pH值、底物浓度、酶用量、反应时间等，即使同一种酶在水解不同底物时，水解的条件也不尽相同。因此，本发明主要探讨蛋白酶浓度、温度、提取时间、固液比等因素对提取率的影响。并利用正交实验确定酶法提取最佳工艺。

①提取时间的确定

将脱钙、除脂、粉碎后的鱼骨、鱼鳞和鱼皮颗粒加水稀释到6％(W/V g/ml)，温度升至50℃，pH7.0的条件下，按酶与底物的质量比(E/S)4％加入中性蛋白酶，按酶与底物的质量比2％加入风味蛋白酶进行水解，每隔30min吸出2ml胶原蛋白提取液测定其中羟脯氨酸的含量，以确定最佳水解时间，结果如图6所示。

由图6可以看出，反应初始阶段水解速度较快，羟脯氨酸的含量增长迅速，2h后水解度增长缓慢，3h后更慢，水解度变化不大。故选择水解时间3h。

②加酶量的确定

在水解时间确定为3h，其它条件固定不变的情况下，改变中性蛋白酶的酶用量，分别加入1％、2％、3％、4％、6％、8％的中性蛋白酶，考察中性蛋白酶不同的加酶量对水解度的影响。结果如图7所不。

由图7可以看出，随着加酶量的增大，水解度增加较大，到加酶量为4％时水解度增大很缓慢，因此从节约成本和提高效率两方面考虑，选择E/S为4％。

④底物浓度的确定

在水解时间为3h，加酶量为4％，其它条件固定的情况下，改变底物浓度，考察不同底物浓度对水解度的影响，结果如图8所示。

由图8可以看出，底物浓度过低时，能作用的底物有限，所以水解度也很低，底物浓度过高时，造成水解液粘度增加，影响酶的扩散，反而不利于水解。如图选取8％的底物浓度最为适宜。

⑤酶解温度的确定

在水解时间为3h，加酶量为4％，底物浓度为8％，酶解pH值固定的情况下，改变酶解温度，分别设为30℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、70℃，考察不同酶解温度对水解度的影响，结果如图9所示。

由图9可以看出，温度对酶解效果的影响非常大，温度过低时酶的活性没有完全发挥，使得水解度较低，温度过高时酶失活的较快，不利于水解。实验过程中还发现温度高可缩短有效水解时间，提高水解效率。如图9选水解温度为50℃。

⑥水解pH的确定

在水解时间为3h，加酶量为4％，底物浓度为8％，酶解温度为50℃的条件下，改变水解液的pH条件，pH值设为6、6.5、7、7.5、8，考察不同pH对水解度的影响。结果如图10所示。

由图10可以看出，pH值对酶解效果的影响也非常大。中性蛋白酶水解原材料时，在pH值为中性时水解度较大、水解效果好，偏酸和偏碱的环境中水解度较小。这是因为在酸性和碱性环境中酶迅速失活，水解效果差。中性蛋白酶在水解脱钙后的鱼鳞时pH值为7时的水解效果最好。

所以本发明确定了复合蛋白酶工作时最佳条件为：按酶与底物质量比加入4％中性蛋白酶，按酶与底物质量比加入2％风味蛋白酶进行水解，底物浓度8％，温度50℃，pH7.0，酶水解时间3h。

实施例四鱼下脚料胶原蛋白的提取及肠衣的制备

1、水产品下脚料的分选：将新鲜的或解冻的冷冻鱼皮分拣，将鱼鳞和鱼骨与鱼皮分离；分离后的鱼鳞和鱼骨浸泡在50℃温水中10～30min，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，之后用柠檬酸浸泡、振荡脱钙2小时，其中柠檬酸的浓度为8％(w/w)，鱼鳞和鱼骨与柠檬酸的比例为1∶16(W/V单位为g/ml)，之后用清水冲洗至中性，沥干粉碎备用；将去杂后的鱼皮浸入50℃温水中10～30分钟，去除表面的粘性物质及脂肪，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，将沥干后的鱼皮粉碎；

2、酶解及灭活：将粉碎后的鱼鳞和鱼骨与粉碎后的鱼皮混合均匀后，加水稀释到8％，在搅拌器上预热至50℃，用30％的氢氧化钠调节PH7.0，按下脚料的投料重量的4％加入中性蛋白酶，按下脚料的投料重量的2％加入风味蛋白酶进行水解，恒温50℃左右，在搅拌器搅拌的条件下反应3h，然后加热至80℃反应5min。

3、脱腥脱色：在灭酶后加入下脚料的投料重量0.5％～1.5％的复合活性炭搅拌40～60min进行脱色脱腥，过滤得脱腥脱色后的鱼胶原蛋白上清液；

4、蒸发浓缩：将步骤4得到的鱼胶原蛋白上清液，在旋转蒸发仪上蒸发浓缩至原体积的25～30％，即得鱼胶原蛋白浓缩液，调节鱼胶原蛋白浓缩液的PH值至PH7～9，在高速匀浆条件下，加入乙醇，沉淀鱼胶原蛋白，过滤收集沉淀的鱼胶原蛋白，并用沉淀蛋白重量2～4倍的水溶解沉淀的鱼胶原蛋白，得到鱼胶原蛋白溶解液。

5、胶原浆的制备：鱼胶原蛋白溶解液在250Mpa压力下，用孔径为0.5mm的过滤机孔板过滤净化，然后加入3％～3.5％(w/w)可食性竹纤维素，3％～3.5％(w/w)食用甘油，1.5～2.5％(w/w)食用明胶和10％(w/w)柠檬酸，搅拌混合均匀，4℃冷藏10h以上备用。进入高速旋刀搅拌器，在搅拌器切刀旋速为2000rpm/min下，搅拌20min，形成胶原蛋白纤维体。在磁力线的作用下迅速冷冻，然后在-10℃下冷藏。

6、采用国外进口的制肠设备，把胶原蛋白纤维体升温至4℃，直接用于红肠、香肠等的生产。

Claims (7)

1.一种从水产品下脚料中提取胶原蛋白并制备胶原浆的方法，包括：1)水产品下脚料的初处理，2)酶解及灭活，3)脱腥脱色，4)蒸发浓缩，5)胶原浆的制备；

其中所述的1)水产品下脚料的初处理为：将新鲜的或解冻的冷冻鱼皮分拣，将鱼鳞和鱼骨与鱼皮分离；分离后的鱼鳞和鱼骨浸泡在50℃温水中10～30min，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，之后用柠檬酸浸泡、振荡脱钙2小时，之后用清水冲洗至中性，沥干粉碎备用；将去杂后的鱼皮浸入50℃温水中10～30分钟，去除表面的粘性物质及脂肪，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，将沥干后的鱼皮粉碎；

其中所述的2)酶解及灭活方法为：将粉碎后的鱼鳞和鱼骨与粉碎后的鱼皮混合均匀后，加水稀释到8％(w/w)，在搅拌器上预热至50℃，用30％(w/v g/ml)的氢氧化钠调节PH7.0，按下脚料的投料重量的4％加入中性蛋白酶，按下脚料的投料重量的2％加入风味蛋白酶进行水解，恒温50℃左右，在搅拌器搅拌的条件下反应3h，然后加热至80℃反应5min；

其中所述的3)脱腥脱色方法为：在灭酶后加入复合活性炭搅拌40～60min进行脱色脱腥，过滤得脱腥脱色后的鱼胶原蛋白上清液；

其中所述的4)蒸发浓缩方法为：将步骤3)得到的鱼胶原蛋白上清液，在旋转蒸发仪上蒸发浓缩至原体积的25～30％，即得鱼胶原蛋白浓缩液，调节鱼胶原蛋白浓缩液的PH值至PH7～9，在高速匀浆条件下，加入乙醇，沉淀鱼胶原蛋白，过滤收集沉淀的鱼胶原蛋白，并用沉淀蛋白重量2～4倍的水溶解沉淀的鱼胶原蛋白，得到鱼胶原蛋白溶解液；

其中所述的5)胶原浆的制备方法为：鱼胶原蛋白溶解液在250Mpa压力下，用孔径为0.5mm的过滤机孔板过滤净化，然后加入3％～3.5％(w/w)可食性竹纤维素，3％～3.5％(w/w)食用甘油，1.5～2.5％(w/w)食用明胶和10％(w/w)柠檬酸，搅拌混合均匀，4℃冷藏10h以上备用；进入高速旋刀搅拌器，在搅拌器切刀旋速为2000rpm/min下，搅拌20min，形成胶原蛋白纤维体；在磁力线的作用下迅速冷冻，然后在-10℃下冷藏；

2.如权利要求1所述的一种从水产品下脚料中提取胶原蛋白并制备胶原浆的方法，其特征在于，所述的水产品下脚料为鱼鳞、鱼骨鱼皮中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的一种从水产品下脚料中提取胶原蛋白并制备胶原浆的方法，其特征在于，所述的柠檬酸浓度为8％(w/w)。

4.如权利要求1所述的一种从水产品下脚料中提取胶原蛋白并制备胶原浆的方法，其特征在于，步骤1)所述的鱼鳞和鱼骨浸泡在柠檬酸中，鱼鳞和鱼骨与柠檬酸的比例为1∶16(W/V单位为g/ml)。

5.如权利要求1所述的一种从水产品下脚料中提取胶原蛋白并制备胶原浆的方法，其特征在于，步骤3)中加入复合活性炭的重量为下脚料的投料重量0.5％～1.5％。

6.根据权利要求1所述的方法制得的胶原浆在制备红肠中的应用。

7.根据权利要求1所述的方法制得的胶原浆在制备香肠中的应用。

Images