CN103285031B - 解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用 - Google Patents

解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103285031B
CN103285031B CN201210306680.0A CN201210306680A CN103285031B CN 103285031 B CN103285031 B CN 103285031B CN 201210306680 A CN201210306680 A CN 201210306680A CN 103285031 B CN103285031 B CN 103285031B
Authority
CN
China
Prior art keywords
sea cucumber
glycosaminoglycan extracted
depolymerization
weight
extracted
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201210306680.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103285031A (zh
Inventor
王志国
刘全海
董玉琼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HARBIN HONGDOUSHAN BIO-PHARM Co Ltd
SHANGHAI KAIRUN BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Original Assignee
HARBIN HONGDOUSHAN BIO-PHARM Co Ltd
SHANGHAI KAIRUN BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by HARBIN HONGDOUSHAN BIO-PHARM Co Ltd, SHANGHAI KAIRUN BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical HARBIN HONGDOUSHAN BIO-PHARM Co Ltd
Priority to CN201210306680.0A priority Critical patent/CN103285031B/zh
Priority to US14/383,376 priority patent/US9539271B2/en
Publication of CN103285031A publication Critical patent/CN103285031A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103285031B publication Critical patent/CN103285031B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/616—Echinodermata, e.g. starfish, sea cucumbers or sea urchins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0066—Isolation or extraction of proteoglycans from organs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞性疾病药物中的应用，所述解聚海参糖胺聚糖的重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖中的一种以上。以重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖为活性成分的药物，静脉或皮下注射时，具有显著抗凝血作用的同时，副作用小、有效地用于预防和治疗血栓栓塞性疾病。分子量为26,000Da～45000Da的解聚海参糖胺聚糖的注射剂，随着剂量增加凝血时间延长抗凝血作用增强，采用皮下注射给药，经皮下给药更有利于药物使用，同时增加了药物使用的方便性和安全性。

Description

解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用
技术领域
本发明涉及一种解聚海参糖胺聚糖的医药用途，具体涉及重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞性疾病药物中的应用，包括了动脉粥样硬化血栓性疾病和静脉血栓栓塞性疾病，以及防治手术后的血栓药物中的应用。
背景技术
中老年人群体血粘稠度常逐渐增加，血小板聚集带生血栓(如冠状动脉、脑动脉)的可能性增大，血栓栓塞性疾病已经成为一种严重威胁人类特别是中老年人健康的常见的疾病。血栓形成，是导致心肌梗死和中风等动脉疾病以及静脉血栓栓塞性疾病发生和患者死亡的主要原因。防治血栓形成药物可按作用机制分为抗凝血药物、抗血小板药物和直接溶血栓药物等，临床上均能用于预防和治疗血栓形成。其中抗凝药物是通过影响凝血因子，从而防止血栓形成或复发。抗凝药物对已经形成的血栓无溶解作用，但可以防止血栓扩展和新血栓形成，有利于促进血栓早期自溶。现有的抗凝药种类繁多，但大多数是西药抗凝药且其副作用较大，使用时需反复检测血凝状况，以免引起出血，另外给药方式繁复，更重要的是该类抗凝药物存在着安全隐患。例如目前使用广泛的抗凝药物肝素、低分子肝素、法华林等使用过程需要检测血凝状况，过量或者不同体质的人使用易致各种出血，存在严重安全隐患。
因此，鉴于人口的老龄化、心血管疾病发病率的增加，以及现有抗凝药物在临床用于血栓栓塞性疾病预防和治疗的广泛性以及其安全隐患的严重性。从中药中筛选、分离更具疗效性、安全性防治血栓栓塞性疾病，是预防和治疗血栓栓塞性疾病一种必然趋势。
发明内容
本发明的目的是提供一种解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用，以克服现有技术存在的上述缺陷，满足临床应用的需要。
动物试验证明，重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖中的一种以上，可用于预防动脉粥样硬化血栓性疾病，可用于治疗动脉粥样硬化血栓性疾病，可用于静脉血栓栓塞性疾病，可用于治疗静脉血栓栓塞性疾病，以及用于预防手术后的血栓形成或治疗手术后的血栓；
因此，所述重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖中的一种以上，可用于制备预防动脉粥样硬化血栓性疾病和静脉血栓栓塞性疾病的药物，可用于制备治疗动脉粥样硬化血栓性疾病和静脉血栓栓塞性疾病的药物，以及用于制备预防手术后的血栓形成的药物，或者用于制备治疗手术后血栓的药物；
所述药物，包括重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖中的一种以上和药学上可接受的载体，为静脉或皮下注射给药的注射液或者是冻干粉针剂；
所述药物中，所述解聚海参糖胺聚糖的重量含量为90～99.90%，优选92%以上，为了达到更理想的效果更优选95%以上；
所述的解聚海参糖胺聚糖的多分散度为1~2，优选1~1.5，更优选1~1.4；
所述多分散度指的是本领域常用的衡量聚合物分子量分布的指数，用于表征聚合物分子量分布的宽度。多分散度在本文或其他文献中又被称多分散指数、多分散性或分布宽度指数，是重均分子量(Mw)与数均分子量(Mn)之比，即Mw／Mn。这个比值随分子量分布宽度而变化。在单分散时，Mw／Mn等于1，随着分子量分布变宽，Mw／Mn值逐渐变大。
皮下注射给药量为大鼠10mg/kg～70mg/kg，优选20mg/kg～50mg/kg；
静脉注射给药量为大鼠0.5mg/kg～20mg/kg，优选0.8mg/kg～15mg/kg；
所述药学上可接受的载体选自甘露醇、乳糖、右旋糖酐、葡萄糖、甘氨酸、水解明胶、聚维酮或氯化钠的一种以上，优选甘露醇；
所述的重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖可采用商业化产品，如哈尔滨红杉生物制药有限公司生产的解聚海参糖胺聚糖，或采用如中国专利ZL200910305363.5报导的方法，或采用如下的方法制备：
（1）将酶加入绞碎的海参，在进行、酶解和沉淀，收集海参糖胺聚糖粗品，对海参糖胺聚糖粗品进行纯化和脱色，收集海参糖胺聚糖；
所述海参选自玉足海参、黑海参、糙海参、梅花参、二色桌片参或白底辐肛参中的一种以上，优选玉足海参；
所述的酶为水解蛋白酶和复合胰酶，水解蛋白酶可采用商业化产品，如诺维信（沈阳）生物技术有限公司的Alcalase，复合胰酶可采用商业化产品，如无锡市雪梅酶制剂科技有限公司的雪梅牌复合胰酶，水解蛋白酶的用量为海参重量的2%，复合胰酶的用量为海参重量的2%；
（2）将重量浓度为5～10%的双氧水加入步骤（1）的产物降解，收集重均分子量为26,000Da～45000Da的解聚海参糖胺聚糖；
所述药物的制备方法，为制剂领域常规的方法，如《中药制剂手册》记载的方法，获得所述的注射液或冻干粉针剂；
本发明的含有解聚海参糖胺聚糖药物可通过皮下注射或者静脉注射的方法施加于需要治疗的患者，给药剂量由医师根据患者的具体情况（如年龄、体重、性别、患病时间、身体状况等）确定。一般而言，以解聚海参糖胺聚糖计，皮下注射给药剂量为5～70mg/kg，优选10～50mg/kg，静脉给药的给药剂量为0.5～20mg/kg，优选0.8～15mg/kg。
经大量实验研究表明，海参糖胺聚糖的抗凝血活性重要的特性是随着剂量增加抗凝血活性递增缓和不易出血，因此相对于肝素及低分子肝素其抗凝血活性具有显著优越的安全性。可更安全的用于防治血栓栓塞性疾病，包括了动脉粥样硬化血栓性疾病和静脉血栓栓塞性疾病（如心肌梗塞、血栓性静脉炎、肺栓塞等），以及可用于防治手术后血栓栓塞。
经大量实验研究表明，以重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖为活性成分的药物，皮下注射时，具有显著抗凝血作用的同时，不具有或者具有较弱出血以及血小板减少等副作用，能安全、有效地用于预防和治疗血栓栓塞性疾病。含有分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖药物，其皮下注射的抗凝血作用优于分子量小于10,000Da解聚海参糖胺聚糖。分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖的注射剂，随着剂量增加凝血时间延长抗凝血作用增强，并且随剂量增加其抗凝血作用递增趋势缓和，不易引起出血，安全性远高于肝素及低分子肝素。另外，采用皮下注射给药，经皮下给药更有利于药物使用，同时增加了药物使用的方便性和安全性。
附图说明
图1为解聚海参糖胺聚糖药物中解聚海参糖胺聚糖的纯度图。
图2为解聚海参糖胺聚糖药物中解聚海参糖胺聚糖的分子量分布图谱。
图3为DHG体外抗凝血剂量与凝血时间的线性关系图。
具体实施方式
解聚海参糖胺聚糖的提取方法是指提取自海参的海参糖胺聚糖，经降解和解聚后产生解聚糖胺聚糖，收集所需分子量的解聚海参糖胺聚糖。从海参体壁中提取海参糖胺聚糖的方法是本领域技术人员所熟悉的，如中国专利ZL200910305363.5。
重均分子量是采用高效液相凝胶色谱法测试的。
实施例1
海参糖胺聚糖的提取：
称取玉足海参药材5kg，水浸过夜。将海参体壁淋干水分，绞碎，称重并补水至40Kg，置60℃水浴中，加入6mol/L氢氧化钠调pH至8.0±0.2，加入100ml水解蛋白酶Alcalase（诺维信（沈阳）生物技术有限公司）搅拌，酶解4小时，85℃以上灭活10分钟，降温至50℃±2℃，加入6mol/L氢氧化钠调pH至8.0±0.2，再加10g复合胰酶（无锡市雪梅酶制剂科技有限公司，雪梅牌）搅拌酶解4小时，煮沸10分钟，冷却。4℃离心，收集上清液，加入6mol/L盐酸调pH至2.5±0.2，4℃冷藏2小时，离心，收集上清液，加入6mol/L氢氧化钠调pH至7.0±0.2，加0.8倍乙醇，4℃静置过夜。
离心，收集沉淀称重，加10倍重量的蒸馏水，加热至85℃±2℃，待完全溶解后，加入6mol/L氢氧化钠调pH至9.0±0.2，加入氯化钙至溶液中氯化钙浓度达到2%（w/v），升温至90℃保持15分钟，冷却至室温，4℃离心，收集上清液，用饱和碳酸钠溶液调pH至11.0±0.2，离心，收集上清液，用6mol/L盐酸调pH至6.0±0.2，加0.8倍体积乙醇，4℃冷藏过夜；
冷藏液离心，收集沉淀称重，加2倍体积蒸馏水，加热使其充分溶解，加乙酸钾使其最终浓度为2mol/L，4℃静置过夜。离心，收集沉淀称重，加2倍体积蒸馏水，加热使其充分溶解，加乙酸钾使其最终浓度为2mol/L，4℃静置过夜。离心，沉淀用冷2mol/L乙酸钾溶液洗涤三次，然后依次用80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇洗涤，待乙醇挥发尽后80℃干燥，称重，得粗品A。
粗品A100g加0.05mol/L、pH6.0的HAc-NaAc缓冲液溶解制成2%溶液上柱，溶液通过纤维素层析柱后，用1.5倍柱体积的0.4mol/LNaCl的HAc-NaAc缓冲液(pH6.0±0.2)洗涤，再用1mol/LNaCl的HAc-NaAc缓冲液(pH6.0±0.2)洗脱，根据紫外检测仪在220nm处数值的变化速度收集洗脱液，置60℃水浴中，用NaOH调pH至11±0.2，按体积量加入3%双氧水，保持4小时，冷却，离心，收集上清液，用HCl调pH至7.0±0.2，加1倍量乙醇，4℃静置过夜。
离心，收集沉淀，依次用95%乙醇、无水乙醇洗涤，得粗品B。
粗品B用蒸馏水溶解成5%的溶液，用截留分子量1万的超滤膜浓缩至原体积的1/2，补加水至原体积，再超滤至1/2体积，再加水重复一次，超滤液冷冻干燥，得海参糖胺聚糖。1.2解聚海参糖胺聚糖的制备
将上述海参糖胺聚糖纯品用5%醋酸配成2%的溶液，加入30%的双氧水使溶液中双氧水的浓度为5%，60℃进行控制解聚20小时。将该溶液用0.1mol/l的氢氧化钠中和至中性，加入3倍体积的乙醇进行醇沉，静置，离心，得到解聚海参糖胺聚糖的粗品。
该粗品干燥，溶于5倍重量的水中，过sephadex-G75柱，用0.5mol/l的氯化钠进行洗脱，脱去盐及小分子杂质，脱盐后的样品冷冻干燥既得55g解聚海参糖胺聚糖，其分子量都在26,000Da～45,000Da，D值＜1.5，纯度为98%以上。
该实例得到的解聚海参糖胺聚糖，经示差折光检测器(RID-10A,岛津)可得到纯度为99.0%的纯品（图谱见图1），经该实例得到的解聚海参糖胺聚糖经凝胶柱(TSK gel G4000PWXL,TOSOH)色谱分析知该产品的重均分子量31816，D值为1.36（图谱见图2）
将以上获得的12.0g解聚海参糖胺聚糖加入24g甘露醇、加入注射用水1000ml溶解，经过超滤、灌装、冻干，得到1000瓶注射用解聚海参糖胺聚糖的冻干粉针剂。
实施例2
解聚海参糖胺聚糖的药效学实验
2.1体外抗凝血实验
2.1.1试验材料
供试样品:
名称：解聚海参糖胺聚糖(26,000Da～45,000Da)，以下缩写：DHG；
来源：上海开润生物医药有限公司；
批号：20110308；
配制：精密吸取后以注射用生理盐水稀释至所需浓度。
试验动物
品系：兔；
来源：上海陈行实验用兔有限公司；
性别：雄性；
体重：1800克；
动物合格证号：SCXK（沪）2007-0010。
2.1.2试验仪器
血小板聚集凝血因子分析仪(型号LG-PABER北京世帝科学仪器公司)。
2.1.3实验方法
实验当日，于样品池中分别加入兔血浆80μl、0.9％氯化钠溶液10μl，预热180s后，加入1％氯化钙溶液10μl，立即混匀，避免产生气泡，用血小板聚集凝血因子分析仪开始计算时间，记录各样品池凝结时间，即为空白。
精密量取对照品溶液，用0.9％氯化钠溶液稀释成不同浓度的溶液，即为不同浓度的样品溶液（0.6μg/ml～23.3μg/ml）。
用10μl不同浓度的样品溶液代替10μl 0.9％氯化钠溶液，分别测定各浓度的样品溶液的血浆凝结时间。每个浓度平行测定4次，求平均值。
2.1.4实验结果
实验结果显示样品终浓度在0.6μg/ml～23.3μg/ml剂量范围内，随剂量增加凝血时间延长，凝血时间延长递增趋势缓和。因此，解聚海参糖胺聚糖组合物用于抗凝血更具安全性，可控性。
表1DHG体外抗凝血实验结果
  样品(μg/ml)   凝血时间   样品(μg/ml)
  空白   197.2±10.5
  0.6   198.3±13.8   0.6%
  1.0   226.7±12.7   15.0%
  2.0   248.3±6.2   26.0%
  3.0   253.9±8.2   28.8%
  5.1   309.8±25.6   57.1%
  7.1   351.5±21.5   78.3%
  9.1   401.5±23.2   103.7%
  11.1   471.4±20.6   139.1%
  13.2   512.7±9.5   160.1%
  15.2   551.4±17.1   179.7%
  17.2   603.6±35.8   206.1%
  19.2   669.7±12.6   239.7%
  21.3   709.6±23.4   259.9%
  23.3   784.8±37.6   298.0%
2.2皮下注射解聚海参糖胺聚糖对大鼠凝血系统的影响
2.2.1试验材料
供试样品:
名称：DHG；
来源：上海开润生物医药有限公司；
批号：20110308；
配制：精密吸取后以注射用生理盐水稀释至所需浓度。
2.2.2试验动物
品系：SD大鼠；
来源：上海西普尔-必凯实验动物有限公司；
性别：雄性；
体重：220-250克；
动物合格证号：SCXK（沪）2011-0017；
饲养：动物饲养于正压净化通风动物房内，室温23±1℃，湿度50～70％，人工照明模拟昼夜变化，自由进食与饮水。
2.2.3试验仪器
自动凝血分析仪Sysmex CA-1500
2.2.4实验方法
将SD大鼠40只，分成4个不同的给药组，阴性对照组（皮下注射生理盐水0.5ml），解聚海参糖胺聚糖(26,000Da～45,000Da)（DHG）低、中、高三个剂量组（10、20、40mg/kg）皮下注射给药，体积0.5ml。
DHG低、中、高三个剂量组，空白对照组皮下注射给药后60min腹主动脉采血测定凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶时间（TT）数值，参见表2。
各组动物在手术前10min用3%速可眠腹腔注射麻醉（0.1ml/100g体重），仰卧固定后腹腔手术，用一次性3.2%柠檬酸钠抗凝真空采血管采血。
2.2.5试验结果
DHG在低剂量10mg/kg对APTT、TT、PT产生明显影响，分别延长了190.8%、90.3%、10.4%，20mg/kg和40mg/kg时产生极显著影响APTT超过了150%—250%的范围，参见表3。
表2 DHG大鼠皮下注射抗凝血实验结果
表3 DHG大鼠凝血时间延长率
  PT   APTT   TT
  10mg/kg   10.4%   190.8%   90.3%
  20mg/kg   15.1%   355.2%   116.8%
  40mg/kg   28.3%   430.5%   152.5%
2.3解聚海参糖胺聚糖对大鼠动静脉导管血栓形成模型的影响
2.3.1试验材料
供试样品:
名称：DHG；
来源：上海开润生物医药有限公司；
批号：20110306；
配制：精密吸取后以注射用生理盐水稀释至所需浓度。
对照样品：
名称：肝素；
来源：国药集团化学试剂有限公司；
批号：F20091029；
含量：150U/mg；
配制：精密称取后以注射用生理盐水溶解并稀释至所需浓度。
试验动物：
品系：SD大鼠；
来源：上海西普尔-必凯实验动物有限公司；
性别：雄性；体重：250-300克；
动物合格证号：SCXK（沪）2011-0007；
饲养：动物饲养于正压净化通风动物房内，室温23±1℃，湿度50～70％，人工照明模拟昼夜变化，自由进食与饮水。
2.3.2试验仪器
BS 110s型电子天平，SARTORIUS公司生产，最小称量值0.1mg。
2.3.3试验方法
将SD大鼠34只，分成4个不同的给药组，阴性对照组（生理盐水1ml/kg），DHG两个剂量组（10、20mg/kg），阳性对照低分子肝素组（2mg/kg）。所有药物均为皮下注射给药，体积0.5ml。
各组动物在手术前10min用12%的水合氯醛腹腔注射麻醉（350～400mg/kg）后，仰卧固定，切开颈部皮肤，分离左侧颈动脉和右侧颈外静脉，以一旁路管连接，管中置一7cm长4号手术丝线。分别在给药20分钟后开放血流15分钟，然后取出丝线称重，减去丝线重量，即为血栓湿重。计算出各试验组的血栓湿重平均值及标准差，用t-检验同生理盐水组进行比较。并按下式计算各试验组的血栓湿重抑制率：
2.3.4试验结果
参见表4，阳性药和受试药物在给药20分钟后测试都可以显著抑制血栓的形成。受试药物对血栓形成的抑制作用与给药剂量呈正比。
表4DHG对大鼠动静脉导管血栓形成模型的影响
与阴性组相比较：*P<0.05，**P<0.01
2.4不同分子量段解聚海参糖胺聚糖皮下注射对大鼠凝血系统的影响
2.4.1试验材料
供试样品:
名称：DHG-Ⅰ（8000Da～12000Da）；DHG-Ⅱ（26,000Da～45,000Da）；
来源：上海开润生物医药有限公司；
批号：20110309（DHG-Ⅰ）；20110308（DHG-Ⅱ）；
配制：精密吸取后以注射用生理盐水稀释至所需浓度。
2.4.2试验动物
品系：SD大鼠；
来源：上海西普尔-必凯实验动物有限公司；
性别：雄性；
体重：220-250克；
动物合格证号：SCXK（沪）2011-0017；
饲养：动物饲养于正压净化通风动物房内，室温23±1℃，湿度50～70％，人工照明模拟昼夜变化，自由进食与饮水。
2.4.3试验仪器
自动凝血分析仪Sysmex CA-1500
2.4.4实验方法
将SD大鼠40只，分成4个不同的给药组，阴性对照组（皮下注射生理盐水0.5ml），解聚海参糖胺聚糖不同分子量段，DHG-Ⅰ（8,000Da～12,000Da)、DHG-Ⅱ（26,000Da～45,000Da）；同等剂量20mg/kg皮下注射给药，体积0.5ml。
DHG不同分子量段，空白对照组皮下注射给药后60min腹主动脉采血测定凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶时间（TT）数值，参见表5。各组动物在手术前10min用3%速可眠腹腔注射麻醉（0.1ml/100g体重），仰卧固定后腹腔手术，用一次性3.2%柠檬酸钠抗凝真空采血管采血。
2.4.5试验结果
DHG-Ⅰ；DHG-Ⅱ同等剂量下DHG-Ⅱ对APTT、TT、PT产生的影响明显强于DHG-Ⅰ。DHG-Ⅰ对APTT、TT、PT分别延长了157.3%、51.4%，37.0%、，DHG-Ⅱ对APTT、TT、PT分别延长了365.0%、117.9%，37.0%、，参见表6。
表5不同分子段DHG大鼠皮下注射抗凝血实验结果
表6不同分子段DHG大鼠凝血时间延长率
  PT   APTT   TT
  20mg/kg   9.6%   157.3%   51.4%
  20mg/kg   37.0%   365.0%   117.9%
2.5静脉注射解聚海参糖胺聚糖对大鼠凝血系统的影响
2.5.1试验材料
供试样品:
名称：DHG；
来源：上海开润生物医药有限公司；
批号：20110308；
配制：精密吸取后以注射用生理盐水稀释至所需浓度。
2.5.2试验动物
品系：SD大鼠；
来源：上海西普尔-必凯实验动物有限公司；
性别：雄性；
体重：220-250克；
动物合格证号：SCXK（沪）2011-0017；
饲养：动物饲养于正压净化通风动物房内，室温23±1℃，湿度50～70％，人工照明模拟昼夜变化，自由进食与饮水。
2.5.3试验仪器
自动凝血分析仪Sysmex CA-1500
2.2.4实验方法
将SD大鼠40只，分成4个不同的给药组，阴性对照组（静脉注射生理盐水0.2ml），解聚海参糖胺聚糖(26,000Da～45,000Da)（DHG）低、中、高三个剂量组（0.5、1.5、4.5mg/kg）静脉注射给药，体积0.2ml。
DHG低、中、高三个剂量组，空白对照组静脉注射给药后30min腹主动脉采血测定凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶时间（TT）数值，参见表7。
各组动物在手术前10min用3%速可眠腹腔注射麻醉（0.1ml/100g体重），仰卧固定后腹腔手术，用一次性3.2%柠檬酸钠抗凝真空采血管采血。
2.2.5试验结果
DHG在低剂量0.5mg/kg对APTT、TT、PT产生明显影响，分别延长了157.27%、83.80%、2.35%，1.5mg/kg和4.5mg/kg时产生极显著影响APTT超过了150%—200%的范围，参见表8。
表7 DHG大鼠静脉注射抗凝血实验结果
表8 DHG大鼠凝血时间延长率
  PT   APTT   TT
  0.5mg/kg   2.35%   157.27%   83.80%
  1.5mg/kg   10.59%   212.73%   120.52%
  4.5mg/kg   27.06%   385.45%   164.36%

Claims (10)

1.解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用，所述药物，包括解聚海参糖胺聚糖和药学上可接受的载体，所述解聚海参糖胺聚糖为重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖中的一种以上，所述海参选自玉足海参；
所述解聚海参糖胺聚糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)将酶加入绞碎的海参，在进行、酶解和沉淀，收集海参糖胺聚糖粗品，对海参糖胺聚糖粗品进行纯化和脱色，收集海参糖胺聚糖；
所述的酶为水解蛋白酶和复合胰酶，水解蛋白酶的用量为海参重量的2％，复合胰酶的用量为海参重量的2％；
(2)将重量浓度为5～10％的双氧水加入步骤(1)的产物降解，收集重均分子量为26,000Da～45000Da的解聚海参糖胺聚糖。
2.解聚海参糖胺聚糖在制备治疗或预防周围血管血栓闭塞疾病药物中的应用，所述药物，包括解聚海参糖胺聚糖和药学上可接受的载体，所述解聚海参糖胺聚糖为重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖中的一种以上，所述海参选自玉足海参；
所述解聚海参糖胺聚糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)将酶加入绞碎的海参，在进行、酶解和沉淀，收集海参糖胺聚糖粗品，对海参糖胺聚糖粗品进行纯化和脱色，收集海参糖胺聚糖；
所述的酶为水解蛋白酶和复合胰酶，水解蛋白酶的用量为海参重量的2％，复合胰酶的用量为海参重量的2％；
(2)将重量浓度为5～10％的双氧水加入步骤(1)的产物降解，收集重均分子量为26,000Da～45000Da的解聚海参糖胺聚糖。
3.解聚海参糖胺聚糖在制备预防或治疗手术后的血栓形成疾病药物中的应用，所述药物，包括解聚海参糖胺聚糖和药学上可接受的载体，所述解聚海参糖胺聚糖为重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖中的一种以上，所述海参选自玉足海参；
所述解聚海参糖胺聚糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)将酶加入绞碎的海参，在进行、酶解和沉淀，收集海参糖胺聚糖粗品，对海参糖胺聚糖粗品进行纯化和脱色，收集海参糖胺聚糖；
所述的酶为水解蛋白酶和复合胰酶，水解蛋白酶的用量为海参重量的2％，复合胰酶的用量为海参重量的2％；
(2)将重量浓度为5～10％的双氧水加入步骤(1)的产物降解，收集重均分子量为26,000Da～45000Da的解聚海参糖胺聚糖。
4.根据权利要求1、2或3所述的应用，其特征在于，所述的解聚海参糖胺聚糖的多分散度为1～2。
5.根据权利要求1、2或3所述的应用，其特征在于，所述药物为静脉或皮下注射给药的注射液或者是冻干粉针。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体选自甘露醇、乳糖、右旋糖酐、葡萄糖、甘氨酸、水解明胶、聚维酮或氯化钠中的一种以上。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体选自甘露醇、乳糖、右旋糖酐、葡萄糖、甘氨酸、水解明胶、聚维酮或氯化钠中的一种以上。
8.治疗或预防心脑血管疾病或周围血管血栓闭塞性疾病药物，其特征在于，包括重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖中的一种以上和药学上可接受的载体，所述海参选自玉足海参；
所述解聚海参糖胺聚糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)将酶加入绞碎的海参，在进行、酶解和沉淀，收集海参糖胺聚糖粗品，对海参糖胺聚糖粗品进行纯化和脱色，收集海参糖胺聚糖；
所述的酶为水解蛋白酶和复合胰酶，水解蛋白酶的用量为海参重量的2％，复合胰酶的用量为海参重量的2％；
(2)将重量浓度为5～10％的双氧水加入步骤(1)的产物降解，收集重均分子量为26,000Da～45000Da的解聚海参糖胺聚糖。
9.预防或治疗手术后的血栓形成疾病的药物，其特征在于，包括重均分子量为26,000Da～45,000Da的解聚海参糖胺聚糖中的一种以上和药学上可接受的载体，所述海参选自玉足海参；
所述解聚海参糖胺聚糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)将酶加入绞碎的海参，在进行、酶解和沉淀，收集海参糖胺聚糖粗品，对海参糖胺聚糖粗品进行纯化和脱色，收集海参糖胺聚糖；
所述的酶为水解蛋白酶和复合胰酶，水解蛋白酶的用量为海参重量的2％，复合胰酶的用量为海参重量的2％；
(2)将重量浓度为5～10％的双氧水加入步骤(1)的产物降解，收集重均分子量为26,000Da～45000Da的解聚海参糖胺聚糖。
10.根据权利要求8或9所述的药物，通过静脉或皮下注射方式施加于患者。
CN201210306680.0A 2012-03-05 2012-08-24 解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用 Active CN103285031B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210306680.0A CN103285031B (zh) 2012-03-05 2012-08-24 解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用
US14/383,376 US9539271B2 (en) 2012-03-05 2013-03-01 Application of depolymerized holothurian glycosaminoglycans (DHG) in preparation of drug for prevention and treatment of thromboembolic diseases

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210055824X 2012-03-05
CN201210055824 2012-03-05
CN201210055824.X 2012-03-05
CN201210306680.0A CN103285031B (zh) 2012-03-05 2012-08-24 解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103285031A CN103285031A (zh) 2013-09-11
CN103285031B true CN103285031B (zh) 2015-09-09

Family

ID=49086920

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210306680.0A Active CN103285031B (zh) 2012-03-05 2012-08-24 解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用

Country Status (3)

Country Link
US (1) US9539271B2 (zh)
CN (1) CN103285031B (zh)
WO (1) WO2013131406A1 (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104147039A (zh) * 2013-05-13 2014-11-19 上海开润生物医药有限公司 黑海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用
CN103788222B (zh) * 2014-01-08 2016-08-31 中国科学院昆明植物研究所 Fuc3S4S取代的低聚糖胺聚糖及其制备方法
CN104610459B (zh) * 2014-09-17 2017-12-05 中国海洋大学 一种低分子量仿刺参糖胺聚糖及其制备方法和应用
CN106349397B (zh) * 2015-07-23 2018-08-17 苏州颐华生物医药技术股份有限公司 解聚海参糖胺聚糖组合物及其制备方法与应用
CN107334097B (zh) * 2017-08-04 2020-09-08 青岛颐圣康和生物制药有限公司 一种海参浸提膏的制备方法和应用
CN110776578B (zh) * 2019-11-12 2021-01-29 苏州颐华生物医药技术股份有限公司 低分子海参糖胺聚糖及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101724086A (zh) * 2009-11-25 2010-06-09 深圳海王药业有限公司 低聚凤梨参糖胺聚糖及其制备方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1579415A (zh) * 2004-05-20 2005-02-16 陈任重 玉足海参糖胺聚糖针剂及其制备方法
CN100432232C (zh) * 2005-04-30 2008-11-12 黑龙江红豆杉药业有限责任公司 自玉足海参中提取玉参多糖的方法
CN101451157B (zh) * 2008-12-25 2012-09-05 大连海晏堂生物有限公司 一种低分子量海参多糖的制备方法
CN101624426B (zh) * 2009-08-07 2011-06-01 黑龙江红豆杉药业有限责任公司 一种玉足海参糖胺聚糖的提取方法
CN101890041B (zh) * 2010-02-10 2012-07-25 上海蓝怡科技有限公司 腹膜透析液及其制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101724086A (zh) * 2009-11-25 2010-06-09 深圳海王药业有限公司 低聚凤梨参糖胺聚糖及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN103285031A (zh) 2013-09-11
WO2013131406A1 (zh) 2013-09-12
US9539271B2 (en) 2017-01-10
US20150051165A1 (en) 2015-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103285031B (zh) 解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用
JPH0323528B2 (zh)
US9540454B2 (en) High purity heparin and production method therefor
CN100525777C (zh) 一种解聚海参糖胺聚糖组合物及其制备方法和用途
CN102731683A (zh) 一种从肝素废液中分离天然低分子肝素的方法
JPH03243601A (ja) 血液凝固の制御能をもつムコ多糖組成物およびその製造方法
CN102633908A (zh) 一种高品质超低分子量肝素的制备方法
CN114533756B (zh) 硫酸葡半乳寡聚糖在制备抗凝血和/或抗血栓药物中的应用
KR101780643B1 (ko) 효소분해를 이용한 헤파린의 정제 방법
US20160082051A1 (en) Use of sea cucumber glycosaminoglycan in preparing medicine for prevention and treatment of thromboembolic disease
CN103932981A (zh) 一种肝素钠封管注射液
CN104725532B (zh) 一种精确定量控制肝素/类肝素中硫酸软骨素及硫酸皮肤素含量的方法
Huang et al. Delayed near-fatal anaphylactic reaction induced by the F10-HPS polysulphone haemodialyser
CN103830263A (zh) 解聚海参糖胺聚糖在制药中的应用
CN104147039A (zh) 黑海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用
AU2015203727B2 (en) High Purity Heparin and Production Method Therefor
CN103830264A (zh) 解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓性疾病药物中的应用
US20040228852A1 (en) Use of increased molecular-weight hirudin as an anticoagulant in extracorporeal kidney replace therapy
CN115181178A (zh) 一种从冷沉淀中制备人纤维蛋白原的方法
CN109939110A (zh) 药根碱在制备抗血栓药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant