CN103257200A

CN103257200A - 一种通过带有紫外检测器的高效液相色谱仪测定食品中甜蜜素含量的方法

Info

Publication number: CN103257200A
Application number: CN2012100356888A
Authority: CN
Inventors: 宋薇
Original assignee: PONY TEST CO
Current assignee: PONY TEST CO
Priority date: 2012-02-17
Filing date: 2012-02-17
Publication date: 2013-08-21

Abstract

本发明涉及一种通过带有紫外检测器的高效液相色谱仪测定食品中甜蜜素含量的方法，包括以下步骤：样品经水提取，在酸性条件下加入合适的衍生剂进行衍生，再经正己烷提取后进入液相色谱系统进行分离，通过紫外检测器进行分析，同时针对油脂含量较高的样品，在二次水提取前使用正己烷去脂，针对蛋白含量高的样品，萃取后加入乙酸锌和亚铁氰化钾除蛋白，这样不仅可以降低基质干扰，而且可以消除假阳性现象。由此可见，该发明快速、易操作，灵敏度高，重复性好，检出限比气相色谱法低一个数量级以上，适用于不同食品中甜蜜素的检测。

Description

一种通过带有紫外检测器的高效液相色谱仪测定食品中甜蜜素含量的方法

本发明涉及一种运用高效液相色谱仪测定食品中甜蜜素含量的测定方法，特别是涉及一种运用液相色谱柱前衍生技术测定食品中甜蜜素含量的方法。

背景技术

甜蜜素，化学名环己基氨基磺酸钠，属于一种非营养型合成添加剂，其甜度是蔗糖的30倍，而价格却是蔗糖的3倍，因而作为常用的食品添加剂用于饮料、糕点、蜜饯等食品中。

有研究表明，食用甜蜜素过量不仅会对人体肝脏和神经系统造成很大危害，而且其代谢物环己胺对心血管系统和睾丸也有毒理作用，因此部分国家已经禁止使用该种添加剂。我国虽然未禁止此类添加剂的使用，但在国家标准GB 2760中明确规定安赛蜜在各类食品中的最大添加限量。

目前国内外对食品中甜蜜素的检测主要有比色法、薄层色谱法、离子色谱法、气相色谱法等。其中气相色谱法最为常用，此法采用直接酯化衍生后检测，前处理简单，检出限偏高，不适用于低含量和基质复杂的样品。本文采用液相色谱法，在酸性条件下加入次氯酸钠将甜蜜素转化为N，N-二氯环己胺后，紫外检测器测定。针对油脂含量较高的样品，在萃取前使用正己烷去脂；针对蛋白含量高的样品，加入乙酸锌和亚铁氰化钾除蛋白，这样不仅可以降低基质干扰，而且可以消除假阳性现象。

本发明要解决的技术问题在于，检出限比目前常用的气相色谱法低一个数量级以上，而且重复性好，适用于不同食品中甜蜜素的检测。

发明内容

本发明提供的是一种运用高效液相色谱仪测定食品中甜蜜素含量的测定方法，包括以下步骤：

1原理

试样中的目标化合物用水溶液超声提取，在酸性条件下加入次氯酸钠将甜蜜素转化为N，N-二氯环己胺后，经高效液相色谱法定性，外标法定量。

2试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为色谱纯，实验用水为超纯水。

2.1甲醇

2.2正己烷

2.3乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌[Zn(CH₃COO)₂·2H₂O]溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，加水稀释到1000mL。

2.4亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾[K₄Fe(CN)₅·3H₂O]，加水至1000mL。

2.5次氯酸钠溶液：把次氯酸钠溶液(含有效氯7.5％)用水稀释至2倍体积。

2.6硫酸溶液：把浓硫酸用水稀释至2倍体积。

2.7碳酸氢钠溶液(5％)：称取5g碳酸氢钠，用水定容至100mL。现用现配。

2.8标准品：环己基氨基磺酸钠，纯度≥98％。

2.9标准储备液(1.6mg/mL)：准确称取0.0163g环己基氨基磺酸钠标准品，用水溶解并定容至10.0mL。

2.10标准系列：配制环己基氨基磺酸钠标准系列，浓度为：4.00、16.0、32.0、80.0、160.0mg/L。

3仪器和设备

3.1液相色谱仪：配有紫外检测器(VWD)。

3.2离心机。

3.3超声波水浴。

3.4水浴锅。

3.5氮吹仪。

4样品及标准溶液的制备

4.1样品的制备

a)提取

称取10.0克试样于50mL离心管中，加入60mL水涡旋2分钟，超声提取30分钟，并定容至刻度。

b)净化

1、油脂含量较高的样品：将提取液转移到250mL分液漏斗中，加入50mL正己烷液液萃取三次，弃去有机相，水相待测。

2、蛋白含量较高的样品：加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各5mL可有效去除蛋白质等杂质的干扰，涡旋混匀，加水定容至刻度，5000r/min离心3min，上清液待测。

c)柱前衍生

吸取10mL样品溶液，加入2mL硫酸溶液、5mL正己烷、1mL次氯酸钠溶液，涡旋振荡1min，弃去水相，保留正己烷相，再加入5mL碳酸氢钠溶液，涡旋1min，取正己烷层过0.22μm滤膜，供HPLC分析。

4.2标准曲线的制备

配制环己基氨基磺酸钠标准溶液4.00、16.0、32.0、80.0、160.0mg/L，按10.1c中步骤操作。

5测定

5.1液相色谱参考条件

色谱柱：C18，5μm，4.5×250mm

流动相：甲醇+水＝75+25。

进样量：10μL。

柱温：40℃。

检测器：紫外检测器，λ＝314nm。

流速：0.8ml/min。

5.2定性定量测定

按照5.1液相色谱条件测定样品及标准溶液，以保留时间定性，以标准溶液浓度C(mg/L)对峰面积A做回归分析，并绘制标准曲线，外标法定量。

6结果计算

......公式(1)

式中：

C——经标准曲线计算的样液中目标化合物的浓度，mg/L；

V——定容体积，mL；

m——称样量，g。

具体实施方式

实施例1：

a)称取10.0克糕点于50mL离心管中，加入60mL水涡旋2分钟，加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各5mL，混匀后超声提取30分钟，冷却至室温后，加水定容至刻度，涡旋混匀，以5000r/min离心3min，上清液待测。

b)衍生

吸取10mL样品溶液，加入2mL硫酸溶液、5mL正己烷、1mL次氯酸钠溶液，涡旋振荡1min，弃去水相，保留正己烷相，再加入5mL氢氧化钠溶液，涡旋1min，取正己烷层过0.22μm滤膜，供HPLC分析。

c)标准曲线的制备

配制环己基氨基磺酸钠标准溶液4.00、16.0、32.0、80.0、160.0mg/L，按上述所述步骤进行检测，按照表1测定浓度和峰面积作标准曲线，标曲图和色谱图见说明书附图中图1和图2所示。

表1

浓度(mg/L)	4	16	32	80	160
						峰面积	3.367	16.620	33.470	91.303	183.650

2.样品加标回收率的测定：

称取阴性糕点样品10g，加标量为25mg/kg，按照4.1步骤处理样品，加标回收率谱图见说明书附图中图3所示。

样品中环己基氨基磺酸钠含量按照公式(1)计算，结果为23.7mg/kg，回收率为94.8％。

显而易见，本领域的普通技术人员，可以用本发明通过液相色谱仪对食品中环己基氨基磺酸钠的测定方法，构成对环己基氨基磺酸钠含量的测定方法。

上述实施例仅供说明本发明之用，而并非是对本发明的限制，有关技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明范围的情况下，还可以做出各种变化和变型，因此所有等同的技术方案也应属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由各权利要求限定。

Claims

1.一种运用高效液相色谱仪测定食品中甜蜜素含量的方法，其特征在于，所述测定方法包括如下步骤：

①样品经超声提取，含高蛋白和高脂肪的样品净化去除蛋白和脂肪，在酸性的条件下加入合适的衍生剂进行柱前衍生，正己烷反萃取后，萃取液进入高效液相色谱仪进行分离，紫外检测器检测。

②用高效液相色谱仪测定食品中甜蜜素含量，所用色谱柱采用，AgilentC₁₈，4.5×250mm，5μm；流速为0.8ml/min；最佳流动相比例为甲醇+水＝75+25；进样量10μL；柱温40℃；紫外检测器波长选择314nm。

2.根据权利要求1所述的一种运用高效液相色谱仪测定食品中甜蜜素含量的方法，其特征在于：在所述步骤①中，在酸性的条件下加入合适的衍生剂进行柱前衍生为：加入2mL硫酸溶液的环境下用1mL次氯酸钠溶液衍生为N，N-二氯环己胺。

3.根据权利要求1所述的一种运用高效液相色谱仪测定食品中甜蜜素含量的方法，其特征在于：在所述步骤②中，液相色谱仪器条件流速为0.8ml/min，最佳流动相比例为甲醇+水＝75+25。

4.根据权利要求1所述的一种运用高效液相色谱仪测定食品中甜蜜素含量的方法，其特征在于：在所述步骤②中，紫外检测器波长选择314nm。