CN111289673A - 一种粮食制品中丙烯酰胺的检测方法 - Google Patents

一种粮食制品中丙烯酰胺的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种粮食制品中丙烯酰胺的检测方法，包括以下步骤：将粮食制品、丙烯酰胺内标溶液和提取剂混合，得到提取液；将得到的提取液进行溴化衍生，得到上清液；将得到的上清液进行净化处理，得到测试液；将得到的测试液进行气相色谱‑质谱分析，得到丙烯酰胺的含量。本发明采用先衍生后净化的方法，先对提取液进行溴化衍生，使得溴与提取液中丙烯酰胺反应生成2,3‑二溴丙酰胺，使得丙烯酰胺衍生物容易用固相萃取柱吸附，缩短了检测时间；再进行净化处理，提高了浓缩净化效果，降低了丙烯酰胺检出限。实施例的结果表明，本发明提供的检测方法的检测时间为90min左右，定量限为0.01mg/kg，检出限为0.003mg/kg。

Description

一种粮食制品中丙烯酰胺的检测方法
技术领域
本发明涉及食品安全技术领域，尤其涉及一种粮食制品中丙烯酰胺的检测方法。
背景技术
丙烯酰胺被国际癌症研究机构(IARC)于1994年评估认定为一种可致癌的化合物。2002年4月，瑞典国家食品管理局首次发布，瑞典斯德哥尔摩大学的科学家在油炸薯条、土豆、面包等含淀粉的食品中，经过高温长时间油炸的食品，检测出有致癌可能性的丙烯酰胺；5月，英国食品标准局(BFSA)公布了类似的结果。随后，挪威、美国、澳大利亚、新西兰、加拿大等国负责食品安全的政府机构对丙烯酰胺在食品中的含量也进行了测定并公布了结果，瑞典科学家的发现被证实。目前国内外均无食品中丙烯酰胺含量限量规定，但各国均开展对食品中丙烯酰胺含量的监控，并制定提出降低食品中丙烯酰胺含量的措施。
目前食品中丙烯酰胺的测定方法包括气相色谱法、气相色谱质谱法、液相色谱串联质谱法。但气相色谱法测定食品中丙烯酰胺干扰大，对前处理要求高，一般用于饮用水中丙烯酰胺的检测。现行的食品中丙烯酰胺的标准检测方法主要有《SN/T 2096-2008食品中丙烯酰胺的检测方法-同位素内标法》和《GB 5009.204-2014食品安全国家标准-食品中丙烯酰胺的测定》。SN/T 2096-2008为气相色谱质谱联用法(GC-MS法)，用水提取试样中的丙烯酰胺，提取液用石墨化碳黑柱净化，净化液中的丙烯酰胺经溴水衍生化后，再用乙酸乙酯提取浓缩，GC-MS检测，同位素内标法定量，检测限为5μg/kg，该法为先净化后衍生测定。GB5009.204-2014中包括两种检测方法，第一法为液质联用(LC-MS/MS)法，以水为提取溶剂，经固相萃取柱或基质分散固相萃取净化，以LC-MS/MS检测，内标法定量，检测限为10μg/kg。第二法为气相色谱质谱联用法(GC-MS法)，用水提取试样中的丙烯酰胺，提取液用基质分散固相萃取净化，净化液中的丙烯酰胺经溴水衍生化后，再用乙酸乙酯提取浓缩，GC-MS检测，同位素内标法定量，检测限为10μg/kg，同样该法为先净化后衍生测定。
但是，LC-MS/MS法受限于昂贵的仪器，难以普及，且丙烯酰胺分子量小，干扰大。GC-MS两个标准方法均采用先净化后衍生测定，丙烯酰胺极易溶于水，难以浓缩净化，导致检测时间长，检测限高等缺陷。
发明内容
本发明的目的在于提供一种粮食制品中丙烯酰胺的检测方法，本发明提供的检测方法检测时间短，检测限低。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种粮食制品中丙烯酰胺的检测方法，包括以下步骤：
1)将粮食制品、丙烯酰胺内标溶液和提取剂混合，得到提取液；
2)将所述步骤1)得到的提取液进行溴化衍生，得到上清液；
3)将所述步骤2)得到的上清液进行净化处理，得到测试液；
4)将所述步骤3)得到的测试液进行气相色谱-质谱分析，得到丙烯酰胺的含量。
优选地，在所述步骤1)中粮食制品的粒度为80目以上。
优选地，所述步骤1)中提取剂包括乙醇溶液。
优选地，所述步骤1)中混合时还包括加入脱脂剂。
优选地，所述步骤2)中的溴化衍生包括：将提取液、溴化钾、硫酸溶液和溴酸钾溶液混合后静置，得到上清液。
优选地，所述步骤2)中静置后还包括除溴。
优选地，所述步骤3)中的净化处理包括：将所述步骤2)得到的上清液依次过固相萃取柱，除杂，洗脱，吹干和溶解离心，得到测试液。
优选地，所述固相萃取柱在使用前进行活化处理。
优选地，所述除杂依次包括淋洗和抽真空。
优选地，所述吹干是在水浴下气体吹干。
本发明提供了一种粮食制品中丙烯酰胺的检测方法，包括以下步骤：将粮食制品、丙烯酰胺内标溶液和提取剂混合，得到提取液；将得到的提取液进行溴化衍生，得到上清液；将得到的上清液进行净化处理，得到测试液；将得到的测试液进行气相色谱-质谱分析，得到丙烯酰胺的含量。本发明采用先衍生后净化的方法，先对提取液进行溴化衍生，使得溴与提取液中丙烯酰胺反应生成2,3-二溴丙酰胺，改变极性，使得丙烯酰胺衍生物容易用固相萃取柱吸附，能够实现丙烯酰胺快速富集，进而缩短了检测时间，可以同时进行大批量样品的快速提取；再进行净化处理，将丙烯酰胺浓缩富集，进一步提高浓缩净化效果，在丙烯酰胺含量极低时也能检测到，降低了丙烯酰胺检出限。实施例的实验结果表明，本发明提供的丙烯酰胺的检测方法的检测时间为90min左右，定量限为0.01mg/kg，检出限为0.003mg/kg。
附图说明
图1为本发明实施例1的标准曲线。
具体实施方式
本发明提供了一种粮食制品中丙烯酰胺的检测方法，包括以下步骤：
1)将粮食制品、丙烯酰胺内标溶液和提取剂混合，得到提取液；
2)将所述步骤1)得到的提取液进行溴化衍生，得到上清液；
3)将所述步骤2)得到的上清液进行净化处理，得到测试液；
4)将所述步骤3)得到的测试液进行气相色谱-质谱分析，得到丙烯酰胺的含量。
本发明将粮食制品、丙烯酰胺内标溶液和提取剂混合，得到提取液。本发明对所述粮食制品的种类没有特殊的限定，本发明提供的检测方法适用于含淀粉的粮食制品。在本发明中，所述粮食制品优选包括油炸薯片、烘烤薯片、饼干、油条、米粉、方面便饼或面包。
在本发明中，所述粮食制品的粒度优选为80目以上。在本发明中，当所述粮食制品的粒度不符合上述条件时，本发明优选先对粮食制品进行粉碎。本发明对所述粮食制品的粉碎方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的粉碎方式即可。在本发明的实施例中，粮食制品的粉碎方式优选为粉碎机粉碎。
本发明对所述粮食制品的用量没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的检测样品的用量即可。在本发明中，所述粮食制品的用量优选为1-2g。
在本发明中，所述粮食制品的加入量的精度优选为0.001g。在本发明中所述精度为0.001g能够提高粮食制品中丙烯酰胺含量的精确度。
本发明对所述丙烯酰胺内标溶液的种类没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的用于丙烯酰胺检测的内标溶液即可。在本发明的实施例中，所述丙烯酰胺内标溶液优选为13C3-丙烯酰胺内标溶液。
本发明对所述丙烯酰胺内标溶液的浓度没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的浓度即可。在本发明的实施例中，丙烯酰胺内标溶液的浓度优选为1.0μg/mL。本发明对所述丙烯酰胺内标溶液的来源没有特殊的限定，采用市售所需浓度的丙烯酰胺内标溶液或者按照本领域技术人员熟知的配制方法配制即可。在本发明的实施例中，当所述丙烯酰胺内标溶液的浓度为1.0μg/mL时，所述丙烯酰胺内标溶液配制方法优选为(1)配制10.0μg/mL13C3-丙烯酰胺内标溶液：取1mL 100μg/mL13C3-丙烯酰胺内标溶液至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，4℃冰箱保存；(2)配制1.0μg/mL丙烯酰胺内标溶液：取2.5mL 10.0μg/mL13C3-丙烯酰胺内标溶液至25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度得1.0μg/mL13C3-丙烯酰胺内标应用液，4℃冰箱保存。
本发明对所述丙烯酰胺内标溶液的用量没有特殊的限定，只要保证所述丙烯酰胺内标溶液中丙烯酰胺的含量与标准曲线制作中的丙烯酰胺内标溶液中的丙烯酰胺含量一致即可。
在本发明中，所述提取剂优选包括乙醇溶液。在本发明中，所述乙醇溶液能够代替国家标准中的水提取，避免米粉糊化，容易提取分离。
本发明对所述提取剂的浓度和加入量没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的浓度和加入量即可。在本发明的实施例中，所述提取剂优选为乙醇的水溶液，更优选为10mL 10％乙醇溶液。本发明对所述10％乙醇溶液的配制方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的配置方法配制即可。在本发明的实施例中，所述10％乙醇溶液的配制方法优选为取10mL无水乙醇，加水到100mL。
本发明对所述粮食制品、丙烯酰胺内标溶液、提取剂的混合的操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的制备混合溶液的技术方案即可。本发明优选先将粮食制品与丙烯酰胺内标溶液混合，得到混合液；然后将所述混合液与提取剂混合，得到提取液。
本发明优选先将粮食制品与丙烯酰胺内标溶液混合，得到混合液。在本发明中，所述粮食制品和丙烯酰胺内标溶液的混合优选在斡旋条件下进行。在本发明中，所述斡旋的时间优选为1～3min，进一步优选为2min。在本发明中，所述斡旋能够实现丙烯酰胺内标溶液与粮食制品充分混合。
得到混合液后，本发明优选将所述混合液与提取剂混合，得到提取液。在本发明中，所述混合液与提取剂的混合优选为超声处理。在本发明中，所述超声处理能够使混合液与提取剂均匀混合。在本发明中，所述超声处理的时间优选为8～12min，进一步优选为10min。
在本发明中，所述将粮食制品、丙烯酰胺内标溶液和提取剂混合时优选加入脱脂剂。在本发明中，当所述粮食制品中富含脂肪或蛋白质时，本发明优选将粮食制品、丙烯酰胺内标溶液和提取剂混合时加入脱脂剂。在本发明中，所述脱脂剂能够脱除粮食制品中大量的脂肪或蛋白质，避免脂肪或蛋白质的存在对于丙烯酰胺检测产生影响。本发明对所述脱脂剂的种类没有特殊的限定，能够脱除粮食制品中的脂肪或蛋白质即可。在本发明的实施例中，脱脂剂的种类优选为石油醚。
本发明对所述脱脂剂的用量没有特殊的限制，根据粮食制品中的脂肪或蛋白质的含量确定即可。
当需要加入脱脂剂时，本发明对所述粮食制品、丙烯酰胺内标溶液、提取剂和脱脂剂的混合的操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的制备混合溶液的技术方案即可。本发明优选先将粮食制品与丙烯酰胺内标溶液混合，得到混合液；然后将所述混合液与提取剂和脱脂剂混合，脱脂后分离脱脂剂，得到提取液。
在本发明中，所述混合液的制备优选与不添加脱脂剂时相同，在此不再赘述。得到混合液后，本发明优选将所述混合液与提取剂和脱脂剂混合，脱脂后分离脱脂剂，得到提取液。在本发明中，所述混合液与提取剂和脱脂剂的混合优选为超声处理。在本发明中，所述超声处理能够使混合液与提取剂和脱脂剂均匀混合。在本发明中，所述超声处理的时间优选为8～12min，进一步优选为10min。
在本发明中，所述分离脱脂剂的的方法优选为：将所述混合液与提取剂和脱脂剂的混合后的产物进行离心处理，得到提取液。在本发明中，当所述混合液中加入脱脂剂时，本发明优选将所述混合后的产物进行离心处理，得到提取液。在本发明中，所述离心处理能够将富含脂肪或蛋白质的脱脂剂与提取液分离，实现提取液的提纯。在本发明中，所述离心处理的时间优选为1～5min，进一步优选为3min。本发明对于所述离心处理的转速没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的转速即可。在本发明的实施例中，所述离心处理的转速优选为10000r/min。
离心处理完成后，本发明优选将所述离心处理得到的分层产物吸去上层脱脂剂层，得到提取液。
得到提取液后，本发明将所述提取液进行溴化衍生，得到上清液。在本发明中，所述溴化衍生优选包括：将提取液、溴化钾、硫酸溶液和溴酸钾溶液混合后静置，得到上清液。在本发明中，所述溴化衍生中采用硫酸溶液为了调节提取液的pH值，使得溴化钾和溴酸钾能够在酸性溶液中生成溴，与丙烯酰胺反应生成具有更高挥发性、更低极性的溴化产物2,3-二溴丙酰胺，改变丙烯酰胺的极性，使得丙烯酰胺衍生物容易用固相萃取柱吸附。
在本发明中，所述硫酸溶液的浓度优选为0.1～0.4mol/L，进一步优选为0.3mol/L。本发明对所述硫酸溶液的配制方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的配制方法配制即可。本发明对所述硫酸溶液的用量没有特殊的限定，能够保证提取液在pH值为1～2时使得溴化钾和溴酸钾生成溴即可。
本发明对所述溴酸钾溶液的浓度没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的浓度即可。在本发明实施例中，所述溴酸钾溶液的浓度优选为1.67％溴酸钾溶液。本发明对所述溴酸钾溶液的配制方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的配制方法配制即可。
本发明对所述溴化钾和溴酸钾溶液的用量没有特殊的限定，只要能够保证生成过量的溴，来与丙烯酰胺进行化学反应即可。
本发明对所述提取液、溴化钾、硫酸溶液和溴酸钾溶液的混合的操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的制备混合溶液的技术方案即可。在本发明中，所述提取液、溴化钾、硫酸溶液和溴酸钾溶液的混合优选为先将提取液与溴化钾混合，得到混合液；再将所述混合液与硫酸溶液和溴酸钾溶液混合，得到上清液。
本发明优选先将提取液与溴化钾混合，得到混合液。本发明对所述提取液与溴化钾混合的方式没有特殊要求，能够将溴化钾溶解即可。
本发明优选将混合液与硫酸溶液和溴酸钾溶液混合，得到上清液。在本发明中，所述混合液与硫酸溶液和溴酸钾溶液的混合优选为加盖混合。本发明对于所述加盖混合的时间没有特殊的限定，能够混合均匀即可。
混合液与硫酸溶液和溴酸钾溶液的混合完成后，本发明优选将所述混合的产物依次进行静置和除溴，得到上清液。在本发明中，所述静置时间优选为25～35min，进一步优选为30min。本发明对于所述静置的温度没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的温度即可。在本发明中，所述静置的温度优选为4℃。在本发明中，所述除溴能够除去提取液中溴化衍生后多余的溴。
在本发明中，所述除溴的时间优选为4～6min，进一步优选为5min。本发明对所述除溴的操作没有特殊的限定，能够去除溴化衍生后多余的溴即可。在本发明的实施例中，所述除溴优选采用25％硫代硫酸钠溶液。
得到上清液后，本发明将所述上清液进行净化处理，得到测试液。在本发明中，所述净化处理优选包括：将所述上清液依次过固相萃取柱，除杂，洗脱，吹干和溶解离心，得到测试液。在本发明中，所述净化处理能够去除杂质，将丙烯酰胺浓缩富集，进一步提高浓缩净化效果。
在本发明中，所述净化处理时间优选为25～35min，进一步优选为30min。
本发明对所述固相萃取柱的种类没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的固相萃取柱即可。在本发明中，所述固相萃取柱优选为SCP固相萃取柱。
本发明对所述固相萃取柱的规格没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的规格即可。
本发明优选在所述固相萃取柱使用前进行活化处理。在本发明中，所述活化处理一是为了浸润填料、以便样品溶液能流过固相萃取柱；二是为了清洗固相萃取柱上面的干扰杂质以及溶剂残留，避免对检测结果产生影响。
本发明对所述活化处理的具体操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的活化处理的技术方案即可。
本发明对所述上清液过固相萃取柱的流速没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的流速即可。在本发明中，所述上清液过固相萃取柱的流速为1mL/min。
在本发明中，所述除杂优选依次包括淋洗和抽真空。在本发明中所述除杂能够除去水溶性杂质和脂肪等。在本发明中，所述淋洗和抽真空优选为采用水淋洗后，抽真空除去柱子上的水分，再使用正己烷淋洗，抽真空除去柱子上的溶液。本发明对所述水和正己烷的用量没有特殊的限定，能够除去水溶性杂质和脂肪即可。在本发明中，所述抽真空的时间优选为8-12min，进一步优选为10min。
本发明对所述洗脱时采用的洗脱溶剂没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的洗脱溶剂即可。在本发明中，所述洗脱溶剂优选为乙酸乙酯。本发明对于所述乙酸乙酯的用量没有特殊的限定，能够将目标化合物全部洗脱即可。
在本发明中，所述吹干优选为在水浴下气体吹干。在本发明中，所述吹干能够进一步除去目标化合物中的杂质。本发明对于所述水浴温度以及气体的种类没有特殊的限定，能够达到吹干的目的即可。
本发明对于所述溶解离心的具体操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的操作即可。
本发明将所述测试液进行气相色谱-质谱分析，得到丙烯酰胺的含量。
本发明对所述测试液进行气相色谱-质谱分析的时间优选为15～25min，进一步优选为20min。
本发明对所述气相色谱-质谱的条件没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的条件即可。
本发明对所述测试液进行气相色谱-质谱分析的操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的气相色谱-质谱分析步骤进行操作即可。
本发明对所述测试液进行气相色谱-质谱分析的操作过程没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的操作过程即可。在本发明中，对所述测试液进行气相色谱-质谱分析优选依次进行标准曲线的制作；对试样溶液的测定得到测试液中丙烯酰胺的含量；结果计算，得到粮食制品中丙烯酰胺的含量。
本发明对所述标准曲线的制作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的内标法标准曲线的制作方法制作即可。在本发明中，所述标准曲线的制作优选为取不同浓度的丙烯酰胺标准工作液与丙烯酰胺内标溶液，以丙烯酰胺标准工作液与丙烯酰胺内标溶液的质量比为横坐标，峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。
对试样溶液的测定得到测试液中丙烯酰胺的含量。本发明对所述试样溶液的测定过程没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的测定过程即可。在本发明中，所述试样溶液的测定优选为先将测试液注入气相色谱-质谱仪中，测得粮食制品中的丙烯酰胺和丙烯酰胺内标溶液中的丙烯酰胺的峰面积比，再根据所述标准曲线得到测试液中丙烯酰胺的含量。
本发明对所述结果计算的公式没有特殊的限定，只要能够计算得到粮食制品中丙烯酰胺的含量即可。在本发明中，所述结果计算的公式优选为按式(1)计算，得到粮食制品中丙烯酰胺的含量。
C＝N/M (1)，
式(1)中：C为粮食制品中丙烯酰胺的含量，μg/kg；N为所述测试液中丙烯酰胺的含量，ng；M为粮食制品的质量，g。
本发明对所述溴化钾、浓硫酸、溴酸钾、硫代硫酸钠、无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、甲醇、丙烯酰胺标准品、100μg/mL13C3-丙烯酰胺内标溶液和SCP固相萃取柱的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的市售产品即可。在本发明中，所述上述原料优选为上海国药生产。本发明对所述溴化钾、浓硫酸、溴酸钾、硫代硫酸钠、无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、甲醇、丙烯酰胺标准品和100μg/mL13C3-丙烯酰胺内标溶液的纯度没有特殊的限定，采用本领技术人员常规的纯度即可。在本发明中，所述乙酸乙酯和甲醇优选为色谱纯，所述溴化钾、浓硫酸、溴酸钾、硫代硫酸钠、无水乙醇、石油醚和100μg/mL13C3-丙烯酰胺内标溶液优选为分析纯，所述丙烯酰胺标准品纯度优选为大于99％，所述水优选为超纯水。
本发明的检测方法对仪器和设备没有特殊的限定，能够实现本发明的技术方案即可。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
(1)试剂和材料
注：除非另有说明，本发明所用试剂均为上海国药生产，均为分析纯，水为超纯水。
硫代硫酸钠、溴酸钾、溴化钾、浓硫酸、无水乙醇、石油醚：沸点30-60℃；
正己烷、乙酸乙酯：色谱纯、甲醇：色谱纯、丙烯酰胺标准品：纯度大于99％、13C3-丙烯酰胺内标溶液：100μg/mL、SCP固相萃取柱：规格200mg/6mL。
(2)标准溶液及试剂配制
丙烯酰胺标准储备液(1.0mg/mL)：称取10mg丙烯酰胺标准品至10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，4℃冰箱保存。
丙烯酰胺标准使用液(10.0μg/mL)：取0.25mL 1.0mg/mL丙烯酰胺标准储备液至25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度得10.0μg/mL标准使用液，4℃冰箱保存。
丙烯酰胺标准工作液(1.0μg/mL)：取1.0mL 10.0μg/mL丙烯酰胺标准使用液至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度得1.0μg/mL丙烯酰胺标准工作液，4℃冰箱保存。
10.0μg/mL13C3-丙烯酰胺内标溶液(10.0μg/mL)：取1mL 100μg/mL13C3-丙烯酰胺内标溶液至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，4℃冰箱保存。
1.0μg/mL丙烯酰胺内标溶液(1.0μg/mL)：取2.5mL 10.0μg/mL13C3-丙烯酰胺内标溶液至25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度得1.0μg/mL13C3-丙烯酰胺内标应用液，4℃冰箱保存。
10％乙醇提取液：取10mL无水乙醇，加水到100mL。
0.3mol/L硫酸溶液：取16.7mL浓硫酸，慢慢加入到50mL水中，最后用水稀释至100mL。
1.67％溴酸钾溶液：称取1.67g溴酸钾，溶于100mL水。
25％硫代硫酸钠溶液：称取25g硫代硫酸钠，用水溶解并稀释至100mL。
(3)仪器和设备
15mL、50mL具塞刻度离心管。
气相色谱质谱仪。
氮吹仪。
离心机：最大转速10000rpm以上。
旋涡混匀器。
超声波清洗仪。
固相萃取仪：带真空泵。
(4)取50g FAPAS质控样饼干T3094QC(该质控样赋值为293mg/kg，含量范围为181-406mg/kg)，经粉碎机充分粉碎，过五号筛(80目)装于50mL塑料离心管内。
(5)提取：准确称取FAPAS质控样饼干T3094QC 2.000g于50mL试管中，加入1.0μg/mL13C3-丙烯酰胺内标溶液200μL，斡旋2min。加入10mL10％乙醇提取液、10mL石油醚，超声提取10min，10000r/min离心3min取出，吸去上层石油醚层，吸出提取液至15mL具塞离心管中备用。
(6)衍生：在提取液中加入1.5g溴化钾，斡旋溶解，再加入0.6mL0.3mol/L硫酸溶液、1mL 1.67％溴酸钾溶液，加盖后混匀于4℃冰箱中静置30min。从冰箱中取出，加入0.1mL25％硫代硫酸钠溶液除去多剩的溴，10000r/m离心5min，上清液待净化。
(7)净化：取SCP柱，先用5mL甲醇、5mL水依次活化柱子，然后将上清液全部过柱，保持1mL/min流速，再用5mL水淋洗除杂，淋洗完后，抽真空5min除去柱子上水分，用5mL正己烷淋洗除杂，抽真空5min除去柱子上溶剂，最后用5mL乙酸乙酯洗脱收集于15mL试管中，40℃水浴下氮气吹干，加0.2mL乙酸乙酯超声溶解残渣，10000r/m离心2min后，取上清液即为测试液，转移至进样瓶中，供GC/MS分析。
(8)气相色谱-质谱参考条件
色谱柱：HP-1701弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)或等同柱
柱温度程序：65℃保持1min，以10℃/min速度升至230℃，并保持2min。
进样口温度：220℃。
色谱-质谱接口温度：230℃
离子源温度：230℃。
载气：氦气，纯度≥99.999％，流速为1.0mL/min。
电离方式：EI源。
电离能量：70eV。
测定方式：SIM模式
进样方式：不分流进样。
进样量：1μL。
溶解延迟：10min。
(9)标准曲线制作：取6个15mL塑料离心管，分别移取0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL的1μg/mL丙烯酰胺标准工作液与1.0μg/mL 13C3-丙烯酰胺内标溶液，用20％乙醇溶液液稀释至10mL。标准系列工作液中丙烯酰胺的浓度分别为2μg/L、5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L，13C3-丙烯酰胺内标溶液为20μg/L。同粮食制品衍生、净化、测定，将标准系列工作液进行气相色谱-质谱仪测定，测得相应的峰面积获得20ng-1000ng丙烯酰胺标准曲线，以丙烯酰胺标准工作液与丙烯酰胺内标溶液的质量比为横坐标，峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线如附图1。
(10)试样溶液的测定：将测试液注入气相色谱-质谱仪中，测得丙烯酰胺、13C3-丙烯酰胺相应的峰面积，根据标准曲线得到试样测试液中丙烯酰胺含量。如果试样测试液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围，可适当减少取样量后测定。
(11)结果计算：按式(1)计算，得到粮食制品中丙烯酰胺的含量。
C＝N/M (1)，
式(1)中：C为粮食制品中丙烯酰胺的含量，μg/kg；N为所述测试液中丙烯酰胺的含量，ng；M为粮食制品的质量，g。
表1粮食制品中丙烯酰胺含量以及检测时间
Figure BDA0002402432350000121
实施例2
在婴幼儿辅助食品米粉(米粉中含有较低浓度的丙烯酰胺)中添加0.01mg/kg丙烯酰胺按照实施例1的方法进行检测，丙烯酰胺回收率在74.5％，信噪比(S/N)为22.7，说明本发明的检测方法灵敏度高，能够准确测出丙烯酰胺含量为0.01mg/kg的粮食样品中丙烯酰胺的含量，故确定本发明的检测方法定量限为0.01mg/kg，按照1/3定量限计算粮食制品中丙烯酰胺检出限为0.003mg/kg。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种粮食制品中丙烯酰胺的检测方法，包括以下步骤：
1)将粮食制品、丙烯酰胺内标溶液和提取剂混合，得到提取液；
2)将所述步骤1)得到的提取液进行溴化衍生，得到上清液；
3)将所述步骤2)得到的上清液进行净化处理，得到测试液；
4)将所述步骤3)得到的测试液进行气相色谱-质谱分析，得到丙烯酰胺的含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在所述步骤1)中粮食制品的粒度为80目以上。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中的提取剂包括乙醇溶液。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中混合时还包括加入脱脂剂。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤2)中的溴化衍生包括：将提取液、溴化钾、硫酸溶液和溴酸钾溶液混合后静置，得到上清液。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述步骤2)中静置后还包括除溴。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤3)中的净化处理包括：将所述步骤2)得到的上清液依次过固相萃取柱，除杂，洗脱，吹干和溶解离心，得到测试液。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述固相萃取柱在使用前进行活化处理。
9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述除杂依次包括淋洗和抽真空。
10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述吹干是在水浴下气体吹干。
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