CN101972292B

CN101972292B - 淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法

Info

Publication number: CN101972292B
Application number: CN2010101822838A
Authority: CN
Inventors: 郭磊; 索卫国; 蔡继宝; 廖堃; 洪炜
Original assignee: China Tobacco Jiangxi Industrial Co Ltd
Current assignee: China Tobacco Jiangxi Industrial Co Ltd
Priority date: 2010-05-25
Filing date: 2010-05-25
Publication date: 2012-01-04
Anticipated expiration: 2030-05-25
Also published as: CN101972292A

Abstract

一种淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法，涉及淫羊藿测定方法领域，本发吸包括以下步骤：(1)淫羊藿叶片粉碎并过筛子后，放于容器中，加入浓度为50％-70％的醇水溶液，提取黄酮糖苷类化合物，取上层清液过滤，得到待分析样品。(2)利用超高效液相色谱-串联质谱法同时对所得待分析样品进行分析。本发明的有益效果是：首先能够有效地将淫羊藿中黄酮糖苷类化合物完全提取，然后经过超高效液相色谱分离，串联质谱的特定扫描模式分析，从而实现快速、准确的定量分析。

Description

淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法

技术领域

本发明涉及淫羊藿测定方法，尤其涉及淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法。

背景技术

中药材淫羊藿中的化学成分是多种多样和十分复杂的，黄酮糖苷类化合物是其中一类分布较广泛的重要化学成分，也是其主要的有效成分，主要包括淫羊藿苷A、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、箭藿苷A等，这一类化合物具有抗心肌缺血、降血压、改善微循环、增强免疫等药理活性，因此研究者对它们的研究日趋活跃。目前中药材淫羊藿黄酮糖苷类化合物的分析方法主要有高效液相色谱法和液相色谱-质谱联用法。由于普通的高效液相色谱仪器受分离度、柱效、检测器灵敏度等方面的限制，不易实现这六种化合物的基线分离，再加上自身抗干扰能力弱，容易造成定量不准确。

发明内容

本发明的目的是提供一种淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法，能快速、准确定量分析中药材淫羊藿中的黄酮糖苷类化合物。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法，包括以下步骤：

(1)提取：淫羊藿叶片经粉碎，过40目-80目的筛子后，称取0.2g-0.5g粉末于容器中，加入20mL-50mL浓度为50％-70％的醇水溶液，称重，提取黄酮糖苷类化合物，补足重量，取上层清液过滤，得到待分析样品。

(2)分析：

色谱条件：分析柱：Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(1.7μm，2.1mm×50mm)；流动相：A相为添加了0.1％-0.3％有机酸I的水溶液，B相为乙腈，梯度洗脱；流速：0.25mL/min；柱温30℃。

质谱条件：选择串联质谱的特定扫描模式进行分析，具体参数如下：气帘气：20mL/min；碰撞气：中；离子源气1：50mL/min；离子源气2：60mL/min；接口加热器：开；温度：550℃；离子喷雾电压：5000V。

所述中药材淫羊藿可为：朝鲜淫羊藿，箭叶淫羊藿，或巫山淫羊藿。

所述提取过程可为超声波提取，也可为震荡提取，或浸泡提取。所述醇类试剂可为包括一个、二个或三个碳原子的一元醇或多元醇，所述有机酸I可为包括一个、二个或三个碳原子的一元有机酸。所述特定扫描模式可为全扫描模式、中性丢失扫描模式、多反应监测扫描模式。

本发明的有益效果是：能够有效地将淫羊藿中黄酮糖苷类化合物首先实现完全提取，然后经过超高效液相色谱分离，串联质谱的特定扫描模式分析，从而实现快速、准确的定量分析，具有灵敏度高、抗干扰能力强、样品前处理简单、高柱效、高分离度、更容易实现这一类化合物的基线分离等优点。本发明的方法不仅可以测定诸如朝鲜淫羊藿这样复杂体系的黄酮糖苷类化合物，而且灵敏度高、选择性强、准确性好、操作简便快速。

具体实施方式

本发明以下将结合实施例作进一步描述，但并不限制本发明。

实施例1

a、称取过40目筛的中药材淫羊藿样品0.5g于100mL具塞玻璃锥形瓶中，加入50mL50％的甲醇-水溶液(V/V)，称重，在常温下，在超声功率350W和超声波频率为70KHz下超声30min，补足重量。

b、取上层清液，以0.22um有机相滤膜过滤，得待分析样品。

c、对所得待分析样品进行分析：

1.色谱条件：分析柱：Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(1.7μm，2.1mm×50mm)；流动相：A相为0.1％的甲酸-水溶液(V/V)，B相为乙腈溶液；梯度条件：0min，A∶B(90％∶10％)；10min，A∶B(80％∶20％)；25min，A∶B(70％∶30％)；35min，A∶B(50％∶50％)；35.1min，A∶B(0％∶100％)；39.9min，A∶B(0％∶100％)40.0min，A∶B(90％∶10％)。流速：0.25mL/min；柱温30℃。

2.质谱条件：采用多反应监测扫描模式进行定量分析，各化合物的特征母离子-子离子对如下表所示：

表1黄酮糖苷类化合物的碎片信息

注：＊碎片离子为定量离子，其余碎片离子为定性离子。

实施例2

a、称取过60目筛的中药材淫羊藿样品0.4g于100mL具塞玻璃锥形瓶中，加入40mL60％的甲醇-水溶液(V/V)，称重，常温下，在转速150r/min下震荡30min，静置5min，补足重量。

b、取上层清液，以0.22um有机相滤膜过滤，得待分析样品。

c、对所得待分析样品进行分析：

1.色谱条件：分析柱：Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(1.7μm，2.1mm×50mm)；流动相：A相为0.2％的甲酸-水溶液(V/V)，B相为乙腈溶液；梯度条件：0min，A∶B(90％∶10％)；10min，A∶B(80％∶20％)；25min，A∶B(70％∶30％)；35min，A∶B(50％∶50％)；35.1min，A∶B(0％∶100％)；39.9min，A∶B(0％∶100％)40.0min，A∶B(90％∶10％)。流速：0.25mL/min；柱温30℃。

2.质谱条件：采用中性丢失扫描模式进行定量分析。

实施例3

a、称取过80目筛的中药材淫羊藿样品0.5g于100mL具塞玻璃锥形瓶中，加入20mL70％的甲醇-水溶液(V/V)，称重，常温下，浸泡1.5h，补足重量。

b、取上层清液，以0.22um有机相滤膜过滤，得待分析样品。

c、对所得待分析样品进行分析：

1.色谱条件：分析柱：Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(1.7μm，2.1mm×50mm)；流动相：A相为0.3％的甲酸-水溶液(V/V)，B相为乙腈溶液；梯度条件：0min，A∶B(90％∶10％)；10min，A∶B(80％∶20％)；25min，A∶B(70％∶30％)；35min，A∶B(50％∶50％)；35.1min，A∶B(0％∶100％)；39.9min，A∶B(0％∶100％)40.0min，A∶B(90％∶10％)。流速：0.25mL/min；柱温30℃。

2.质谱条件：采用多反应监测扫描模式进行定量分析。

Claims

1.一种淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)提取：淫羊藿叶片经粉碎，过40目-80目的筛子后，称取0.2g-0.5g粉末于容器中，加入20mL-50mL浓度为50％-70％的醇水溶液，称重，提取黄酮糖苷类化合物，补足重量，取上层清液过滤，得到待分析样品；

(2)分析：

色谱条件：分析柱：Waters Acquity UPLC BEH C₁₈；流动相：A相为添加了0.1％-0.3％有机酸I的水溶液，B相为乙腈，梯度洗脱，梯度条件：0min，A∶B为90％∶10％；10min，A∶B为80％∶20％；25min，A∶B为70％∶30％；35min，A∶B为50％∶50％；35.1min，A∶B为0％∶100％；39.9min，A∶B为0％∶100％；40.0min，A∶B为90％∶10％；流速：0.25mL/min；柱温30℃；

质谱条件：选择串联质谱的特定扫描模式进行分析，具体参数如下：气帘气：20mL/min；碰撞气：中；离子源气1∶50mL/min；离子源气2∶60mL/min；接口加热器：开；温度：550℃；离子喷雾电压：5000V。

2.根据权利要求1所述的一种淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法，其特征在于：所述中药材淫羊藿为：朝鲜淫羊藿，箭叶淫羊藿，或巫山淫羊藿。

3.根据权利要求1所述的一种淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法，其特征在于：所述提取过程为超声波提取，震荡提取，或浸泡提取。

4.根据权利要求1所述的一种淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法，其特征在于：所述醇类试剂为包括一个、二个或三个碳原子的一元醇或多元醇，所述有机酸I为包括一个、二个或三个碳原子的一元有机酸。

5.根据权利要求1所述的一种淫羊藿中黄酮糖苷类化合物的测定方法，其特征在于：所述特定扫描模式为全扫描模式、中性丢失扫描模式、多反应监测扫描模式。