CN112014488A - 格列本脲中杂质环己胺的检测方法 - Google Patents

格列本脲中杂质环己胺的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种采用高效液相分离与紫外检测串联的方式检测格列本脲中杂质环己胺的新方法，该方法稳定性好、重现性好、操作简单，可准确的检测出格列本脲中杂质环己胺，有利于药品的质量控制。

Description

格列本脲中杂质环己胺的检测方法
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，涉及一种降血糖的药物格列本脲中杂质环己胺的检测方法。
背景技术
格列本脲是一种口服的降血糖类药物，其原料药合成路线如下：
Figure BDA0002079945480000011
合成格列本脲的起始物料环己基异氰酸酯较为活泼，在合成过程中遇水极易生成环己胺，为有效控制格列本脲产品质量，需对杂质环己胺进行有效控制。
环己胺生成路线如下：
Figure BDA0002079945480000012
目前通过查询文献可知检测环己胺大部分采用气相色谱法，但根据格列本脲结构特性发现格列本脲在高温条件下可降解产生环己胺，干扰检测，为有效控制产品质量，需严格控制其杂质含量。目前，各国药典均未收载格列本脲中杂质环己胺的检测方法，参考相关文献如下所述：
1、文献1：气相色谱仪在环己胺分析中的应用
色谱条件：色谱柱：5％二苯基-95％二甲基聚硅氧烷为填充剂的毛细管柱；检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；检测器温度：280℃；进样口温度：250℃；升温程序：起始柱温50℃，维持1分钟，以每分钟10℃速率升温至100℃，维持3分钟；分流比：12:1；进样方式：直接进样；进样量：1.0ml。
2、文献2：填充柱气相色谱法测定环己胺及其杂质
色谱条件：色谱柱：3mm×2500mm不锈钢柱；检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；检测器温度：250℃；进样口温度：250℃；色谱柱温度：125℃；进样方式：直接进样；进样量：0.4μl。
3、以上文献收载的环己胺检测方法均为气相色谱法，但格列本脲在高温条件下会降解生成杂质环己胺，干扰检测。
4、为解决格列本脲对杂质环己胺的干扰问题，我们摸索出一套适合格列本脲中杂质环己胺检测的分析方法。该方法快速简便，稳定性及专属性良好；一定浓度范围内，浓度与峰面积之间线性关系良好；重复性试验、中间精密度试验RSD均小于2.0％，回收率试验RSD小于5.0％；最低检出量(S/N＝3)为0.06μg/ml(0.003％)；在色谱柱柱温、流速、流动相pH、流动相中三乙胺用量略有波动及采用不同仪器或色谱柱时，检测结果均一致，方法耐用性较好。
发明内容
本发明的目的在于提供一种格列本脲中杂质环己胺的检测方法，且方法稳定性好、重现性好，用于格列本脲中杂质环己胺检测。
本发明解决上述技术问题所采取的技术方案是：将格列本脲和环己胺进行柱前衍生处理后，采用高效液相分离与紫外检测串联的方式分析检测，具体如下：
1)色谱条件：
色谱柱：十八烷基键合硅胶键合硅胶为填充剂；
流动相：0.1％三乙胺溶液-乙腈等度洗脱；
流动相的流速：0.8～1.2mL/min；
柱温：30～40℃；
检测波长：250nm；
检测时间：60min；
2)溶液制备
反应机理：2,3,4,6-四乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯(GITC)是一种非常常见活泼的胺类衍生化试剂，在碱性常温下即可与环己胺上的-NH-进行1:1的化学反应，得到稳定的硫脲化合物；格列本脲结构上的-NH-(酰胺)显酸性，与GITC不发生反应。
环己胺与GITC反应式如下：
Figure BDA0002079945480000031
环己胺本身无紫外吸收，采用高效液相分离与紫外检测串联方式不能有效检测；当环己胺与衍生试剂(GITC)反应后，生成硫脲类化合物，紫外吸收较强，可采用高效液相分离与紫外检测串联方式进行检测。
衍生试剂：2,3,4,6-四乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯(GITC)；
GITC溶液：临用新制，取衍生试剂GITC约20mg，精密成定，置5ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为GITC溶液；
三乙胺溶液：取三乙胺约25mg，精密称定，置10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度摇匀，作为三乙胺溶液；
溶剂：精密量取三乙胺1ml，置1000ml乙腈中，混匀；
格列本脲溶液：取格列本脲约20mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为格列本脲溶液；
环己胺溶液：取环己胺约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为环己胺溶液；
格列本脲衍生化溶液：精密量取格列本脲溶液、GITC溶液、三乙胺溶液各适量，混匀，室温放置20分钟后，作为格列本脲衍生化溶液；
环己胺衍生化溶液：精密量取环己胺溶液、GITC溶液、三乙胺溶液各适量，混匀，室温放置20分钟后，作为环己胺衍生化溶液；
空白溶剂：精密量取溶剂、GITC溶液、三乙胺溶液各适量，混匀，室温放置20分钟后，作为空白溶剂；
3)分析检测：取步骤2)的环己胺衍生化溶液、格列本脲衍生化溶液及空白溶剂各20μL注入液相色谱仪，完成格列本脲中杂质环己胺的检测。
进一步地，我们公开了所述的色谱柱：十八烷基键合硅胶键合硅胶为填充剂，Ultimate XB-C18 4.6×250mm，5μm。
更进一步地，我们公开了所述的流动相组成：0.1％三乙胺溶液(量取三乙胺1ml，置1000ml水中，用冰乙酸调节pH值至3.5)-乙腈(60:40)。
同时，我们还公开了优选的柱温为35℃，流动相的流速为1.0mL/min。
最后，我们进一步公开了格列本脲衍生化溶液、环己胺衍生化溶液及空白溶剂的制备；格列本脲衍生化溶液：精密量取0.1ml格列本脲溶液，0.4mlGITC溶液，0.1ml三乙胺溶液，混匀，室温放置20分钟后，作为格列本脲衍生化溶液；环己胺衍生化溶液：精密量取0.1ml环己胺溶液，0.4mlGITC溶液，0.1ml三乙胺溶液，混匀，室温放置20分钟后，作为环己胺衍生化溶液；空白溶剂：精密量取0.1ml溶剂，0.4mlGITC溶液，0.1ml三乙胺溶液，混匀，室温放置20分钟后，作为空白溶剂。
有益效果
现有技术相中格列本脲检测一般采用气相色谱法，但格列本脲在高温条件下会降解生成杂质环己胺，干扰检测。
本发明利用方便快捷的的高效液相色谱法，柱前衍生处理后，采用高效液相分离与紫外检测串联的方式分析检测，将格列本脲中杂质环己胺有效检出，方法稳定性、重现性、准确度均十分良好，有利于药品的质量控制。
附图说明
图1示实施例中空白溶剂的检测结果；
图2示实施例中格列本脲衍生化溶液的检测结果；
图3示实施例中环己胺衍生化溶液的检测结果
具体实施方式
为使本领域的技术人员能够更好的理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。
本发明所使用的试剂均为市场上可购得的色谱纯级别试剂。
实施例：
色谱条件：
仪器：岛津20A，岛津20AvT紫外检测器，检测波长：250nm；
色谱柱：十八烷基键合硅胶键合硅胶为填充剂，Ultimate XB-C18 4.6×250mm，5μm；
流动相：0.1％三乙胺溶液(量取三乙胺1ml，置1000ml水中，用冰乙酸调节pH值至3.5)-乙腈(60:40)；
流速：1.0mL/min；
柱温：35℃；
检测波长：250nm；
检测时间：60min；
测定法：
GITC溶液：临用新制，取衍生试剂GITC约20mg，精密成定，置5ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为GITC溶液；
三乙胺溶液：取三乙胺约25mg，精密称定，置10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度摇匀，作为三乙胺溶液；
溶剂：精密量取三乙胺1ml，置1000ml乙腈中，混匀；
格列本脲溶液：取格列本脲约20mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为格列本脲溶液；
环己胺溶液：取环己胺约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为环己胺溶液；
格列本脲衍生化溶液：精密量取格列本脲溶液、GITC溶液、三乙胺溶液各适量，混匀，室温放置20分钟后，作为格列本脲衍生化溶液；
环己胺衍生化溶液：精密量取环己胺溶液、GITC溶液、三乙胺溶液各适量，混匀，室温放置20分钟后，作为环己胺衍生化溶液；
空白溶剂：精密量取溶剂、GITC溶液、三乙胺溶液各适量，混匀，室温放置20分钟后，作为空白溶剂；
精密量取格列本脲衍生化溶液和环己胺衍生化溶液各20μl，分别注人液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，环己胺不得过0.10％。

Claims (4)

1.格列本脲中杂质环己胺检测方法，其特征在于：格列本脲溶液及环己胺对照品溶液柱前衍生后，采用高效液相分离与紫外检测串联的方式分析检测，具体如下：
1)色谱条件：
色谱柱：十八烷基键合硅胶键合硅胶为填充剂；
流动相：0.1％三乙胺溶液-乙腈等度洗脱；
流动相的流速：0.8～1.2mL/min；
柱温：30～40℃；
检测波长：250nm；
检测时间：60min；
2)溶液制备：
反应机理：2,3,4,6-四乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯(GITC)是一种非常常见活泼的胺类衍生化试剂，在碱性常温下即可与环己胺上的-NH-进行1:1的化学反应，得到稳定的硫脲化合物；格列本脲结构上的-NH-(酰胺)显酸性，与GITC不发生反应；
衍生试剂：2,3,4,6-四乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯(GITC)；
GITC溶液：临用新制，取衍生试剂GITC约20mg，精密成定，置5ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为GITC溶液；
三乙胺溶液：取三乙胺约25mg，精密称定，置10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度摇匀，作为三乙胺溶液；
溶剂：精密量取三乙胺1ml，置1000ml乙腈中，混匀；
格列本脲溶液：取格列本脲约20mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为格列本脲溶液；
环己胺溶液：取环己胺约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为环己胺溶液；
格列本脲衍生化溶液：精密量取格列本脲溶液、GITC溶液、三乙胺溶液各适量，混匀，室温放置20分钟后，作为格列本脲衍生化溶液；
环己胺衍生化溶液：精密量取环己胺溶液、GITC溶液、三乙胺溶液各适量，混匀，室温放置20分钟后，作为环己胺衍生化溶液；
空白溶剂：精密量取溶剂、GITC溶液、三乙胺溶液各适量，混匀，室温放置20分钟后，作为空白溶剂；
3)分析检测：取步骤2)的环己胺衍生化溶液、格列本脲衍生化溶液及空白溶剂各20μL注入液相色谱仪，完成格列本脲中杂质环己胺的检测。
2.根据权利要求1所述的格列本脲中杂质环己胺的检测方法，其特征在于：所述流动相：0.1％三乙胺溶液(量取三乙胺1ml，置1000ml水中，用冰乙酸调节pH值至3.5)-乙腈(60:40)。
3.根据权利要求1所述的格列本脲中杂质环己胺的检测方法，其特征在于：柱温为35℃，流动相的流速为1.0mL/min。
4.根据权利要求1所述的格列本脲中杂质环己胺的检测方法，其特征在于：格列本脲衍生化溶液、环己胺衍生化溶液及空白溶剂的制备；格列本脲衍生化溶液：精密量取0.1ml格列本脲溶液，0.4mlGITC溶液，0.1ml三乙胺溶液，混匀，室温放置20分钟后，作为格列本脲衍生化溶液；环己胺衍生化溶液：精密量取0.1ml环己胺溶液，0.4mlGITC溶液，0.1ml三乙胺溶液，混匀，室温放置20分钟后，作为环己胺衍生化溶液；空白溶剂：精密量取0.1ml溶剂，0.4mlGITC溶液，0.1ml三乙胺溶液，混匀，室温放置20分钟后，作为空白溶剂。
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