CN103251564A - 一种注射用阿扎胞苷及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种注射用阿扎胞苷及其制备方法，主要成分包含主药阿扎胞苷和甘露醇，本发明主要通过控制阿扎胞苷水溶液的pH值，有效抑制阿扎胞苷水解，降低冻干后产品的有关物质，提高了阿扎胞苷冻干制剂的产品质量。
Description
技术领域
本发明涉及一种注射用阿扎胞苷及其制备方法，属医药技术领域。
背景技术
阿扎胞苷(Azacitidine)为DNA甲基转移酶抑制剂,可引起DNA低甲基化,并具有直接细胞毒作用，由美国Pharmion制药公司研制开发。2004年5月美国FDA批准该药物Vidaza上市，用于对骨髓增生异常综合征的所有亚型的治疗。由于该药物活性成分阿扎胞苷在水中迅速水解，使得冻干制剂有关物质很难控制，储存期间产品稳定性差，因而对于临床用药安全和有效性造成了潜在的影响。
5-氮杂胞嘧啶核苷结构式如下：
阿扎胞苷（化合物1）是一种胞嘧啶核苷类似物，在水中极易水解，主要产生两个水解产物，是注射用阿扎胞苷的主要杂质。如下反应所示，阿扎胞苷的含氮杂环首先开环得到化合物2，这一步反应为可逆反应，两者可以相互转化保持平衡。化合物2进一步水解得到化合物3，这一步反应为不可逆反应。
化合物1 化合物2 化合物3
发明内容
本发明的目的是提供一种稳定的注射用阿扎胞苷制剂及其制备方法，主要通过控制阿扎胞苷水溶液的pH值，抑制阿扎胞苷在水中迅速水解，减少水解产物的生成，从而大大降低了冻干产品的有关物质，提高产品质量。
实验过程中，首先研究了阿扎胞苷在不同pH值下的甘露醇水溶液中的稳定性情况，具体实验条件为：采用盐酸或氢氧化钠调节甘露醇水溶液的pH值分别为5，6，6.5，7，7.5和8，控制溶液温度在-1～-3℃范围内，每份甘露醇水溶液中加入等量的阿扎胞苷原料药溶解，分别于0，30，60和90min取样，采用HPLC法测定有关物质情况（水解产物，即化合物2），筛选适宜的pH值范围。
有关物质检测方法如下：
⑴色谱条件：
色谱柱：ODS-C8（4.6×250mm,5um）
进样量：10uL
柱温：25℃
流速：1.0ml/min
检测波长：205nm
流动相：A相，2mmol/L乙酸铵；B相，甲醇
梯度：
⑵检测方法：
将样品配制成浓度为1mg/ml的甲醇溶液，取10uL进样，百分之一自身对照法计算有关物质情况。
阿扎胞苷在不同pH值的甘露醇水溶液中的有关物质测定结果如下：
上述结果表明，阿扎胞苷在偏中性的甘露醇水溶液中的降解产物较少。根据实验结果，分别采用pH值为6，6.5，7，7.5和8的甘露醇水溶液配制阿扎胞苷溶液，进行冻干研究，测定冻干产品的有关物质情况。
本发明注射用阿扎胞苷，由主药阿扎胞苷和赋形剂甘露醇组成。所述的注射用阿扎胞苷，每支的组成为：
阿扎胞苷 100mg
甘露醇 100mg
本发明注射用阿扎胞苷的制备方法如下：
⑴量取80%注射用水，加入甘露醇，搅拌至完全溶解；
⑵加入活性炭，80℃水浴保温20分钟，过滤除碳；
⑶用注射用水补足全量，降温至-1～-3℃，调节pH6-8；
⑷加入阿扎胞苷，搅拌至完全溶解，严格控制温度在-1～-3℃；
⑸灌装，25ml/瓶；
⑹按预设温度冻干；
⑺真空压塞、压盖、包装。
具体实施方式
下面通过实施例来进一步说明本发明。应该正确理解的是：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要求保护的范围。
实施例1
1.1处方
1.2冻干程序
1.3制备方法
⑴量取80%注射用水，加入甘露醇，搅拌至完全溶解；
⑵加入活性炭，80℃水浴保温20分钟，过滤除碳；
⑶用注射用水补足全量，降温至-1～-3℃，调节pH6；
⑷加入阿扎胞苷，搅拌至完全溶解，严格控制温度在-1～-3℃；
⑸灌装，25ml/瓶；
⑹开启冻干机，-50℃预冻3h后，开启真空泵，运行程序；
⑺真空压塞、压盖、包装。
1.4全检结果
1.4.1水分：1.25%±0.27（n=6）
1.4.2含量：100.12%±0.35(n=3)
1.4.3有关物质：
实施例2
2.1处方
2.2冻干程序
2.3制备方法
⑴量取80%注射用水，加入甘露醇，搅拌至完全溶解；
⑵加入活性炭，80℃水浴保温20分钟，过滤除碳；
⑶用注射用水补足全量，降温至-1～-3℃，调节pH6.5；
⑷加入阿扎胞苷，搅拌至完全溶解，严格控制温度在-1～-3℃；
⑸灌装，25ml/瓶；
⑹开启冻干机，-50℃预冻3h后，开启真空泵，运行程序；
⑺真空压塞、压盖、包装。
2.4全检结果
2.4.1水分：0.24%±0.13(n=6)
2.4.2含量：99.24%±0.27(n=3)
2.4.3有关物质：
实施例3
3.1处方
3.2冻干程序
3.3制备方法
1、量取80%注射用水，加入甘露醇，搅拌至完全溶解；
2、加入0.1%活性炭，80度水浴搅拌20分钟，过滤除碳；
3、用注射用水补足全量，降温至-1～-3℃，调节pH7；
4、加入阿扎胞苷，搅拌至完全溶解，严格控制温度在-1～-3℃；
5、分装，25ml/瓶；
6、开启冻干机，-50℃预冻3h后，开启真空泵，运行程序；
7、真空压塞、压盖、包装。
3.4全检结果
3.4.1水分：2.29%±0.26(n=6)
3.4.2含量：99.75%±0.56(n=3)
3.4.3有关物质：
实施例4
4.1处方
4.2冻干程序
4.3制备方法
⑴量取80%注射用水，加入甘露醇，搅拌至完全溶解；
⑵加入活性炭，80℃水浴保温20分钟，过滤除碳；
⑶用注射用水补足全量，降温至-1～-3℃，调节pH7.5；
⑷加入阿扎胞苷，搅拌至完全溶解，严格控制温度在-1～-3℃；
⑸灌装，25ml/瓶；
⑹开启冻干机，-50℃预冻3h后，开启真空泵，运行程序；
⑺真空压塞、压盖、包装。
4.4全检结果
4.4.1水分：0.15%±0.35(n=6)
4.4.2含量：100.09%±0.24(n=3)
4.4.3有关物质：
实施例5
5.1处方
5.2冻干程序
5.3制备方法
⑴量取80%注射用水，加入甘露醇，搅拌至完全溶解；
⑵加入活性炭，80℃水浴保温20分钟，过滤除碳；
⑶用注射用水补足全量，降温至-1～-3℃，调节pH8；
⑷加入阿扎胞苷，搅拌至完全溶解，严格控制温度在-1～-3℃；
⑸灌装，25ml/瓶；
⑹开启冻干机，-50℃预冻3h后，开启真空泵，运行程序；
⑺真空压塞、压盖、包装。
5.4全检结果
5.4.1水分：0.28%±0.53(n=6)
5.4.2含量：100.64%±0.33(n=3)
5.4.3有关物质：
本发明在大量实验的基础上，证明注射用阿扎胞苷在制备过程中，溶液的pH值对最终冻干产品的有关物质至关重要。结果表明，控制甘露醇水溶液的pH值在6～8范围内，冻干后产品的有关物质（化合物2和3）含量低于上市样品，如果pH值控制在7～8范围内，冻干后产品中的有关物质含量明显降低，最优的溶液pH值为7.5。
实施例6
本发明的注射用阿扎胞苷和上市样品注射用阿扎胞苷（商品名Vidaza）对人骨髓增生异常综合征荷瘤小鼠抗瘤作用的研究。
实验方法：
1、建立动物模型：
（1）细胞培养：人MDS细胞株MUTZ-1，常规体外培养MUTZ-1细胞。
（2）动物接种及传代：共40只SCID小鼠。无菌条件下，取体外培养的对数生长期MUTZ-1细胞，制成单细胞悬液，用0.9%NaCl调整细胞密度约为1×108/ml接种于4-6周龄第一代SCID小鼠肩胛皮下（每只鼠注射约为0.1ml） 成瘤后无菌手术取材，用细胞形态学、组织病理学、流式细胞术免疫学、染色体分析等方法，分析鉴定荷瘤组织来源及生物学特性。为获取性能稳定的荷瘤动物模型，进行动物传代。观察第二代35只SCID小鼠的生长情况、成瘤率和成瘤潜伏期
2、实验动物分组：取30只第二代人MDS-SCID荷瘤小鼠作为实验动物，雌雄各半，体重约18-23g，随机分为3组，分别为注射用阿扎胞苷（实施例1）组，和注射用阿扎胞苷（上市样品）组，和空白对照组。各阿扎胞苷组均100mg/m2，腹腔注射，每8小时一次，每周连用5天，共用3周。空白对照组相同时间点腹腔注射给予0.9%NaCl。
3、观察药物对各组荷瘤生长、生存期及存活率的影响：自接种日起，每周2次，用游标卡尺测量荷瘤大小，计算瘤体直径均值MTD=[瘤体垂直相交直径乘积（mm）]1/2。待小鼠荷瘤MTD达4-6mm大小时开始给药治疗，同时计算治疗时间和生存期。
4、实验结果：阿扎胞苷治疗3周后，与对照组比较，荷瘤生长明显减慢，平均生存期明显延长。进食较好，活泼自如，无明显体重下降，病理检查多脏器组织未见明显充血水肿，疗效较好。两治疗组治疗效果无显著性差异。说明本发明的改变制备工艺的注射用阿扎胞苷不影响其作用效果。与上市的注射用阿扎胞苷疗效相当，但不良反应更小。结果如下表：
表1各组荷瘤大小及平均生存期
Claims (6)
1.一种注射用阿扎胞苷，其特征在于：配制阿扎胞苷水溶液时，调节溶液的pH值范围为6-8，优选pH值范围为7-8，最佳pH值为7.5。
2.根据权利要求1所述的注射用阿扎胞苷，其特征在于：主要成分包含阿扎胞苷和甘露醇，每支注射用阿扎胞苷含有主药阿扎胞苷100mg。
3.根据权利要求1所述的注射用阿扎胞苷，其制备方法包括如下步骤：
⑴量取80%注射用水，加入甘露醇，搅拌至完全溶解；
⑵加入活性炭，80℃水浴保温20分钟，过滤除碳；
⑶用注射用水补足全量，降温至-1～-3℃，调节pH值6-8；
⑷加入阿扎胞苷，搅拌至完全溶解，严格控制温度在-1～-3℃；
⑸分装，25ml/瓶；
⑹按预设温度冻干；
⑺真空压塞、压盖、包装。
4.根据权利要求3所述的注射用阿扎胞苷，其特征在于，所述的活性炭用量为0.1%-0.5%。
5.根据权利要求3所述的注射用阿扎胞苷的制备方法，其特征在于，所述的制备温度为-1～-3℃。
6.根据权利要求1-5所述的任一注射用阿扎胞苷，其特征在于：用于制备治疗部分FAB分型骨髓增生异常综合征亚型患者药物中的用途。
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