CN104887681B - 一种抑制肺癌细胞转移的组合药物以及检测方法 - Google Patents
一种抑制肺癌细胞转移的组合药物以及检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104887681B CN104887681B CN201510239995.1A CN201510239995A CN104887681B CN 104887681 B CN104887681 B CN 104887681B CN 201510239995 A CN201510239995 A CN 201510239995A CN 104887681 B CN104887681 B CN 104887681B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lung carcinoma
- cell
- carcinoma cell
- composition
- medicine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供一种抑制肺癌细胞转移的组合药物，包括水飞蓟宾、替加氟和DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂；所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549。本发明属于医药技术领域，本发明提供的组合药物具有良好的肺癌细胞抑制效果，且可显著抑制肺癌细胞的转移。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种抑制肺癌细胞转移的组合药物以及肺癌细胞转移的检测方法。
背景技术
肺癌是一种常见的肺部恶性肿瘤，近年来的发病率和死亡率增长最快，对人类健康安全的威胁也越来越大。恶性肿瘤是危害人类生命健康的细胞性疾病，肿瘤细胞从生物体内正常细胞转化为恶性细胞，其形态、功能、代谢和增殖等都会发生变化，可以看作是细胞的异常分化导致其具有永生性。
水飞蓟宾(Silybin)是从菊科药用植物水飞蓟种子的种皮中提取所得的一种天然黄酮木脂素类化合物。水飞蓟宾呈黄色粉末，味苦，可溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇，微溶于氯仿，几乎不溶于水。其分子式为C25H22O10，摩尔质量为482.12。水飞蓟宾临床上主要用于治疗中毒性及酒精相关性肝病的治疗，还可作为抗氧化食品添加剂。药理学研究表明，水飞蓟宾能够清除机体内自由基，延缓衰老，对抗脂质过氧化，抑制一氧化氮的产生，减轻对组织细胞的毒素，保护肝细胞膜、改善肝功能，降血脂和保护心肌等作用。孙羿等在《水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制》一文中指出水飞蓟宾可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖，并能降低凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。中国专利申请201010238453.X公开了水飞蓟宾在治疗神经受损方面的用途。
替加氟是氟尿嘧啶的衍生物，在体内经肝脏活化逐渐转变为氟尿嘧啶而起抗肿瘤作用，能干扰和阻断DNA、RNA及蛋白质合成，主要作用于S期，是抗嘧啶类的细胞周期特异性药物。药理学研究表明，替加氟对胃癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、乳腺癌和肝癌具有一定的疗效。
DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂是一类能够抑制DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的物质。肿瘤细胞中的DNA拓扑异构酶Ⅰ的含量和活性远高于正常体细胞，因此，DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂能选择性抑制肿瘤细胞的生长增殖，从而发挥抗肿瘤作用。谭慧心等在《拓扑异构酶Ⅰ抑制剂研究进展》一文中指出“迄今有关各类抑制剂与拓扑异构酶Ⅰ和/或DNA的作用机制尚不明确，而且多数拓扑异构酶Ⅰ抑制剂存在结构复杂、特异性不高、毒性较大的缺点。”包括伊立替康在内的替康类是常用的DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂，主要用于大肠癌、食管癌和胃癌等的治疗。
目前，市场上仍缺少可以显著抑制肺癌细胞转移的组合药物。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种抑制肺癌细胞转移的组合药物，并提供了相应的肺癌细胞转移的检测方法。
一种抑制肺癌细胞转移的组合药物，包括水飞蓟宾、替加氟和DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂；所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549。
发明人对现有的具有抗癌效果的药物进行了大量筛选和复配，预料不到地发现：通过水飞蓟宾、替加氟和DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂以一定重量比组合得到的组合药物具有良好的肺癌细胞抑制效果，且可显著抑制肺癌细胞的转移。
通常情况下，水飞蓟宾主要用于肝脏疾病的治疗，替加氟主要用于治疗消化系癌。DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂虽然具有较广泛的抗癌作用，但尚无文献报道DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂可与水飞蓟宾、替加氟联合作为组合药物联合使用。替加氟即1-(四氢-2-呋喃基)-5-氟-2,4(1H,3H)-嘧啶二酮。
优选地，所述组合药物中，水飞蓟宾、替加氟和DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂的质量比为(1~2)：(1~2)：(0.5~1)。
优选地，所述组合药物中，水飞蓟宾、替加氟和DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂的质量比为2：2：1。
优选地，所述DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂选自贝洛替康、卢比替康、依沙替康、托泊替康、伊立替康或其可药用盐。
优选地，所述组合药物由水飞蓟宾、替加氟、DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂和药学上可接受的载体制得。
优选地，所述组合药物为注射剂。
相应地，本发明还提供一种肺癌细胞转移的检测方法，包括如下步骤：A）培养肺癌细胞，所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549，采用所述的组合药物对所述肺癌细胞进行处理；B）采用胰酶消化所述肺癌细胞，并用不含胎牛血清的基础培养基重悬细胞；C）进行细胞计数后，对细胞悬液进行稀释；D）将细胞悬液加入至Transwell小室，并加入含胎牛血清的培养基至Transwell小室下方的培养孔里，于培养箱中进行培养后，用甲紫染色，显微镜下检测所述肺癌细胞的转移。
根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为Transwel是一种膜滤器，也可认为是一种有通透性的支架。将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。发明人将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
优选地，所述培养箱的培养条件包括37℃和5%的二氧化碳。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供的组合药物包括水飞蓟宾、替加氟和DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂，具有良好的肺癌细胞抑制效果，且可显著抑制肺癌细胞的转移，对肺癌细胞的转移能力有显著的协同抑制作用，尤其对非小细胞肺癌细胞株A549具有非常好的抑制效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
细胞迁移（cell migration）的基本原理是细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的浓度梯度后而产生的移动。迁移过程中细胞不断重复着向前方伸出突足，然后牵拉胞体的循环过程。癌细胞转移是指转移是指肿瘤细胞从原发部位侵入淋巴管，血管或其他途经被带到它处继续生长，形成与原发部位肿瘤相同类型的肿瘤，具有极大的危害，在治疗肺癌的方向上，如何抑制肺癌细胞转移，就成为肿瘤治疗中的一个关键问题。
本发明中，肺癌细胞株A549细胞株购自武汉大学中国典型培养物保藏中心，SPF级BALB/c-nu小鼠购自广东省医学实验动物中心，所使用的试剂均为常规市售试剂。
实施例一 抑制肺癌细胞转移的组合药物
制备方法：取处方量的水飞蓟宾、替加氟和盐酸伊立替康，加入适量的去离子水，再加入1，2-丙二醇和泊洛沙姆进行充分溶解，加入氯化钠，混匀，过滤除菌即得。
实施例二 抑制肺癌细胞转移的组合药物
制备方法：同实施例一。
对比例一
与实施例一相比的不同之处在于：将水飞蓟宾由2.0g变为0g，将替加氟由2.0g变为3.0g，将盐酸伊立替康由1.0g变为2.0g。
制备方法：同实施例一。
对比例二
与实施例一相比的不同之处在于：将水飞蓟宾由2.0g变为3.0g，将替加氟由2.0g变为0g，将盐酸伊立替康由1.0g变为2.0g。
制备方法：同实施例一。
对比例三
与实施例一相比的不同之处在于：将水飞蓟宾由2.0g变为2.5g，将替加氟由2.0g变为2.5g，将盐酸伊立替康由1.0g变为0g。
制备方法：同实施例一。
效果实施例一 本发明提供的组合药物对A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响
取对数生长期的A549细胞，用无菌PBS溶液调整至细胞浓度为3×107个/mL，在BALB/c-nu小鼠背部皮下接种A549细胞0.1mL，待皮下移植瘤体积达75 mm3左右时，按瘤体积和荷瘤鼠体重均衡原则分为6组，每组3只。
对照组：生理盐水；
实施例一组：2mg/kg水飞蓟宾+2mg/kg替加氟+1mg/kg盐酸伊立替康；
实施例二组：1.5mg/kg水飞蓟宾+2mg/kg替加氟+0.8mg/kg盐酸伊立替康；
对比例一组：3mg/kg替加氟+2mg/kg盐酸伊立替康；
对比例二组：3mg/kg水飞蓟宾+2mg/kg盐酸伊立替康；
对比例三组：2.5mg/kg水飞蓟宾+2.5mg/kg替加氟。
隔日给药1次，将上述组别分别采用腹腔注射的方式，共计8次，末次给药48 h后脱臼处死小鼠，切除移植瘤，称取瘤重。瘤重抑制率（%）= (1-实验组瘤重均值/对照组瘤重均值)×100%。通过瘤重的比较来体现各实验组药物对A549细胞裸鼠瘤生长的影响。数据以平均数±标准差表示，采用SPSS15.0软件进行统计学分析。
试验结果如表1所示。从表1可知，与对照组相比，实施例一组和实施例二组对A549细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用均具有极显著性差异（P＜0.01），而对比例一组、对比例二组和对比例三组则不具有显著性差异（p＞0.05）；与对比例一组相比，实施例一组和实施例二组对A549细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用均具有极显著性差异（P＜0.01）；与对比例二组相比，实施例一组和实施例二组对A549细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用均具有极显著性差异（P＜0.01）；与对比例三组相比，实施例一组和实施例二组对A549细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用均具有极显著性差异（P＜0.01）。通过对比，可以发现：水飞蓟宾、替加氟和盐酸伊立替康都对本发明提供的组合药物的肿瘤抑制效果起着至关重要的影响，这三种成分的组合起到了协同增效作用。
注：** 与对照组相比，P＜0.01；## 与对比例一组相比，P＜0.01；▲▲与对比例二组相比，P＜0.01；■■与对比例三组相比，P＜0.01。
效果实施例二 本发明提供的组合药物对A549肺癌细胞转移的影响
对照组：不含FBS的RPMI1640培养基；
实施例一组：2μg/mL水飞蓟宾+2μg/mL替加氟+1μg/mL盐酸伊立替康；
实施例二组：1.5μg/mL水飞蓟宾+2μg/mL替加氟+0.8μg/mL盐酸伊立替康；
对比例一组：3μg/mL替加氟+2μg/mL盐酸伊立替康；
对比例二组：3μg/mL水飞蓟宾+2μg/mL盐酸伊立替康；
对比例三组：2.5μg/mL水飞蓟宾+2.5μg/mL替加氟。
培养A549肺癌细胞，收集对数生长期的A549细胞，以5×104个/mL的密度，每孔加入2mL种6孔板，细胞贴壁后，分别采用对照组、实施例一组、实施例二组、对比例一组、对比例二组和对比例三组处理A549细胞。处理24h后，用0.25%的胰酶消化细胞，并用不含FBS的RPMI1640培养基重悬细胞，分别进行细胞计数后，对细胞悬液进行稀释至终浓度为1×105个/ml。加入100μL细胞悬液至Transwell小室，并加入250μL含10%FBS的RPMI1640培养基至Transwell小室下方的培养孔里，置于37℃和5%CO2培养箱中进行培养，培养48h后，75%酒精固定，然后用甲紫染色，显微镜下观察计数。
结果显示：未用药物处理的对照组穿过Transwell小室细胞数为186；实施例一组穿过Transwell小室细胞数为45；实施例二组穿过Transwell小室细胞数为51；对比例一组穿过Transwell小室细胞数为112；对比例二组穿过Transwell小室细胞数为107；对比例三组穿过Transwell小室细胞数为119。通过对比，可以发现：水飞蓟宾、替加氟和盐酸伊立替康都对本发明提供的组合药物的肺癌细胞转移抑制效果起着至关重要的影响，这三种成分的组合起到了协同增效作用。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种抑制肺癌细胞转移的组合药物，其特征在于：包括水飞蓟宾、替加氟和DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂；所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549；所述组合药物中，水飞蓟宾、替加氟和DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂的质量比为(1～2)：(1～2)：(0.5～1)；所述DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂选自伊立替康或其可药用盐。
2.根据权利要求1所述的抑制肺癌细胞转移的组合药物，其特征在于：所述组合药物中，水飞蓟宾、替加氟和DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂的质量比为2：2：1。
3.根据权利要求1或2所述的抑制肺癌细胞转移的组合药物，其特征在于：由水飞蓟宾、替加氟、DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂和药学上可接受的载体制得。
4.根据权利要求1或2所述的抑制肺癌细胞转移的组合药物，其特征在于：所述组合药物为注射剂。
5.一种肺癌细胞转移的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：A)培养肺癌细胞，所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549，采用权利要求1至4中任一项所述的组合药物对所述肺癌细胞进行处理；B)采用胰酶消化所述肺癌细胞，并用不含胎牛血清的基础培养基重悬细胞；C)进行细胞计数后，对细胞悬液进行稀释；D)将细胞悬液加入至Transwell小室，并加入含胎牛血清的培养基至Transwell小室下方的培养孔里，于培养箱中进行培养后，用甲紫染色，显微镜下检测所述肺癌细胞的转移。
6.根据权利要求5所述的肺癌细胞转移的检测方法，其特征在于：所述培养箱的培养条件包括37℃和5％的二氧化碳。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510239995.1A CN104887681B (zh) | 2015-05-13 | 2015-05-13 | 一种抑制肺癌细胞转移的组合药物以及检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510239995.1A CN104887681B (zh) | 2015-05-13 | 2015-05-13 | 一种抑制肺癌细胞转移的组合药物以及检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104887681A CN104887681A (zh) | 2015-09-09 |
| CN104887681B true CN104887681B (zh) | 2017-12-19 |
Family
ID=54020926
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510239995.1A Active CN104887681B (zh) | 2015-05-13 | 2015-05-13 | 一种抑制肺癌细胞转移的组合药物以及检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104887681B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103784460A (zh) * | 2014-02-18 | 2014-05-14 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 抑制肺癌细胞转移的组合药物、药物制剂以及检测方法 |
-
2015
- 2015-05-13 CN CN201510239995.1A patent/CN104887681B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103784460A (zh) * | 2014-02-18 | 2014-05-14 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 抑制肺癌细胞转移的组合药物、药物制剂以及检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 伊立替康在非小细胞肺癌中的临床应用进展;丁丽;《中国医药指南》;20111031;第9卷(第30期);第248-250页 * |
| 替加氟持续低剂量口服治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察;石建华 等;《临床肿瘤学杂志》;20080930;第13卷(第9期);第800-802页 * |
| 水飞蓟宾抑制人肺癌细胞浸润的作用机制研究;赵威 等;《中国微生态学杂志》;20140430;第26卷(第4期);第396-399页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104887681A (zh) | 2015-09-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102731365B (zh) | 猴头菌抑制幽门螺杆菌的生物小分子及其在治疗消化道疾病中的应用 | |
| CN101485655A (zh) | 二氢杨梅素在制备防治肿瘤放化疗不良反应的药物的应用 | |
| CN102526022A (zh) | 表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN102526073A (zh) | 罗汉果醇h9在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN109420167B (zh) | 一种治疗肿瘤的联合用药物 | |
| CN116948901A (zh) | 食窦魏斯氏菌d-2胞外多糖在抑制结肠癌细胞中的应用 | |
| CN101474173B (zh) | 香豆素类化合物九里香酮在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN104887681B (zh) | 一种抑制肺癌细胞转移的组合药物以及检测方法 | |
| CN104873513B (zh) | 一种抑制肺癌细胞转移的药物组合物以及检测方法 | |
| CN104055786B (zh) | 苜蓿酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、苜蓿酸及其盐在制备防治肿瘤药物中的应用 | |
| CN102503892A (zh) | 含钴夹心杂多酸及其合成方法和应用 | |
| CN102688228A (zh) | 含有芹菜素及芹菜素类衍生物和冬凌草甲素及冬凌草甲素类衍生物的药物组合物及其应用 | |
| CN109265511B (zh) | 一种三萜类化合物及其制备方法和在制备抗癌药物中的应用 | |
| CN106265619A (zh) | Dfmo或dfmo和姜提取物在制备食管癌和肝癌的预防及临床治疗的药物中的应用 | |
| CN107412736B (zh) | 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途 | |
| CN112618569A (zh) | 一种用于治疗尿路上皮癌的药物 | |
| CN112336716A (zh) | 维生素c和双硫仑在制备抗肿瘤联合用药物中的用途 | |
| CN104840463B (zh) | 一种促进肺癌细胞凋亡的药物组合物以及检测方法 | |
| CN101711790A (zh) | 一种用于治疗肝癌的野生核桃楸树皮水提取物 | |
| CN102232957B (zh) | 3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21-酸在制备预防、治疗肝癌或乳腺癌药物中的用途 | |
| CN105999245B (zh) | 含乌司他丁的药物组合物在制备治疗胆囊癌药物中的用途 | |
| CN105434432B (zh) | N-羟基邻苯二甲酰亚胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN106138067A (zh) | 蟾蜍二烯内酯类化合物在制备抗胃癌药物中的应用 | |
| CN109602775B (zh) | 乳苣醇提物在制备抗乳腺癌药物中的用途 | |
| CN104873514A (zh) | 一种抑制肺癌细胞增殖的药物组合物以及检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: 510700 No. 10, helix 3 Road, International Biological Island, Huangpu District, Guangzhou City, Guangdong Province Patentee after: GUANGZHOU KINGMED CENTER FOR CLINICAL LABORATORY Address before: 510330 Guangdong Guangzhou Haizhuqu District Xingang East Road 2429, 3rd floor. Patentee before: GUANGZHOU KINGMED CENTER FOR CLINICAL LABORATORY |