CN106138067A - 蟾蜍二烯内酯类化合物在制备抗胃癌药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗胃癌药物，具体地说是蟾蜍二烯内酯类化合物在抗胃癌药物中的应用，所述的蟾蜍二烯内酯类化合物包括沙蟾毒精，沙蟾毒精-3-庚二酰精氨酸酯，远华蟾毒精-3-己二酰精氨酸酯，远华蟾毒精，去乙酰华蟾毒精，华蟾毒它灵-3-辛二酰精氨酸酯，南美蟾毒精-3-辛二酰精氨酸酯，3-去氢蟾毒灵和海蟾蜍毒及它们药学上可接受的成盐化合物。体外细胞实验表明，本发明中的化合物能够显著抑制胃癌细胞球的生长，因此可以用于制备治疗胃癌的肿瘤药物。
Description
技术领域
本发明涉及抗胃癌药物，具体地说是蟾蜍二烯内酯类化合物在抗胃癌药物中的应用，所述的蟾蜍二烯内酯类化合物包括沙蟾毒精，沙蟾毒精-3-庚二酰精氨酸酯，远华蟾毒精-3-己二酰精氨酸酯，远华蟾毒精，去乙酰华蟾毒精，华蟾毒它灵-3-辛二酰精氨酸酯，南美蟾毒精-3-辛二酰精氨酸酯，3-去氢蟾毒灵和海蟾蜍毒及它们药学上可接受的成盐化合物。
背景技术
蟾蜍是一种中医临床常用的药用原动物，其蟾皮及制剂在治疗肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、食道癌及结肠癌等肿瘤疗效确切。目前在临床抗肿瘤治疗应用较为广泛的主要有华蟾素注射液及华蟾素胶囊，其中蟾蜍二烯内酯类化合物和极性含氮化合物被认为是蟾皮中的主要有效成分。然而由于蟾皮本身成分的复杂性，在临床使用中不乏副反应的报道，比如过敏反应、粒细胞缺乏及心脏毒性较大等，显著降低了其药用价值。若能借助于先进的活性筛选评价体系，合理评价化合物的抗肿瘤活性，将有利于开发新的抗肿瘤药物。(Natural ProductReports,2011,28,953-969；Nature Reviews Drug Discovery,2008,7,926-935；Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2014,92,105-113；AnalyticalMethods,2014,6,5183-5190.)
与传统的二维(2D)培养细胞评价抗肿瘤活性相比，三维(3D)培养细胞筛选评价技术能够更为准确的反映肿瘤体内的微环境，如细胞异质性、营养物、氧梯度、细胞-细胞作用、基质沉淀物和基因表达等，因此其评价结果与体内效果更为的接近。在3D细胞培养技术中，多细胞形成的三维细胞球是最为方便、典型、通用的技术。目前形成细胞球的方法主要有自发聚集、旋转细胞培养系统、基质键合板、聚合支架及微孔板法。这些方法各有优缺点，但这些方法都不能兼具既简单、快速又标准化的方法。在本发明中，我们采用了一种简单、快速、可重复及标准化的3D细胞球形成技术，系统研究了蟾皮中蟾蜍二烯内酯类化合物的抗胃癌活性。(Nature Reviews Molecular Cell Biology,2007,8,839-845；Drug Discovery Today,2009,14,102-107；Carcinogenesis,2011,32,1540-1549；Oncogene,2009,28,461-468；Experimental Cell Research,2013,319,75-87；NatureProtocols,2009,4,309-324.)
目前关于本发明中提到的蟾蜍二烯内酯类化合物的抗胃癌活性尚未报道。
发明内容
本发明涉及抗胃癌药物的发现，本发明目的之一是提供具有抗胃癌作用的蟾蜍二烯内酯类化合物药物，所述的蟾蜍二烯内酯类化合物包括沙蟾毒精、沙蟾毒精-3-庚二酰精氨酸酯、远华蟾毒精-3-己二酰精氨酸酯、远华蟾毒精、去乙酰华蟾毒精、华蟾毒它灵-3-辛二酰精氨酸酯、南美蟾毒精-3-辛二酰精氨酸酯、3-去氢蟾毒灵和海蟾蜍毒(分别对应于下述的结构式1-9)及它们药学上可接受的成盐化合物，其结构如下；目的之二是建立更接近与体内疗效的3D细胞球筛选模型。
体外细胞实验表明，本发明中所述的蟾蜍二烯内酯类化合物能够显著抑制胃癌细胞球的生长，因此可以用于制备治疗胃癌的药物。
附图说明
图1不同接种密度的HGC-27细胞经3D培养形成的细胞球随着时间的增长曲线；
图2不同的蟾蜍二烯内酯内化合物(10μM)对HGC-27细胞球生长的抑制作用随时间的变化曲线。1-沙蟾毒精，2-沙蟾毒精-3-庚二酰精氨酸酯，3-远华蟾毒精-3-己二酰精氨酸酯，4-远华蟾毒精，5-去乙酰华蟾毒精，6-华蟾毒它灵-3-辛二酰精氨酸酯，7-南美蟾毒精-3-辛二酰精氨酸酯，8-3-去氢蟾毒灵，9-海蟾蜍毒，10-多烯紫杉醇，11-盐酸表柔比星；
图3不同蟾蜍二烯内酯内化合物(10μM)对HGC-27细胞球生长的抑制能力的比较(第6天)，0为对照组；
图4不同浓度化合物5-去乙酰华蟾毒精对HGC-27细胞球生长的抑制作用随时间的变化曲线，浓度单位为μmol/L,简写为μM；
图5化合物5-去乙酰华蟾毒精对HGC-27细胞球生长的抑制作用随浓度的变化曲线(第6天)，浓度单位为mol/L,简写为M。
具体实施方式
现结合实例，对本发明做进一步说明。实例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。
实施例1：胃癌3D细胞球筛选模型的建立
沙蟾毒精，沙蟾毒精-3-庚二酰精氨酸酯，远华蟾毒精-3-己二酰精氨酸酯，远华蟾毒精，去乙酰华蟾毒精，华蟾毒它灵-3-辛二酰精氨酸酯，南美蟾毒精-3-辛二酰精氨酸酯，3-去氢蟾毒灵和海蟾蜍毒来源于上海源叶生物科技有限公司。
多烯紫杉醇和盐酸表柔比星购于大连美仑生物技术有限公司；胃癌细胞系HGC-27购于中国科学院上海细胞库；ULA-96孔板购于Corning；倒置显微镜购于OLYMPUS。
将处于对数生长期的HGC-27细胞接种于ULA-96孔板中，密度分别为20000个/孔(20K个/孔),10000个/孔，5000个/孔，2500个/孔，1250个/孔，625个/孔，313个/孔和156个/孔，培养基(RPMI-1640含20％胎牛血清)接种体积为200μL/well,每个细胞密度各2孔，且重复两次，每隔24h使用倒置显微镜记录3D细胞球的大小，连续记录4天。其结果如图1所示。根据3D细胞球连续4天生长的状态及第4天细胞球的大小，确定最佳的细胞密度。最佳的细胞密度一般为细胞球具有最快的生长速度并且在第4天时细胞球的直径大小落入范围300μm～500μm之中，因为在此范围内3D细胞球的状态更接近与体内肿瘤的状态，更有利于抗癌药物的筛选。根据图1可以看出满足上述要求的最佳细胞密度为313个/孔。
实施例2：粗筛蟾蜍二烯内酯类化合物对3D细胞球生长的抑制作用
选择临床上治疗胃癌的典型药物多烯紫杉醇和盐酸表柔比星作为阳性对照药，粗筛9种典型的蟾蜍二烯内酯类化合物对HGC-27的3D细胞球生长的抑制作用。其中9种典型的蟾蜍二烯内酯类化合物(作为粗筛药物)为沙蟾毒精，沙蟾毒精-3-庚二酰精氨酸酯，远华蟾毒精-3-己二酰精氨酸酯，远华蟾毒精，去乙酰华蟾毒精，华蟾毒它灵-3-辛二酰精氨酸酯，南美蟾毒精-3-辛二酰精氨酸酯，3-去氢蟾毒灵和海蟾蜍毒。将最佳密度(313个/孔)的细胞接种于ULA-96孔板，培养基(RPMI-1640含20％胎牛血清)接种体积为200μL/well。培养4天，生长至最佳粒径的3D细胞球之后，每孔置换100μL的新鲜培养基(RPMI-1640含20％胎牛血清)，在22个孔中分别加入单一药物(包括2种阳性对照药和9种典型的蟾蜍二烯内酯类化合物)终浓度为10μM，体积为10μL，每个化合物重复两次。空白对照组为含0.05％DMSO的培养基(RPMI-1640含20％胎牛血清)处理的3D细胞球，两个孔做空白对照组。每隔24h使用倒置显微镜记录3D细胞球的大小，连续记录6天。其结果如图2所示。从图中可以看出，这些蟾蜍二烯内酯内化合物对3D细胞球的生长都有一定的抑制作用。以第6天为研究的时间点，比较蟾蜍二烯内酯类化合物对3D细胞球生长的抑制能力如图3所示，发现研究的这些蟾蜍二烯内酯类化合物对3D细胞球生长的抑制能力可与阳性对照药多烯紫杉醇和盐酸表柔比星的抑制能力相媲美，其中化合物5-去乙酰华蟾毒精可将细胞球抑制为对照组细胞球大小的39.2％，且这种化合物的抑制能力强于胃癌阳性对照药的抑制能力，可将其作为抗胃癌药物的候选化合物。
实施例3：去乙酰华蟾毒精抑制3D细胞球生长的剂量关系
将抑制能力最强的化合物5-去乙酰华蟾毒精的不同剂量作用于3D细胞球。将最佳密度(313个/孔)的细胞接种于ULA-96孔板，培养基(RPMI-1640含20％胎牛血清)接种体积为200μL/well培养4天，生长至最佳粒径的3D细胞球之后，每孔置换100μL的新鲜培养基，在16个孔中加入化合物5药物体积为10μL，化合物的浓度梯度为40μM,20μM,10μM,5μM,2.5μM,1.25μM,0.625μM和0.3125μM，每个浓度重复两次。空白对照组为含0.2％DMSO的培养基(RPMI-1640含20％胎牛血清)处理的细胞球，两个孔做空白对照组。每隔24h使用倒置显微镜记录3D细胞球的大小，连续记录6天，其结果如图4所示。以第6天为研究的时间点，研究蟾蜍二烯内酯类化合物对3D细胞球生长的抑制剂量关系如图5所示。从图中可以看出，随着化合物剂量的升高，化合物5-去乙酰华蟾毒精的抑制能力增强，其剂量抑制曲线呈现单相“S”型，对应的IC50值为1.21±0.11μM。
通过3D细胞球模型的活性筛选，发现研究的蟾蜍二烯内酯类化合物对胃癌的3D细胞球的生长都有一定的抑制作用，其抑制能力可与胃癌阳性对照药的抑制能力相媲美，其中去乙酰华蟾毒精对胃癌3D细胞球生长的抑制能力最强，其抑制能力强于胃癌阳性对照药的抑制能力，此活性化合物的发现为抗胃癌药物的开发提供了候选化合物。
Claims (6)
1.蟾蜍二烯内酯类化合物在制备抗胃癌药物中的应用，其特征在于：所述的抗胃癌药物是以蟾蜍二烯内酯类化合物为活性成分制备而成。
2.按照权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的蟾蜍二烯内酯类化合物包括化合物本身及它们药学上可接受的成盐化合物中的一种或二种以上。
3.按照权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的蟾蜍二烯内酯类化合物具体包括沙蟾毒精、沙蟾毒精-3-庚二酰精氨酸酯、远华蟾毒精-3-己二酰精氨酸酯、远华蟾毒精、去乙酰华蟾毒精、华蟾毒它灵-3-辛二酰精氨酸酯、南美蟾毒精-3-辛二酰精氨酸酯、3-去氢蟾毒灵和海蟾蜍毒中的一种或二种以上。
4.按照权利要求1所述的应用，其特征在于：所述它们药学上可接受的盐为蟾蜍二烯内酯类化合物与有机酸或酸性氨基酸形成酯后再与无机碱或有机碱形成的盐之一种或多种；或者蟾蜍二烯内酯类化合物与碱性氨基酸形成酯后再与无机或有机酸形成的盐之一种或多种。
5.按照权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的蟾蜍二烯内酯类化合物为去乙酰华蟾毒精，去乙酰华蟾毒精是所述的蟾蜍二烯内酯类化合物中抗胃癌活性最强的化合物。
6.按照权利要求1所述的应用，其特征在于：抗胃癌药物中还包括药物学上可接受的载体或赋形剂。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107397748A (zh) * | 2017-08-09 | 2017-11-28 | 黄娇英 | 一种具有抗感染作用的蟾酥提取物及其制备方法 |
| CN108743594A (zh) * | 2018-09-05 | 2018-11-06 | 滨州医学院 | 蟾毒它灵作为抗恶性黑色素瘤药物的应用及其制剂 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1072183A (zh) * | 1991-11-06 | 1993-05-19 | 张丽莎 | 提取蟾蜍灵的方法及其蟾蜍灵和有关衍生物的用途 |
| CN101177445A (zh) * | 2006-11-08 | 2008-05-14 | 山东绿叶制药有限公司 | 新的蟾蜍二烯内酯类化合物及其制备方法与应用 |
| CN101822832A (zh) * | 2010-04-16 | 2010-09-08 | 马宏跃 | 一种具有抗肿瘤作用的组合物及其在制备治疗肿瘤药物中的应用 |
| CN102038690A (zh) * | 2010-11-02 | 2011-05-04 | 暨南大学 | 沙蟾毒精在制备抗肿瘤药物制剂中的应用 |
-
2015
- 2015-04-21 CN CN201510188667.3A patent/CN106138067A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1072183A (zh) * | 1991-11-06 | 1993-05-19 | 张丽莎 | 提取蟾蜍灵的方法及其蟾蜍灵和有关衍生物的用途 |
| CN101177445A (zh) * | 2006-11-08 | 2008-05-14 | 山东绿叶制药有限公司 | 新的蟾蜍二烯内酯类化合物及其制备方法与应用 |
| CN101822832A (zh) * | 2010-04-16 | 2010-09-08 | 马宏跃 | 一种具有抗肿瘤作用的组合物及其在制备治疗肿瘤药物中的应用 |
| CN102038690A (zh) * | 2010-11-02 | 2011-05-04 | 暨南大学 | 沙蟾毒精在制备抗肿瘤药物制剂中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 辛秀兰: "中药蟾酥的药理作用研究进展", 《现代生物医学进展》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107397748A (zh) * | 2017-08-09 | 2017-11-28 | 黄娇英 | 一种具有抗感染作用的蟾酥提取物及其制备方法 |
| CN107397748B (zh) * | 2017-08-09 | 2018-10-02 | 黄娇英 | 一种具有抗感染作用的蟾酥提取物及其制备方法 |
| CN108743594A (zh) * | 2018-09-05 | 2018-11-06 | 滨州医学院 | 蟾毒它灵作为抗恶性黑色素瘤药物的应用及其制剂 |
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