CN101716343A - 一种单克隆抗体的冻干制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了抗EGFR-抗体的冻干制剂的制备方法。所述抗EGFR-抗体的冻干制剂是由抗EGFR-抗体蛋白，保护剂，赋型剂，缓冲盐经过冻干制备而成，是一种新的高浓度的EGFR-抗体的冻干制剂。本发明提供的抗EGFR-抗体蛋白冻干制剂稳定性好，有效期延长，易于保存和运输。

Description

一种单克隆抗体的冻干制剂

技术领域

本发明涉及一种抗-EGFR单克隆抗体的冻干制剂。

背景技术

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)突变、失调或过表达于许多上皮恶性肿瘤，在肿瘤的生长和分化过程中起重要作用。抗EGFR的单克隆抗体是针对于胞外域EFGR的靶向性抗体，临床应用显示了良好的抗肿瘤活性，而且并不产生严重副反应。而抗-EGFR单克隆抗体抗癌原理正基于此。

现有的抗-EGFR抗体制剂专利：

德国S·马瑟斯和H-C·马勒通过沉淀试剂和晶体得到抗-EGFR抗体的固体形式制剂(申请号/专利号：200480034587)。其缺点沉淀试剂得到的蛋白有时无法复溶。

默克专利有限公司的H-C·马勒；R·米勒；；U·马丁尼-马尔；U·哈斯；C·巴赫曼发明包含两妥昔单抗(Cetuximab)的稳定的液体药物制剂(申请号：02814105.9)，所述Cetuximab是一种抗表皮生长因子受体(EGF受体)的嵌合单克隆抗体。所述制剂的贮藏稳定性增强并且可经胃肠外途径用于治疗肿瘤。但此配方是液体制剂，长时间贮存容易发生蛋白聚集和其他化学反应，不利于运输和贮存。

S·马瑟斯和H-C·马勒又通过超滤制备抗-EGFR抗体的高浓缩液体，发明了抗-EGFR抗体液体制剂的方法(申请号/专利号：200580004883)。这项发明很大程度缓解了以往因蛋白药物浓度低，但是也有不足之处，首先以液体制剂的形式存在的蛋白，更容易发生理化反应，比如发生脱酰胺反应、被其他物质氧化或水解，其次当蛋白在水溶液中浓度过高时容易聚集，注入人体后易产生免疫反应。

更重要的是，液体制剂在长途运输中，剧烈震荡会使蛋白质容易变性，大去活性。

发明内容

抗EGFR-单克隆抗体包括鼠源的、人鼠嵌合的、完全人源化的抗EGFR-单克隆抗体。

本发明制剂配方简单，蛋白体系稳定。冻干得到的制剂，蛋白稳定性更高，便于大规模生产，贮存和运输。冻干蛋白经复溶后蛋白理化性质及活性没有显著变化，并且不存在药理上不可接受的试剂，从而具有良好的安全性和耐受性。

本发明是一种含有抗EGFR-单克隆抗体的冻干制剂，制剂的组成包括抗EGFR-单克隆抗体、赋形剂、保护剂、缓冲盐。

抗EGFR-单克隆抗体冻干制剂复溶后抗体蛋白含量为2-100mg/mL，更优选为25-75mg/mL。这种高浓度的蛋白制剂可以大大减轻患者用药注射量大的痛苦。

在赋形剂的帮助下抗EGFR-抗体更容易赋形冻干保存。赋形剂为糖类、多醇类，更优选为甘露醇、蔗糖、葡萄糖、山梨醇。赋形剂在制剂中的含量为0-20％，更优选为2-10％。

本发明选择的保护剂为氨基酸、糖类、醇类、吐温。更优选为吐温、精氨酸、山梨醇。保护剂在冻干制剂经注射用水复溶后的含量为10mmol/L-200mmol/L，更优选为50-100mmol/L。

本发明选择的冻干制剂缓冲盐为磷酸盐缓冲体系、Tris缓冲体系以及人体可接受的缓冲盐。冻干制剂经注射用水复溶后缓冲盐浓度为0-200mmol/L，更优选为5mmol/L-50mmol/L，pH在6.5-8.0之间，优选为6.8-7.4。

制剂冻干过程包括预冻，抽真空和循环冷冻2步。预冻时间不少于1.5小时，更有选4-8小时。抽真空和循环冷冻是同时进行，程序化步骤，循环冷冻不少于15小时。

具体实施方式

以下通过实施例、实验例详细说明本发明的内容，但这些实施例并不构成对本发明的限制。

实施例1：水针对比溶液

成分	浓度
		西妥昔单抗	100mg
磷酸二氢钠	20mg
		磷酸氢二钠	66mg
氯化钠	424mg
		注射用水	加至50ml
PH值	7.1

实施例2：溶液A

成分	浓度
		西妥昔单抗	30g
精氨酸	50mmol
		磷酸氢二钠	10g
甘露醇	5％

成分	浓度
		吐温20	0.001％
注射用水	加至1L
		PH值	7.1

实施例3：溶液B

成分	浓度
		西妥昔单抗	30g
精氨酸	50mmol
		磷酸氢二钠	10g
甘露醇	2.5％
		吐温20	0.005％
注射用水	加至1L
		PH值	7.1

实施例4：冻干

将溶液A、溶液B按照以下程序冻干：

预冻：-50℃，5小时。

循环冷冻：从-50℃程序性升温到30℃，共20小时，真空度70bar。

在冻干期间，可使用参气来达到温度均匀的目的。也可以更长时间进行循环冷冻而不会影响产品的质量。

实施例5：

稳定性考察，采用药品加速稳定性实验考察以上3种配方的贮存稳定性，温度25℃。

检测方法：

纯度检测：高效液相色谱法，柱子用TSK3000SW_XL。流动相：20mmol磷酸盐缓冲液0.4mol/LNa₂SO₄。

等电点：根据《中国药典》2005年版等点聚焦电泳法。

内毒素检测：根据《中国药典》2005年版细菌内毒素检测方法。

外观：根据《中国药典》2005年版可见异物检查法。

活性：根据A418检测方法以市售爱必妥(默克公司)做为对照品。设定其活性为100％，水针对比溶液、溶液A、溶液B采用与其活性的比较值。

加速稳定性实验结果(25℃)

根据稳定性试验结果表明：冻干制剂的贮存稳定性明显优于液体制剂。

Claims (11)

1.一种含有抗EGFR-抗体的冻干制剂，其特征是制剂的组成部分含有抗EGFR-抗体、赋形剂、保护剂、缓冲盐。

2.根据权利要求1，其特征在于抗EGFR-抗体冻干制剂复溶后含量为2-100mg/mL，更优选为25-75mg/mL。

3.根据权利要求1，其特征在于赋形剂为糖类、多醇类，更优选为甘露醇、蔗糖、葡萄糖、山梨醇。

4.根据权利要求3，其特征在于赋形剂在制剂中的含量为0-20％，更优选为2-10％。

5.根据权利要求1，其特征在于保护剂为氨基酸、糖类、醇类、吐温。更优选为吐温、精氨酸、山梨醇。

6.根据权利要求5，保护剂在冻干制剂经注射用水复溶后的含量为10mM/L-200mM/L，更优选为50-100mM/L。

7.根据权利要求1，其特征在于冻干制剂缓冲盐为人体可接受的缓冲盐，更优选磷酸盐缓冲体系，冻干制剂经注射用水复溶后缓冲盐浓度为0-200mM/L，更优选为5mM/L-50mM/L，pH在6.5-8.0之间。

8.根据权利要求1，其特征在于表面活性剂为吐温类，更优选吐温80，

9.根据权利要求8，其特征在于冻干制剂经注射用水复溶后表面活性剂浓度为0.001％-0.05％，更优选0.001％-0.01％。

10.根据权利要求9，其特征在于预冻时间不少于1.5小时，更有选4-8小时。

11.根据权利要求9，其特征在于抽真空和循环冷冻是同时进行，程序化步骤，循环冷冻不少于15小时。