CN101631563B - 含有流感疫苗的冻干制剂及其制备方法 - Google Patents

含有流感疫苗的冻干制剂及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101631563B
CN101631563B CN2008800077114A CN200880007711A CN101631563B CN 101631563 B CN101631563 B CN 101631563B CN 2008800077114 A CN2008800077114 A CN 2008800077114A CN 200880007711 A CN200880007711 A CN 200880007711A CN 101631563 B CN101631563 B CN 101631563B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lyophilized formulations
arginine
acid
addition salts
aqueous solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN2008800077114A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101631563A (zh
Inventor
山下亲正
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Otsuka Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Publication of CN101631563A publication Critical patent/CN101631563A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101631563B publication Critical patent/CN101631563B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16051—Methods of production or purification of viral material

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明的目的在于提供一种改善流感疫苗稳定性的冻干制剂。对满足以下(A)～(C)条件的水溶液进行冻干，由此获得流感疫苗的稳定性被显著改善的冻干制剂：(A)含有(i)流感疫苗、(ii)疏水性氨基酸和(iii)精氨酸及其酸加成盐；(B)上述成分(iii)的配合量相对于得到的冻干制剂的总量为20～85重量％；以及(C)通过控制构成上述成分(iii)的精氨酸与其酸加成盐的比率，调节pH为8～10。

Description

含有流感疫苗的冻干制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种含有流感疫苗的冻干制剂。更具体而言，本发明涉及一种改善流感疫苗稳定性的冻干制剂。进而，本发明涉及一种该冻干制剂的制备方法。
背景技术
流感是由流感病毒感染呼吸系统而引起的疾病。通常，流感在感染流感病毒开始的1～2天左右的潜伏期之后，出现38℃以上的发热，接着出现头痛、全身倦怠感、关节痛和肌肉痛等全身症状，出现咳嗽或有痰等呼吸系统症状，上述症状通常在1周以内恢复。但是，如果老年人、婴幼儿、孕妇、有呼吸系统或循环系统慢性疾患的患者、糖尿病患者或慢性肾功能不全患者等感染流感，则流感会引起肺炎或支气管炎等严重的并发症，根据不同情况有时甚至会导致死亡。另外，流感不仅引起严重的健康伤害，而且其感染力强，在短时间内集中感染很多人，所以还造成社会和经济的巨大损失。
为了预防由感染流感所带来的健康伤害、降低社会及经济的损失，给与流感疫苗是最有效的方法。目前作为流感疫苗的制剂，已知用作注射剂的液体制剂和用作滴鼻剂的冷冻制剂，但目前尚未有稳定性优异的干燥制剂上市(例如参见非专利文献1)。
流感疫苗以液体制剂的形态流通时，为了防止流感疫苗失活，必须在流通及保存时始终保持在低温，即冷藏环节是必不可少的。另外，流感疫苗以冷冻制剂的形态流通时，为了稳定地保持制剂，在流通及保存时也要求保持疫苗处于冷冻状态。如上述所述被制剂化成液体制剂或冷冻制剂的流感疫苗，在运输和保存中需要高度的温度管理(参见非专利文献2)，所以难以在保持流感疫苗活性的情况下使其在供给电力不足的地区或不具备低温运输手段的地区流通。
为了克服上述液体制剂或冷冻制剂的缺点，使流感疫苗以干燥制剂的形态流通是有效的。因此，近年关于流感疫苗的冻干制剂，公开了配合乳糖或海藻糖进行制剂化的技术，但是未给出其稳定性的情况(参见非专利文献3)。
与其他疫苗相同，流感疫苗对热的敏感性高，并且已知在高温或凝固点以下活性被破坏(参见非专利文献2)。即便只是进行干燥处理或冻干处理，也存在在配制时或保存时流感疫苗的活性经时降低的问题。尚未发现能够克服上述问题的技术，迄今为止尚未报道流感疫苗的干燥制剂成功实用化的例子。
非专利文献1：Deborah A.Buonagurio et al.，Vaccine，Vol.24(2006)，2151-2160.
非专利文献2：Stephen E.Zweig，Vaccine，Vol.24(2006)，5977-5985.
非专利文献3：Robert J.Garmise et al.，AAPS PharmSciTech 2006；7(1)Article 19，E1-E7.
发明内容
本发明是鉴于上述背景技术而研究得到的，目的在于提供一种改善流感疫苗稳定性的冻干制剂。
本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现在制备含有流感疫苗的冻干制剂时，通过对满足下述(A)～(C)条件的水溶液进行冻干，能够得到流感疫苗的稳定性显著改善的冻干制剂：
(A)含有(i)流感疫苗、(ii)疏水性氨基酸和(iii)精氨酸及其酸加成盐；
(B)配合上述成分(iii)使其相对于得到的冻干制剂的总量为20～85重量％；和
(C)通过控制构成上述成分(iii)的精氨酸与其酸加成盐的比率，调节pH至8～10。
基于上述发现，并进一步反复改良从而完成了本发明。
即，本发明提供一种如下所述的含有流感疫苗的冻干制剂。
项1、一种含有流感疫苗的冻干制剂，其特征在于，
所述冻干制剂是对含有(i)流感疫苗、(ii)疏水性氨基酸和(iii)精氨酸及其酸加成盐的水溶液进行冻干而得到的，
(iii)精氨酸及其酸加成盐的配合比例相对于冻干制剂的总量为20～85重量％，并且精氨酸及其酸加成盐二者的比率在使上述水溶液的液性为pH8～10的范围内。
项2、项1所述的冻干制剂，其中，(i)流感疫苗为经脱盐处理的疫苗。
项3、项1所述的冻干制剂，其中，(ii)疏水性氨基酸为苯基丙氨酸，或者为缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸中的至少一种与苯基丙氨酸的组合。
项4、项1所述的冻干制剂，其中，相对于冻干制剂的总量，以14～75重量％的比例含有(ii)疏水性氨基酸。
项5、项1所述的冻干制剂，其中，(iii)精氨酸及其酸加成盐为精氨酸及其盐酸盐。
项6、项1所述的冻干制剂，其中，相对于1重量份精氨酸，以1～20重量份的比例含有精氨酸的酸加成盐。
项7、项1所述的冻干制剂，其中，上述成分(i)～(iii)的总量相对于冻干制剂的总量为80～100重量％。
项8、项1所述的冻干制剂，是用时溶解型的注射剂。
项9、项1所述的冻干制剂，是经肺给药用药物制剂。
项10、项1所述的冻干制剂，是滴鼻给药用药物制剂。
进而，本发明提供如下所述的含有流感疫苗的冻干制剂的制备方法。
项11、一种含有流感疫苗的冻干制剂的制备方法，所述方法包括下述步骤：
第1步骤：配制水溶液，所述水溶液含有(i)流感疫苗、(ii)疏水性氨基酸和(iii)精氨酸及其酸加成盐，该水溶液中的(i)流感疫苗的含量为相当于相对于制备的冻干制剂的总量为20～85重量％的量，并且水溶液的pH为8～10；及
第2步骤：对上述步骤中配制的水溶液进行冻干。
项12、项11所述的制备方法，其中，(i)流感疫苗为经脱盐处理的疫苗。
项13、项11所述的制备方法，其中，(ii)疏水性氨基酸为苯基丙氨酸，或者为缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸中的至少一种与苯基丙氨酸的组合。
项14、项11所述的制备方法，其中，在上述第1步骤中使用的水溶液中的(ii)疏水性氨基酸的含量为相当于相对于制备的冻干制剂的总量为14～75重量％的量。
项15、项11所述的制备方法，其中，(iii)精氨酸及其酸加成盐为精氨酸及其盐酸盐。
项16、项11所述的制备方法，其中，在上述第1步骤中使用的水溶液中，相对于1重量份精氨酸，以1～20重量份的比例含有精氨酸的酸加成盐。
项17、项11所述的制备方法，其中，上述第1步骤中使用的水溶液中的上述成分(i)～(iii)的总含量为相当于相对于制备的冻干制剂的总量为80～100重量％的量。
由于本发明的冻干制剂可以在保存过程中稳定地保持流感疫苗的活性，所以与现有的制剂相比，能更容易地流通及保管。
另外，由于本发明的冻干制剂可以在用时溶解于注射用水作为注射剂使用，或直接作为经肺给药制剂或滴鼻剂使用，所以该冻干制剂具有可以适用于各种给药方式的优点。
具体实施方式
在本说明书中，pH为在25℃下测定的值。
本发明的冻干制剂的特征在于，含有(i)流感疫苗、(ii)疏水性氨基酸和(iii)精氨酸及其酸加成盐，进而，该成分(iii)具有特定的配合比例，并且，组成该成分(iii)的精氨酸及其酸加成盐二者的比率满足特定的范围。
作为在本发明的冻干制剂中配合的流感疫苗(以下有时简记作成分(i))，优选为将在发育的鸡蛋中增殖的病毒粒子纯化后制备得到的亚单位疫苗或裂解疫苗之一的流感HA(红血球凝聚素)疫苗。但是，也可以为来源于组织培养的流感疫苗。进而，也可以为使流感病毒削弱的活疫苗、保持免疫原性地进行无毒化而得到的成分疫苗(component vaccine)或者使全部病毒粒子失活的全粒子疫苗(whole viral particles vaccine)。另外，本发明中使用的流感疫苗也可以是由A型株和B型株中的任一方或双方的流感病毒制备得到的，优选由A型株和B型株双方的流感病毒制备得到的流感疫苗。
本发明中使用的流感疫苗可以使用按照公知的制备方法制备的疫苗，或者也可以使用市售的疫苗。
另外，制备的或市售的流感疫苗为溶液或粉末状、且含有缓冲剂或防腐剂等盐类时，优选预先将该流感疫苗用于脱盐处理进行脱盐。通过如上所述地用于脱盐处理，可以更有效地提高本发明的冻干制剂中的流感疫苗的稳定性。作为对流感疫苗进行脱盐处理的方法，没有特别限定，例如可以举出超滤法、沉淀法、离子交换法、透析法等。需要说明的是，从抑制脱盐处理时的流感疫苗活性降低的观点考虑，优选使用利用氢氧化钠、氢氧化钾或精氨酸等碱性物质调节至pH8～10、优选pH8～9的水溶液进行脱盐。特别优选脱盐处理时使用的溶液除不含有流感疫苗之外与制备本发明的冻干制剂时用于冻干的溶液组成相同的溶液。
作为本发明的冻干制剂中的成分(i)的配合比例，根据该冻干制剂的适用方法等进行适当设定，例如可以举出相对于该冻干制剂的总量，成分(i)的配合比例在0.3～60重量％、优选为1～50重量％、更优选为2～40重量％、更进一步优选为3～30重量％、特别优选为3～20重量％的范围内。
作为本发明的冻干制剂中含有的疏水性氨基酸(以下有时简记作成分(ii))，具体而言可以举出缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯基丙氨酸等构成蛋白质的氨基酸。在本发明中，上述疏水性氨基酸可以单独使用一种，或组合两种以上进行使用。在本发明中，作为疏水性氨基酸，优选举出单独使用苯基丙氨酸，或者使用缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸中的至少一种与苯基丙氨酸的组合。
作为本发明的冻干制剂中的成分(ii)的配合比例，可以根据该成分(ii)的种类、该冻干制剂的适用方法等适当设定，例如可以举出相对于该冻干制剂的总量，成分(ii)的配合比例在14～75重量％、优选为20～75重量％、更优选为20～70重量％、更进一步优选为25～65重量％、特别优选为30～60重量％的范围内。
在本发明的冻干制剂中进一步含有精氨酸及其酸加成盐(以下有时简记作成分(iii))。即，在本发明的冻干制剂中必须组合精氨酸及其酸加成盐进行配合。
作为本发明中使用的精氨酸的酸加成盐，只要是在药学上允许的物质即可，没有特别限定，例如可以举出盐酸盐、硝酸盐、硫酸盐等无机酸加成盐；以及乙酸盐等有机酸加成盐。在本发明中，作为精氨酸的酸加成盐，优选举出精氨酸盐酸盐。在本发明中，精氨酸的酸加成盐可以单独使用一种，或组合两种以上进行使用。
在本发明的冻干制剂中，按成分(iii)的总量(即，精氨酸及其酸加成盐的总量)计，以相对于该冻干制剂的总量为20～85重量％的配合比例含有成分(iii)。通过以所述配合比例含有成分(iii)，可以抑制保存时流感疫苗的活性降低，从而可以提供稳定性优异的制剂。优选举出相对于该冻干制剂的总量成分(iii)的配合比例为20～80重量％，更优选为20～75重量％，更进一步优选为25～70重量％，特别优选为30～65重量％。
另外，成分(iii)满足上述配合比例，进而将成分(iii)中的精氨酸及其酸加成盐的比率设定为使用于冻干的水溶液的pH在8～10的范围内。即，由于精氨酸显示碱性，精氨酸的酸加成盐显示酸性，所以成分(iii)在满足上述配合比例的范围内，通过调节精氨酸与精氨酸的酸加成盐的比率，将用于冻干的水溶液的液性调整至上述范围内。如上所述使用精氨酸及其酸加成盐，将用于冻干的水溶液的液性调节至上述范围内，从而可以改善流感疫苗的保存稳定性。较优选将精氨酸及其酸加成盐的比率设定为使用于冻干的水溶液的pH在8～9的范围内。此处，用于冻干的水溶液是指在制备冻干制剂时用于冻干的水溶液，即在精制水中添加有本发明的冻干制剂全部含有成分的水溶液。在本发明中没有特别的限定，例如将用于冻干的水溶液设定为每1mL该水溶液含有相当于冻干制剂的总重量(全部配合成分的总量)为0.2～20mg、优选为0.4～20mg、更优选为0.4～15mg、更进一步优选为0.6～12.5mg、特别优选为1～10mg的量。
成分(iii)中的精氨酸及其酸加成盐的比率只要是使用于冻干的水溶液的液性在上述范围内即可，没有特别限定，可以根据酸加成盐的种类或配合的上述成分(ii)的种类等适当地进行设定。具体而言，可以举出精氨酸的酸加成盐相对于1重量份精氨酸的比率为1～20重量份，优选为1～15重量份，更优选为1.25～12.5重量份，更进一步优选为1.5～12.5重量份，特别优选为2～10重量份。
在本发明的冻干制剂中加入上述成分(i)～(iii)，在不影响本发明效果的范围内，还可以进一步含有除精氨酸之外的亲水性氨基酸(以下有时简记作成分(iv))。作为亲水性氨基酸，只要是具有亲水性侧链的氨基酸即可，可以为任意的氨基酸，不论是否是构成蛋白质的氨基酸。作为亲水性氨基酸，具体可以举出赖氨酸、组氨酸等碱性氨基酸；丝氨酸、苏氨酸等中性羟基氨基酸；天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸；天冬酰胺、谷氨酰胺等酰胺型氨基酸；甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等其他氨基酸等。在上述亲水性氨基酸中优选举出丙氨酸和甘氨酸。上述亲水性氨基酸可以单独使用一种，或组合两种以上进行使用。
在本发明的冻干制剂中配合上述亲水性氨基酸时，对于其配合比例也没有特别限定，但例如可以举出亲水性氨基酸的配合比例相对于该冻干制剂的总量为5～50重量％，优选为5～40重量％，更优选为5～30重量％，更进一步优选为5～25重量％，特别优选为10～25重量％。
此外，在本发明的冻干制剂中，为了使对流感疫苗的稳定化效果更显著，优选在不合有上述成分(iv)时上述成分(i)～(iii)的总量或在含有上述成分(iv)时上述成分(i)～(iv)的总量相对于该冻干制剂的总量为80～100重量％，优选为85～100重量％，更优选为90～100重量％，更进一步优选为95～100重量％，特别优选为100重量％。
只要不影响本发明的效果，在本发明的冻干制剂中可以含有下述成分：葡萄糖等单糖类；蔗糖，麦芽糖，乳糖，海藻糖等二糖类；甘露醇等糖醇；环糊精等寡糖类；右旋糖酐40或普鲁兰多糖等多糖类；聚乙二醇等多元醇；癸酸钠等脂肪酸盐；人血清蛋白；无机盐；明胶；表面活性剂；缓冲剂等。在表面活性剂中，只要是通常用于药物中的表面活性剂即可，不论是阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂均可。进而，在本发明的冻干制剂中，根据需要也可以含有佐剂。
本发明的冻干制剂是通过在精制水中添加规定量的成分(i)～(iii)，进而根据需要添加成分(iv)和其它添加成分，并且将其用于冻干处理，从而制备得到的。具体而言，通过下述的第1步骤及第2步骤，可以制备本发明的冻干制剂，
第1步骤：配制水溶液，所述水溶液含有(i)流感疫苗、(ii)疏水性氨基酸以及(iii)精氨酸及其酸加成盐；该水溶液中的(iii)精氨酸及其酸加成盐的含量为相当于相对于制备的冻干制剂的总量为20～85重量％的量，并且水溶液的pH为8～10。
第2步骤：对上述第1步骤中配制的水溶液进行冻干，由此得到冻干制剂。
将在上述第1步骤中配制的水溶液用于冻干处理，由此可以得到为目标产物的冻干制剂。因此，在上述第1步骤中配制用于冻干的水溶液，使在水溶液中含有的成分中除经冻干被除去的成分之外的各成分的比率与作为制备对象的冻干制剂中含有的各成分的比率相同。另外，如上所述，通过调节精氨酸与精氨酸的酸加成盐的比率来调节上述第1步骤中配制的水溶液的所述液性。
本发明的冻干制剂可以是经冻干处理得到的干燥固体(冻干饼)本身，另外也可以是将该干燥固体粉末化而得到的产物。
对本发明的冻干制剂的给药方式没有特别限定。例如可以是用时使其溶解于稀释液(注射用溶液)作为注射剂皮下给药。另外，本发明的冻干制剂也可以溶解于稀释液制成液体制剂，作为经肺给药用或滴鼻给药用药物制剂经肺给药或鼻腔内给药。进而，本发明的冻干制剂通过施加空气冲击而微粉末化成为经肺给药用或滴鼻给药用药物制剂时，也可以利用能够施加空气冲击的干燥粉末吸入装置直接经肺给药或鼻腔内给药。
本发明的冻干制剂的给药方法可以根据对象患者的年龄等进行适当设定，但是例如可以1次或约间隔1～4周分2次给予相当于3～300μg流感疫苗的量的冻干制剂。
本发明的冻干制剂在不是用时溶解于稀释液中而是直接给药的情况下，从使用简便性的观点考虑，优选分成单次给药量(1次给药量)容纳于容器中。另外，将本发明的冻干制剂在用时溶解于稀释液进行给药时，可以分成单次给药量容纳于容器中，或将多次的给药量合并容纳于一个容器中。
本发明的冻干制剂与作为现有注射剂使用的含有流感疫苗的制剂相比，由于配合的赋形剂的量降低，因此具有在一个容器中容纳的冻干制剂的配合量少的优点。在本发明中，在一个容器中容纳的冻干制剂的配合量没有特别限定，但是例如可以举出配合量为0.1～10mg，优选为0.15～8mg，更优选为0.2～6mg，更进一步优选为0.25～5mg，特别优选为0.3～5mg。
实施例
以下根据实施例等更具体地说明本发明，但本发明并不限定于这些实施例。
参考例1探讨流感疫苗的脱盐条件
对流感HA疫苗溶液的脱盐处理条件进行了探讨。具体而言，使用流感HA疫苗“生研”(商品名、Denka生研制，Lot No.308-A)作为流感HA疫苗溶液，将适量的上述溶液加入4mL Vivaspinconcentrator(Sartorius制)中，在3000rpm下离心分离30分钟。接着，将表1所示组成的溶液分别加入Vivaspin concentrator中，在3000rpm下离心分离30分钟。反复进行上述操作共计3次。
按以下方法测定被脱盐的流感HA疫苗的活性(HA价)。
<流感HA疫苗的活性测定>
1、5vol％鸡红血球悬浮液的配制
将保存的鸡血液(日本Biotest研究所制)加入试管中，在900g下离心分离5分钟后，除去上清和白血球层。然后，将下述组成的稀释液(1/200mol/L磷酸缓冲的氯化钠溶液(pH7.2))加入试管内的红血球中，搅拌后进行离心分离，除去上清。反复进行上述操作3次。用吸移管吸取试管中的红血球，加入装有稀释液的容器中进行混合，配制5vol％鸡红血球悬浮液。
稀释液的组成
NaCl              8.5g
Na2HPO4·12H2O    1.425g
KH2PO4            0.135g
精制水            1000mL
2、HA价的测定
将50μL各种浓度的流感HA疫苗溶液加到微板上，然后在其中加入50μL 0.5vol％鸡红血球悬浮液(两阶段稀释法)，将微板充分混合，在室温下静置1小时后，将使红血球完全凝集的流感HA疫苗的最终稀释倍数作为HA价。
所得结果示于表1。由结果可以确定如果流感HA疫苗在pH7以下的溶液中进行脱盐处理，则会导致其活性降低，但如果在pH8～9的溶液中进行脱盐处理，则可以稳定地保持其活性。
[表1]
  溶液的组成和液性   残留活性
 条件1   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe；用NaOH调节pH至3.0   12.5％
 条件2   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe；用NaOH调节pH至4.0   6.3％
 条件3   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe；用NaOH调节pH至5.7   12.5％
 条件4   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe；用NaOH调节pH至7.0   50％
 条件5   在0.5mL精制水中不加入Phe；用NaOH调节pH至7.0   50％
 条件6   在0.5mL精制水中加入0.5mgPhe；用NaOH调节pH至8.0   100％
 条件7   在0.5mL精制水中不加入Phe；用NaOH调节pH至8.0   100％
 条件8   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe；用NaOH调节pH至9.0   100％
#表中，残留活性是指脱盐处理后的HA价相对于脱盐处理前的HA价的比例(％)。
试验例1流感疫苗的稳定性评价
使用流感HA疫苗“生研”(商品名、Denka生研制，Lot No.308-A)作为流感HA疫苗溶液，将1mL(相当于90μg流感HA疫苗)上述溶液加入4mL Vivaspin concentrator(Sartorius制)中，在3000rpm下离心分离30分钟。然后，将表2所示组成的溶液分别加入Vivaspinconcentrator中，在3000rpm下离心分离30分钟。反复进行上述操作共计3次。最终被浓缩·脱盐(缓冲液交换)的溶液为表2所示组成的溶液，体积调整为最初的体积(1mL)。将0.5mL所得溶液填充到玻璃管形瓶中，进行冻干，得到冻干产品。
[表2]
  各实施例和比较例中使用的溶液的组成和液性
  实施例1   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe、0.5mg Arg-HCl和0.075mg Arg；pH 8
  实施例2   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe、0.3mgArg-HCl和0.050mg Arg；pH 8
  实施例3   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe、0.2mg Ile、0.3mg Arg-HCl和0.057mg Arg；pH 8
  实施例4   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe、0.2mg Val、0.3mg Arg-HCl和0.055mg Arg；pH 8
  实施例5   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe、0.2mg Leu、0.3mg Arg-HCl和0.052mg Arg；pH 8
  实施例6   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe、0.2mg Ala、0.3mg Arg-HCl和0.052mg Arg；pH 8
  实施例7   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe、0.2mg Gly、0.3mg Arg-HCl和0.052mg Arg；pH 8
  比较例1   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe和适量的NaOH；pH 8
  比较例2   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe和0.060mg Arg；pH 8
  比较例3   在0.5mL精制水中加入0.5mg Arg-HCl和0.030mg Arg；pH 8
  比较例4   在0.5mL精制水中加入0.5mg Phe，0.5mg His和0.030mg Arg；pH 8
#在实施例1-7和比较例2-4中使用的溶液通过加入规定量的各配合成分，不使用其他pH调节剂，将其液性调节至pH为8。在比较例1中使用的溶液加入规定量的配合成分后，加入NaOH使其液性是pH为8。
将所得冻干制剂密封在玻璃管形瓶(vial)中，在该状态下，于25℃/60％RH下避光保存4周。在刚配制后和保存1、2、3及4周后，按与上述参考例1同样的方法测定冻干制剂中的流感HA疫苗的HA价。
结果示于表3。即使使用仅单独用氢氧化钠或精氨酸调节pH至8的含有苯基丙氨酸的溶液，也无法抑制保存时流感HA疫苗的活性降低(比较例1和2)。另外，即使使用不加入作为疏水性氨基酸的苯基丙氨酸、而加入精氨酸及精氨酸盐酸盐调节pH至8的溶液，也无法抑制流感HA疫苗的活性降低(比较例3)。进而，即使使用组合苯基丙氨酸、作为碱性氨基酸的组氨酸和精氨酸进行配合调节pH至8的溶液，也无法抑制流感HA疫苗的活性降低。
相对于此，确认通过使用于配制冻干制剂的溶液满足下述(1)～(3)的条件可以稳定地维持最终制备的冻干制剂中流感HA疫苗的活性。
(1)配合疏水性氨基酸、精氨酸和精氨酸酸加成盐；(2)设定精氨酸与精氨酸酸加成盐的比率，使该溶液的pH为8；以及(3)设定精氨酸和精氨酸酸加成盐的总量，使其相对于冻干制剂为规定浓度以上。
[表3]
Figure G2008800077114D00131
#表中残留活性是指保存后的冻干制剂的HA价相对于刚配制后的冻干制剂的HA价的比例(％)。
表中冻干制剂组成栏中的单位％是重量％。
表中“-”表示没有测定。

Claims (17)

1.一种冻干制剂，含有流感疫苗，其特征在于，
所述冻干制剂是对含有(i)流感疫苗、(ii)疏水性氨基酸和(iii)精氨酸及其酸加成盐的水溶液进行冻干而得到的，
其中，(ii)疏水性氨基酸为选自苯基丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、及异亮氨酸中的至少一种，(iii)精氨酸及其酸加成盐为精氨酸、及选自其盐酸盐、硝酸盐、硫酸盐和乙酸盐中的至少一种精氨酸加成盐，
相对于冻干制剂的总量，(iii)精氨酸及其酸加成盐的配合比例为20～85重量％，并且精氨酸及其酸加成盐二者的比率在使所述水溶液的液性为pH8～10的范围内。
2.如权利要求1所述的冻干制剂，其中，(i)流感疫苗为经脱盐处理的疫苗。
3.如权利要求1所述的冻干制剂，其中，(ii)疏水性氨基酸为苯基丙氨酸，或者为缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸中的至少一种与苯基丙氨酸的组合。
4.如权利要求1所述的冻干制剂，其中，相对于冻干制剂的总量，以14～75重量％的比例含有(ii)疏水性氨基酸。
5.如权利要求1所述的冻干制剂，其中，(iii)精氨酸及其酸加成盐为精氨酸及其盐酸盐。
6.如权利要求1所述的冻干制剂，其中，相对于1重量份的精氨酸，以1～20重量份的比例含有精氨酸的酸加成盐。
7.如权利要求1所述的冻干制剂，其中，所述成分(i)～(iii)的总量相对于冻干制剂的总量为80～100重量％。
8.如权利要求1所述的冻干制剂，是用时溶解型的注射剂。
9.如权利要求1所述的冻干制剂，是经肺给药用药物制剂。
10.如权利要求1所述的冻干制剂，是滴鼻给药用药物制剂。
11.一种含有流感疫苗的冻干制剂的制备方法，所述方法包括下述步骤：
第1步骤：配制水溶液，所述水溶液含有(i)流感疫苗、(ii)疏水性氨基酸和(iii)精氨酸及其酸加成盐，
其中，(ii)疏水性氨基酸为选自苯基丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、及异亮氨酸中的至少一种，(iii)精氨酸及其酸加成盐为精氨酸、及选自其盐酸盐、硝酸盐、硫酸盐和乙酸盐中的至少一种精氨酸加成盐，
所述水溶液中的(iii)精氨酸及其酸加成盐的含量为相当于相对于制备的冻干制剂的总量为20～85重量％的量，且水溶液的pH为8～10；及
第2步骤：对上述步骤中制备的水溶液进行冻干。
12.如权利要求11所述的制备方法，其中，(i)流感疫苗为经脱盐处理的疫苗。
13.如权利要求11所述的制备方法，其中，(ii)疏水性氨基酸为苯基丙氨酸，或者为缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸中的至少一种与苯基丙氨酸的组合。
14.如权利要求11所述的制备方法，其中，在所述第1步骤中使用的水溶液中的(ii)疏水性氨基酸的含量为相当于相对于制备的冻干制剂的总量为14～75重量％的量。
15.如权利要求11所述的制备方法，其中，(iii)精氨酸及其酸加成盐为精氨酸及其盐酸盐。
16.如权利要求11所述的制备方法，其中，所述第1步骤中使用的水溶液中，相对于1重量份精氨酸，以1～20重量份的比例含有精氨酸的酸加成盐。
17.如权利要求11所述的制备方法，其中，所述第1步骤中使用的水溶液中的所述成分(i)～(iii)的总含量为相当于相对于制备的冻干制剂的总量为80～100重量％的量。
CN2008800077114A 2007-03-09 2008-03-07 含有流感疫苗的冻干制剂及其制备方法 Expired - Fee Related CN101631563B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2007059724 2007-03-09
JP059724/2007 2007-03-09
PCT/JP2008/054210 WO2008111532A1 (ja) 2007-03-09 2008-03-07 インフルエンザワクチン含有凍結乾燥製剤、及びその製造方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101631563A CN101631563A (zh) 2010-01-20
CN101631563B true CN101631563B (zh) 2013-07-24

Family

ID=39759470

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008800077114A Expired - Fee Related CN101631563B (zh) 2007-03-09 2008-03-07 含有流感疫苗的冻干制剂及其制备方法

Country Status (20)

Country Link
US (1) US8216588B2 (zh)
EP (1) EP2119451A4 (zh)
JP (1) JP5388842B2 (zh)
KR (1) KR20090128463A (zh)
CN (1) CN101631563B (zh)
AR (1) AR065640A1 (zh)
AU (1) AU2008225501B2 (zh)
BR (1) BRPI0808037A2 (zh)
CA (1) CA2680193C (zh)
HK (1) HK1139076A1 (zh)
IL (1) IL200588A0 (zh)
MX (1) MX2009009635A (zh)
MY (1) MY149924A (zh)
NZ (1) NZ579395A (zh)
RU (1) RU2484847C2 (zh)
SG (1) SG179406A1 (zh)
TW (1) TWI428140B (zh)
UA (1) UA97391C2 (zh)
WO (1) WO2008111532A1 (zh)
ZA (1) ZA200905952B (zh)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0614460D0 (en) * 2006-07-20 2006-08-30 Novartis Ag Vaccines
EP3744833A1 (en) * 2011-06-28 2020-12-02 Leukocare Ag Stabilisation method for viruses
EP2948129B1 (en) * 2013-01-25 2017-11-22 Wintermute Biomedical, Inc. Therapeutic compounds
GB201314248D0 (en) * 2013-08-08 2013-09-25 Glaxosmithkline Biolog Sa Saccharide vaccine formulation
US10736840B2 (en) 2013-09-03 2020-08-11 Georgia Tech Research Corporation Thermally stable vaccine formulations and microneedles
WO2015059284A1 (en) * 2013-10-25 2015-04-30 Leukocare Ag A novel method for the production of stabile vaccines
TW201720426A (zh) 2015-11-27 2017-06-16 Nitto Denko Corp 流感疫苗乾燥製劑、及流感疫苗乾燥製劑之製造方法
WO2017090767A1 (ja) * 2015-11-27 2017-06-01 日東電工株式会社 インフルエンザワクチン乾燥製剤、及び、インフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法
EP3381467A4 (en) 2015-11-27 2019-06-05 Nitto Denko Corporation PHARMACEUTICAL VACCINE COMPOSITION FOR ORAL ADMINISTRATION AND METHOD FOR PREPARING A PHARMACEUTICAL VACCINE COMPOSITION FOR ORAL ADMINISTRATION
CA3052047A1 (en) 2017-02-13 2018-08-16 Wintermute Biomedical, Inc. Anti-pathogenic therapeutic compositions
CA3115050A1 (en) 2018-10-01 2020-04-09 Wintermute Biomedical, Inc. Therapeutic compositions

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006041819A1 (en) * 2004-10-06 2006-04-20 Medimmune Vaccines, Inc. Refrigerator-temperature stable influenza vaccine compositions

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2505657A1 (fr) * 1981-05-13 1982-11-19 Pasteur Institut Perfectionnements apportes aux agents de stabilisation de virus vivants pour la preparation de vaccins, et vaccins stabilises contenant lesdits agents de stabilisation
US4537769A (en) 1982-04-06 1985-08-27 American Cyanamid Company Stabilization of influenza virus vaccine
JPH07121871B2 (ja) * 1986-10-09 1995-12-25 国立予防衛生研究所長 インフルエンザワクチン凍結乾燥製剤
JPH05229960A (ja) * 1990-10-30 1993-09-07 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd 新規インフルエンザワクチン
JPH0813753B2 (ja) 1992-05-22 1996-02-14 株式会社微生物化学研究所 牛伝染性鼻気管炎ウイルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病ウイルス感染症、パラインフルエンザ３型ウイルス感染症、牛ｒｓウイルス感染症および牛アデノ７型ウイルス感染症５種混合生ワクチン
MXPA02009485A (es) 2000-03-31 2003-03-10 Kirin Brewery Preparacion en polvo para administracion a traves de la mucosa, que comprende un farmaco de alto peso molecular y que muestra una estabilidad mejorada en almacenamiento.
EG24184A (en) * 2001-06-15 2008-10-08 Otsuka Pharma Co Ltd Dry powder inhalation system for transpulmonary
JP2004054555A (ja) * 2002-07-19 2004-02-19 Yokogawa Electric Corp 表示装置
EP2481819A1 (en) 2003-02-25 2012-08-01 MedImmune Vaccines, Inc. Cross flow filtration in the production of stabilized influenza vaccine compositions
RU2290205C1 (ru) * 2005-09-13 2006-12-27 Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунологическим препаратам "МИКРОГЕН" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ получения живой вакцины для профилактики гриппа

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006041819A1 (en) * 2004-10-06 2006-04-20 Medimmune Vaccines, Inc. Refrigerator-temperature stable influenza vaccine compositions

Also Published As

Publication number Publication date
TWI428140B (zh) 2014-03-01
JP5388842B2 (ja) 2014-01-15
KR20090128463A (ko) 2009-12-15
AU2008225501A2 (en) 2009-09-24
EP2119451A1 (en) 2009-11-18
RU2484847C2 (ru) 2013-06-20
TW200848074A (en) 2008-12-16
HK1139076A1 (en) 2010-09-10
MY149924A (en) 2013-10-31
US20100104595A1 (en) 2010-04-29
NZ579395A (en) 2012-05-25
CA2680193A1 (en) 2008-09-18
AU2008225501A1 (en) 2008-09-18
SG179406A1 (en) 2012-04-27
JPWO2008111532A1 (ja) 2010-06-24
EP2119451A4 (en) 2012-05-16
IL200588A0 (en) 2010-05-17
ZA200905952B (en) 2010-11-24
BRPI0808037A2 (pt) 2014-06-17
MX2009009635A (es) 2009-09-22
CN101631563A (zh) 2010-01-20
RU2009137380A (ru) 2011-04-20
AR065640A1 (es) 2009-06-17
AU2008225501B2 (en) 2013-08-29
UA97391C2 (ru) 2012-02-10
CA2680193C (en) 2015-05-05
US8216588B2 (en) 2012-07-10
WO2008111532A1 (ja) 2008-09-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101631563B (zh) 含有流感疫苗的冻干制剂及其制备方法
CN102281900B (zh) 灭活的全病毒疫苗的稳定赋形剂
TW520291B (en) Stable lyophilized pharmaceutical preparations of monoclonal or polyclonal antibodies
AU2013326548B2 (en) Virus-containing formulation and use thereof
TW205570B (en) A method for stabilizing live vaccine
EP1206189B1 (en) Rotavirus vaccine formulations
US6616931B1 (en) Rotavirus vaccine formulations
CN101095950B (zh) 一种稳定的人用狂犬病疫苗冻干制剂及其制备
CN103118663A (zh) 卡泊芬净组合物
EP0939648B1 (en) Rotavirus vaccine formulations
AU2018334502A1 (en) Process for lyophilized pharmaceutical formulation of a therapeutic protein
CN1802171B (zh) 不包含血清白蛋白的人红细胞生成素的稳定水溶液
JP6126684B2 (ja) 新規なロタウイルスワクチン組成物及び同組成物を調製する方法
CN105530955A (zh) 流感疫苗干燥制剂、及流感疫苗干燥制剂的制造方法
CN101439181A (zh) 一种稳定的乌司他丁水针剂药物组合物
US20220339241A1 (en) Stable formulations of recombinant proteins
CN107865824B (zh) 一种稳定的重组人血管内皮抑制素皮下注射组合物
CN101716343A (zh) 一种单克隆抗体的冻干制剂
US20140356396A1 (en) Rotavirus preparations with excess calcium ions and high viscosities that ensure viability at elevated temperatures
KR20180095817A (ko) 열적으로 안정한 로타바이러스 백신 제제 및 그의 사용 방법
JPH01246226A (ja) 安定な修飾アスパラギナーゼ含有組成物
AU2008202660B2 (en) Rotavirus vaccine formulations

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1139076

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1139076

Country of ref document: HK

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20130724

Termination date: 20160307

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee