JPH01246226A - 安定な修飾アスパラギナーゼ含有組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は抗腫瘍剤として有用な修飾アスパラギナーゼを
含む組成物であり、そこに含有される修飾アスパラギナ
ーゼが安定化された組成物に関する。更に詳しくは、本
発明はアミノ酸、イミノ酸および緩衝剤から選ばれる少
なくとも１種を配合してなる安定な修飾アスパラギナー
ゼ含有組成物に関するものである。

〔従来の技術］ アスパラギナーゼは抗ＩＩΦ瘍剤として有用であるが、
抗原性を有するためアスパラギナーゼを２゜４−ビス（
０−メトキシポリエチレングリコール）−６−クロル−
３−）リアジン、２−０−メトキシポリエチレングリコ
ール−４，６−ジクロル−３−）リアジンなどで修飾し
たり、グルタルアルデヒドなどを架橋剤としてアルブミ
ンで修飾することによって、即ち修飾アスパラギナーゼ
のＢ様とすることによってその抗原性を低下または消失
させている。修飾アスパラギナーゼは、アスパラギナー
ゼ投与によってアスパラギナーゼに対する抗体ができた
腫瘍患者に対しても再投与が可能であるところから非常
に有用な物質である（Ｊｐｎ、　Ｊ。

Ｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅｓ、（ＧＡＮＮ）、　７１．１２
６４−１２７０．１９８６参照）。

〔発明が解決しようとする課題］ しかしながら修飾アスパラギナーゼは、安定性が悪く、
特に／８液状態、凍結乾燥状態および凍結乾燥工程中な
どにおいて安定性が悪いため、たとえば水性注射剤ある
いは凍結乾燥製剤とした場合、あるいはそれら製剤の製
造工程中（特に、凍結乾燥工程中）にその活性が低下す
るという問題点を有する。

〔課題を解決するための手段〕

かかる観点から、本発明者らは修飾アスパラギナーゼが
安定化された修飾アスパラギナーゼ含有組成物を得るべ
く鋭意研究を行ってきた。その結果、アミノ酸およびイ
ミノ酸が修飾アスパラギナーゼに対する安定化作用を有
することを見いだした。また、修飾アスパラギナーゼを
蒸留水に溶解したときのｐＨと同じｐＨを維持するよう
に緩衝剤を用いて修飾アスパラギナーゼ水溶液を調製し
た場合、緩衝剤を添加することによって修飾アスパラギ
ナーゼは安定化されることを見いだした。本発明者らは
さらに研究を重ねてアミノ酸および／またはイミノ酸と
緩衝剤とを共存させると、修飾アスパラギナーゼに対す
る安定化作用がより一層増大することを見いだし本発明
を完成させるに至った。

即ち、本発明はアミノ酸、イミノ酸および緩衝剤から選
ばれる少なくとも１種を配合してなることを特徴とする
安定な修飾アスパラギナーゼ含有組成物に関する。

本発明で安定化の対象となる修飾アスパラギナーゼとは
、アスパラギナーゼ、特にＬ−アスパラギナーゼの抗原
性を低下または消失させるためにアスパラギナーゼを適
当な化合物にて修飾したものをいう。修飾アスパラギナ
ーゼとしては、具体的には２．４−ビス（０−メトキシ
ポリエチレングリコール）−６−クロル−３−）リアジ
ン、２−０−メトキシポリエチレングリコール−４，６
−ジクロル−３−）リアジンなどで修飾されるか、グル
タルアルデヒドなどを架橋側としてアルブミンなどで修
飾されたアスパラギナーゼが例示される。

本発明で使用されるアミノ酸の種類は特に限定されず、
０体、Ｌ体のいずれでもよいが、好ましくはα−アミノ
酸、特に蛋白質構成アミノ酸が使用される。アミノ酸の
好適な例としては、たとえば中性アミノ酸〔脂肪族アミ
ノ酸（グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロ
イシンなど）、ヒドロキシアミノ酸（セリン、トレオニ
ンなど）、含硫アミノ酸（システィン、シスチン、メチ
オニンなど）アミドアミノ酸（アスパラギン、グルタミ
ンなど）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、チロシ
ン、トリプトファンなど）〕、酸性アミノ酸（アスパラ
ギン酸、グルタミン酸など）、塩基性アミノ酸（ヒスチ
ジン、リジン、アルギニンなど）などが例示される。特
に好ましいアミノ酸としては、グリシン、グルタミン、
システィンなどが例示される。

本発明で使用されるイミノ酸の種類は特に限定されない
が、好ましくはプロリン、オキシプロリンなどが使用さ
れる。イミノ酸は０体、Ｌ一体のいずれでもよい。

本明細書の以下の記載において、単にアミノ酸類と表現
した場合には、イミノ酸をも包含する概念である。

本発明で使用される緩衝剤は通常の生理的に許容される
緩衝剤でよく、例えばクエン酸塩緩衝系、クエン酸−リ
ン酸水素２ナトリウム系、リン酸塩緩衝系、コハク酸塩
緩衝系、酢酸塩緩衝系、フタル酸塩緩衝系、トリスヒド
ロキシメチルアミノメタン緩衝系などが挙げられる。こ
れらは単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わ
せて使用してもよい。

本発明組成物には、例えば水溶液状態の組成物において
は、２　ＫＩＪ／ｄ〜５５にυ／ｌａｌ！（ＫＵは国際
単位である）の濃度の修飾アスパラギナーゼに対して、
アミノ酸類は最終濃度が０．Ｏ１■／Ｉｄ〜２０ｍｇ／
−１好ましくは０．１ｍｇ／Ｉｄ〜５■／ｍ１になるよ
うに配合される。緩衝剤は、通常最終濃度が等張の１０
０分の１以上の濃度になるように含有させて、得られる
組成物のｐＨを修飾アスパラギナーゼを蒸留水に溶解し
たときのｐＨと同じｐＨを維持するように配合される。

当該ｐＨとしては通常５〜Ｂ、好ましくは約６〜７に調
節することが好適である。アミノ酸類および緩衝剤を同
時に配合する場合においても、最終濃度がそれぞれ上記
となるように配合すればよい。

また、凍結乾燥状態の組成物としては上記の如き割合で
アミノ酸類、緩衝剤の配合された水性組成物を凍結乾燥
させたものが例示される。

〔作用・効果〕

本発明の組成物中に配合されるアミノ酸類または緩衝剤
は修飾アスパラギナーゼに対して優れた安定化作用を有
する。従って、本発明の組成物においては、そこに含ま
れる修飾アスパラギナーゼが安定に保たれる。特に、水
溶液状態の修飾アスパラギナーゼ含有組成物、凍結乾燥
状態の修飾アスパラギナーゼ含有組成物、また凍結乾燥
製剤の製造工程中においても修飾アスパラギナーゼが安
定に保たれるのである。

本発明の組成物の具体的な製剤の態様としては溶液性注
射剤、凍結乾燥製剤、徐放性包埋剤などが例示される。

〔試験例〕

以下に試験例を挙げて本発明組成物中における修飾アス
パラギナーゼの安定性についてより具体的に説明する。

なお、以下の試験例において修飾アスパラギナーゼの活
性はＩＩＫＵ／ｍｆｆ１以下のものはそのまま、１１Ｋ
ＩＪ／ｍｆより高いものは、約１１ＫＵ／ｄになるよう
に希釈した後、Ｌ−アスパラギナーゼの定量法（日本薬
局方外医薬品成分規格　１９８６版厚生省薬務局審査第
二課監修　薬業時報蛙発行第５〜６頁参照）により測定
した。

試験例１ １１Ｋ［Ｉ／ｄの濃度の２，４−ビス（０−メトキシポ
リエチレングリコール）−６−クロル−Ｓ−トリアジン
で修飾した修飾アスパラギナーゼに対して、グリシンを
最終濃度が１■／　ｔｔｒＲになるように含有させた水
溶液を調製した。得られた水溶液を２５°Ｃで１力月保
存した。１力月後にアスパラギナーゼ活性を測定し、初
期活性（ＩＩＫＵ／ｄ）を１００％として修飾アスパラ
ギナーゼの活性残存率を算出した。対照としては修飾ア
スパラギナーゼのみが蒸留水に溶解したものを用いた。

第１表に結果を示す。

第１表 試験例２ １１ＫＵ／ｄの濃度の２．４−ビス（Ｏ−メトキシポリ
エチレングリコール）−６−クロル−３−トリアジンで
修飾した修飾アスパラギナーゼに対して緩衝剤はリン酸
塩緩衝液を使用し、最終濃度が等張の１０分の１の濃度
になるように含有させてｐＨを６．５に調節した。得ら
れた水溶液を２５°Ｃで１力月保存した。１力月後にア
スパラギナーゼ活性を測定し、初期活性（ＩＩＫＵ／ｄ
）を１００％として修飾アスパラギナーゼの活性残存率
を算出した。対照としては修飾アスパラギナーゼのみが
茎留水に溶解したものを用いた。なおこの溶液のｐＨは
６．５であった。

第２表に結果を示す。

第２表 試験例３ １１Ｋｔｌ／妊の濃度の２，４−ビス（０−メトキシポ
リエチレングリコール）−６−クロル−Ｓ−トリアジン
で修飾した修飾アスパラギナーゼに対して、第３表に示
した各種アミノ酸類を最終濃度が５ｍｇ／ｍになるよう
に含有させ、緩衝剤にはリン酸塩緩衝液を使用し、最終
濃度が等張の１０分の１の濃度になるように含有させて
ｐＨを６．５に調節した。得られた各水溶液を４０゛ｃ
で３時間放置した。３時間後にアスパラギナーゼ活性を
測定し、初期活性（ＩＩＫＵ／ｄ）を１００％として修
飾アスパラギナーゼの活性残存率を算出した。

また、対照としては、アミノ酸類および緩衝剤の何れも
添加していないもの（対照）を用いた。

第３表に用いたアミノ酸類および活性残存率の値を示す
。

［以下余白］ 第３表 試験例４ １１ＫＵ／ａｄの濃度の２．４−ビス（０−メトキシポ
リエチレングリコール）−６−クロル−Ｓ−トリアジン
で修飾された修飾アスパラギナーゼに対して、第４表に
示した各種アミノ酸類を最終濃度が１■／ｄになるよう
に含有させ、緩衝剤にはリン酸塩緩衝液を使用し、最終
濃度が等張になるように含有させてｐＨを６．５に調整
した。得られた水溶液を４０°Ｃで３時間放置した。３
時間後にアスパラギナーゼ活性を測定し、初期活性（１
１にυ／ｄ）を１００％として修飾アスパラギナーゼの
活性残存率を算出した。

第４表に、用いたアミノ酸類および活性残存率の値を示
す。

第４表 試験例５ １１ＫＩＪ／ａｄの濃度の２．４−ビス（Ｏ−メトキシ
ポリエチレングリコール）−６−クロル−３−トリアジ
ンで修飾された修飾アスパラギナーゼに対して、グリシ
ンを最終濃度が１　ｍｇ／ｄ〜２０■／Ｉ１１になるよ
うに各種濃度で含有させ、緩衝剤にはリン酸塩緩衝液を
使用し、最終濃度が等張の１０分の１の濃度になるよう
に含有させてｐＨを６．５に調整した。得られた水溶液
を４０°Ｃで２４時間放置した。２４時間後にアスパラ
ギナーゼ活性を測定し、初期活性（ＩＩＫＩＪ／ａｔｅ
）を１００％とじて修飾アスパラギナーゼの活性残存率
を算出した。

第５表に、用いたグリシンの添加量および活性残存率の
値を示す。

第５表 試験例６ １１にＵ／ｄの濃度の２，４−ビス（０−メトキシポリ
エチレングリコール）−６−クロル−３−トリアジンで
修飾された修飾アスパラギナーゼに対して、グリシンを
最終濃度が５　［／ｄになるように含有させ、緩衝剤を
含有させていないもの及び緩衝剤として゛リン酸塩緩衝
液を最終濃度が等張の１０分の１あるいは１００分の１
になるように含有させてｐＨを６．５に調節したものを
調製した。

得られた水溶液を４０″Ｃで２４時間および７日間放置
した。２４時間後および７日後にアスパラギナーゼ活性
を測定し、初期活性（Ｉ　Ｉ　ＫＵ／ｍｉ）を１００％
として修飾アスパラギナーゼの活性残存率を算出した。

第６表に、用いた緩衝剤の濃度および活性残存率の値を
示す。

第６表 ｓＩ：等張を１としたときの濃度 試験例７ ２〜５５にＵ／−の濃度の２，４−ビス（０−メトキシ
ポリエチレングリコール）−６−クロル−８−トリアジ
ンで修飾された修飾アスパラギナーゼに対して、グリシ
ンを最終濃度が５■／ｄになるように含有させ、緩衝剤
にはリン酸塩緩衝液を使用し最終濃度が等張の１０分の
１の濃度になるように含有させてｐＨを６．５に調節し
た。得られた水溶液を２５°Ｃで２４時間放置した。２
４時間後にアスパラギナーゼ活性を測定し、初期活性を
１００％として修飾アスパラギナーゼの活性残存率を算
出した。

第７表に活性残存率の値を示す。

第７表 試験例８ １１ＫＵ／ｄの濃度の２，４−ビス（０−メトキシポリ
エチレングリコール）−６−クロル−３−トリアジンで
修飾された修飾アスパラギナーゼに対して、グリシンを
最終濃度が５　ｆｆ１ｇ　／　ｍｌになるように含有さ
せ、緩衝剤にはリン酸塩緩衝液を使用し最終濃度が等張
の１０分の１の濃度になるように含有させてｐＨを６．
５に調節した。得られた水溶液を凍結乾燥した。凍結乾
燥品を２５°Ｃで２４時間放置した。２４時間後にアス
パラギナーゼ活性を測定し、凍結乾燥前の活性（１１Ｋ
［Ｉ／ｍ！、）を１００％として修飾アスパラギナーゼ
の活性残存率を算出した。対照としてはグリシンおよび
緩衝剤を添加していないものを用いた。

第８表に活性残存率の値を示す。

第８表 試験例９ １１ＫＵ７’＋ｆの濃度の２，４−ビス（０−メトキシ
ポリエチレングリコール）−６−クロル−３−トリアジ
ンで修飾された修飾アスパラギナーゼに対して、緩衝剤
としてクエン酸塩緩衝液、クエン酸−リン酸塩緩衝液、
あるいは酢酸塩緩衝液を使用し最終濃度が等張の１０分
の１の濃度になるように含有させてｐＨを６．５に調節
した。得られた水溶液を４０”Ｃで３時間放置した。３
時間後にアスパラギナーゼ活性を測定し、初期活性（１
１ＫＵ／ｄ）を１００％として修飾アスパラギナーゼの
活性残存率を算出した。

第９表に結果を示す。

第９表 〔実施例〕 次に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、
本発明はこれに限定されるものではない。

実施例１ 修飾アスパラギナーゼの注射用製剤１　ｒａｌ中岨成：
修飾アスパラギナーゼ　　　　　　　１１Ｋｔｌグリシ
ン　　　　　　　　　　　　　　１ｎ＋ｇリン酸２水素
ナトリウム（２水塩）１．９■リン酸水素２ナトリウム
（１２水塩）１．６＋ｎｇ注射用蒸留水　　　　　　　
　　　　　適量注射用遺留水以外の各原料を上記数量正
確に秤量する。これらに注射用奈留水を加えて溶かし、
正確に１ｒｄとする。得られた水溶液をフィルター孔径
０．２２μｍのフィルターで無菌！！過を行った。

この無菌の水溶液をアンプルに充填することによって、
安定な修飾アスパラギナーゼの注射用製剤を得た。

実施例２ 修飾アスパラギナーゼの注射用凍結乾燥製剤１バイアル
中組成： 修飾アスパラギナーゼ　　　　　　２２０ＫＵグリシン
　　　　　　　　　　　　　２０ｍｇリン酸２水素ナト
リウム（２水塩）　　３８■リン酸水素２ナトリウム（
１２水塩）３２ｍｇ注射用蒸留水　　　適宜加えて２０
ｍ２とする。

上記組成にて実施例１と同様に調製した後、無菌濾過を
行いバイアルに充填し、標準的技法により凍結乾燥する
ことによって、安定な修飾アスパラギナーゼの注射用凍
結乾燥製剤を得た。

特許出願人　　住友製薬株式会社

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. アミノ酸、イミノ酸および緩衝剤から選ばれる少なくと
   も１種を配合してなることを特徴とする安定な修飾アス
   パラギナーゼ含有組成物。