JPH0813753B2 - 牛伝染性鼻気管炎ウイルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病ウイルス感染症、パラインフルエンザ３型ウイルス感染症、牛ｒｓウイルス感染症および牛アデノ７型ウイルス感染症５種混合生ワクチン - Google Patents
牛伝染性鼻気管炎ウイルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病ウイルス感染症、パラインフルエンザ３型ウイルス感染症、牛ｒｓウイルス感染症および牛アデノ７型ウイルス感染症５種混合生ワクチンInfo
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- JPH0813753B2 JPH0813753B2 JP4155603A JP15560392A JPH0813753B2 JP H0813753 B2 JPH0813753 B2 JP H0813753B2 JP 4155603 A JP4155603 A JP 4155603A JP 15560392 A JP15560392 A JP 15560392A JP H0813753 B2 JPH0813753 B2 JP H0813753B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、牛伝染性鼻気管炎（Ｉ
ＢＲ）ウイルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病（Ｂ
ＶＤ−ＭＤ）ウイルス感染症、パラインフルエンザ３型
（ＰＩ３）ウイルス感染症、牛ＲＳウイルス感染症およ
び牛アデノ７型（ＡＤ７）ウイルス感染症の各ウイルス
感染症に対するワクチンの全てを混合してなる５種混合
生ワクチンに関するものである。
ＢＲ）ウイルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病（Ｂ
ＶＤ−ＭＤ）ウイルス感染症、パラインフルエンザ３型
（ＰＩ３）ウイルス感染症、牛ＲＳウイルス感染症およ
び牛アデノ７型（ＡＤ７）ウイルス感染症の各ウイルス
感染症に対するワクチンの全てを混合してなる５種混合
生ワクチンに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルス
は、牛に感染すると呼吸器症状、結膜炎及び陰門膣炎等
を起こし、妊娠牛では流産を起こす。牛ウイルス性下痢
−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）ウイルスでは、呼吸器症状の
他に重度の致死的下痢を起こすことで知られ、妊娠牛に
対しては持続感染牛の産出および流産等の異常産の原因
となる。パラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウイルスで
は、主として呼吸器症状の原因となる。また、牛ＲＳウ
イルスでは、主として呼吸器症状の原因となるが、呼吸
器系各器官における病状が重度で治癒の経過も長く、特
に成牛では予後不良となることか多い。更に、牛アデノ
７型（ＡＤ７）ウイルスの感染では呼吸器症状および下
痢の両者の原因となる。
は、牛に感染すると呼吸器症状、結膜炎及び陰門膣炎等
を起こし、妊娠牛では流産を起こす。牛ウイルス性下痢
−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）ウイルスでは、呼吸器症状の
他に重度の致死的下痢を起こすことで知られ、妊娠牛に
対しては持続感染牛の産出および流産等の異常産の原因
となる。パラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウイルスで
は、主として呼吸器症状の原因となる。また、牛ＲＳウ
イルスでは、主として呼吸器症状の原因となるが、呼吸
器系各器官における病状が重度で治癒の経過も長く、特
に成牛では予後不良となることか多い。更に、牛アデノ
７型（ＡＤ７）ウイルスの感染では呼吸器症状および下
痢の両者の原因となる。
【０００３】これら５種の病原体は日本全国のほとんど
の牛群に分布し、感染・発病を繰り返している。したが
って、各成育段階の牛や成牛においては常時脅威となっ
ており、発病することによる死亡、成長の遅延、泌乳量
の減少および生産子牛の減少等、畜産経営の面からのト
ータルの被害も大きい。ここに、これら５種に対するワ
クチンの有用性が存在し、５種混合生ワクチンとするこ
とによる有利な面での経済性が存在する。
の牛群に分布し、感染・発病を繰り返している。したが
って、各成育段階の牛や成牛においては常時脅威となっ
ており、発病することによる死亡、成長の遅延、泌乳量
の減少および生産子牛の減少等、畜産経営の面からのト
ータルの被害も大きい。ここに、これら５種に対するワ
クチンの有用性が存在し、５種混合生ワクチンとするこ
とによる有利な面での経済性が存在する。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】これら５種の病気を予
防する目的として、それぞれ一種ずつの単味ワクチンが
開発され、従来から実用化されてきた。更に近年になっ
て牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルス感染症、牛ウイ
ルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）ウイルス感染症お
よびパラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウイルス感染症
の３種混合生ワクチンも実用化されている。しかしなが
ら、これら５種の全てに対するワクチンを混合した５種
混合生ワクチンは実用化されていない。これは、５種類
のワクチンウイルスを混合するためには、各単味ワクチ
ンのウイルス量に比べ５倍のウイルス量が必要であっ
て、従来の方法では、このような各単味ワクチンの５倍
ものウイルス量のワクチンを得ることが出来ず、全ての
ワクチンウイルスを混合することは不可能であったこと
による。本発明は上記の点に鑑み、前記３種混合生ワク
チンに牛ＲＳウイルス感染症および牛アデノ７型（ＡＤ
７）ウイルス感染症のワクチンウイルス液を加えたもの
であって、前記のようなワクチンウイルスの混合にとも
なう困難さを克服してなし得たものである。
防する目的として、それぞれ一種ずつの単味ワクチンが
開発され、従来から実用化されてきた。更に近年になっ
て牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルス感染症、牛ウイ
ルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）ウイルス感染症お
よびパラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウイルス感染症
の３種混合生ワクチンも実用化されている。しかしなが
ら、これら５種の全てに対するワクチンを混合した５種
混合生ワクチンは実用化されていない。これは、５種類
のワクチンウイルスを混合するためには、各単味ワクチ
ンのウイルス量に比べ５倍のウイルス量が必要であっ
て、従来の方法では、このような各単味ワクチンの５倍
ものウイルス量のワクチンを得ることが出来ず、全ての
ワクチンウイルスを混合することは不可能であったこと
による。本発明は上記の点に鑑み、前記３種混合生ワク
チンに牛ＲＳウイルス感染症および牛アデノ７型（ＡＤ
７）ウイルス感染症のワクチンウイルス液を加えたもの
であって、前記のようなワクチンウイルスの混合にとも
なう困難さを克服してなし得たものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】即ち、本発明は、弱毒牛
伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルスＮｏ．７５８−４３
株をウシまたはブタ組織由来培養細胞で培養したウイル
ス液、弱毒牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）
ウイルスＮｏ．１２−４３株をウシまたはブタ組織由来
培養細胞で培養したウイルス液、弱毒パラインフルエン
ザ３型（ＰＩ３）ウイルスＢＮ−ＣＥ株をニワトリもし
くはウシ組織由来培養細胞またはサル腎ｖｅｒｏ細胞で
培養したウイルス液、弱毒牛ＲＳウイルスｒｓ−５２株
をハムスターもしくはウシ組織由来培養細胞またはサル
腎ｖｅｒｏ細胞で培養したウイルス液、および弱毒牛ア
デノ７型（ＡＤ７）ウイルスＴＳ−ＧＴ株をヤギまたは
ウシ組織由来培養細胞で培養したウイルス液の５種類の
ウイルス液を混合してなる５種混合生ワクチンである。
伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルスＮｏ．７５８−４３
株をウシまたはブタ組織由来培養細胞で培養したウイル
ス液、弱毒牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）
ウイルスＮｏ．１２−４３株をウシまたはブタ組織由来
培養細胞で培養したウイルス液、弱毒パラインフルエン
ザ３型（ＰＩ３）ウイルスＢＮ−ＣＥ株をニワトリもし
くはウシ組織由来培養細胞またはサル腎ｖｅｒｏ細胞で
培養したウイルス液、弱毒牛ＲＳウイルスｒｓ−５２株
をハムスターもしくはウシ組織由来培養細胞またはサル
腎ｖｅｒｏ細胞で培養したウイルス液、および弱毒牛ア
デノ７型（ＡＤ７）ウイルスＴＳ−ＧＴ株をヤギまたは
ウシ組織由来培養細胞で培養したウイルス液の５種類の
ウイルス液を混合してなる５種混合生ワクチンである。
【０００６】前記弱毒牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイ
ルス液では、ウイルスの接種量を感染の多重度（接種ウ
イルス量／培養細胞数；multiplicity of infection 、
以下「ｍ．ｏ．ｉ．」と略記する）０．００１にするこ
とにより、また、培養日数を１２〜１４日とすることに
より従来の方法と比較し約５〜７倍の高いウイルス液を
得ることが可能となった。
ルス液では、ウイルスの接種量を感染の多重度（接種ウ
イルス量／培養細胞数；multiplicity of infection 、
以下「ｍ．ｏ．ｉ．」と略記する）０．００１にするこ
とにより、また、培養日数を１２〜１４日とすることに
より従来の方法と比較し約５〜７倍の高いウイルス液を
得ることが可能となった。
【０００７】弱毒牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−
ＭＤ）ウイルス液では、ｍ．ｏ．ｉ．を０．５〜０．１
の接種量に変更し、更に、この接種量のウイルスと培養
細胞浮遊液とを３４°で混合培養することにより、従来
の方法に比べて約５〜１０倍の高いウイルス液を得るこ
とが可能となった。
ＭＤ）ウイルス液では、ｍ．ｏ．ｉ．を０．５〜０．１
の接種量に変更し、更に、この接種量のウイルスと培養
細胞浮遊液とを３４°で混合培養することにより、従来
の方法に比べて約５〜１０倍の高いウイルス液を得るこ
とが可能となった。
【０００８】また、弱毒パラインフルエンザ３型（ＰＩ
３）ウイルス液では、培養細胞浮遊液に対してウイルス
を混合培養することにより、従来の方法に比べて５〜８
倍の高いウイルス液を得ることが可能となった。
３）ウイルス液では、培養細胞浮遊液に対してウイルス
を混合培養することにより、従来の方法に比べて５〜８
倍の高いウイルス液を得ることが可能となった。
【０００９】そして、弱毒牛ＲＳウイルス液では、ＨＡ
Ｌ細胞をクローニングすることによりウイルスの増殖の
良好な細胞を選択し、更に採取したウイルス液を限外ろ
過法により約５〜１０倍濃縮する方法を開発応用した。
これにより、従来より５〜１０倍高いウイルス液を得る
ことが可能となった。
Ｌ細胞をクローニングすることによりウイルスの増殖の
良好な細胞を選択し、更に採取したウイルス液を限外ろ
過法により約５〜１０倍濃縮する方法を開発応用した。
これにより、従来より５〜１０倍高いウイルス液を得る
ことが可能となった。
【００１０】更に、弱毒牛アデノ７型（ＡＤ７）ウイル
ス液では、培養細胞にｍ．ｏ．ｉ．が０．１となるよう
に接種して培養することにより、従来の方法に比べ約５
〜８倍の高いウイルス液を得ることが可能となった。
ス液では、培養細胞にｍ．ｏ．ｉ．が０．１となるよう
に接種して培養することにより、従来の方法に比べ約５
〜８倍の高いウイルス液を得ることが可能となった。
【００１１】上記のように、各単味ワクチンにおけるウ
イルス量をそれぞれ５倍以上とすることで、５種混合生
ワクチンが実用可能となった。
イルス量をそれぞれ５倍以上とすることで、５種混合生
ワクチンが実用可能となった。
【００１２】そして、それぞれのワクチンウイルスの混
合比は、牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルス１０7.75
ＴＣＩＤ50以上、牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−
ＭＤ）ウイルス１０6.00ＴＣＩＤ50以上、パラインフル
エンザ３型（ＰＩ３）１０8.00ＴＣＩＤ50以上、牛ＲＳ
ウイルス１０7.75ＴＣＩＤ50以上、および牛アデノ７型
（ＡＤ７）ウイルス１０6.75ＴＣＩＤ50以上とした。こ
れにより、５種混合生ワクチンは、その効力の点で安定
した性状の製品を得ることが可能となった。
合比は、牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルス１０7.75
ＴＣＩＤ50以上、牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−
ＭＤ）ウイルス１０6.00ＴＣＩＤ50以上、パラインフル
エンザ３型（ＰＩ３）１０8.00ＴＣＩＤ50以上、牛ＲＳ
ウイルス１０7.75ＴＣＩＤ50以上、および牛アデノ７型
（ＡＤ７）ウイルス１０6.75ＴＣＩＤ50以上とした。こ
れにより、５種混合生ワクチンは、その効力の点で安定
した性状の製品を得ることが可能となった。
【００１３】更に、凍結乾燥の過程や凍結乾燥後の製品
の安定性を確保するため、混合した５種のウイルスの失
活を防ぐ安定剤（ＪＩＳ試薬特級乳糖５重量％、ＪＩＳ
試薬特級ショ糖５重量％、ＪＩＳ試薬特級Ｌ−アルギニ
ン塩酸塩２重量％、ＪＩＳ試薬特級グリシン３重量％、
ＪＩＳ試薬特級ポリビニルピロリドン０．３重量％、Ｊ
ＩＳ試薬特級ラクトアルブミン０．５重量％、およびＪ
ＩＳ試薬特級イーストエキストラクト０．１重量％を含
んだ水溶液）を開発した。
の安定性を確保するため、混合した５種のウイルスの失
活を防ぐ安定剤（ＪＩＳ試薬特級乳糖５重量％、ＪＩＳ
試薬特級ショ糖５重量％、ＪＩＳ試薬特級Ｌ−アルギニ
ン塩酸塩２重量％、ＪＩＳ試薬特級グリシン３重量％、
ＪＩＳ試薬特級ポリビニルピロリドン０．３重量％、Ｊ
ＩＳ試薬特級ラクトアルブミン０．５重量％、およびＪ
ＩＳ試薬特級イーストエキストラクト０．１重量％を含
んだ水溶液）を開発した。
【００１４】
【発明の効果】本発明は弱毒牛伝染性鼻気管炎（ＩＢ
Ｒ）ウイルス、弱毒牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ
−ＭＤ）ウイルス、弱毒パラインフルエンザ３型（ＰＩ
３）ウイルス、弱毒牛アデノ７型（ＡＤ７）ウイルス
に、弱毒牛ＲＳウイルスを加えて５種混合生ワクチンと
し、一製品として実用化可能としてなるものであって、
５種混合生ワクチンとしの実用化は世界においても例を
見ない。
Ｒ）ウイルス、弱毒牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ
−ＭＤ）ウイルス、弱毒パラインフルエンザ３型（ＰＩ
３）ウイルス、弱毒牛アデノ７型（ＡＤ７）ウイルス
に、弱毒牛ＲＳウイルスを加えて５種混合生ワクチンと
し、一製品として実用化可能としてなるものであって、
５種混合生ワクチンとしの実用化は世界においても例を
見ない。
【００１５】そして、本発明によれば、このように５種
混合生ワクチンとすることによって、以下のような多く
の優れた効果が得られる。 （１）これらの５種類の病原体は、四季を問わず年間を
通して流行し、しかも牛個体に対する伝播経路がいずれ
も接触感染により、また、日本各地のほとんどの牛群に
浸潤しているところから、５種混合生ワクチンの中に不
必要と思われるワクチンが含まれない。 （２）一度の接種で各単味ワクチンを応用した場合と同
等の効果が期待できる。 （３）これらの５種の生ウイルス間では、培養細胞を用
いた試験管内（ in vitr o ）試験においても、また、牛
を用いた生体内（in vivo ）試験においてもワクチン効
果を阻害する干渉現象はみられない。 （４）牛にこの５種混合生ワクチンを接種しても、元気
・食欲等の一般的臨床症状を示さず、赤血球および白血
球数に異常を示さない。また、注射局所における腫脹・
硬結もみられない。更に、発熱（４０．５°以上）や、
白血球減少症もみられない。 （５）一度のワクチン接種で５種の疾病に対する効果が
期待できるため、従来のワクチンを用いたワクチネーシ
ョンに比べて牛を保定する回数および注射の回数が減少
し、牛個体に対するストレスは軽減されるとともに、注
射のための人の配置や人の労働時間が短縮され、経済性
が上昇する。 （６）５種混合生ワクチンは一製品となるため、ワクチ
ン製造にかかるコストが低減され、各単味ワクチンを個
々に応用した合計の費用よりも安くなり、畜産農家にと
って経済性が上昇する。
混合生ワクチンとすることによって、以下のような多く
の優れた効果が得られる。 （１）これらの５種類の病原体は、四季を問わず年間を
通して流行し、しかも牛個体に対する伝播経路がいずれ
も接触感染により、また、日本各地のほとんどの牛群に
浸潤しているところから、５種混合生ワクチンの中に不
必要と思われるワクチンが含まれない。 （２）一度の接種で各単味ワクチンを応用した場合と同
等の効果が期待できる。 （３）これらの５種の生ウイルス間では、培養細胞を用
いた試験管内（ in vitr o ）試験においても、また、牛
を用いた生体内（in vivo ）試験においてもワクチン効
果を阻害する干渉現象はみられない。 （４）牛にこの５種混合生ワクチンを接種しても、元気
・食欲等の一般的臨床症状を示さず、赤血球および白血
球数に異常を示さない。また、注射局所における腫脹・
硬結もみられない。更に、発熱（４０．５°以上）や、
白血球減少症もみられない。 （５）一度のワクチン接種で５種の疾病に対する効果が
期待できるため、従来のワクチンを用いたワクチネーシ
ョンに比べて牛を保定する回数および注射の回数が減少
し、牛個体に対するストレスは軽減されるとともに、注
射のための人の配置や人の労働時間が短縮され、経済性
が上昇する。 （６）５種混合生ワクチンは一製品となるため、ワクチ
ン製造にかかるコストが低減され、各単味ワクチンを個
々に応用した合計の費用よりも安くなり、畜産農家にと
って経済性が上昇する。
【００１６】
【実施例】本発明に係る牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウ
イルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−Ｍ
Ｄ）ウイルス感染症、パラインフルエンザ３型（ＰＩ
３）ウイルス感染症、牛ＲＳウイルス感染症および牛ア
デノ７型（ＡＤ７）ウイルス感染症５種混合生ワクチン
の具体的製造方法は以下の通りである。
イルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−Ｍ
Ｄ）ウイルス感染症、パラインフルエンザ３型（ＰＩ
３）ウイルス感染症、牛ＲＳウイルス感染症および牛ア
デノ７型（ＡＤ７）ウイルス感染症５種混合生ワクチン
の具体的製造方法は以下の通りである。
【００１７】先ず、弱毒牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウ
イルスでは、野外強毒Ｎｏ．７５８株を３０°のブタ精
巣培養細胞で３９代継代し、限界希釈法により３回クロ
ーニングして得られたＮｏ．７５８−４３株を種ウイル
スとした。この種ウイルスをｍ．ｏ．ｉ．が０．００１
になるように３７°で２〜４日間培養したブタ精巣培養
細胞に接種し、３０°で１２〜１４日間培養後採取した
ウイルス液を弱毒牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルス
浮遊液とした。
イルスでは、野外強毒Ｎｏ．７５８株を３０°のブタ精
巣培養細胞で３９代継代し、限界希釈法により３回クロ
ーニングして得られたＮｏ．７５８−４３株を種ウイル
スとした。この種ウイルスをｍ．ｏ．ｉ．が０．００１
になるように３７°で２〜４日間培養したブタ精巣培養
細胞に接種し、３０°で１２〜１４日間培養後採取した
ウイルス液を弱毒牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルス
浮遊液とした。
【００１８】次に、弱毒牛ウイルス性下痢−粘膜病（Ｂ
ＶＤ−ＭＤ）ウイルスでは、野外強毒Ｎｏ．１２株を３
４°のブタ精巣培養細胞で３９代継代し、限界希釈法に
より３回クローニングして得られたＮｏ．１２−４３株
を種ウイルスとした。この種ウイルスをｍ．ｏ．ｉ．が
０．５〜０．１となるように１ミリリットル当たり１０
０万個に調整したブタ精巣培養細胞に混合接種し、３４
°で３日間培養後採取したウイルス液を弱毒牛ウイルス
性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）ウイルス浮遊液とし
た。
ＶＤ−ＭＤ）ウイルスでは、野外強毒Ｎｏ．１２株を３
４°のブタ精巣培養細胞で３９代継代し、限界希釈法に
より３回クローニングして得られたＮｏ．１２−４３株
を種ウイルスとした。この種ウイルスをｍ．ｏ．ｉ．が
０．５〜０．１となるように１ミリリットル当たり１０
０万個に調整したブタ精巣培養細胞に混合接種し、３４
°で３日間培養後採取したウイルス液を弱毒牛ウイルス
性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）ウイルス浮遊液とし
た。
【００１９】また、弱毒パラインフルエンザ３型（ＰＩ
３）ウイルスでは、野外強毒ＢＮ1−１株を３０°のニ
ワトリ胚培養細胞で連続継代して得られたＢＮ−ＣＥ株
を種ウイルスとした。この種ウイルスをｍ．ｏ．ｉ．が
０．０１となるように１ミリリットル当たり３００万個
に調整したニワトリ胚培養細胞浮遊液に混合接種し、３
０°で８〜１０日間培養後採取したウイルス液を弱毒パ
ラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウイルス浮遊液とし
た。
３）ウイルスでは、野外強毒ＢＮ1−１株を３０°のニ
ワトリ胚培養細胞で連続継代して得られたＢＮ−ＣＥ株
を種ウイルスとした。この種ウイルスをｍ．ｏ．ｉ．が
０．０１となるように１ミリリットル当たり３００万個
に調整したニワトリ胚培養細胞浮遊液に混合接種し、３
０°で８〜１０日間培養後採取したウイルス液を弱毒パ
ラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウイルス浮遊液とし
た。
【００２０】そして、弱毒牛ＲＳウイルスでは、野外強
毒ＲＳ−５２株を３０°のＨＡＬ細胞で連続継代後３回
限界希釈法によりクローニングを行い、得られた温度感
受性変異株を種ウイルスとした。この種ウイルスをｍ．
ｏ．ｉ．が０．０１となるように、既存のＨＡＬ細胞を
更にクローニングして得られた高ウイルス感受性ＨＡＬ
−ｃｌ1 細胞に接種し、３０°で７〜１０日間培養後ウ
イルス液を採取した。更に、このウイルス液を分子量分
別限外ろ過法により５〜１０倍に濃縮したものを弱毒牛
ＲＳウイルス浮遊液とした。
毒ＲＳ−５２株を３０°のＨＡＬ細胞で連続継代後３回
限界希釈法によりクローニングを行い、得られた温度感
受性変異株を種ウイルスとした。この種ウイルスをｍ．
ｏ．ｉ．が０．０１となるように、既存のＨＡＬ細胞を
更にクローニングして得られた高ウイルス感受性ＨＡＬ
−ｃｌ1 細胞に接種し、３０°で７〜１０日間培養後ウ
イルス液を採取した。更に、このウイルス液を分子量分
別限外ろ過法により５〜１０倍に濃縮したものを弱毒牛
ＲＳウイルス浮遊液とした。
【００２１】牛アデノ７型（ＡＤ７）ウイルスでは、野
外強毒袋井株を３０°のウシ腎培養細胞、ヤギ胸腺培養
細胞およびヤギ精巣培養細胞で連続継代後３０°で３回
クローニングし、得られたＴＳ−ＧＴ株を種ウイルスと
した。この種ウイルスをｍ．ｏ．ｉ．が０．１となるよ
うにヤギ精巣培養細胞に接種し、３０°で１０〜１４日
間培養後採取したウイルス液を弱毒牛アデノ７型（ＡＤ
７）ウイルス浮遊液とした。
外強毒袋井株を３０°のウシ腎培養細胞、ヤギ胸腺培養
細胞およびヤギ精巣培養細胞で連続継代後３０°で３回
クローニングし、得られたＴＳ−ＧＴ株を種ウイルスと
した。この種ウイルスをｍ．ｏ．ｉ．が０．１となるよ
うにヤギ精巣培養細胞に接種し、３０°で１０〜１４日
間培養後採取したウイルス液を弱毒牛アデノ７型（ＡＤ
７）ウイルス浮遊液とした。
【００２２】これら５種類のウイルス液のそれぞれのウ
イルス含有量は、弱毒牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイ
ルス浮遊液は１ミリリットル当たり１０7.75ＴＣＩＤ50
以上、弱毒牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）
ウイルス浮遊液では１ミリリットル当たり１０6.00ＴＣ
ＩＤ50以上、弱毒パラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウ
イルス浮遊液では１ミリリットル当たり１０8.00ＴＣＩ
Ｄ50以上、弱毒牛ＲＳウイルス浮遊液では１ミリリット
ル当たり１０7.75ＴＣＩＤ50以上、および弱毒牛アデノ
７型（ＡＤ７）ウイルス浮遊液では１ミリリットル当た
り１０6.75ＴＣＩＤ50以上とし、これらを混合してウイ
ルス原液とする。
イルス含有量は、弱毒牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイ
ルス浮遊液は１ミリリットル当たり１０7.75ＴＣＩＤ50
以上、弱毒牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）
ウイルス浮遊液では１ミリリットル当たり１０6.00ＴＣ
ＩＤ50以上、弱毒パラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウ
イルス浮遊液では１ミリリットル当たり１０8.00ＴＣＩ
Ｄ50以上、弱毒牛ＲＳウイルス浮遊液では１ミリリット
ル当たり１０7.75ＴＣＩＤ50以上、および弱毒牛アデノ
７型（ＡＤ７）ウイルス浮遊液では１ミリリットル当た
り１０6.75ＴＣＩＤ50以上とし、これらを混合してウイ
ルス原液とする。
【００２３】このウイルス原液に対して等量の安定剤
（ＪＩＳ試薬特級乳糖５重量％、ＪＩＳ試薬特級ショ糖
５重量％、ＪＩＳ試薬特級Ｌ−アルギニン塩酸塩２重量
％、ＪＩＳ試薬特級グリシン３重量％、ＪＩＳ試薬特級
ポリビニルピロリドン０．３重量％、ＪＩＳ試薬特級ラ
クトアルブミン０．５重量％、およびＪＩＳ試薬特級イ
ーストエキストラクト０．１重量％を含んだ水溶液）を
加え混合し、ワクチン瓶に小分けした後、凍結乾燥し
た。
（ＪＩＳ試薬特級乳糖５重量％、ＪＩＳ試薬特級ショ糖
５重量％、ＪＩＳ試薬特級Ｌ−アルギニン塩酸塩２重量
％、ＪＩＳ試薬特級グリシン３重量％、ＪＩＳ試薬特級
ポリビニルピロリドン０．３重量％、ＪＩＳ試薬特級ラ
クトアルブミン０．５重量％、およびＪＩＳ試薬特級イ
ーストエキストラクト０．１重量％を含んだ水溶液）を
加え混合し、ワクチン瓶に小分けした後、凍結乾燥し
た。
【００２４】以上のように凍結乾燥した乾燥品を、既存
の溶解用液で溶解したワクチンについて試験した成績を
以下に示す。
の溶解用液で溶解したワクチンについて試験した成績を
以下に示す。
【００２５】異常毒性否定試験 ワクチンを４週齢のマウスの腹腔内には０．５ミリリッ
トル、体重約３５０ｇのモルモットの腹腔内には５ミリ
リットルを接種し、両動物の一般的臨床症状、および体
重の推移を１０日間観察した。結果を表１に示す。
トル、体重約３５０ｇのモルモットの腹腔内には５ミリ
リットルを接種し、両動物の一般的臨床症状、および体
重の推移を１０日間観察した。結果を表１に示す。
【００２６】
【表１】
【００２７】この試験結果から明らかなように、両動物
とも一般的臨床症状に、ワクチン接種による異常は観察
されず、体重の増加は順調に推移した。
とも一般的臨床症状に、ワクチン接種による異常は観察
されず、体重の増加は順調に推移した。
【００２８】牛に対する安全性試験 ３〜４か月齢のホルスタイン種９頭を用い、その中の３
頭にはワクチンの１ドースずつを１回、他の３頭には１
００ドースずつを１回それぞれ筋肉内に接種し、更に残
る３頭は未接種対照とし一般的臨床症状を２週間観察し
た。結果を表２に示す。
頭にはワクチンの１ドースずつを１回、他の３頭には１
００ドースずつを１回それぞれ筋肉内に接種し、更に残
る３頭は未接種対照とし一般的臨床症状を２週間観察し
た。結果を表２に示す。
【００２９】
【表２】
【００３０】この結果、ワクチンの１ドース、および１
００ドースをそれぞれ接種したいずれの牛群においても
元気食欲等の異常は観察されず、４０．５°以上の発熱
および白血球減少も認められなかった。また注射局所の
腫脹や硬結もみられず、ワクチン注射による副作用は観
察されなかった。
００ドースをそれぞれ接種したいずれの牛群においても
元気食欲等の異常は観察されず、４０．５°以上の発熱
および白血球減少も認められなかった。また注射局所の
腫脹や硬結もみられず、ワクチン注射による副作用は観
察されなかった。
【００３１】有効性試験（１） 表２で用いた牛９頭について、ワクチン接種前、および
接種後４週までの一週間間隔で採取した血清を用い、ワ
クチン接種後の抗体応答をワクチンウイルスの親株（野
外強毒株）を抗原とし測定した。結果を表３に示す。
接種後４週までの一週間間隔で採取した血清を用い、ワ
クチン接種後の抗体応答をワクチンウイルスの親株（野
外強毒株）を抗原とし測定した。結果を表３に示す。
【００３２】
【表３】
【００３３】この結果、ワクチンの１ドース、および１
００ドースをそれぞれ接種したいずれの牛群においても
ワクチンの接種前抗体陰性の個体はワクチン接種の１〜
２週後から抗体応答がみられ、ワクチン接種前抗体陽性
の個体でも一部抗体の有意上昇を示す例が観察された。
００ドースをそれぞれ接種したいずれの牛群においても
ワクチンの接種前抗体陰性の個体はワクチン接種の１〜
２週後から抗体応答がみられ、ワクチン接種前抗体陽性
の個体でも一部抗体の有意上昇を示す例が観察された。
【００３４】有効性試験（２） 野外飼養牛８０頭を用い、その中の６０頭にはワクチン
の１ドースを筋肉内に注射し、残りの２０頭をワクチン
未接種対照とした。ワクチン接種牛についてワクチン接
種後１０か月までの抗体応答をワクチンウイルスの親株
（野外強毒株）を抗原とし測定した。結果を表４に示
す。
の１ドースを筋肉内に注射し、残りの２０頭をワクチン
未接種対照とした。ワクチン接種牛についてワクチン接
種後１０か月までの抗体応答をワクチンウイルスの親株
（野外強毒株）を抗原とし測定した。結果を表４に示
す。
【００３５】
【表４】
【００３６】ワクチン接種前抗体を保有していなかった
牛の抗体応答は、ワクチン接種後１か月の血清を用いた
試験で牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルス４５頭中４
０頭（４０／４５＝８８．９％）、牛ウイルス性下痢−
粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）ウイルス（３４／３６＝９４．
４％）、パラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウイルス
（３４／３９＝８７．１％）、牛ＲＳウイルス（４１／
４４＝９３．２％）、牛アデノ７型（ＡＤ７）ウイルス
（３８／３８＝１００％）と良好な陽転率を示した。
牛の抗体応答は、ワクチン接種後１か月の血清を用いた
試験で牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルス４５頭中４
０頭（４０／４５＝８８．９％）、牛ウイルス性下痢−
粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）ウイルス（３４／３６＝９４．
４％）、パラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウイルス
（３４／３９＝８７．１％）、牛ＲＳウイルス（４１／
４４＝９３．２％）、牛アデノ７型（ＡＤ７）ウイルス
（３８／３８＝１００％）と良好な陽転率を示した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 39:265） (72)発明者 出水田 昭弘 京都府綴喜郡宇治田原町立川68−４ (72)発明者 石田 康久 京都府京都市北区紫野大徳寺町95−２ (56)参考文献 特開 平１−230523（ＪＰ，Ａ) 特公 昭48−2767（ＪＰ，Ｂ２) (54)【発明の名称】 牛伝染性鼻気管炎ウイルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病ウイルス感染症、パラインフルエ ンザ３型ウイルス感染症、牛ＲＳウイルス感染症および牛アデノ７型ウイルス感染症５種混合生 ワクチン
Claims (1)
- 【請求項１】 弱毒牛伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイル
スＮｏ．７５８−４３株を、感染の多重度（接種ウイル
ス量／培養細胞数）が０．００１になるようにブタ精巣
培養細胞に接種して培養してなるウイルス液、弱毒牛ウ
イルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）ウイルスＮｏ．
１２−４３株を、感染の多重度（接種ウイルス量／培養
細胞数）が０．５〜０．１となるように調整したブタ精
巣培養細胞に混合接種して混合培養してなるウイルス
液、弱毒パラインフルエンザ３型（ＰＩ３）ウイルスＢ
Ｎ−ＣＥ株を、感染の多重度（接種ウイルス量／培養細
胞数）が０．０１となるようにニワトリ胚の培養細胞浮
遊液に混合接種して培養してなるウイルス液、弱毒牛Ｒ
Ｓウイルスｒｓ−５２株を、感染の多重度（接種ウイル
ス量／培養細胞数）が０．０１となるようにＨＡＬ細胞
をクローニングして得られた高ウイルス感受性ＨＡＬ−
ｃｌ １ 細胞に接種して培養し、得られたウイルス液を分
子量別限外ろ過法により濃縮してなるウイルス液、およ
び弱毒牛アデノ７型（ＡＤ７）ウイルスＴＳ−ＧＴ株
を、感染の多重度（接種ウイルス量／培養細胞数）が
０．１となるようにヤギ精巣培養細胞に接種して培養し
てなるウイルス液の５種類のウイルス液を混合してな
り、前記各ワクチンウイルスの混合比を、牛伝染性鼻気
管炎（ＩＢＲ）ウイルス１０ ７．７５ ＴＣＩＤ ５０ 以
上、牛ウイルス性下痢−粘膜病（ＢＶＤ−ＭＤ）ウイル
ス１０ ６．００ ＴＣＩＤ ５０ 以上、パラインフルエンザ
３型（ＰＩ３）ウイルス１０ ８．００ ＴＣＩＤ ５０ 以
上、牛ＲＳウイルス１０ ７．７５ ＴＣＩＤ ５０ 以上、お
よび牛アデノ７型（ＡＤ７）ウイルス１０ ６．７５ ＴＣ
ＩＤ ５０ 以上としてなる５種混合生ワクチン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4155603A JPH0813753B2 (ja) | 1992-05-22 | 1992-05-22 | 牛伝染性鼻気管炎ウイルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病ウイルス感染症、パラインフルエンザ３型ウイルス感染症、牛ｒｓウイルス感染症および牛アデノ７型ウイルス感染症５種混合生ワクチン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4155603A JPH0813753B2 (ja) | 1992-05-22 | 1992-05-22 | 牛伝染性鼻気管炎ウイルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病ウイルス感染症、パラインフルエンザ３型ウイルス感染症、牛ｒｓウイルス感染症および牛アデノ７型ウイルス感染症５種混合生ワクチン |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05320071A JPH05320071A (ja) | 1993-12-03 |
| JPH0813753B2 true JPH0813753B2 (ja) | 1996-02-14 |
Family
ID=15609637
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4155603A Expired - Fee Related JPH0813753B2 (ja) | 1992-05-22 | 1992-05-22 | 牛伝染性鼻気管炎ウイルス感染症、牛ウイルス性下痢−粘膜病ウイルス感染症、パラインフルエンザ３型ウイルス感染症、牛ｒｓウイルス感染症および牛アデノ７型ウイルス感染症５種混合生ワクチン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0813753B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2386272T3 (es) * | 2004-09-09 | 2012-08-16 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh | Reducción de riesgos iatrogénicos potenciales asociados a las vacunas antigripales |
| CA2680193C (en) | 2007-03-09 | 2015-05-05 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Lyophilized preparation comprising influenza vaccine, and method for preparation thereof |
| CN112807424A (zh) * | 2020-10-19 | 2021-05-18 | 华威特（江苏）生物制药有限公司 | 牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎二联活疫苗及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0310317B1 (en) * | 1987-09-28 | 1993-12-15 | Beecham Inc. | Inactivation of viruses and bacteria |
-
1992
- 1992-05-22 JP JP4155603A patent/JPH0813753B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05320071A (ja) | 1993-12-03 |
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