KR20180095817A

KR20180095817A - 열적으로 안정한 로타바이러스 백신 제제 및 그의 사용 방법

Info

Publication number: KR20180095817A
Application number: KR1020187016712A
Authority: KR
Inventors: 로버트 케이 에반스; 에리카 엘 스트라블; 린 이소피
Original assignee: 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션
Priority date: 2015-12-18
Filing date: 2016-12-13
Publication date: 2018-08-28
Also published as: MX2018007413A; EP3389786A4; CA3006069A1; EP3389786A1; BR112018012181A2; WO2017106115A1; US10874732B2; JP2019502685A; CN108367164A; AU2016370401A1; US20190000957A1; RU2018126322A

Abstract

본 발명은 하나 이상의 로타바이러스 재조합체 또는 약독된 로타바이러스 균주, 제약상 허용 가능한 칼슘염, 아디프산, 수크로스, 및 인산나트륨을 포함하는 열적으로 안정한 경구 로타바이러스 백신 제제에 관한 것으로서, 하나 이상의 로타바이러스 재조합체 또는 약독된 로타바이러스 균주 각각은 37 ℃ 에서 7 일 동안, 25 ℃ 에서 45 일 동안 및 2-8 ℃ 에서 2 년 이상 동안 안정하다. 본 발명의 칼슘 함유 제제는, 로타바이러스 입자를 안정화하기 위해 용액 내 유리 칼슘 이온을 최적화하기에 효율적인 양으로 존재하는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 실시양태에서, 제제는 폴리소르베이트 80 같은 계면활성제를 포함한다. 본 발명은 또한 로타바이러스 감염을 예방하기 위해, 또는 감염의 가능성을 줄이기 위해, 또는 그의 임상 증세의 발병 또는 진행을 예방, 완화 또는 지연하기 위해, 본 발명의 로타바이러스 백신 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

열적으로 안정한 로타바이러스 백신 제제 및 그의 사용 방법

본 발명은 로타바이러스에 대한 면역학적 반응을 유발하고, 대상체에서 로타바이러스 감염, 및/또는 그들의 임상 증세의 예방 및/또는 치료에 유용한, 열적으로 안정한 로타바이러스 백신 제제에 관한 것이다.

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2016년 12월 18일로 출원된 미국 가출원 번호 제62/269,419호의 우선권을 주장하고, 이 가출원의 내용은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.

로타바이러스 감염은, 심각한 탈수 및 전해질 장애 그리고, 일부의 경우, 쇼크 및 사망을 야기할 수 있는, 어린 아동에서 설사 및 구토와 관련된다. 로타바이러스는 2 살 미만 연령의 아동에서 심각한 급성 설사 질병의 가장 흔한 원인체이다. 어른 뿐만 아니라, 나이 많은 아동도 로타바이러스에 감염되고, 관련 병상이 발병할 수 있다. 로타바이러스-관련 질병 및 사망의 발생률은, 열악한 의료 시스템으로 인해 개발 도상국의 아동들에게 불균형적으로 영향을 준다. 로타바이러스-관련 사망자들의 거의 90 %는 아프리카 및 아시아의 저소득 국가에서 발생한다(세계보건기구-로타바이러스 백신 WHO 성명서, WHO Weekly Epidemiological Record 88:49-64(2013)).

RotaTeq®(로타바이러스 백신, 생(live), 경구, 5 가(pentavalent); 뉴저지주 화이트하우스 스테이션 소재의 Merck and Co., Inc,) 및 Rotarix®(로타바이러스 백신, 생, 경구, 벨기에 뤽상사르(Rixensart) 소재의 GlaxoSmithKline Biologicals), 2 개의 생 약독된 경구 로타바이러스 백신은 전 세계의 다른 나라에서 시판되고 있다. 이러한 백신의 도입은 고소득 및 중간 소득 국가에서 질병 부담의 실질적인 감소로 이어졌다(Patel et al., PLoS Medicine, 9(10): e1001330, p1-10 (2012); Giaquinto et al., Human Vaccines 7:734-748 (2012)). 이러한 이유로, WHO는 로타바이러스에 대한 백신접종과 모든 국가 면역 프로그램에 로타바이러스 백신을 포함할 것을 권장한다(WHO Weekly Epidemiological Record, supra at 62 (2013) 참조). 그러나, 로타바이러스 감염 또는 이와 관련된 질병의 가능성을 감소시키는 백신의 유용성에도 불구하고, 특히 개발 도상국에서, 로타바이러스는 매년 거의 450,000 명의 5 세 미만 아동의 사망 원인으로 남아 있다(상동 at 50).

로타바이러스 백신의 세계적인 유통을 위해, 다양한 환경 상황에서 안정한, 그런 백신을 만들어내는 것이 필요하다. 개발 도상국에서 빈번한 저온-유통의 실패로 인해, 열적으로 안정한 개선된 백신 제제에 대한 필요성이 존재한다. 게다가, 탄탄한 저온 유통을 가지고 있는 나라에서, 열적으로 안정한 백신의 개발은 승온에의 우연한 노출에 견딜 수 있는 능력을 제공할 것이다.

본 발명은, 경구 투여에 적합한, 열적으로 안정한 액상 로타바이러스 백신 제제에 관한 것으로, 이는 37 ℃ 에서 7 일 동안, 25 ℃ 에서 45 일 동안 및 2-8 ℃ 에서 2 년 이상 동안 안정하다(즉, 아래에서 설명하는 바와 같은, VVM7 요건을 만족함). 본 발명의 제제는 적어도 하나의 로타바이러스 재조합체(reassortant) 또는 약독된 로타바이러스 균주의 제약상 유효량, 제약상 허용 가능한 칼슘염, 수크로스, 아디프산, 및 인산나트륨을 포함하고, pH는 약 6.2 내지 약 6.7 이다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 로타 바이러스 백신 제제는 약 1.0 mM 내지 약 3.5 mM 의 제약상 허용 가능한 칼슘염, 약 0.5 M 내지 약 2.0 M 수크로스, 약 260 mM 내지 약 700 mM 아디프산, 및 약 10 mM 내지 약 100 mM 인산나트륨을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제제는, 폴리소르베이트 80과 같은 비이온성 계면활성제를 추가로 포함한다. 추가 실시양태에서, 제제는 조직배양배지를 포함한다. 본 발명의 제제는 바람직하게는 아연을 전혀 함유하지 않는다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 제제는 G1, G2, G3, G4, 및 P1A 로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 로타바이러스 재조합체를 포함한다. 추가 실시양태에서, 로타바이러스 백신 제제는 G1, G2, G3, G4, 및 P1A 로타바이러스 재조합체를 포함한다.

본 발명의 하나의 바람직한 실시양태는,

a) G1, G2, G3, G4 및 P1A 로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 로타바이러스 재조합체;

b) 약 1.5 M 수크로스;

c) 약 465 mM 아디프산;

d) 약 10 mM 인산나트륨; 및

e) 약 3 mM 의 제약상 허용 가능한 칼슘염;

을 포함하고, pH 가 25 ℃ 에서 약 6.4 인 로타바이러스 백신 제제에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 제제는 약 0.01 %의 폴리소르베이트 80을 추가로 포함한다.

본 발명은 또한 본 발명의 제제를 아동에게 투여하는 것을 포함하는, 아동에서 로타바이러스 감염 가능성을 감소시키거나, 로타바이러스 위장염의 가능성 또는 중증도를 예방하거나 감소시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 이러한 측면의 특정 실시양태에서, 제제는 생후 6 주 내지 12 주 사이 연령의 유아에게 경구로 투여된다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 방법은

(a) 소정의 시간이 경과할 때까지 대기;

(b) 제제의 추가 투여량을 아동에게 투여; 및

(c) 선택적으로 (a) 및 (b) 단계를 1 회 이상 반복;

하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 방법은 로타바이러스 백신 제제를 아동에게 3-투여 시리즈로 투여하는 것을 포함하고, 아동이 시리즈의 완료시 생후 32 주이거나 더 어린 연령이다.

본 발명은 또한 로타바이러스 위장염의 예방과 같은, 로타바이러스 감염과 관련된 질병의 치료 또는 예방을 위한 본 발명의 로타바이러스 백신 제제의 용도에 관한 것이다.

본 명세서 및 첨부된 특허청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 단수형 "하나의, "한" 및 "그"는, 문맥에서 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 복수형도 포함한다.

"또는"에 대한 언급은 문맥에서 나타난 가능성들 중 하나를 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 어느 하나 또는 양쪽의 가능성을 나타낸다. 어떤 경우에는, "및/또는"이 어느 하나 또는 양쪽의 가능성을 강조하기 위해 사용되었다.

본 명세서 및 첨부된 특허청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 하기 정의 및 약어가 적용된다:

용어 "치료"는 처치적 치료 및 예방적 또는 방지적 조치 모두를 말한다. 치료를 "필요로" 하는 개체 또는 환자는, 로타바이러스에 감염될 위험에 있는 개체 또는 환자 뿐만 아니라, 어느 임상 증상이 발현했건 하지 않았건, 이미 로타바이러스 감염된 개체 또는 환자를 포함하다. 본 발명의 로타바이러스 백신 제제을 사용한 환자의 치료는, 환자에서 로타바이러스에 대한 면역 반응을 유도/증가시키는 것, 하나 이상의 로타바이러스에 대한 바이러스 중화 항체 반응을 유도하는 것, 로타바이러스에 감염된 환자에서 로타바이러스의 임상 증세의 가능성을 예방, 개선, 중단 또는 감소시키는 것, 로타바이러스 감염과 관련된 위장염 또는 다른 질병 또는 합병증을 발달시킬 가능성을 예방 또는 감소시키는 것, 설사, 구토, 열, 및 복통과 같은 로타바이러스 감염의 임상 증상의 중증도 및 지속기간을 감소시키는 것, 및 로타바이러스 감염의 가능성을 예방 또는 감소시키는 것 중 하나 이상을 포함한다.

용어 "제약상 유효량" 또는 "유효량"은 충분한 백신 조성물이 환자에게 도입되어, 환자에서 로타바이러스에 대한 면역 반응을 유도/증가시키는 것, 환자에서 로타바이러스에 대한 바이러스 중화 항체 반응을 유도/증가시키는 것, 로타바이러스 감염의 가능성을 예방 또는 감소시키는 것, 로타바이러스에 감염된 환자에서 로타바이러스 감염의 임상 증세를 예방, 개선 또는 중단시키는 것, 또는 로타바이러스 관련 질병의 중증도 또는 지속기간을 감소시키는 것을 포함한(이에 제한되지 않음) 목적하는 효과를 발생시키는 양을 의미한다. 당업자라면 이러한 수준이 예방 대 치료에 따라 달라질 수 있고, 나이, 몸무게 등의 환자의 특성에 따라 달라질 수 있음을 인식한다.

용어 "면역 반응"은 세포-매개된(T 세포) 면역 반응 및/또는 항체(B 세포) 반응을 말한다.

용어 "환자"는 본원에 기재된 로타바이러스 백신 제제를 투여받는, 로타바이러스에 감염될 수 있는 포유동물로서, 예를 들어, 사람이다. 바람직한 실시양태에서, 환자는 소아 환자이다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 환자는 생후 6 주 및 32 주 사이 연령이다. 본원에 정의된 바와 같이, "환자"는 로타바이러스에 이미 감염된 자 및 그 후에 노출될 수 있는, 즉, 노출의 위험이 있는 자를 포함한다. 환자는 예방적으로 또는 처치적으로 치료된다. 예방적 치료는 로타 바이러스 감염 또는 그의 영향, 예를 들어, 위장염의 가능성 또는 중증도를 감소시키기 위해 충분한 방어 면역을 제공한다. 처치적 치료는 로타바이러스 감염 또는 그의 임상 결과의 중증도를 감소시키기 위해 수행될 수 있다.

용어 "약"은, 물질 또는 조성물의 양(예를 들어, mM 또는 M), 제제 성분의 백분율(v/v 또는 w/v), 용액/제제의 pH, 또는 방법의 단계를 특징짓는 파라미터의 값, 또는 그와 유사한 것을 수정할 때, 예를 들어, 물질 또는 조성물의 제조, 특징화 및/또는 사용에 관여되는 전형적인 측정, 취급 및 샘플링 과정을 통해; 이러한 과정에서 의도치 않은 오류를 통해; 제조, 원료, 또는 조성물을 만들거나 사용하기 위해 또는 절차를 수행하기 위해 사용된 성분의 순도의 차이를 통해; 및 그와 유사한 것을 통해, 발생할 수 있는 수량 값에서의 변동을 말한다. 어떤 실시양태에서, "약"은 적절한 단위의 ± 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 또는 5.0 변동을 의미한다. 어떤 실시양태에서, "약"은 ± 0.1%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 또는 10% 의 변동을 의미할 수 있다.

"VVM7 제제" 또는, "VVM7RotaTeq™"은, 37 ℃ 에서 적어도 7 일 동안, 25 ℃ 에서 45 일 동안 및 2-8 ℃에서 2 년 이상 동안 안정한, 본 발명의 로타바이러스 백신 제제를 말한다. 안정한 것으로 여겨지기 위해, 본 발명의 백신 제제는 각각의 온도에서 정해진 기간동안 임상적으로 결정된 유효기간 종료시의 효능, 즉, 임상시험에서 정의된 효능을 위해 필요한 최소한의 효능을 넘는 효능을 유지해야 한다. (하기 표 1 참조. 또한 미국 뉴저지주 화이트하우스 스테이션 소재의 Merck & Co., Inc. 의 2006년 U.S. 최초 승인되고, 2013년 6월 수정된 RotaTeq 패키지 삽입물로부터의 표 7 참조).

표 1. RotaTeq™ 재조합체의 최소 투여 수준

"RotaTeq™ 상업용 제제"는 Merck & Co., Inc. (뉴저지주 화이트하우스 스테이션 소재)에서 제조된, RotaTeq™ (로타바이러스 백신, 생(live), 경구, 5가(pentavalent)) 백신을 말하고, 생후 6 주 내지 32 주 연령의 유아에서 G1, G2, G3 및 G4 로타바이러스 혈청형에 의해 발생하는 로타바이러스 위장염의 예방을 위해 2006 년에 처음으로 승인되었다.

본원에서 하기 약어들이 사용되고, 다음과 같은 의미를 갖는다:

ANC = 산 중화 용량, CI = 신뢰 구간, GMT = 기하 평균 역가, PS80 = 폴리소르베이트 80, SNA = 혈청 중화 항체; v/v = 부피/부피, VVM = 백신 바이알 모니터, VVMC = 양립가능한 백신 바이알 모니터, VVM7 = 백신 바이알 모니터 카테고리 7 (하기 기술되는 바와 같음), WFI = 주사용 수(water); w/v = 중량/부피.

도 1 은 37 ℃ 에서의 칼슘 침전을 나타낸다. 칼슘의 다양한 수준을 갖는 로타바이러스 제제는 37 ℃ 에서 인큐베이션(incubation)의 3, 7, 10, 14, 18 및 39 일 후 침전(PPT)의 징후가 육안으로 관찰되었다. 결과는 pH 6.7 에서 3.75 mM Ca을 함유하는 제제에서 뿐만 아니라, pH 6.2, 6.4, 및 6.7 에서 4 mM Ca을 함유하는 제제에서의 칼슘 침전 결과를 나타낸다.
도 2 는 실시예 8 에 기재된 연구를 위해 재조합체 로타바이러스 혈청형 G1, G2, G3, G4 및 P1A(퍼-프로토콜 집단, per-protocol population) 에 대한 혈청 중화 항체 반응의 GMT 비열등성 통계 분석을 나타낸다. 연구의 주된 목적은 RotaTeq™(RotaTeq™ 기존 제제)의 상업용 제제를 투여받은 대상체에 비해 VVM7RotaTeq™(RotaTeq™ 신규 제제)를 투여받은 대상체에서 투여 3 후 42 일에 백신-유도 항체 반응이 유사한지(비열등) 여부를 결정하기 위한 것이었다. 결과는 5 가지 모든 혈청형의 면역원성에 대해 VVM7 RotaTeq™ 제제가 RotaTeq™의 상업용 제제에 비해 열등하지 않은 것을 보여주었다.
도 3 은 실시예 8 에 기재된 연구와 관련하여 혈청 항-로타바이러스 IgA 에 대한 면역원성 개요를 제공한다.

본 발명은 기존의 로타바이러스 백신 제제에 비해 열적 안정성이 증가한 열적으로 안정한 로타바이러스 백신 제제에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 하나 이상의 로타바이러스 재조합체 또는 약독된 로타바이러스 균주를 포함하는 로타바이러스 백신 제제에 관한 것으로, 하나 이상의 로타 바이러스 재조합체 또는 약독된 로타바이러스 균주 각각은 37 ℃ 에서 7 일 동안, 25 ℃ 에서 45 일 동안 및 2-8 ℃ 에서 2 년 이상 동안 안정하다.

백신 바이알 모니터(VVMs)는 해당 분야의 의료계 종사자들이 백신의 바이알을 사용할지 안할지에 대해 잘 알고 결정을 내릴 수 있도록 한다(WHO, 2002, Technical Review of Vaccine Vial Monitor Implementation 27 Mar 2002, 1-47). VVMs는 각각의 백신 유닛에 붙여진 라벨들이고, 시간에 따라 누적된 열 노출을 관찰하기 위해 온도 감수성 물질을 함유한다. 이러한 누적된 열 노출은 시간이 흐르면서 라벨의 내부 부분이 어두워지게 하고, 백신이 받는 열적 스트레스의 시각적 표시를 제공한다. 색 변화의 속도는 온도에 따라 증가한다. 라벨 내부 부분의 색이 라벨의 외부 부분과 대등하거나 더 어두울 때, 백신은 이의 허용되는 누적된 열 노출이 초과되었고, 폐기돼야 한다. VVM 이 백신의 유통, 저장, 관리에 존재하는 유일한 온도 모니터이므로, 백신이 초과된 열 노출로 인해 폐기돼야 하는지를 쉽게 구별하는 능력은 저온 유통 실패가 발생할 수 있는 지역에서 특히 중요하다. VVMs의 유용성의 결과로서, UNICEF 및 WHO는 백신을 구입하는 국가는 제조업자들에게 WHO의 기준을 만족하는 VVMs를 포함하도록 요구할 것을 권고하는 정책 내용을 1999년에 발표하였다(Quality of the cold chain: WHO/UNICEF policy statement on the use of vaccine vial monitors in immunization services (WHO/V&B/99.18) 참조).

현재, WHO 에 의해 명시된 4 가지의 백신 바이알 모니터 범주가 있고, 이는 37 ℃에서 종점에 도달하는데 걸리는 일 수를 기준으로 분류되었다(표 2). 상업용 VVMs의 제한된 효용으로 인해, 백신은 VVM 에 의해 명시된 안정성 프로파일에 대등하도록 만들어져야 한다. 백신은 VVM 안정성 기준을 충족시키기 위해, 2-8 ℃, 25 ℃ 및 37 ℃ 에서 정해진 시간동안 임상적으로 결정된 유효기간 종료시의 효능을 넘는 효능을 유지해야 한다. RotaTeq™의 유효기간 종료시의 효능에 대해서는, 상기 표 1 을 참조한다.

표 2 - 백신 바이알 모니터 안정성 요건

본 발명은 백신 바이알 모니터 범주 VVM7 (37 ℃ 에서 7 일, 25 ℃ 에서 45 일, 2-8 ℃ 에서 2 년) 와 양립할 수 있는 안정성 프로파일을 갖는, 열적으로 안정한 경구 로타바이러스 백신 제제에 관한 것이다. VVM7 안정성 요건을 만족하는 신규 로타바이러스 백신 제제를 개발하려는 계획은 백신의 열적 안정성을 증가시키기 위해 자유 칼슘 농도를 증가시키는 것을 수반한다. 기존의 상업용 RotaTeq™ 제제 중의 것보다 낮은 칼슘 결합 계수를 갖는 부형제의 선택 및 칼슘의 첨가로 인해 이를 달성하였다. 본 발명의 제제는 칼슘 및 추가적인 부형제를 포함하고, 추가적인 부형제는 로타바이러스 입자를 안정화하기 위해 용액 내 유리 칼슘을 최대화하는 양으로 존재한다. 제제에 사용된 부형제의 칼슘 결합 친화성은 안정성에 직접적인 영향을 주는 것으로 본원에 나타나 있다. 본 발명의 제제는 칼슘 용해도 및 로타바이러스 안정성의 균형을 제공한다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 로타바이러스 제제는 아연을 포함하지 않는다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 경구 로타바이러스 제제는 (로타바이러스 성분에 더하여) 아디프산나트륨, 인산나트륨, 염화칼슘 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 본 발명의 이러한 측면의 바람직한 실시양태에서, 경구 로타바이러스 백신 제제는 pH 6.4 에서 0.465 M 아디프산이나트륨(아디프산을 수산화나트륨으로 중화하여 용액에서 생성됨), 10 mM 인산나트륨, 3 mM 염화칼슘 및 0.01 %(w/v) PS-80을 포함한다. 본 발명의 경구 로타바이러스 백신 제제는 생 로타바이러스 1 가(monovalent) 백신 벌크의 무세포 제제를 사용하여 제조되고, 로타바이러스-감염된 베로(Vero) 세포 배양물의 수거물 및 동결-해동 용균, 뒤이은 용균물의 여과 및 농축에 의해 생산된다. 최종 약물 생성물을 제조하기 위해, 원하는 활성 성분(즉, 로타바이러스 재조합체(들) 및/또는 약독된 로타바이러스 균주)에 대한 개별의 로타바이러스 1 가 백신 벌크는 제제 완충액과 혼합함으로써 결합될 수 있다.

다양한 로타바이러스 백신 제제가 소개되어 왔다. 그러나, 로타바이러스 백신 제제가 세계보건기구의 정책과 일치하는 VVM7 요건을 만족하여야 할 필요가 있다. 그러한 제제는, 다양한 환경 조건 하에서 안정하고, 개발도상국에서의 빈번한 저온-유통 실패로 인해 효능 및/또는 안전성이 쉽게 감소하지 않는 로타바이러스 백신을 전 세계에 안전하게 유통할 수 있게 함으로써 세계 건강에 긍정적인 영향을 줄 것이다.

칼슘의 첨가가 로타바이러스 백신 제제의 열적 안정성에 유익한 영향을 준다고 가정하였다. 그러나, 선행 개시 문헌에는 칼슘이 특정 로타바이러스 제제의 안정성에 어떤 영향도 주지 않거나 특정한 조건 하에서만 안정성에 영향을 줄 것임을 시사해왔다. 버크(Burke) 등(미국 특허 번호 제6,616,931호 및 제5,932,223호)은 10 mM 칼슘의 첨가가, 조직배양배지를 함유하지 않는 제제에 첨가되었을 때, 로타바이러스 재조합체 P1 및 G1 의 안정성을 개선한다는 것을 개시한다. G1 및 P1 로타바이러스 재조합체 둘 다에 대한 효능 손실은 염화칼슘의 존재 및 부재시 평가되었다. 로타바이러스 재조합체가 100 mM 염화칼슘과 함께 10 mM 트리스(Tris)로 투석되었을 때, 37 ℃ 에서 안정성의 개선은 10 mM 염화칼슘을 첨가할 때 관찰되었다. 37 ℃ 에서 3 일 후 효능의 로그 손실은 P1 에 대해 4 배 초과(2.2 대 0.5) 및 G1 에 대해 12 배 초과(2.5 대 0.2)로 감소하였다. 반대로, G1 및 P1 로타바이러스 재조합체가 윌리엄의 배지 E(William's Medium E) 환경에 있을 때, 10 mM 염화칼슘의 첨가에 안정성의 개선은 관찰되지 않았다. 추가적으로, WO 2006/087205는 칼슘이 안정성에 유익한 영향을 주지 않는 로타바이러스 백신 제제를 개시한다.

본 발명에 따르면, 칼슘의 특정한 양이 침전의 야기 없이 로타바이러스 바이러스 입자의 안정성을 증가시키고, 이에 따라 VVM7 요건을 만족하는 열적으로 안정한 제제의 제조를 가능하게 하는 것이 본원에 나타나 있다. 본원의 제제에서, 칼슘은 제약상 허용 가능한 칼슘염으로서 존재한다. 본원에서 사용된, 용어 "제약상 허용 가능한"은 본 명세서 전반에 기술된 바와 같이, 인간에게 투여하기 적합한 본 발명의 활성 성분(예를 들어, 로타바이러스 재조합체)과 부가혼합된 물질을 말한다. 제약상 허용 가능한 칼슘염은 안전하고 원하는 목적(즉, 안정성 증가)에 대해 효과적이다. 본 발명의 제제에 유용한 제약상 허용 가능한 칼슘염의 예들은, 염화칼슘, 아세트산칼슘, 탄산칼슘, 구연산칼슘, 글루콘산칼슘, 젖산칼슘 및 황산칼슘을 포함하고, 이에 제한되지 않는다. 산 중화 용량을 증가시키기 위해 특히 본 발명에 함유된 인산나트륨이 있으면, 이의 좋지 않은 용해성 때문에, 본 발명의 제제에서 칼슘염은 인산칼슘이 아닌 것이 바람직하다. 바람직한 실시양태에서, 제약상 허용 가능한 칼슘염은 염화칼슘의 형태로 존재한다.

WO 2013/02933 ("'933 출원")은 로타바이러스 백신 제제에 있는 과량의 칼슘 이온이 승온에서 백신 생존율을 보장하는 것을 개시한다. '993 출원은 바이러스 안정성을 보장하기 위한 로타바이러스 제제에 있는 칼슘의 바람직한 양은 적어도 4 mM 이라고 언급한다. 본 발명에 따르면, 4 mM 미만의 칼슘의 양, 즉, 약 1.0 mM 내지 약 3.8 mM 칼슘은 침전의 야기 없이 로타바이러스 백신을 안정화할 수 있는 것이 밝혀졌다. 본원에서, 4 mM 또는 더 많은 칼슘의 양은 칼슘이 용액으로부터 침전하므로 바람직하지 않다는 것이 추가로 밝혀졌다. 실시예 1 및 4 를 참조한다.

상기 목적을 위해, 본 발명은 백신 제제, 예를 들어 하나 이상의 로타바이러스 재조합체 또는 약독된 로타바이러스 균주를 포함하는 로타바이러스 백신 제제를 제공하고, 제제 성분은 임의의 이전 실시양태에 정의된 바와 같고 칼슘은 약 1.0 내지 약 3.8 mM, 약 1.25 내지 약 3.8 mM, 약 1.75 내지 약 3.8 mM, 약 2.0 내지 약 3.8 mM, 약 2.25 내지 약 3.8 mM, 약 2.5 내지 약 3.8 mM, 약 2.75 내지 약 3.8 mM, 약 3.0 내지 약 3.8 mM, 약 1 내지 약 3.5 mM, 약 1.25 내지 약 3.5 mM, 약 1.75 내지 약 3.5 mM, 약 2.0 내지 약 3.5 mM, 약 2.25 내지 약 3.5 mM, 약 2.5 내지 약 3.5 mM, 약 2.75 내지 약 3.5 mM, 약 3.0 내지 약 3.5 mM, 약 1 내지 약 3.0 mM, 약 1.25 내지 약 3.0 mM, 약 1.75 내지 약 3.0 mM, 약 2.0 내지 약 3.0 mM, 약 2.25 내지 약 3.0 mM, 약 2.5 내지 약 3.0 mM, 및 약 2.75 내지 약 3 mM의 양 중 어느 하나로 존재한다. 본 발명의 대안의 실시양태에서, 백신 제제 성분은 임의의 이전 실시양태에서 기술된 바와 같고 칼슘의 양은 약 1 mM, 약 2 mM, 약 2.5 mM, 약 2.75 mM, 약 3.0 mM, 약 3.5 mM, 또는 약 3.75 mM 이다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 3.0 mM 칼슘을 포함한다.

제약상 허용 가능한 칼슘염을 상기 명시된 양(예를 들어, 약 1.0 내지 약 3.8 mM)으로 포함하는 본 발명의 로타바이러스 백신 제제는, 제제가 조직배양배지를 희석제로서 포함하는 경우에도 안정한 것이 본원에 나타나 있다. 따라서, 본 발명의 제제는 선택적으로 조직배양배지를 약 2 내지 약 30 % v/v의 양으로 포함한다. 제약상 제제에 사용되기에 적합한 어느 조직배양배지라도, 예를 들어 윌리엄의 배지 E(William's Medium E), 둘배코의 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium), 미국 특허번호 제6,656,719호에 기술된 배지는 본 발명의 제제에 이용될 수 있다. 선행기술문헌(미국 특허번호 제6,616,931호 및 제5,932,223호)은 칼슘이 조직배양배지를 포함하지 않는 제제에 첨가되었을 때는, 특정 로타바이러스 재조합체 P1 및 G1 의 안정성을 개선했지만, 제제가 윌리엄의 배지 E를 포함하는 경우 G1 및 P1 로타바이러스 재조합체를 안정화시키지 못하는 것을 상반되게 보여주고 있다.

본 발명의 백신 제제는, 활성 성분(들)로서, 적어도 하나의 로타바이러스 재조합체 또는 약독된 로타바이러스 균주(본원에서 "로타바이러스 활성 성분(들)"로 언급함)의 제약상 유효량을 포함한다. 상기 기재된 임의의 실시양태를 포함하는 본 발명의 실시양태에서, 로타바이러스 백신 제제는 하나 이상의 로타바이러스 재조합체를 포함한다. 대안의 실시양태에서, 로타바이러스 제제는 적어도 하나의 약독된 로타바이러스 균주를 포함한다.

재조합체의 로타바이러스 모균주(parent strain)는 적절한 인간 또는 소(bovine) 숙주로부터 분리될 수 있다. 예를 들어, 인간 로타바이러스 모균주는 WI78, WI79, BrB, 또는 SC2 일 수 있다. 소의 로타바이러스 모균주는, 예를 들어, 균주 WC3 일 수 있다. 로타바이러스 재조합체는 인간 로타바이러스 모균주의 외부 캡시드 단백질 및 소 로타바이러스 모균주의 부착 단백질을 발현하는 재조합체 로타바이러스일 수 있다.

본 발명의 하나의 실시양태에서, 제제는 인간 로타바이러스 모균주의 외부 캡시드 단백질 G1 및 소 로타바이러스 모균주의 부착 단백질을 발현하는 재조합체 로타바이러스를 포함한다. 특정 실시양태에서, 소 로타바이러스 모균주의 부착 단백질은 혈청형 P7 에서 유래한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "G1" 또는 "G1 재조합체"는 인간 로타바이러스 균주의 G1 외부 표면 단백질 및 소 모균주의 혈청형 P7 에서 유래한 부착 단백질을 포함하는 재조합체를 말한다.

본 발명의 다른 실시양태에서, 제제는 인간 로타바이러스 모균주의 외부 캡시드 단백질 G2 및 소 로타바이러스 모균주의 부착 단백질을 발현하는 재조합체 로타바이러스를 포함한다. 특정 실시양태에서, 소의 로타바이러스 모균주의 부착 단백질은 혈청형 P7 에서 유래한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "G2 재조합체"는 인간 로타바이러스 균주의 G2 외부 표면 단백질 및 소 모균주의 혈청형 P7 에서 유래한 부착 단백질을 포함하는 재조합체를 말한다.

추가 실시양태에서, 제제는 인간 로타바이러스 모균주의 외부 캡시드 단백질 G3 및 소 로타바이러스 모균주의 부착 단백질을 발현하는 재조합체 로타바이러스를 포함한다. 특정 실시양태에서, 소 로타바이러스 모균주의 부착 단백질은 혈청형 P7 에서 유래한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "G3 재조합체"는 인간 로타바이러스 균주의 G3 외부 표면 단백질 및 소 모균주의 혈청형 P7 에서 유래한 부착 단백질을 포함하는 재조합체를 말한다.

또 다른 실시양태에서, 제제는 인간 로타바이러스 모균주의 외부 캡시드 단백질 G4 및 소 로타바이러스 모균주의 부착 단백질을 발현하는 재조합체 로타바이러스를 포함한다. 특정 실시양태에서, 소 로타바이러스 모균주의 부착 단백질은 혈청형 P7 에서 유래한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "G4 재조합체"는 인간 로타바이러스 균주의 G4 외부 표면 단백질 및 소 모균주의 혈청형 P7 에서 유래한 부착 단백질을 포함하는 재조합체를 말한다.

여전히 추가 실시양태에서, 제제는 본원에서 혈청형 P1A[8] 이라 언급되는 인간의 로타바이러스 모균주의 부착 단백질, P1A(유전자형 P[8]), 및 소 로타바이러스 모균주의 혈청형 G6 의 외부 캡시드 단백질을 발현하는 재조합체 바이러스를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "P1A[8] 재조합체"은 소 로타바이러스 균주의 외부 표면 단백질 및 인간 모균주의 부착 단백질 P1A(유전자형 P[8])을 포함하는 재조합체를 말한다.

본 발명의 제제에서, 각 로타바이러스 활성 성분은 제약상 유효량으로 개개로 존재한다. 바람직한 실시양태에서, 모든 로타바이러스 활성 성분의 총량은 mL 당 약 1×10⁶ 감염단위 내지 mL 당 약 50×10⁶ 감염단위이다. 바람직한 실시양태에서 백신 제제의 각 재조합체 개개의 양은 약 2×10⁶ 내지 약 20×10⁶ 이어서, 유효기간 종료시 재조합체에 대한 양은 mL 당 적어도 2×10⁶ 감염단위이다. 일부 실시양태에서, 제제는 개개의 재조합체 투여량에 대해 최소한 2.0-2.8×10⁶ 감염단위를 포함한다.

선택된 실시양태에서, 제제는 G1, G2, G3, G4 및 P1A 로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 로타바이러스 재조합체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제제는 G1, G2, G3, G4 및 P1A 로 이루어진 군에서 선택되는 2 개 이상의 로타바이러스 재조합체를 포함한다. 다른 실시양태에서, 제제는 G1, G2, G3, G4 및 P1A 로 이루어진 군에서 선택되는 3 개 이상의 로타바이러스 재조합체를 포함한다. 추가 실시양태에서, 제제는 G1, G2, G3, G4 및 P1A 로 이루어진 군에서 선택되는 4 개 이상의 로타바이러스 재조합체를 포함한다. 여전히 추가 실시양태에서, 제제는 G1, G2, G3, G4 및 P1A 로타바이러스 재조합체들을 포함한다.

로타바이러스 재조합체는, 예를 들어, 베로 세포에서의 증식과 같이, 향진균제의 부재에서 표준 세포 배양 기술을 사용하여 증식될 수 있다.

앞에서 언급했듯이, VVM7 안정성 요건을 만족시키는 로타바이러스 백신 제제를 개발하는 하나의 목적은 백신의 열적 안정성을 증가시키기 위해 자유 칼슘 농도를 증가시키는 것이었다. 두번째 목적은 활성 제약상 성분(즉, 바이러스 재조합체)이 소장에 온전한 상태로 도달할 수 있도록 충분한 산 중화 능력(ANC)을 갖는 제제를 개발하는 것이었다. 계획된 로타바이러스 백신 제제는 경구 투여를 위한 것이므로, 활성 재조합체 각각은 소장으로 가기 위해 위의 혹독한 환경에서 살아남아야 한다. 이전의 연구들은, WC3, 기존 RotaTeq™ 제제에 있는 인간-소 재조합체의 백본을 포함하는 일부 소의 로타바이러스 균주가 산성 조건(pH 4.0 미만)에서 빠르게 비활성화되는 것을 밝혔다(Weiss, S., Clark, H.F. "Rapid Inactivation of Rotaviruses by Exposure to Acid Buffer or Acidic Gastric Juice" Journal of General Virology 66: 2725-2730 (1985)).

상기 기술한 바와 같이, 충분한 ANC의 필요로 인하여, RotaTeq™의 상업용 제제는 유아의 위산을 중화하여 바이러스가 소장에 도달하기 전에 파괴되지 않도록 구연산나트륨 및 인산나트륨 둘 다를 포함한다; 따라서 방어 면역 반응의 발생을 가능하게 한다. 본원의 VVM7 제제의 개발에서, 구연산나트륨이 다른 카르복실산에 비해 상대적으로 높은 칼슘 결합 계수를 갖고 있기 때문에 구연산나트륨을 포함하는 것이 최적이 아닐 것이라고 정하였다. 요구되는 산 중화를 제공하지만 용액에 더 많은 칼슘 이온을 남김으로써 바이러스 안정성을 개선하기 위해 구연산을 더 낮은 칼슘 친화성의 카르복실산으로 대체하기로 정하였다.

상기 목적을 위해, 본 발명의 실시양태에서, 아디프산이 구연산나트륨에 비해 낮은 칼슘 결합 계수를 갖고 허용 가능한 안전성 프로파일을 가지므로, 로타바이러스 백신 제제는 RotaTeq™ 제제에 있는 구연산나트륨 트리카르복실레이트 대신 아디프산 디카르복실레이트를 포함한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 로타바이러스 백신 제제는 임의의 상기 실시양태 또는 임의의 하기 기술되는 실시양태(및 그들의 조합)에 정의된 성분을 포함하고, 약 260 mM 내지 약 700 mM 아디프산을 추가로 포함한다.

일부 실시양태에서, 제제는 아디프산을 약 275 mM 내지 약 700 mM, 약 300 mM 내지 약 700 mM, 약 325 mM 내지 약 700 mM, 약 350 mM 내지 약 700 mM, 약 400 mM 내지 약 700 mM, 약 425 mM 내지 약 700 mM, 약 450 mM 내지 약 700 mM, 약 275 mM 내지 약 650 mM, 약 300 mM 내지 약 650 mM, 약 325 mM 내지 약 650 mM, 약 350 mM 내지 약 650 mM, 약 400 mM 내지 약 650 mM, 약 425 mM 내지 약 650 mM, 약 275 mM 내지 약 600 mM, 약 300 mM 내지 약 600 mM, 약 325 mM 내지 약 600 mM, 약 350 mM 내지 약 600 mM, 약 400 mM 내지 약 600 mM, 약 425 mM 내지 약 600 mM, 약 450 mM 내지 약 600 mM, 약 275 mM 내지 약 550 mM, 약 300 mM 내지 약 550 mM, 약 325 mM 내지 약 550 mM, 약 350 mM 내지 약 550 mM, 약 400 mM 내지 약 550 mM, 약 425 mM 내지 약 550 mM, 약 450 mM 내지 약 550 mM, 약 275 mM 내지 약 500 mM, 약 300 mM 내지 약 500 mM, 약 325 mM 내지 약 500 mM, 약 350 mM 내지 약 500 mM, 약 400 mM 내지 약 500 mM, 약 425 mM 내지 약 500 mM, 또는 약 450 mM 내지 약 500 mM의 양으로 포함한다. 하나의 특히 바람직한 실시양태에서, 로타바이러스 백신 제제는 약 465 mM 아디프산을 포함한다.

본 발명의 구체적인 실시양태에서, 로타바이러스 백신 제제는 임의의 상기 실시양태 또는 임의의 하기 기술되는 실시양태(및 그들의 조합)에 정의된 성분을 포함하고, 약 0.5 M 내지 약 2.0 M 수크로스를 추가로 포함한다. 수크로스는 전체적인 바이러스 안정성을 증가시키기 위해 제제에 첨가된다. 추가 실시양태에서, 조성물의 수크로스 농도는 약 0.5 M 내지 약 1.9 M, 약 0.5 mM 내지 약 1.8M, 약 0.5 mM 내지 약 1.75M, 약 0.5 M 내지 약 1.6M, 약 0.5 M 내지 약 1.5M; 0.75 M 내지 약 1.9 M, 약 0.75 mM 내지 약 1.8M, 약 0.75 mM 내지 약 1.75M, 약 0.75 M 내지 약 0.75, 약 0.75 내지 약 1.5M, 1.0 M 내지 약 1.9 M, 약 1.0 mM 내지 약 1.8M, 약 1.0 mM 내지 약 1.75M, 약 1.0 M 내지 약 1.6M, 약 1.0 M 내지 약 1.5M; 1.25 mM 내지 약 1.75M, 약 1.25 M 내지 약 1.6M, 또는 약 1.25 M 내지 약 1.5M 이다.

대안의 실시양태에서, 백신 조성물은 약 0.5 M, 약 1.0 M, 약 1.25 M, 약 1.5 M, 약 1.75 M, 또는 약 2 M 수크로스를 포함한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 백신 제제는 약 1.5 M 수크로스를 포함한다.

본 발명의 제제는 또한, 용액의 ANC 에 기여하는 인산나트륨을 포함할 수 있다. 인산나트륨은 인산나트륨 일염기성(monobasic) 일수화물(monohydrate)의 형태로 존재할 수 있다. 따라서, 본 발명의 추가 실시양태에서, 로타바이러스 백신 제제는 임의의 상기 실시양태 또는 임의의 하기 기술되는 실시양태(및 그들의 조합)에 정의된 부형제를 포함하고, 약 10 mM 내지 약 100 mM 인산나트륨을 추가로 포함한다. 약 1.0 내지 약 3.8 mM 칼슘염 및 약 275 mM 내지 약 700 mM 아디프산을 조합한 약 10 mM 내지 약 100 mM 인산나트륨의 사용은, 침전의 야기 없이 가용성 칼슘 농도를 최대화하여, 제제가 VVM7 요건을 만족하게 한다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 제제는 약 10 mM 인산나트륨을 포함한다. 추가 실시양태에서, 제제는 약 5 mM 인산나트륨, 약 15 mM 인산나트륨, 약 20 mM 인산나트륨, 약 25 mM 인산나트륨, 약 50 mM 인산나트륨, 약 75 mM 인산나트륨, 또는 약 100 mM 인산나트륨을 포함한다.

본원에 기재된 임의의 백신 제제는 선택적으로 계면활성제를 포함할 수 있다. 계면활성제는 정제, 여과, 냉동-건조, 수송, 보관, 및 전달과 같은 가공 조건 동안에 안정성을 제공하고, 응집을 감소 및/또는 방지하고, 또는 단백질의 손상을 방지 및/또는 억제하기 위해, 백신 제제에 첨가될 수 있다. 본 발명에서, 계면활성제는 로타바이러스 활성 성분(들)에게 추가적인 안정성을 제공하는데 유용할 수 있다.

본 발명의 제제에 유용한 계면활성제에는, 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트-20 (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트), 폴리소르베이트-40 (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미테이트), 폴리소르베이트-60 (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트), 및 폴리소르베이트-80 (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트)을 포함하는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 (트윈(Tween)® (미국 델라웨어주 윌밍톤에 소재하는 유니케마 아메리카 엘엘씨(Uniquema Americas LLC))이라는 상표명으로 시판되는 폴리소르베이트); 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 예컨대 브리즈(Brij)® 58 (미국 델라웨어주 윌밍톤에 소재하는 유니케마 아메리카 엘엘씨) 및 브리즈® 35; 폴록사머 (예를 들어, 폴록사머 188); 트리톤(Triton)® X-100 (미국 텍사스주 휴스톤에 소재하는 유니온 카바이드 코포레이션(Union Carbide Corp)) 및 트리톤® X-114; NP40; 스팬(Span) 20, 스팬 40, 스팬 60, 스팬 65, 스팬 80 및 스팬 85; 에틸렌 및 프로필렌 글리콜의 공중합체 (예를 들어, 비이온성 계면활성제의 플루로닉(pluronic)® 시리즈, 예컨대 플루로닉® F68, 플루로닉® 10R5, 플루로닉® F108, 플루로닉® F127, 플루로닉® F38, 플루로닉® L44, 플루로닉® L62 (독일 루드빅샤펜에 소재하는 바스프 코포레이션(BASF Corp)); 및 나트륨 도데실 술페이트 (SDS)가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.

본 발명의 제제에 포함될 계면활성제의 양은 목적하는 기능을 수행하는 충분한 양, 즉 제제의 로타바이러스 재조합체(들) 또는 약독된 로타바이러스 균주를 안정화하기에 필요한 최소량이다. 전형적으로, 계면활성제는 약 0.008 % 내지 0.04 % w/v (wt/vol)의 농도로 존재한다. 본 발명의 이러한 측면의 일부 실시양태에서, 계면활성제는 제제에 약 0.01 % 내지 약 0.04 %; 약 0.01 % 내지 약 0.03%, 또는 약 0.01 % 내지 약 0.02 %의 양으로 존재한다. 특정 실시양태에서, 계면활성제는 약 0.01 %의 양으로 존재한다. 대안의 실시양태에서, 계면활성제는 0.015 %, 0.02 %, 0.025 %, 0.03 %, 0.035 %, 또는 0.04 %의 양으로 존재한다.

본 발명의 예시적인 실시양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 브리즈® 35, 플루로닉® F-68 및 트리톤®으로 이루어진 군으로부터 선택된 비이온성 계면활성제이다. 일부 실시양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80이다. 특정 실시양태에서, 로타바이러스 백신 제제는 약 0.01 % PS80을 포함한다.

25 ℃ 에서 본 발명 백신 조성물의 pH는, 임의의 상기 실시양태 또는 임의의 하기 기재된 실시양태에 기재된 바와 같이, 바람직하게 약 6.2 내지 약 6.7 의 범위에 있다. 본원에 기재된 안정성 연구(실시예 2 참조)는, 6.0 만큼 낮거나 7.0 만큼 높은 pH 에서 특정 로타바이러스 재조합체에 대해 더 큰 효능 손실률이 관찰된 것을 입증한다. 구체적으로, G1, G4 및 P1 재조합체는 pH 6.0 및 pH 7.0 에서 더 큰 손실을 보였다. 따라서, 본 발명의 제제는 모든 로타바이러스 활성 성분들에 대한 더 낮은 효능 손실률을 제공하기 위해 6.0 보다 높거나 7.0 보다 낮은 pH 에서 유지된다. 본 발명의 구체적인 실시양태에서, 조성물의 pH는 약 6.2 내지 약 6.6, 약 6.2 내지 약 6.5, 약 6.2 내지 약 6.4, 약 6.2 내지 약 6.3, 약 6.3 내지 약 6.7, 약 6.3 내지 약 6.6 또는 약 6.3 내지 약 6.5 이다. 추가 실시양태에서, pH는 약 6.2, 약 6.3, 약 6.4, 약 6.5, 약 6.6 또는 약 6.7 이다. 특정 실시양태에서, 25 ℃ 에서 제제의 pH는 약 6.4 이다.

본 발명의 제제의 pH는, 제제의 pH를 각각 감소시키거나 증가시키는 산성화제 및 알칼리화제로서 유용한, 다양한 제약상 허용 가능한 부형제의 첨가를 통해 최적의 수준으로 조정될 수 있다. 제제의 pH를 증가시키기 유용한 알칼리화제는 암모니아 용액, 탄산암모늄, 디에탄올아민, 모노에탄올아민, 수산화칼륨, 탄산수소나트륨, 붕산나트륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 인산수소이나트륨 및 트롤아민을 포함한다. 본 발명의 실시양태에서, pH는 수산화나트륨의 첨가를 통해 조정된다. 본 발명의 실시양태에서, 수산화나트륨의 양은 약 750 mM 내지 약 1.25 M 이다. 특정 실시양태에서, 수산화나트륨의 양은 약 900 mM 내지 약 950 mM 이다. 추가 실시양태에서 수산화나트륨의 양은 약 924 mM 이다.

WO2006/042202는 아연이 본원에 기재된 로타바이러스 백신 제제에 안정성을 부여하는 가장 중요한 부형제라고 보고한다. 유사하게, WO2013/029033는 로타바이러스 백신 제제에 아연을 있는 것이 바람직하다고 언급한다. 본 발명자들은, 놀랍게도, 아연이 본원의 로타바이러스 제제의 안정성에 실제로 해로운 것을 발견하였다(실시예 5 참조). pH 6.7 에서 465 mM 아디프산, 100 mM 인산나트륨, 1.5 M 수크로스, 0.01 % PS80 및 2 mM 염화칼슘을 함유하는 전형적인 5 가의 로타바이러스 백신 제제의 안정성은 1 mM 염화아연의 존재 및 부재에서 평가되었다. 로타바이러스 효능 데이터는 테스트 제제에 있는 각 재조합체의 효능 손실률을 계산하기 위해 사용되었다. 데이터는 제제에 1 mM 아연이 포함되었을 때 모든 5 개의 재조합체가 37 ℃ 에서 7 일 후에 효능 손실이 더 컸음을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 제제는 아연을 포함하지 않는 것이 바람직하다.

사용 방법

본 발명은 또한 본원에 개시된 백신 제제의 투여를 포함하는, 로타바이러스에 의한 인간 환자의 감염 가능성을 예방하거나 감소시키는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 본원에 개시된 백신 제제의 투여를 포함하는, 로타바이러스 위장염의 가능성을 예방하거나 감소시키는 방법, 또는 그의 지속기간 또는 중증도를 감소시키는 방법을 제공한다. 본원에서 제공된 방법의 특정 실시양태에서, 환자에게 투여되는 제약 조성물은 하나 이상의 로타바이러스 재조합체 또는 약독된 로타바이러스 균주를 포함한다. 하나의 실시양태에서, 백신 제제는 적어도 하나의 로타바이러스 재조합체를 포함한다. 다른 실시양태에서, 백신 제제는 G1, G2, G3, G4 및 P1A 로타바이러스 재조합체를 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 로타바이러스 제약 제제는 증강된, 지속적인 면역 반응을 유발하기 위해 다양한 프라이밍(prime)/상승 조합으로 환자에게 경구로 투여된다. 이 경우에, 2 종 이상의 제약 조성물 또는 제제는 "프라이밍 및 상승(prime and boost)" 요법에서 투여된다. 예를 들어, 제 1 조성물이 1 회 이상 투여되고, 이어서 예정된 시간 후에, 예를 들어 2 주, 1 개월, 2 개월, 6 개월 후에, 또는 다른 적절한 간격으로 제 2 조성물이 1 회 이상 투여된다. 바람직하게는, 임상 요법에서 사용되는 2 종 이상의 로타바이러스 제약 조성물은, 첫번째 투여량이 생후 6 내지 12 주 연령에 투여되고, 4 내지 10 주의 간격으로 투여된다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 백신 조성물은 3 번째 투여가 생후 32 주 또는 더 어린 연령에 투여되면서, 3 번 투여된다.

따라서, 본 발명의 임의의 로타바이러스 백신 제제를 아동에게 경구로 투어하는 것을 포함하는 본 발명은, 아동에서 로타바이러스 감염의 가능성을 감소시키거나, 로타바이러스 위장염의 가능성, 또는 그의 중증도 또는 지속기간을 예방 또는 감소시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 이러한 측면의 특정 실시양태에서, 아동은 생후 6 내지 32 주 사이 연령의 유아이다. 다른 실시양태에서, 아동은 생후 6 내지 12 주 사이 연령의 유아이다.

본 발명의 다른 실시양태에서, 상기 방법은

(a) 소정의 시간이 경과할 때까지 대기;

(b) 제제의 추가 투여량을 아동에게 투여; 및

(c) 선택적으로 (a) 및 (b) 단계를 반복;

하는 단계를 추가로 포함한다. 본 발명의 로타바이러스 백신 조성물의 첫번째 투여 및 본 발명의 로타바이러스 백신 조성물의 두번째 투여, 또는 그 후 임의의 투여 사이의 시간은, 달라질 수 있다. 특정 실시양태에서, 첫번째 투여가 약 6 내지 약 12 주 연령의 아동에게 주어진다. 추가 실시양태에서 방법은 로타바이러스 백신 제제를 3-투여 시리즈로 아동에게 투여하는 것을 포함하고, 아동은 시리즈의 완료시 생후 32 주이거나 더 어린 연령이다.

본 발명 방법의 임의의 실시양태에서, 로타바이러스 백신 제제는 선택적으로, 디프테리아 및 파상풍 톡소이드 및 무세포 백일해(DTaP), 비활성화된 소아마비 바이러스 백신(IPV), 헤모필루스 b 형 인플루엔자 접합체(Hib), B 형 간염 백신, 및 폐렴구균 접합체 백신에서 하나 이상을 포함하는 하나 이상의 추가적인 백신과 함께 아동에게 동시에 투여된다

본 발명은 또한, 로타바이러스 감염에 관련된 질병의 치료 또는 예방을 위한 본 명세서에 기재된 임의의 실시양태의 로타바이러스 백신 제제의 사용에 관한 것이다. 본 발명은 또한 로타바이러스 위장염의 예방을 위한 본 발명의 로타바이러스 백신 제제의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 실시양태는 또한, (a) 치료(예를 들어, 인간의 몸의); (b) 약물; (c) 로타바이러스 복제 억제; (d) 로타바이러스에 대한 면역 반응 또는 방어 면역 반응의 유도; (e) 로타바이러스에 대한 바이러스 중화 항체 반응의 유도; (f) 로타바이러스에 의한 감염의 치료 또는 예방; (g) 로타바이러스 감염과 관련된 병리적 증상의 진행, 발병 또는 중증도를 감소시키는 것 및/또는 로타바이러스 감염 가능성을 감소시키는 것 또는, h) 위장염을 포함하지만 이에 제한되지 않는 로타바이러스-관련 질병(들)의 발병, 중증도, 또는 진행을 치료, 예방 또는 지연시키는 것에 (ⅰ) 사용, (ⅱ) 이를 위한 약물 또는 조성물로서의 사용, 또는 (ⅲ) 이를 위한 약물의 제조에의 사용을 위한, 본원에 기재된 하나 이상의 로타바이러스 백신 제제를 포함한다.

따라서, 본 발명은, 치료가 필요한 환자에게 본 발명의 하나 이상의 제제를 투여하는 것을 포함하는, 로타바이러스 감염 또는 로타바이러스-관련 질병의 예방적 및/또는 처치적 치료에 관한 방법을 제공한다.

예방적 치료는 본원에 기재된 바와 같은, 본 발명의 로타바이러스 백신 제제를 사용하여 수행될 수 있다. 본 발명의 제제는 일반 사람들 또는 로타바이러스 감염의 위험이 증가한 사람들에게 투여될 수 있다.

따라서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 로타바이러스 백신 제제의 제약상 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 로타바이러스 감염에 대비하여 환자에서 방어 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다.

본원에 언급된 모든 간행물은 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 방법론 및 물질을 기재 및 개시할 목적으로 참고로 포함된다.

첨부된 도면을 참고하여 본원 발명의 상이한 실시양태를 설명할 때, 본 발명이 그러한 정확한 실시양태로 제한되지 않고, 첨부된 특허청구범위에서 한정된 본 발명의 범위 또는 취지에 벗어남 없이 당업자에 의해 다양한 변화 및 수정이 수행될 수 있다고 이해된다.

실시예 1

VVMC 로타바이러스 제제 부형제 선정

상업용 백신 제제(RotaTeq™)가 최소한의 효능을 발휘할 때부터 효능이 종료될 때까지 걸리는 시간 양을 평가하였다. 백신의 각 재조합체가 5 ℃ 에서 저장될 때 VVM7을 만족하기 위해 필요한 시간 동안 안정하였음에도 불구하고, 5 개 재조합체 모두 25 ℃ 및 37 ℃ 에서 최소한의 VVM7 요건을 만족하지 못한 것이 밝혀졌다. 따라서, 연구는, 37 ℃ 에서 7 일, 25 ℃ 에서 45 일 및 2-8 ℃ 에서 2 년 동안 저장 후, 백신 효능이 5 개의 재조합체 모두에 대해 유효기간 종료시의 효능보다 높게 유지하는 것을 필요로 하는, VVM7 요건에 맞는 제품의 열적 안정성 프로파일을 증가시키기 위한 상업용 로타바이러스 제제를 새로 만들기 위해 착수되었다.

RotaTeq™ 이 경구로 투여되므로, 각각의 활성 재조합체는 소장으로 가기위해 위의 혹독한 환경에서 살아 남아야만 한다. WC3, RotaTeq™ 제제에서 사용되는 인간-소 재조합체의 백본을 포함한 일부 소 로타바이러스 균주가 산성 조건(pH 4.0 미만)에서 빠르게 비활성화되는 것이 이전에 밝혀졌었다(Weiss, S., Clark, H.F. "Rapid Inactivation of Rotaviruses by Exposure to Acid Buffer or Acidic Gastric Juice" Journal of General Virology 66: 2725-2730 (1985)). 그 결과, RotaTeq™의 상업용 제제는, 유아의 위산을 중화하여 바이러스가 소장에 도달하기 전에 파괴되지 않도록, 구연산나트륨 및 인산나트륨 둘 다를 포함한다; 따라서 방어 면역 반응의 발생이 가능하게 한다. VVM7 제제를 개발하는 하나의 목적은, 활성 제약 성분들(즉, 바이러스 재조합체)가 소장에 온전한 상태로 도달하는 것을 보장하기 위해, 0.86 mEQ/dose인 상업용 RotaTeq™ 제제의 산 중화 용량(ANC)을 만족하거나 초과하는 것이었다.

VVM7 안정성 요건을 만족시키는 신규 RotaTeq™ 제제를 개발하기 위한 계획은 백신의 열적 안정성을 증가시키기 위해 자유 칼슘 농도의 증가를 수반한다. 상업용 RotaTeq™ 제제 중의 것들보다 낮은 칼슘 결합 계수를 갖는 부형제의 선택 및 염화칼슘의 첨가로 이를 달성하였다. 산 중화를 위해 상업용 RotaTeq™ 제제에서 사용되는, 구연산나트륨은 다른 카르복실산에 비하여 상대적으로 높은 칼슘 결합 계수를 갖는다. 요구되는 산 중화를 제공하지만, 용액에 더 많은 칼슘을 남겨둠으로써 바이러스 안정성을 개선하기 위해 구연산나트륨을 더 낮은 칼슘 결합 계수를 갖는 카르복실산으로 대체하기로 하였다. 디카르복실레이트 아디프산은, 이의 낮은 칼슘 결합 계수 및 안전성 프로파일로 인해 RotaTeq™ 제제에 있는 트리카르복실레이트 구연산을 대체하기 위해 선택되었다. 아디프산의 칼슘 결합 계수(log(K)는 2.19이고 K는 ~155이다)는 구연산의 칼슘 결합 계수(log(K)는 3.5이고 K는 3162이다)보다 대략 20 배 더 낮다.

감염성 로타바이러스 입자를 안정시킬 수 있는 제제에 있는 자유 칼슘을 최대화하는데 이용되는 두번째 접근은, 제제에 염화칼슘을 첨가하는 것이었다. 그러나, 인산도 함유하는 제제에서의 칼슘 농도의 증가는 인산칼슘의 침전을 야기할 수 있으므로, 칼슘, 인산, 및 아디프산 농도의 어느 조합이 침전의 위험 없이 가용성 칼슘을 최대화하는지 결정하기 위해, 일련의 침전 스크리닝(screening) 연구를 시작하였다.

제제 개발 동안 아디프산의 두가지 농도, 465 mM 및 250 mM로 처음에 테스트되었다. 465 mM 아디프산의 사용은 제제에서 상업용 제제에 비해 현저하게 높은 ANC를 야기하였다. 제제의 ANC를 상업용 RotaTeq™ 제제의 것과 유사한 수준으로 감소시킬 수 있는 250 mM 아디프산의 농도도 테스트되었다. 250 mM 아디프산을 포함하는 테스트 제제에서 칼슘 용해도의 현저한 감소(3.0 mM 에서 1.5 mM 으로)가 관찰되었다; 따라서, 465 mM 아디프산이 표적 농도로 선정되었다.

인산을 함유하는 제제에서의 가용성 칼슘 농도를 최대화하기 위한 첫번째 연구는, 상업용 RotaTeq™ 제제에서의 농도와 일치하도록 인산나트륨을 사용하여 수행되었다. 이러한 연구들은 465 mM 아디프산, 100 mM 인산나트륨, 1.5 M 수크로스 및 0.01 %(w/v) 폴리소르베이트 80의 염기 제제를 사용하였다. 테스트 제제는 6.0 내지 6.7 로 다른 pH, 및 1.0, 2.0, 또는 3.0 mM 중 어느 하나의 칼슘 농도에서 준비되었다. 제제는 25 및 37 ℃ 에서 인큐베이션으로 침전물의 형성이 관찰되었다. pH 6.5 및 6.7 에서 2 및 3 mM 칼슘을 함유하는 제제는 통상적으로 두 인큐베이션 온도에서 침전이 발생하였다. 이러한 발견은, 1 mM 칼슘이, 100 mM 인산을 함유하는 제제에 첨가될 수 있는 최대 칼슘의 농도인 것을 나타낸다. 침전은 37 ℃에서 인큐베이트된 pH 6.7 의 샘플에서 처음 발견되었다. 따라서, 그 다음의 선별은 37 ℃ 에서의 인큐베이션으로 pH 6.7 에서 침전물 형성을 평가하는 것에 초점이 맞춰졌다.

실험의 두번째 세트에서, 제제에서 인산의 농도는, 가용성 칼슘을 최대화하는 조합을 확인하기 위한 목적으로, 칼슘 농도에 따라 달라졌다. 이러한 연구에서 사용되는 기본 제제는 6.5 및 6.7 의 pH 값에서 465 mM 아디프산, 1.5 M 수크로스 및 0.01 %(w/v) 폴리소르베이트 80을 함유한다. 시험된 인산나트륨 농도는 100 mM, 50 mM, 및 10 mM을 포함한다. 이 선별에서 테스트된 칼슘의 농도는 1 mM 부터 4 mM 까지 다양하다. 다시 한번, 칼슘 농도가 1 mM을 초과할 경우 100 mM 인산 농도 제제에서 침전이 관찰되었다. 인산 농도가 50 mM로 감소되었을 때, 1 mM 초과의 칼슘을 함유하는 제제에서 침전이 관찰되는 것처럼, 칼슘 용해도에 현저한 개선이 이뤄지지 않았다. 반면, 4.0 mM 칼슘이 첨가될 때까지 침전이 관찰되지 않은, 오직 10 mM 인산을 함유하는 제제에서는 칼슘 용해도의 현저한 개선이 관찰되었다. 이러한 연구들은 인산 농도가 10 mM로 감소되었을 때 현저하게 더 높은 가용성 칼슘 농도가 달성될 수 있음을 나타낸다.

실시예 2

안정성에 대한 pH의 영향

465 mM 아디프산, 100 mM 인산, 1.5 M 수크로스, 0.01 % PS-80 및 1 mM 칼슘 제제에 대해 pH 범위(6.0 내지 7.0)에 걸쳐 안정성 데이터를 산출하기 위해 안정성 연구가 수행되었다. 간단히 말해서, 5 가의 로타바이러스 제제는 pH 6.0, 6.2, 6.5, 6.7 및 7.0 에서 준비되었고, 경구 투여 튜브에 채워졌다. 모든 5 개의 재조합체의 안정성은 37 ℃에서 0, 1, 2, 3, 6, 7, 8 및 10 일동안 인큐베이션된 후 평가되었다. 로타바이러스 효능 데이터는, 효능을 시간(일)으로 변환한 자연 로그에서의 선형 회귀를 수행함으로써, 테스트된 5 개의 pH 값에서 각 재조합체의 효능 손실률을 계산하기 위해 사용되었다. 37 ℃ 에서 7 일 저장 후 평균 효능 손실의 자연 로그 값은 아래에 나타나 있다(표 3). G1, G4 및 P1 재조합체는 테스트된 pH 범위의 양 끝에서 더 큰 손실을 나타냈다.

표 3. 안정성에 대한 pH의 영향

실시예 3

아디프산 농도

로타바이러스 재조합체의 안정성에 대한 아디프산 농도의 영향은, pH 6.4 에서 10 mM 인산, 1.5 M 수크로스, 0.01 % PS80 및 3 mM 칼슘의 존재 하, 250 mM, 350 mM, 465 mM, 및 700 mM 아디프산에서 평가되었다. 간단히 말해서, 5 가의 로타바이러스 제제가 제조되었고 경구 투여 튜브에 채워졌다. 모든 5 개의 재조합체의 안정성은 37 ℃ 에서 0, 3, 7 및 10 일 동안 인큐베이션된 후 평가되었다. 로타바이러스 효능 데이터는 효능을 시간(일)으로 변환한 자연 로그에서의 선형 회귀를 수행함으로써, 테스트된 4 개의 아디프산 농도에서 각 재조합체의 효능 손실률을 계산하기 위해 사용되었다. 37 ℃ 에서 7 일 저장 후의 각 재조합체에 대한 평균 효능 손실의 자연 로그 값은 아래에 나타나 있다(표 4). 37 ℃ 에서 7 일 후 효능 손실은 G1, G2 및 G3 재조합체에 대해 테스트된 아디프산 농도의 범위에 걸쳐 일정했다. 더 높은 아디프산의 농도는 더 많은 양의 칼슘을 킬레이트화했을 것이고, 감소된 안정성을 야기할 수 있었으므로, 이러한 발견은 예측되지 않은 것이었다. 이론에 얽매이기 바라지 않았음에도 불구하고, 이 결과에 대한 하나의 해석은 700 mM 아디프산에서 조차 충분한 칼슘이 용액에 남아있거나 바이러스 입자들과 결합되어 안정성에 영향이 없다는 것이다. G4 재조합체에 대해 효능 손실은 더 높은 아디프산 농도에서 약간 더 높았다.

표 4. 안정성에 대한 아디프산 농도의 영향

실시예 4

인산칼슘 침전의 정제

어떤 농도(3 및 4 mM 사이)에서 칼슘 침전이 먼저 관찰되는지를 결정하기 위한 주요 목표로 다른 실험 세트를 수행하였다. 이러한 실험 세트에서, 465 mM 아디프산, 10 mM 인산나트륨, 1.5 M 수크로스 및 0.01 %(w/v) 폴리소르베이트 80의 기본 제제가 사용되었다. 칼슘의 다양한 수준을 갖는 로타바이러스 제제는 37 ℃ 인큐베이션의 3, 7, 10, 14, 18 및 39 일 후 침전의 흔적(PPT)이 육안으로 관찰되었다. 이러한 연구에서 테스트된 염화칼슘 농도는, 1 내지 4 mM의 사이에 있었고, 특히 3 및 4 mM 사이의 농도에 집중되었다. 완성도를 위해, 제제의 pH는 6.2 내지 6.7 으로 상이하고, 침전의 발생은 37 ℃ 인큐베이션에서 관찰되었다. 결과는 샘플이 3.5 mM 또는 더 적은 칼슘을 함유할 때, 인큐베이션 39 일 후에도, 테스트된 어느 pH 값에서도 침전이 관찰되지 않는다는 것을 나타낸다(도 1 참조). 하기 표에 나타난 바와 같이, pH 6.2 또는 6.4 중 어느 하나에서 4 mM Ca을 함유하는 제제에서 침전 문제를 관찰하였다. pH 6.7 에서, 3.75 mM 및 4 mM을 함유하는 제제에서 침전을 관찰하였다. 따라서, 침전의 위험 및 안정성을 기준으로 한 안정성을 위한 최적의 칼슘 농도는 3 mM 인 것으로 선택되었다.

실시예 5

안정성에 대한 아연의 영향

로타바이러스 백신 제제에 아연을 포함하는 것의 이점이 있는지를 평가하기 위해 안정성 연구가 수행되었다. pH 6.7 에서 465 mM 아디프산, 100 mM 인산, 1.5 M 수크로스, 0.01 % PS80 및 2 mM 염화칼슘을 함유하는 5 가의 로타바이러스 백신 제제의 안정성은 1 mM 염화아연의 존재 및 부재 하에 평가되었다. 모든 5 개 재조합체의 안정성은 37 ℃ 에서 0, 3, 7 및 8 일동안 인큐베이션된 후 평가되었다. 로타바이러스 효능 데이터는 효능을 시간(일)으로 변환한 자연 로그에서의 선형 회귀를 수행함으로써, 테스트된 2 개의 제제에서 각 재조합체의 효능 손실률을 계산하기 위해 사용되었다. 37 ℃ 에서 7 일 저장 후의 평균 효능 손실의 자연 로그 값은 아래에 나타나 있다(표 5). 모든 5 개의 재조합체는 제제에 1 mM 아연이 포함되었을 때, 37 ℃ 에서 7 일 후 효능 손실이 더 컸다.

표 5. 안정성에 대한 아연의 영향

실시예 6

VVM7 요건과 제제의 양립가능성 측정

필요한 VVM 온도(37 ℃, 25 ℃ 및 2 내지 8 ℃)에서 효능 손실률을 측정하기 위해 형식적인 안정성 연구가 수행되었다. 평가될 각 온도에서, 샘플들은 서로 다른 시간동안 인큐베이트되고, 남아있는 효능이 측정되었다. 95 % CI 에서 손실률은 측정된 효능 값들을 사용하여 결정되었다. 표 6 및 표 7 에 나타난 데이터는, 37 ℃ 및 25 ℃ 에서의 상업용 RotaTeq™ 제제(높은 칼슘 결합 친화력을 가짐) 및 VVMC 제제(낮은 칼슘 결합 친화력)에 대한 효능 손실률을 각각 요약한다. 37 ℃ 에서 G3 재조합체의 가장 큰 개선(362 배 향상)이 관찰됨과 함께 안정성의 큰 개선이 관찰되었다. 25 ℃ 에서 모든 재조합체가 1.7 내지 51.1 배의 범위에서 손실률 개선을 나타내었고 좀 더 완만한 안정성 향상이 관찰되었다. 요약하면, 바이러스 입자를 안정화할 수 있는 용액 내 자유 칼슘의 극대화를 통해, RotaTeq™ 에 있는 모든 5 개 로타바이러스 재조합체의 안정성이 승온에서 개선되었고, 그 결과 VVM7 에 양립가능한 제제가 되었다.

표 6. 95 % 신뢰구간으로 37 ℃ 에서 1 일당 감염성 손실(LN IU/day)

표 7. 95 % 신뢰구간으로 25 ℃ 에서 1 일당 감염성 손실(LN IU/day)

실시예 7

폴리소르베이트 80 농도 범위의 결정

RotaTeq™의 상업용 제제는 PS80을 포함한다. 안정성 연구는 37 ℃ 에서 RotaTeq™ VVM7 제제의 안정성에 대한 PS80 농도 영향을 평가하기 위해 수행되었다. 완성된 제제에서, PS80은 바이러스 벌크(bulk) 및 제제 완충액에 모두 존재한다. 바이러스 벌크의 첨가로, 최종 용기 내의 PS80 농도가 기존 상업용 제제(0.008 내지 0.04 %(w/v))의 범위에 걸쳐있게 하여, 다양한 PS80 농도를 갖는 제제 완충액을 제조하였다. 특유의 벌크 로트(lot)로 채워진 용기의 3 개의 로트가 각 제제 완충액과 제조되었고 모든 12 개의 로트는 PS80 실험을 위해 제출되었다. 표 8 은 각 안정화제를 위한 이론상의 PS80 농도 및 최종 용기 로트에서 실험적으로 결정된 농도를 요약한다.

표 8. 제제 완충액 및 최종 용기에서의 PS80 농도

모든 5 개 재조합체의 효능이 결정된 후, 각각의 12 개 최종 용기 로트는 37 ℃ 에서 0 또는 9 일 동안 안정화되었다. PS80 농도 및 효능 결과는 연구된 범위 내에서 안정성이 PS80 농도에 의해 영향을 받는지 여부를 결정하기 위해 분석되었다. 간단히 말해서, 효능 데이터는 상호작용 텀(term) 시간 공식의 통계적인 의미를 테스트하기 위해 혼합 효과 회귀 모델(mixed effects regression model)에 적합하였다. 이 텀의 의미는 제제 간 손실률의 잠재적인 차이를 나타낸다. 결과는 재조합체 G1, G2, G3 및 G4 의 상호작용 텀 p-값이 0.05 보다 크다는 것을 나타내었으며, 이는 의미가 발견되지 않았음을 나타낸다. 재조합체 P1은 0.049의 상호작용 텀 p-값을 가졌고, 이는 경계적 의미를 나타낸다; 따라서, 개별 기울기 값은 각 로트 및 제제에 대해 계산되었다. 이러한 추가 분석은 제제 #4 가 3 개의 로트 간에 일관되게 더 큰 기울기 값을 갖는 것을 보여준다. 높은 PS80 농도에서 안정성의 증가에 기여하는 경계선의 상당한 차이점으로, 모든 재조합체가 테스트한 PS80 농도 전체에 걸쳐 안정한 것으로 결론이 내려졌다.

실시예 8

VVM7-RotaTeq™의 안전성, 내약성(tolerability), 및 면역원성을 평가하기 위한 이중-맹검(Double-Blind), 무작위로, 통제된, 연구

이 연구의 주요 목적은, 면역원성의 기준에서 RotaTeq™의 상업용 제제와 비교하였을 때, VVM7RotaTeq™의 비열등성을 증명하기 위한 것이다. 이 연구의 주요 목적은, RotaTeq™의 상업용 제제를 투여받는 대상체에 비해 VVM7RotaTeq™을 투여받는 대상체에서 투여 3 후 42 일에 백신-유도 항체 반응이 유사한지(비열등한지) 여부를 결정하기 위한 것이다.

생후 6 내지 12 주 사이 연령의 적합한 대상체를 1:1 비율로 2 개의 백신접종 그룹에 무작위로 배정하였다: 그룹 1은 VVM7RotaTeq™를 3 회 경구 투여 받고 그룹 2는 RotaTeq™ 상업용 제제를 3 회 경구 투여를 받았다. 혈청은 2 회 시간 간격(투여 1 전 및 투여 3 후 42 일째)으로 수집되었고, 혈청 항-로타바이러스 IgA 뿐만 아니라, 인간 로타바이러스 혈청형 G1, G2, G3, G4, 및 P1A[8] 에 대한 혈청 중화 항체(SNA)에 의해 테스트되었다. 신규 제제의 안전성 및 내약성 또한 평가되었다. 대변 샘플이 수집되었고, 백신접종 후 14 일 이내에 심각한 설사 및/또는 구토를 적당히 경험한 대상체에 대해 로타바이러스를 테스트하였다.

총 1020 명의 대상체들이 임의로 선정되고, 1014 명 대상체들이 백신접종을 받았다. 그들 중에서, 510 명이 신규 제제를 투여받았고 504 명이 RotaTeq™의 기존 제제를 투여받았다. 두 그룹은 일반적으로 비슷한 기본 특성을 가진다.

주요한 면역원성 가설은, 연구 백신의 3 회 투여량을 투여받은 대상체에서의 인간 로타바이러스 혈청형 G1, G2, G3, G4, 및 P1A[8] 에 대한 백신-유도 SNA 반응의 GMTs 에 관해서 그룹들 간의 비-열등성을 증명하기 위한 것이었다. 성공의 기준은 GMT 비율의 95 % CI의 하한값이 0.67 초과일 것을 요구한다(기존 제제에 비해 신규 제제의 GMT에서 1.5 배 이하의 감소에 상응). 모든 5 개 혈청형에 대하여 VVM7RotaTeq™ 제제는 RotaTeq™의 상업용 제제에 비해 열등하지 않았다(도 2 참조). G3 에 대한 GMT는 기존 제제 그룹에 비해 신규 제제 그룹에서 더 높았다. 게다가, 혈청 항-로타바이러스 IgA에 대한 면역원성은 신규 제제 그룹과 기존 제제 그룹에서 유사하였다(도 3 참조).

양 그룹에서 대상체의 안전성에 관한 데이터가 수집되었다. 투여 후 장중첩증, 설사, 구토, 고열(직장 온도 38.1 ℃[100.5 ℉] 또는 동등), 및 과민성은 관심 사건으로 미리 지정되었다. 결과는 VVM7 제제가 내약성이 우수하고 이러한 사건들에 대해 상업용 RotaTeq™ 제제에 대해 비슷한 안전성 프로파일을 갖고 있는 것을 나타냈다. 연구에서 백신-관련 심각한 부작용과 사망은 없었다. 오직 2 명의 대상체가 부작용으로 인해 연구를 중단하였다.

Claims

적어도 하나의 로타바이러스 재조합체 또는 약독된 로타바이러스 균주의 제약상 유효량, 약 1.0 mM 내지 약 3.5 mM의 제약상 허용 가능한 칼슘염, 약 0.5 M 내지 약 2.0 M 수크로스, 약 260 mM 내지 약 700 mM 아디프산, 및 약 10 mM 내지 약 100 mM 인산나트륨을 포함하고, pH 가 약 6.2 내지 약 6.7 인 액상 로타바이러스 백신 제제.
제1항에 있어서, 칼슘이 염화칼슘으로부터 유래된 것인 로타바이러스 백신 제제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 비이온성 계면활성제를 추가로 포함하는 로타바이러스 백신 제제.
제3항에 있어서, 비이온성 계면활성제가, 0.008 % 내지 0.04 % w/v의 농도로 존재하는 폴리소르베이트 80 인 로타바이러스 백신 제제.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, G1, G2, G3, G4 및 P1A 로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 로타바이러스 재조합체를 포함하는 로타바이러스 백신 제제.
제5항에 있어서, G1, G2, G3, G4 및 P1A 로타바이러스 재조합체를 포함하는 로타바이러스 백신 제제.
제5항 또는 제6항에 있어서, 로타바이러스 재조합체의 총 양이 mL 당 약 1.0×10⁶ 내지 약 50×10⁶ 감염단위인 로타바이러스 백신 제제.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 조직배양배지를 추가로 포함하는 로타바이러스 백신 제제.
제8항에 있어서, 조직배양배지가 약 2 내지 약 30 % v/v 양으로 존재하는 로타바이러스 백신 제제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 칼슘의 양이 약 3.0 mM 인 로타바이러스 백신 제제.
제1항에 있어서, 제제가
a) G1, G2, G3, G4 및 P1A 로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 로타바이러스 재조합체;
b) 약 1.5 M 수크로스;
c) 약 465 mM 아디프산;
d) 약 10 mM 인산나트륨; 및
e) 약 3 mM의 제약상 허용 가능한 칼슘염;
을 포함하고, pH 가 25 ℃ 에서 약 6.4 인 로타바이러스 백신 제제.
제11항에 있어서, 약 0.01 %의 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는 로타바이러스 백신 제제.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 37 ℃ 에서 적어도 7 일 동안, 25 ℃ 에서 적어도 45 일 동안, 및 2-8 ℃ 에서 적어도 2 년 동안 열적으로 안정한 로타바이러스 백신 제제.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 제제를 아동에게 경구로 투여하는 것을 포함하는, 아동에서 로타바이러스 감염 가능성을 감소시키거나, 로타바이러스 위장염의 가능성 또는 중증도를 예방하거나 감소시키는 방법.
제14항에 있어서, 아동이 생후 6 주 내지 12 주 사이 연령의 유아인 방법.
제14항 또는 제15항에 있어서,
(a) 소정의 시간이 경과할 때까지 대기;
(b) 상기 제제의 추가 투여량을 아동에게 투여; 및
(c) 선택적으로 (a) 및 (b) 단계를 1 회 이상 반복;
하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제16항에 있어서, 아동에게 3-투여 시리즈로 로타바이러스 백신 제제를 투여하는 것을 포함하고, 아동이 시리즈의 완료시 32 주이거나 더 어린 연령인 방법.
제14항 또는 제15항에 있어서, 로타바이러스 백신 제제가, 디프테리아 및 파상풍 톡소이드 및 무세포 백일해(DTaP), 비활성화된 소아마비 바이러스 백신(IPV), 헤모필루스 b 형 인플루엔자 접합체(Hib), B 형 간염 백신, 및 폐렴구균 접합체 백신 및 그들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 2 차 백신과 동시에 아동에게 투여되는 방법.
로타바이러스 감염과 관련된 질병의 치료 또는 예방을 위한, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 로타바이러스 백신 제제의 용도.
로타바이러스 위장염의 예방을 위한, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 로타바이러스 백신 제제의 용도.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 로타바이러스 감염의 가능성을 감소시키거나, 로타바이러스 위장염의 가능성 또는 중증도를 감소시키는데 사용하기 위한 로타바이러스 백신 제제.