EA043650B1 - Не содержащая буфера кислотоустойчивая ротавирусная вакцина с малым объемом дозы - Google Patents
Не содержащая буфера кислотоустойчивая ротавирусная вакцина с малым объемом дозы Download PDFInfo
- Publication number
- EA043650B1 EA043650B1 EA201990027 EA043650B1 EA 043650 B1 EA043650 B1 EA 043650B1 EA 201990027 EA201990027 EA 201990027 EA 043650 B1 EA043650 B1 EA 043650B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- vaccine
- rotavirus
- buffer
- concentration
- titer
- Prior art date
Links
- 229940124859 Rotavirus vaccine Drugs 0.000 title claims description 90
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 196
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 117
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 claims description 101
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 67
- 229940069428 antacid Drugs 0.000 claims description 28
- 239000003159 antacid agent Substances 0.000 claims description 28
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 24
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 24
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 24
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical class [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 23
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 23
- 230000001458 anti-acid effect Effects 0.000 claims description 21
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 19
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 claims description 18
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 18
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 18
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 18
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 15
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 13
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 13
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 9
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 9
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 229960005050 live attenuated rota virus Drugs 0.000 claims description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 5
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 5
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 229940126578 oral vaccine Drugs 0.000 claims description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 44
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 22
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 11
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 10
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 10
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 10
- 206010067470 Rotavirus infection Diseases 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- UUUDMEBRZTWNAO-UHFFFAOYSA-N carbonic acid;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound OC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O UUUDMEBRZTWNAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 229940124941 Rotarix Drugs 0.000 description 5
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 241000617996 Human rotavirus Species 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- 230000002953 anti-rotaviral effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000702673 Bovine rotavirus Species 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 206010017913 Gastroenteritis rotavirus Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L adipate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC([O-])=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 208000037951 infantile gastroenteritis Diseases 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229960001539 poliomyelitis vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 1
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000120506 Bluetongue virus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001471959 Bovine rotavirus A unknown G-type Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000958041 Homo sapiens Musculin Proteins 0.000 description 1
- 241000678604 Human rotavirus G1P[8] Species 0.000 description 1
- 208000005168 Intussusception Diseases 0.000 description 1
- OWYWGLHRNBIFJP-UHFFFAOYSA-N Ipazine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(Cl)=NC(NC(C)C)=N1 OWYWGLHRNBIFJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000702646 Rhesus rotavirus Species 0.000 description 1
- 229940124878 RotaTeq Drugs 0.000 description 1
- 241001247927 Rotavirus G1 Species 0.000 description 1
- 241000702677 Simian rotavirus Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hcl hcl Chemical compound Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 102000046949 human MSC Human genes 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 description 1
- 239000004223 monosodium glutamate Substances 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229940053050 neomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 1
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003168 reconstitution method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- MQGDEWHKPUUFRU-QTNFYWBSSA-M sodium;(2s)-2-amino-5-hydroxy-5-oxopentanoate;phosphoric acid Chemical compound [Na+].OP(O)(O)=O.[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MQGDEWHKPUUFRU-QTNFYWBSSA-M 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- -1 triethanol aminooleate Chemical compound 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Description
Область техники
Настоящее изобретение относится к области ротавирусных вакцин. Более конкретно, настоящее изобретение относится к области ротавирусных вакцин, которые не содержат буфера или не требуют введения какого-либо антацида до, во время или после введения такой ротавирусной вакцины. Настоящее изобретение также относится к объему дозы на единицу вакцины, в частности ротавирусных вакцин.
Уровень техники
Хорошо известно, что ротавирусы являются основной причиной тяжелого гастроэнтерита у младенцев и детей более старшего возраста во всем мире. Даже улучшение гигиены, качества воды и санитарных условий, которые, как правило, могут способствовать борьбе со многими бактериями и паразитами, из-за которых возникают другие виды диареи, в достаточной степени не предотвращают распространение ротавируса. Таким образом, вакцинация является единственной стратегией, способной значительно снизить уровень заболеваемости ротавирусными инфекциями, в слаборазвитых и развивающихся странах по всему миру. Вакцинация имеет более важное значение для стран, в которых отсутствует необходимая экономическая поддержка и инфраструктура для борьбы с ротавирусными инфекциями у инфицированных пациентов. На сегодняшний день в мире было выпущено по меньшей мере четыре коммерчески доступные ротавирусные вакцины, первой из которых в 1999 г. стала вакцина Роташилд (Rotashield®), поставляемая Wyeth Holdings. Данная вакцина представляла собой живую пероральную тетравалентную ротавирусную вакцину, произведенную с применением вакцины на основе 1 ротавируса макаки-резус, 3 реассортированных вирусов макаки-резус и человека, лицензированной в США. Однако указанная вакцина была снята с продажи через 14 месяцев из-за ее связи с нежелательными реакциями инвагинацией кишечника.
Вакцина Rotashield® содержала композицию, включающую сахарозу, глутамат натрия, монофосфат калия, дифосфат калия, фетальную бычью сыворотку и неомицина сульфат в среде амфотерицина. В соответствующей патентной публикации, относящейся к композициям ротавирусной вакцины WO 2000006196 A2, сообщается, что указанные композиции вакцины могут содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, необходимые для обеспечения условий, приближенных к физиологическим условиям, такие как регулирующие рН и буферные агенты и т.п., например ацетат натрия, лактат натрия, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид кальция, сорбитанмонолаурат, триэтаноламинолеат, цитрат-бикарбонат или тому подобное. Когда композицию вводят перорально, также может потребоваться обеспечение индивидуума буферным раствором для частичной нейтрализации желудочного сока и защиты реассортированного ротавируса при поступлении в кишечник. Буферные растворы, подходящие для указанного применения, включают бикарбонат натрия, цитрат-бикарбонат или тому подобное.
Вакцина РотаТек (RotaTeq®) представляет собой пентавалентную реассортированую между вирусами человека и быка (WC3) живую аттенуированную пероральную вакцину, производимую Merck & Co., содержащую штамм ротавируса быка WC3, P7[5]G6, при этом содержащую 5 реассортированных вариантов, из которых 4 реассортированный варианта с геном VP7 от серотипа G1, G2, G3 или G4 и 1 реассортированный вариант с геном VP4 Р1А[8] от родительского штамма ротавируса человека с остальными генами от родительского штамма ротавируса быка WC3. В состав вакцины (соответствующие патентные публикации Merck, а именно WO 1998/13065, WO 2001/08495 и WO 2002/011540) входят определенные стабилизаторы в средах для культур тканей наряду с присутствием буферов в самом указанном составе, при этом указанный буфер представляет собой цитрат натрия и фосфат натрия. Карбоксилат согласно формуле изобретения указанных заявок используется и действует в качестве буфера для обеспечения устойчивости ротавирусного антигена к воздействию кислой среды желудка, когда вирусный антиген вводят в желудок ребенка.
Далее вакцина Ротарикс (Rotarix®) представляет собой моновалентную вакцину, содержащую пассированный штамм ротавируса человека RIX4414, полученный из штамма 89-12. Вакцина Rotarix® (производимая GlaxoSmithKline Biologicals (GSK)) представляет собой живую вакцину, которая содержит аттенуированный моновалентный штамм ротавируса человека G1P[8]. Указанная вакцина доступна в лиофилизированной форме, смешанной со стабилизаторами, для восстановления с применением буферного разбавителя на основе карбоната кальция перед введением вакцины субъектам.
Rotarix получали путем восстановления лиофилизированного активного ингредиента (штамм RIX4414 + вспомогательные вещества) с применением 1,0 мл буфера на основе CaCO3 от GSK, содержавшегося в предварительно наполненном шприце. После введения указанного буфера во флакон, содержавший лиофилизированную вакцину, указанный флакон хорошо встряхивали для ресуспендирования указанной вакцины. Затем весь объем ресуспендированного продукта набирали в тот же шприц, иглу (или устройство для переноса) указанного шприца удаляли, и указанный продукт быстро вводили в виде однократной пероральной дозы. В качестве альтернативы восстановление коммерчески доступной лиофилизированной вакцины будет осуществляться согласно тем же методикам с применением перорального аппликатора, наполненного буфером, и адаптера для переноса вместо шприца и иглы. Внешне восстановленная вакцина должна выглядеть молочно-белой. Следует производить визуальный осмотр указанной вакцины на предмет наличия твердых частиц и/или обесцвечивания и не вводить при любом из ука
- 1 043650 занных условий. Rotarix следует вводить перорально. Ребенок должен находиться в полулежащем положении, и все содержимое аппликатора для перорального введения, содержащего указанную восстановленную вакцину, следует вводить на внутреннюю поверхность щеки. Rotarix не следует вводить путем инъекции. Следовательно, понятно, что, восстановление с применением буферного разбавителя включает очень много стадий, начиная от обеспечения того, что восстановление было выполнено надлежащим образом до момента введения указанной вакцины. Все указанные факторы, несомненно, вызывают снижение соблюдения режима вакцинации, что означает частичную защиту от ротавирусной инфекции, а не обеспечение полной защиты.
Соответствующие патентные заявки GSK WO 2001/012797, WO 2005/02133, WO 2006/087205 относятся к составам ротавирусной вакцины, которые содержат серийно пассированный живой аттенуированный штамм ротавируса Р43 со специфическими мутациями, также дополненный антацидным буфером для восстановления. G-белок (VP4 и VP7) указанного штамма ротавируса способен обеспечивать индуцирование иммунного ответа на по меньшей мере 4 других штамма ротавируса серотипов G1 и по меньшей мере одного из G2-G14.
Также известны другие запатентованные композиции ротавирусной вакцины со стабилизаторами и буферами от Bharat Biotech International Limited с индийским «бессимптомным» штаммом 116Е, выделенным из организма ребенка. В случае указанных композиций требуется отдельное введение антацидного буфера реципиенту вакцины для повышения рН желудка до введения указанной вакцины, при этом указанный антацидный буфер представляет собой цитратно-фосфатный буфер, необходимый для нейтрализации кислотности желудка во время введения антигена ротавирусной вакцины. В патентной публикации WO 2013160913 предложены композиции ротавирусной вакцины, содержащие ротавирусные антигены, стабилизаторы и некоторые новые комбинации буферов. Буферы согласно указанному изобретению предварительно смешивают с композициями ротавирусной вакцины для нейтрализации сильнокислого рН желудка без необходимости отдельного введения антацида перед введением вакцины.
Таким образом, понятно, что разработаны различные ротавирусные вакцины с применением различных штаммов, как вирусов человека, так реассортированных вирусов животных. Существует несколько важных различий в характеристиках указанных штаммов, наиболее типичные из которых перечислены ниже.
Таблица 1. Различия между моновалентными вакцинами человека и вакцинами с применением реассортированных вирусов животных
| Ротавирусные вакцины с штаммами человека | Животные реассортированные ротавирусные вакцины |
| Естественная инфекция обеспечивает защиту от последующего ротавирусного заболевания. | Ротавирусы животных представляют собой естественно аттенуированные штаммы, что снижает репликацию у людей. |
| Вирусы человека обладают высокой способностью к репликации в инфицированном организме и, таким | Ротавирусные вакцины с реассортированными штаммами вирусов животных требуют очень |
| образом, аттенуируются путем многократного пассирования в культурах тканей множества инфицированных хозяев. Поскольку это штаммы человека, титра вакцины 10Л4 ФОЕ/0,5 мл достаточно для того, чтобы вызвать необходимую иммуногенность в отношении ротавирусных инфекций у людей. | высоких титров вакцины, чтобы иметь возможность вызвать требуемый иммунный ответ. |
| Иммунитет широкого спектра приобретается путем различных иммунных эффекторных механизмов. | Требуется ожидание того, когда нейтрализующее антитело окажется в просвете кишечника. Полученный иммунитет не так высок, как в случае вакцин с штаммами человека. |
| Г етеротипная защита достигается благодаря широкому иммунному ответу. Это означает, что он обеспечивает перекрестную защиту от различных штаммов. | Конструкции реассортированной вакцины должны содержать общие антигены ротавируса человека. |
Мотивы создания изобретения
Таким образом, известно, что ротавирус очень чувствителен к кислым средам (Estes, M., Graham, D., Smith, E. and Gerba, С. (1979). Rotavirus Stability and Inactivation. Journal of General Virology, 43(2), pp. 403-409). Также сообщалось, что вирус младенческого гастроэнтерита (infantile gastroenteritis) становится нестабильным и происходит разрушение внешней оболочки и капсомеров указанных вирусов под действием среды, имеющей рН менее 3,0 (Palmer E., Martin, M. and Murphy, F. (1977). Morphology and Stability
- 2 043650 of Infantile Gastroenteritis Virus: Comparison with Reovirus and Bluetongue Virus. Journal of General Virology, 35(3), pp. 403-414). Также сообщалось, что многие штаммы ротавируса инактивировались в течение минуты под действием среды, имеющей рН 2, и сходные результаты были получены с применением желудочного сока человека, имеющего рН 1,8 (Weiss, С. and Clark, H. (1985). Rapid Inactivation of Rotaviruses by Exposure to Acid Buffer or Acidic Gastric Juice. Journal of General Virology, 66(12), pp. 2725-2730). Также сообщалось, что ротавирус человека серотипа 1 полностью инактивируется под действием среды, имеющей рН 2,5 (Meng, Z., Birch, С., Heath, R. and Gust, I. (1987). Physicochemical Stability and Inactivation of Human and Simian Rotaviruses. Applied and Envirnmental Microbiology, 53(4), pp. 727-730). Известно, что ротавирус в целом очень нестабилен под действием кислых сред и быстро инактивируется. Скорости инактивации трех ротавирусов коров и нескольких ротавирусов, происходящих от приматов, определяли при воздействии кислотных буферов при рН 2,0, рН 3,0 или рН 4,0. Каждый ротавирус очень быстро инактивировался при рН 2,0 (кислотности, наиболее сходной с нормальной кислотностью желудка натощак), при этом было определено, что периоды полужизни с сохранением инфекционности составляли 1 мин или менее. Каждый ротавирус инактивировался с гораздо меньшей скоростью при рН 3,0; инактивация при рН 4,0 была минимальной. Были обнаружены некоторые различия в устойчивости к кислотам между различными штаммами ротавируса. Несмотря на то, что указанные определения выполняли при комнатной температуре (23°C), эксперименты при различных температурах свидетельствовали о еще более высокой скорости инактивации вируса под действием кислоты при нормальной температуре тела (37°C). Исследования ротавируса, подвергнутого воздействию натурального желудочного сока человека при рН 1,8 или рН 2,1, выявили скорость вирусной инактивации, сходную со скоростью, отмеченной с применением глицинового буфера с таким же рН. (Ref: Geigy Scientific Tables, volume 1, 1981, page 126).
Инактивация ротавируса происходит при рН от 2,0 до 3,0, но при рН 4,0 инактивации не происходит, или она минимальна. Поскольку желудок содержит среду с высоким содержанием желудочной кислоты, до настоящего времени было крайне необходимо добавлять буферы в составы ротавирусной вакцины, буферы в составах на основе ротавирусов способствуют поддержанию постоянного рН указанных составов ротавирусной вакцины, что, таким образом, обеспечивает антацидную или буферную способность указанных составов вакцины. Антацидная способность (также именуемая кислотонейтрализующей способностью) ротавирусных вакцин была измерена с помощью анализов Россетта-Райс для детей (Baby Rossett Rice Assays) в патентах GSK. Кислотонейтрализующую способность конкретного состава определяют как измеренное время поддержания рН выше 4,0 и оценивают с помощью анализа Россетта-Райс для детей. Как сообщается, в анализе Россетта для детей (Baby Rosset assay) якобы моделируется внутрижелудочная среда желудка человека. В недавнем патенте GSK US 8821891 B2 предложена более низкая концентрация фосфатов при повышенной концентрации карбоксилата, предпочтительно адипата, составляющей от 100 мМ до 1 М, предпочтительно от 400 до 700 мМ, в объеме дозы ротавирусной вакцины всего лишь 1,5 мл из расчета на дозу для человека. Адипат действует как буфер, способный противостоять высокой кислотности желудка (рН 1-2). Способность противостоять воздействию кислой среды желудка человека измеряют с помощью анализа Россетта-Райс для детей с получением значения от 8 до 23 мин, которое, как сообщается, позволяет, и которого достаточно, чтобы избежать инактивации ротавирусного антигена в составе вакцины после введения указанной ротавирусной вакцины ребенку.
Таким образом, для эффективного введения ротавирусной вакцины, которая способна обеспечивать индуцирование иммуногенного ответа, достаточного для обеспечения защиты от ротавирусных инфекций, необходимо по меньшей мере от 1,5 до 2 мл состава ротавирусной вакцины или восстановленной вакцины из расчета на дозу для человека для перорального введения, чтобы эффективно обеспечить прохождение ротавирусного антигена через сильнокислую среду желудка. Таким образом, с помощью приведенных выше описаний состояния в области ротавирусных вакцин, доступных до настоящего времени, специалисты в данной области техники также смогут легко понять и признать, что ротавирусный антиген представляет собой крайне неустойчивый к кислотам антиген, и для введения ротавирусной вакцины всегда требуется антацидный или буферный компонент, в результате чего повышается необходимое количество (из расчета дозировки в объемах на единицу вакцины) вводимой вакцины.
Также несомненно, что ротавирусный антиген представляет собой крайне нестабильный вирус, и учитывается ситуация, когда живой аттенуированный антиген ротавирусной вакцины может быть более нестабильным; таким образом, указанный ротавирусный антиген дополняется соответствующими специальными стабилизаторами вакцины для обеспечения стабилизации составов вакцины, что увеличивает величину дозы указанной вакцины из расчета по объему на единицу вакцины. Кроме того, включение буферов или антацидов или необходимость восстановления вакцины с применением разбавителя вакцины на основе буфера также увеличивает величину дозы вакцины из расчета по объему на единицу вакцины. Следовательно, обеспечение ротавирусной вакцины, не содержащей буфера/антацида, несомненно, уменьшит объем дозы на единицу вакцины. В то же время крайне необходимо, чтобы такое отсутствие буфера в ротавирусной вакцине не ухудшало бы эффективность и стабильность ротавирусной вакцины.
Поскольку субъектом-реципиентом ротавирусной вакцины всегда является ребенок в возрастной группе от 6 недель до 6 месяцев, вполне вероятно, что значительное количество состава ротавирусной вакцины, введенного в рот ребенка, прольется. Это создает риск частичного введения вакцины, в резуль
- 3 043650 тате чего снижается эффективность процедуры вакцинации и не происходит защиты от заболевания, несмотря на получение указанной вакцины. Таким образом, всегда желательно, чтобы величина дозы из расчета по объему на единицу ротавирусной вакцины была максимально снижена без ухудшения эффективности состава вакцины. В настоящее время минимальный объем дозы для ротавирусной вакцины, известный из уровня техники, составляет от 1,5 до 2,5 мл. Вакцины содержат стабилизаторы вакцин и буферы для вакцин, увеличивающие общий объем дозы указанных вакцин. Таким образом, снижение объема дозы на единицу ротавирусной вакцины при сохранении такой же способности повышать необходимую иммуногенность для профилактики ротавирусных инфекций у детей уменьшит вероятность проливания состава вакцины, вводимого ребенку. Таким образом, было бы совершенно не очевидно предоставление не содержащего буфера состава ротавирусной вакцины в малых дозах, составляющих не более 1 мл, предпочтительно всего 0,8 мл или наиболее предпочтительно всего 0,5 мл из расчета на дозу для человека, который столь же или, скорее, более эффективен, чем ротавирусная вакцина (вакцины), предоставленная с буферами или антацидами, имеющая большой объем дозы на единицу вакцины.
В уровне техники раскрыты составы ротавирусной вакцины, все из которых должны быть стабилизированы в жидких составах при температурах охлаждения в диапазоне 5±3°C или в виде лиофилизированных порошков, в случае которых требуется восстановление вакцины перед введением указанной вакцины с применением подходящего разбавителя. Уже обсуждалось, что восстановление вакцины в случае лиофилизированного порошка требует определенных навыков и осторожности. Кроме того, отдельные производственные требования к разбавителям помимо требований к вакцине удваивают затраты на производство вакцины, а также транспортные расходы. Недостаток квалификации, осторожности и соответствующей инфраструктуры для складских нужд усугубляет проблему с поставками лиофилизированной ротавирусной вакцины. Для жидких вакцин при 5±3°C срок годности ограничен только 2 годами. Также происходит снижение титра, относящееся к вакцинам, предоставленным при 2-8°C, во время хранения и транспортировки, которое является нежелательным. Но было обнаружено, что в случае составов ротавирусной вакцины при -20°C вообще не происходило потерь при транспортировке и хранении. Вероятность контаминации вакцин также снижается в гораздо большей степени в случае вакцин при -20°C. Кроме того, центр по снабжению вакцинами (vaccine supply facility) при -20°C уже создан почти в 120 странах мира для поставок полиомиелитной вакцины. Таким образом, существующие хранилища вакцин и поставки вакцин, аналогичные поставкам полиомиелитной вакцины, в значительной степени способствовали бы снижению бремени ротавирусных заболеваний во всем мире. Желательно разработать альтернативные стратегии, при которых будет дополнительно повышена стабильность ротавирусной вакцины, чтобы указанная вакцина была бы доступна в самых отдаленных местах земного шара. Таким образом, в настоящей патентной заявке раскрываются новые составы ротавирусной вакцины, и указанные составы ротавирусной вакцины стабильны в течение по меньшей мере 5 лет, являются абсолютно новыми и совершенно не раскрыты в уровне техники.
Задача настоящего изобретения
Основной задачей настоящего изобретения является обеспечение не содержащей буфера и устойчивой к кислой среде ротавирусной вакцины.
Еще одной основной задачей настоящего изобретения является обеспечение ротавирусной вакцины с малым объемом дозы, составляющим не более 1 мл или даже всего 0,8 мл, предпочтительно 0,5 мл.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение стабильной композиции ротавирусной вакцины с объемом вакцины, составляющим всего лишь 0,5 мл на дозу.
Другой задачей настоящего изобретения является уменьшение проливания ротавирусной вакцины и минимизация связанных с вакциной потерь реципиентом указанной вакцины и повышение тем самым комплаентности к вакцинации.
Другой задачей настоящего изобретения является получение композиции ротавирусной вакцины, которая не требует применения каких-либо специфических методов разбавления или восстановления до или во время введения вакцины.
Еще одной задачей настоящего изобретения является обеспечение ротавирусной вакцины, которая является стабильной в течение по меньшей мере 5 лет при -20°C.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение ротавирусной вакцины с малым объемом дозы, которая является стабильной в течение 2 лет при 5±3°C, 6 месяцев при 25°C и 1 недели при 37°C.
Еще одной задачей настоящего изобретения является обеспечение не содержащей буфера композиции ротавирусной вакцины с малым объемом дозы, составляющим не более 1 мл, которая является стабильной в желудке при рН от 2 до 4 в течение по меньшей мере 20 мин.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение не содержащей буфера композиции ротавирусной вакцины с малым объемом дозы, составляющим не более 1 мл, которая является стабильной при кислом рН 2-4 без какого-либо добавления буферов или агентов, стабилизирующих кислоты.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение не содержащей буфера кислотоустойчивой композиции ротавирусной вакцины с малым объемом дозы, которая не требует введения ка
- 4 043650 кого-либо антацида или буфера до, или после, или во время введения указанной вакцины субъекту.
В качестве альтернативы задачей настоящего изобретения также является обеспечение ротавирусной вакцины с малым объемом дозы, составляющим 0,5 мл, наряду с присутствием буфера, которая столь же эффективна против ротавирусных инфекций у людей.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение ротавирусной вакцины с малым объемом дозы, не содержащей буфера, которая способна обеспечивать индуцирование аналогичного или более сильного иммунного ответа по сравнению с иммунным ответом, индуцируемым ротавирусными вакцинами, композиции которых дополнены антацидами или буферами.
Краткое описание изобретения
Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения предложена композиция вакцины, для которой снижение титра ротавирусной вакцины составляет не более 0,55 ФОЕ/на 0,5 мл при рН 2-4 в течение периода, составляющего по меньшей мере один час.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предложена композиция вакцины, для которой снижение титра ротавирусной вакцины составляет не более 0,68 ФОЕ/на 0,5 мл при рН 2-4 в течение периода, составляющего по меньшей мере 20 мин.
В еще одном варианте реализации настоящего изобретения предложены различные композиции ротавирусной вакцины при объеме дозы, составляющем от 1 мл до 0,5 мл, причем указанные составы вакцины не содержат каких-либо буферов или антацидов и характеризуются незначительным снижением титра вакцины при рН 2 и рН в течение периода времени, составляющего 30 мин.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предложены значения кислотонейтрализующей способности композиции ротавирусной вакцины с малым объемом дозы, составляющим от 0,5 до 1 мл на единицу вакцины, по сравнению с композициями ротавирусной вакцины в присутствии буферов, установленные с помощью анализов Россетта-Райс для детей.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предложена не содержащая буфера ротавирусная вакцина с объемом дозы всего 0,5 мл, которая способна обеспечивать индуцирование аналогичного или более сильного иммунного ответа из расчета по четырехкратной сероконверсии после вакцинации по сравнению с иммунным ответом согласно сероконверсии, индуцируемой с применением состава вакцины в присутствии буферов или при введении антацидов.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предложен способ профилактики ротавирусной диареи у людей, включающий стадии введения эффективного количества стабилизированного состава ротавирусной вакцины, содержащего штамм ротавируса 116Е, комбинацию сахаров, выбранных из сахарозы, лактозы и трегалозы, гидролизат лактальбумина, рекомбинантный сывороточный альбумин человека, без присутствия какого-либо буферного состава в указанном составе ротавирусной вакцины.
В еще одном варианте реализации настоящего изобретения предложены стабильные композиции ротавирусной вакцины, которые являются стабильными при -20°C в течение по меньшей мере 5 лет.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предложены стабильные композиции ротавирусной вакцины при 2-8°C, 25°C и 37°C в течение 2 лет, 6 месяцев и 3 недель соответственно.
Подробное описание изобретения
Вариант реализации 1: Полученные с применением буфера составы на основе ротавируса и кислотность желудка
В приведенном выше разделе, описывающем уровень техники, было упомянуто, что применение буферов является общепринятой стратегией приготовления ротавирусной вакцины, которую до настоящего времени использовали различные производители ротавирусной вакцины, и поэтому состав ротавирусной вакцины (Rota vaccine), содержащий штамм 116Е при -20°C (SPG и модифицированную по способу Дульбекко минимальную питательную среду (DMEM)), исследовали с применением цитратнобикарбонатного буфера и условий физиологического раствора.
Компания Bharat Biotech International Limited получала штаммы ротавпруса 116Е человека из Национального института здравоохранения (National Institute of Health) в рамках соглашения о передаче материалов с Национальным институтом аллергических и инфекционных заболеваний (National Institute of Allergy and Infectious Diseases, NIAID), NIH, Бетесда, США. Полная геномная последовательность штаммов ротавируса 116Е уже описана в литературе.
Три состава ротавирусной вакцины с ротавирусом 116Е, хранившиеся при -20°C, относили к 3 группам (группам I, II и III), подробно описанным ниже. Композиции ротавирусной вакцины во всех трех группах, описанных ниже, содержали живой аттенуированный ротавирусный антиген штамма 116Е, растворенный в 10% SPG (сахарозе, дигидрофосфате калия и гидрофосфате калия) и модифицированной по способу Дульбекко минимальной питательной среде. Указанные составы вакцины обрабатывали отдельно друг от друга, как подробно описано ниже.
Группа I: 0,5 мл состава А с ротавирусом 116Е при -20°C.
Группа II: 2 мл (эквивалентно 4 дозам для человека по 0,5 мл из расчета на дозу для человека) состава А с ротавирусом 116Е, смешанного с 5 мл физиологического раствора.
Группа III: 0,570 мл состава А с ротавирусом 116Е + смесь [1,42 мл цитратно-бикарбонатного буфера + 8 мл 34,8 мЭкв HCl].
- 5 043650
Как указано выше, группа I включала состав ротавирусной вакцины при -20°C, причем к указанному составу вакцины не был добавлен буфер или физиологический раствор, и титр вакцины измеряли в течение следующих 120 мин. В случае группы II обеспечивали 2 мл состава вакцины с ротавирусом 116Е (хранившегося при -20°C) и добавляли 5 мл физиологического раствора, и титр вакцины измеряли при целевом титре 10Л6 ФОЕ/мл в течение не более 120 мин. В случае группы III обеспечивали 0,57 мл состава вакцины с ротавирусом 116Е (хранившегося при -20°C) и добавляли 1,42 мл цитратнобикарбонатного буфера и 8 мл 34,8 мЭкв хлористоводородной кислоты.
Таблица 2. Титры вакцины в случае составов ротавирусной вакцины (при температуре хранения -20°C) в присутствии буферов через 0, 60 и 120 мин
| № группы | 0 мин в ФОЕ/0,5 мл | 60 мин в ФОЕ/мл | 120 мин в ФОЕ/мл | Примечания |
| Группа I | 106’35 | 106’17 | 106’32 | Очень стабильный |
| Группа II | 105’76 | 10534 | 105,69 | Довольно стабильный |
| Группа III | 104’61 | 105’30 | 105’11 | Довольно стабильный |
Таким образом, приведенная выше таблица подтверждает, что при воздействии на вирус условий физиологического раствора или в присутствии буферных растворов титр ротавирусного антигена является стабильным, и, следовательно, стабильна указанная вакцина.
Вариант реализации 2: Иммунопероксидазный анализ составов ротавирусной вакцины при разных значениях рН.
Пример 1: Иммунопероксидазный анализ проводили после того, как составы ротавирусной вакцины подвергали прямому воздействию кислой среды путем непосредственного добавления к составу ротавирусной вакцины 34,8 мЭкв хлористоводородной кислоты (HCl). рН составов вакцины снижали непосредственно с рН 7 до различных более низких значений рН, составлявших рН 2 и рН 4, путем прямого добавления кислоты, и затем титр антигена вакцины или к вакцине измеряли при указанных более низких значениях рН 2 и рН 4. После этого титр вакцины измеряли в течение не более 1 ч при различных более низких значениях рН, составлявших 2 и 4. Были сделаны следующие наблюдения. Реакционную смесь исследовали в различные моменты времени и при различных уровнях рН. Подробности представлены ниже в табл. 3. Указанные составы ротавирусной вакцины (при температуре хранения -20°C) содержат живой аттенуированный ротавирусный антиген 116Е, 10% SPG (фосфат-глутамат натрия), растворенный в модифицированной по способу Дульбекко минимальной питательной среде.
Таблица 3. Результаты иммунопероксидазного анализа при целевом титре 10Л5,0 ФОЕ/0,5 мл дозы через 0 и 60 мин после непосредственного добавления кислоты к составам ротавирусной вакцины (температура хранения: -20°C)
| Подробно сти об образце | Титр в ФОЕ/0,5 мл дозы | Примечания | ||||
| Фактиче ский титр в 0 минуту | Скорректи рованный титр с коэффицие нтом разбавлени я в 0 минуту | Фактическ ий титр через 1 час | Скорректир ованный титр с коэффицие нтом разбавлени я через 1 час | Log снижени я через1 час | ||
| 0,5 мл состава вакцины с ротавирус ом 116Е при pH 7,4 | 104,95 | н/д | 104,94 | 104,94 | - | - |
| 0,5 мл состава вакцины с ротавирус ом 116Е + 34,8 мЭкв НС1 при pH 4,0 | 103’58 | 105’05 | 103’58 | 105’05 | Nil | Отсутствие влияния pH |
| 0,5 мл состава вакцины с ротавирус ом 116Е + 34,8 мЭкв НС1 при pH 2,0 | 103’54 | 105’01 | 102’93 | ю4’40 | 0,55 | Незначитель ное влияние pH |
Примечание: Рассчитанное снижение значения титра инфекционности в результате разбавления =
- 6 043650
101,47 ФОЕ. Таким образом, фактический титр вакцины после разбавления составляет 102,93 при рН 2. Все образцы титровали в трех повторностях с помощью иммунопероксидазного анализа. Пероральная ротавирусная вакцина (целевой титр 105,0 ФОЕ/0,5 мл) была стабильной при рН 4,0. Целевой титр означает минимальную концентрацию антигена ротавируса 116Е во флаконе с вакциной, которую нужно достичь в указанном флаконе. Исходный титр при нейтральном рН вакцины составляет 104,95 ФОЕ/0,5 мл на 0-ую минуту. Титр вакцины при рН 2 на 0-ую минуту составляет 103,54 ФОЕ/0,5 мл, и его значение падает до 102,93 ФОЕ/0,5 мл в течение 1 ч. Таким образом, после прибавления значения коэффициента разбавления 1,47 в результате добавления кислоты к фактическому значению титра (102,93 ФОЕ/0,5 мл) скорректированный титр вакцины при рН 2 через 1 ч после добавления кислоты составляет 104,40, что сравнимо с исходным титром вакцины 104,95 при рН 7 на 0-ую минуту. Таким образом, вакцина имела log общего снижения титра вакцины только 0,55 при рН 2,0 в течение 1 ч. Это подтверждает, что даже при более низком значении рН, составляющем 2, то есть в конкретной кислой среде, содержащейся в желудке человека, состав ротавирусной вакцины способен поддерживать титр вакцины на значении 104,40 ФОЕ/0,5 мл. При таком титре вакцины она способна индуцировать достаточный иммунный ответ на последующие ротавирусные инфекции. В клиническом испытании, проведенном с применением вакцины Rota 116E с титром 104,0, указанная вакцина обеспечивала 4-кратную сероконверсию примерно 62%, что является вполне обнадеживающим результатом. (Nita Bhandari et al, J Infect Dis 2009, 200, 421-9).
Пример 2.
Тот же эксперимент повторяли с другой вакциной (при температуре хранения -20°C), при этом целевой титр составил 10Л6,0 ФОЕ/0,5 мл (доза). Рассчитанные значения титра совместно с коэффициентом разбавления приведены в таблице ниже при различных значениях рН на 0-ую минуту и через 1 ч. Указанные составы ротавирусной вакцины (при температуре хранения -20°C) содержат живой аттенуированный ротавирусный антиген 116Е, 10% SPG, растворенный в DMEM.
Таблица 4. Результаты иммунопероксидазного анализа при целевом титре 10Л6,0 ФОЕ/0,5 мл дозы через 0 и 60 мин после непосредственного добавления кислоты к составам ротавирусной вакцины (температура хранения: -20°C)
| Сведения об образце вакцины | pH | Скорректированн ый титр с коэффициентом разбавления при 0’ ч в ФОЕ/0,5 мл | Скорректированн ый титр с коэффициентом разбавления через 1 час в ФОЕ/0,5 мл | Log снижения через 1 час | Примечания |
| 0,5 мл состава вакцины с ротавирусом 116Е | 7,2 | 105’35 | 105’30 | 0,05 (нет снижения) | Отсутствие влияния pH |
| 0,5 мл состава вакцины с ротавирусом 116Е + 34,8 мЭкв НС1 | 4,0 | 105’33 | 105’09 | 0,24 (незначительное снижение) | Отсутствие влияния pH |
| 0,5 мл состава вакцины с ротавирусом 116Е + 34,8 мЭкв НС1 | 2,0 | 104’89 | 104’21 | 0,68 (незначительное снижение) | Незначительное влияние pH |
Вывод: При рН 4,0 в образцах вакцины происходило снижение титра вакцины, log которого составлял всего 0,24, что можно считать отсутствием влияния рН в практических условиях, поддерживаемых в течение 1 ч. При рН 2,0 происходило снижение титра, log которого составлял 0,46 на момент 0 ч, и log10 которого в ФОЕ составлял 0,68 через 1 ч. Это говорит о том, что рН оказывает очень незначительное влияние на значения титра вакцины при таком более низком значении кислого рН, как рН 2.
Из таблицы, приведенной выше, видно, что титр вакцины 10Л4,89 ФОЕ/0,5 мл при рН 2 снижается до значения титра 10Л4,21 ФОЕ/0,5 мл; log титра в пределах 4,89-4,21 вполне достаточен для репликации ротавируса в ЖКТ ребенка возрастом от 6 недель до 2 лет. Кислотность желудка ребенка также составляет рН 2, что отражает модель внутрижелудочной среды. Вакцина по-прежнему способна сохранять свое действие при титре, Log 10 которого в ФОЕ/0,5 мл составляет 4,89, который является достаточным для прохождения через желудок и последующего проникновения в кишечные ворсинки и для дальнейшей репликации ротавируса, ответственного за индуцирование иммунного ответа у ребенка, что обеспечивает защиту от ротавирусного гастроэнтерита и его предотвращение. Таким образом, было обнаружено, что вакцина стабильна при кислом рН, составляющем 2, в течение по меньшей мере 1 ч без какоголибо значительного снижения титра вакцины.
Вариант реализации 3: In vitro эксперимент для демонстрации того, что для вакцины, содержащей
- 7 043650 ротавирус 116Е, не требуется антацида:
Помимо выводов из результатов клинического исследования, которые приведены далее в настоящем описании, также проверяли введение вакцины непосредственно без буфера при моделировании сходных условий воздействия кислой среды желудка in vitro.
Пример 3.1.
Обеспечивали 1 мл вакцины (состава 3A), содержавшей ротавирус 116Е, комбинацию сахарозы (50%), лактозы (0,5%) и трегалозы (0,5%), гидролизат лактальбумина (1%), сывороточный альбумин человека (0,4%), добавляли 1,25 мл 0,1н. HCl и хорошо перемешивали. Отбирали образец и испытывали на содержание вируса при различных уровнях рН через различные промежутки времени. Результаты представлены в табл. 5.1 ниже.
Таблица 5.1. Иммунопероксидазный анализ 1 мл вакцины с ротавирусом 116Е (состава 3A)
| № обр. | Сведения об образце | Содержание вируса (ФОЕ/мл) |
| 1 | pH 2,0 - 0 минут | 5,72 |
| 2 | pH 2,0 - 10 минут | 4,78 |
| 3 | pH 2,0 - 30 минут | 3,84 |
| 4 | pH 3,0 - 0 минут | 5,96 |
| 5 | pH 3,0 - 10 минут | 5,96 |
| 6 | pH 3,0 - 30 минут | 5,91 |
| 7 | Контроль | 6,10 |
Пример 3.2.
К 0,8 мл вакцины, содержавшей ротавирус 116Е, комбинацию сахарозы (40%) и трегалозы (0,5%), гидролизат лактальбумина (20%), поливинилпирролидин (0,5%) (состава 3B), добавляли 1,25 мл 0,1н. HCl и хорошо перемешивали. Отбирали образец и определяли содержание вируса при различных уровнях рН через различные промежутки времени. Результаты представлены в табл. 5.2 ниже.
Таблица 5.2. Иммунопероксидазный анализ 0,8 мл вакцины с ротавирусом 116Е (состава 3B)
| № обр. | Сведения об образце | Содержание вируса (ФОЕ/мл) | Содержание вируса (ФОЕ/0,8 мл) |
| 1 | pH 2,0-0 минут | 4,71 | 4,62 |
| 2 | pH 2,0 - 10 минут | 4,69 | 4,60 |
| 3 | pH 2,0 - 30 минут | 4,41 | 4,32 |
| 4 | pH 3,0 - 0 минут | 5,97 | 5,88 |
| 5 | pH 3,0 - 10 минут | 5,94 | 5,85 |
| 6 | pH 3,0-30 минут | 5,93 | 5,84 |
| 7 | Контроль | 6,10 |
Пример 3.3.
К 0,5 мл вакцины с ротавирусом 116Е, содержавшей комбинацию сахарозы (60%) и трегалозы (0,5%), соевый белок (20%), пиридоксин-HCl (0,1%), поливинилпирролидин (0,25%) (состава 3C), добавляли 1,25 мл 0,1н. HCl и хорошо перемешивали. Отбирали образец и испытывали на содержание вируса при различных уровнях рН через различные промежутки времени. Результаты представлены в табл. 5.3 ниже.
Таблица 5.3. Иммунопероксидазный анализ 0,8 мл вакцины с ротавирусом 116Е (состава 3C)
| № обр. | Сведения об образце | Содержание вируса (ФОЕ/0,5 мл) |
| 1 | pH 2,0 - 0 минут | 4,29 |
| 2 | pH 2,0 - 10 минут | 4,21 |
| 3 | pH 2,0 - 30 минут | 3,39 |
| 4 | pH 3,0 - 0 минут | 5,20 |
| 5 | pH 3,0 - 10 минут | 5,17 |
| 6 | pH 3,0 - 30 минут | 5,08 |
| 7 | Контроль | 5,80 |
Пример 3.4.
К 0,5 мл вакцины с ротавирусом 116Е, содержавшей 10% SPG, растворенный в DMEM (состава 3D), добавляли 1,25 мл 0,1н. HCl и хорошо перемешивали. Отбирали образец и испытывали на содержание вируса при различных уровнях рН через различные промежутки времени. Результаты представлены в табл. 5.4 ниже.
- 8 043650
Таблица 5.4. Иммунопероксидазный анализ 0,8 мл вакцины с ротавирусом 116Е (состава 3D)
| № обр. | Сведения об образце | Содержание вируса (ФОЕ/0,5 мл) |
| 1 | pH 2,0 - 0 минут | 4,78 |
| 2 | pH 2,0 - 10 минут | 4,48 |
| 3 | pH 2,0-30 минут | 4,29 |
| 4 | pH 3,0 - 0 минут | 5,22 |
| 5 | pH 3,0 - 10 минут | 5,17 |
| 6 | pH 3,0 - 30 минут | 4,70 |
| 7 | Контроль | 5,80 |
Пример 3.5.
К 0,5 мл вакцины с ротавирусом 116Е, содержавшей сахарозу (40%), трегалозу (0,5%), лактозу (5%), рекомбинантный сывороточный альбумин человека (rHSA) (0,5%), гидролизат лактальбумина (LAH) (1%) и смешанный буфер (ацетат аммония + бикарбонат аммония + гидроортофосфат аммония) (состава 3D), добавляли 1,25 мл 0,1н. HCl и хорошо перемешивали. Отбирали образец и испытывали на содержание вируса при различных уровнях рН через различные промежутки времени. Результаты представлены в табл. 5.5 ниже.
Таблица 5.5. Иммунопероксидазный анализ 0,8 мл вакцины с ротавирусом 116Е (состава 3D)
| № обр. | Сведения об образце | Содержание вируса (ФОЕ/0,5 мл) |
| 1 | pH 2,0-0 минут | 4,77 |
| 2 | pH 2,0 - 10 минут | 4,65 |
| 3 | pH 2,0 - 30 минут | 4,39 |
| 4 | pH 3,0 - 0 минут | 5,21 |
| 5 | pH 3,0 - 10 минут | 5,19 |
| 6 | pH 3,0 - 30 минут | 4,87 |
| 7 | Контроль | 5,80 |
Выводы: Из приведенных выше таблиц очевидно, что при рН 2,0 в течение 30 мин любые составы вакцины, содержащие ротавирус 116Е, также способны быть устойчивыми при отсутствии какого-либо буфера или какого-либо антацида.
Вариант реализации 4. Анализ Россетта-Райс для детей (BRR)
Анализ BRR представляет собой валидированную методику для кислотонейтрализующей способности составов ротавирусной вакцины. Таким образом, выбранные составы вакцины, содержащие цитратно-фосфатный буфер и цитратно-бикарбонатный буфер, оценивают на кислотонейтрализующую способность с использованием указанного анализа. Эксперименты in vitro проводили в смоделированных условиях желудочной среды ребенка с применением анализа Россетта-Райс для детей (BRR). Различные составы с различными комбинациями буферных агентов были выбраны для экспериментов по нейтрализации кислотности, и результаты представлены в таблице ниже при различных значениях рН, при которых были смоделированы условия, соответствующие желудочной среде ребенка. Составы вакцин разбавляли водой для инъекций до 10 мл, затем добавляли 4 мл 0,1н. HCl, после чего добавляли 0,5 мл в минуту 0,1н. HCl до достижения рН 4,0. Кислотонейтрализующую способность (ANC) определяют как время в минутах, необходимое для поддержания рН выше 4,0.
- 9 043650
Таблица 6. Подробные сведения о составах вакцины
| Состав вакцины 4А | Антиген ротавируса 116Е с целевым титром 10Л6 ФОЕ/0,5 мл; 10% SPG и DMEM (достаточное количество) |
| Состав вакцины 4В | Антиген ротавируса 116Е с целевым титром 10Л6 ФОЕ/0,5 мл; 10% SPG и DMEM (достаточное количество), добавленные к 2,5 мл цитратнобикарбонатного буфера |
| Состав вакцины 4 С | Антиген ротавируса 116Е с целевым титром 10Л6 ФОЕ/0,5 мл, комбинация по меньшей мере 2 сахаров (50% сахарозы и 0,5% трегалозы) и 0,5% гидролизата лактальбумина. (Образец 8 ниже). |
| Состав вакцины 4D | Антиген ротавируса 116Е с целевым титром 10Л6 ФОЕ/0,5 мл, комбинация по меньшей мере 2 сахаров (40% сахарозы, 0,5% трегалозы), 0,5% гидролизата лактальбумина, 0,35% сывороточного альбумина человека и 1,1 М фосфатный буфер. |
В ходе анализа Россетта-Райс для детей, проведенного с применением составов вакцины 4A-4D, указанных выше, были сделаны следующие наблюдения (табл. 7).
Таблица 7. Анализ Россетта-Райс для детей в отношении составов ротавирусной вакцины с буфером ____________по сравнению с составами без него___________
| Составы вакцины | Исходный pH | pH после добавления кислоты | Объем добавленной 0,1 и. НС1 | Значения анализа Россетта-Райс для детей | Исходные титры вакцины в ФОЕ/0,5 мл | Титры вакцины в ФОЕ/0,5 мл через 1 час |
| Состав вакцины 4А при -20°С без буфера с дозой 0,5 мл | 7,48 | 1,95 | 4,0 мл | BRR менее 0 минут (мгновеннное падение pH) | 10Л4,83 | 1ОЛ3,83 |
| Состав вакцины 4В при -20°С с 2,5 мл цитратнобикарбонатного буфера с дозой 0,5 мл | 8,35 | 4,22 | 10,0 мл | BRR 12 минут | 10л6,17 | 10л6,15 |
| Состав вакцины 4С при 5+3 °C без буфера с дозой 0,5 мл | 7,28 | 3,98 | 5,0 мл | BRR 2 минуты | 10л5,30 | 10л5,02 |
| Состав вакцины 4D при 5+3°С с буфером в дозе 1,5 мл или 2 мл | 6,75 | 4,33 | 10,5 мл | BRR приблизительно 13 минут | 10л6,12 | 10л6,11 |
Вывод: Таким образом, из приведенной выше таблицы видно, что даже для состава вакцины 4А, указанного выше, который демонстрирует мгновенное падение рН от 7,48 до 1,95, титр вакцины удерживается в интервале от 10Л4,83 ФОЕ/0,5 мл до 10Л3,83 ФОЕ/0,5 мл. Таким же образом, и в случае состава вакцины 4С титр вакцины удерживается в интервале от 10Л5,30 до 10Л5,02 ФОЕ/0,5 мл, когда значение рН падает от 7,28 до 3,98 в течение 2 мин. Таким образом, даже если значение BRR составляет всего 2 мин, титр вакцины удерживается на приемлемом уровне, т.е. составляет 10Л5,02 ФОЕ/0,5 мл. Этой значительной величины титра вакцины достаточно для обеспечения индуцирования иммунного ответа и тем самым обеспечения защиты от ротавирусного гастроэнтерита и его предотвращения у детей.
Вариант реализации 4: Клиническое испытание вакцины ROTAVAC®, содержащей штамм ротавируса 116Е, без добавления буфера.
Гипотеза и обоснование исследования
Предполагается, что естественная передача ротавируса происходит фекально-оральным путем. Ротавирусы в целом являются кислотонеустойчивыми, и считается, что кислая среда влияет на жизнеспособность указанного вируса.
Учитывая кислотонеустойчивую природу ротавирусов, они крайне успешно обеспечивают повсеместное заражение млекопитающих, большая часть которых имеет значения рН желудка, составляющие примерно 2. Одно из предположений заключается в том, что желудок ребенка может быть несколько более податливым для выживания ротавируса, чем желудок взрослого человека, так как уровень рН в желудке ребенка обычно составляет приблизительно 3,2 по сравнению со значением для взрослых, составляющим приблизительно 1,0. Это могло бы объяснить тот факт, что от 60 до 90% отмечаемых у человека случаев ротавирусного заболевания встречаются у детей в возрасте младше 3 лет.
План исследования
Для того чтобы проверить эту гипотезу, было проведено большое многоцентровое рандомизиро
- 10 043650 ванное контролируемое испытание для оценки и сравнения иммунного ответа на вакцину у субъектов, получавших вакцину ROTAVAC с цитратно-бикарбонатным буфером, с теми, кто получал ROTAVAC без буфера.
Соответственно, указанное испытание включало следующие три группы лечения:
Группа I (получала ROTAVAC® за 5 мин до введения 2,5 мл буфера),
Группа II (получала ROTAVAC® без буфера),
Группа III (получала ROTAVAC®, смешанную с 2,5 мл буфера непосредственно перед введением).
Исследователь и ответственные за безопасность (координаторы исследования) не знали назначений по группам лечения. Слепое исследование обеспечивала опытная медицинская сестра, которая вводила вакцину в соответствии с обозначенной группой лечения. Все участники исследования получали 3 дозы вакцины с интервалом в 4 недели. Иммунный ответ на вакцину проверяли через 4 недели после третьей дозы вакцины (на 84 день) и сравнивали с исходными значениями (в 0 день). Иммуногенность определяли из расчета по среднегеометрическим титрам (СГТ) сывороточного антиротавирусного IgA и сероконверсии (кратного повышения уровней антител от периода перед вакцинацией до периода после вакцинации) в группах лечения.
Результаты исследования и выводы
Иммунный ответ после вакцинации между группами лечения был сопоставим при отсутствии статистически значимого различия в ответе по антиротавирусному IgA. Важно отметить, что сероконверсия и значения СГТ, полученные в группе II (введение ROTAVAC® без буфера), были сходными со значениями, полученными в двух других группах лечения, в которых ROTAVAC® вводили с буфером.
СГТ антиротавирусного IgA после вакцинации в группе, где ROTAVAC вводили без буфера, составил 20,7 ед/мл в сравнении с 19,6 ед/мл и 19,2 ед/мл в двух группах, которые получали антацидный буфер за 5 мин до вакцины и одновременно в виде смеси с вакциной, соответственно (табл. 8). Различия между группами не были статистически значимыми (р>0,05, Т-критерий Стьюдента).
Таблица 8. Среднегеометрические титры и 95% ДИ для результатов (0 день и 84 день)
| Осмотр | Группа I(N = 290) | Группа II (N = 287) | Группа III (N = 286) | |||
| СГТ | 95% ДИ | СГТ | 95% ДИ | СГТ | 95% ДИ | |
| 0 ДЕНЬ | 10,5 | (9,4, 11,7) | 10,8 | (9,7, 11,9) | 10,2 | (9,2, 11,3) |
| 84 ДЕНЬ | 19,6 | (17,0, 22,7) | 20,7 | (17,9, 24,0) | 19,2 | (16,8, 22,1) |
N = Количество субъектов, оцениваемых в каждой группе;
СГТ = среднее геометрическое;
95% ДИ (НП, ВП) = доверительные интервалы (нижний предел, верхний предел)
Аналогично четырехкратная сероконверсия, наблюдаемая в группах, получавших ROTAVAC® без антацидного буфера и с буфером, имела сходные значения 29,2, 24,5 и 25,1% соответственно (табл. 9). Кроме того, нижний предел 95% доверительного интервала различия в сероконверсии (2-кратной) между группами лечения составлял более -10%, что указывает на неменьшую величину иммунного ответа, достигнутого с применением всех трех схем лечения (табл. 10).
Таблица 9. Сероконверсия и 95% ДИ (2-, 3- или 4-кратное изменение титров антител) между исходными данными и 84 днем после вакцинации
| Кратность изменений | Группа I (N = 290) | Группа II (N = 287) | Группа III (N = 286) | |||
| % | 95% ДИ | % | 95% ДИ | % | 95% ДИ | |
| 2 | 30,7 | (25,7, 36,2) | 35,2 | (29,9, 40,9) | 33,5 | (28,3, 39,2) |
| 3 | 27,6 | (22,8,33,1) | 32,4 | (27,3,38,1) | 31,8 | (26,7, 37,4) |
| 4 | 24,5 | (19,8,29,7) | 29,2 | (24,3, 34,8) | 25,1 | (20,5, 30,5) |
N = Количество субъектов, оцениваемых в каждой группе;
(95% ДИ) = доверительные интервалы (нижний предел, верхний предел)
- 11 043650
Таблица 10. Различие в % 2-кратной сероконверсии после вакцинации в группах лечения
| % 2-кратной сероконверсии после вакцинации (84 день) | ||||||
| Группа I (N = 290) | Группа II (N = 287) | Группа III (N = 286) | ||||
| % | 95% ДИ | % | 95% ДИ | % | 95% ДИ | |
| 84 ДЕНЬ | 30,7 | (25,7, 36,2) | 35,2 | (29,9,40,9) | 33,5 | (28,3, 39,2) |
| Различие в % сероконверсии с 95% ДИ (двусторонний критерий χ-квадрат) | ||||||
| Группа | % (95% ДИ различия) | |||||
| Группа I относительно группы II | 4,5 (-3,5, 12,5) | |||||
| Группа II относительно группы III | 1,6 (-6,5, 9,7) | |||||
| Группа I относительно группы III | 2,9 (-4,7, 10,5) |
Реактогенность и безопасность в отношении запрашиваемых и незапрашиваемых нежелательных явлений были сопоставимы по всем трем группам при отсутствии статистически значимого различия.
Вакцина ROTAVAC® хорошо переносилась во всех трех группах лечения, в которых получали указанную вакцину с антацидным буфером или без него.
Вариант реализации 5: Новые составы, содержащие ротавирус 116Е
Данные о стабильности жидких составов вакцины ORV 116E при 37°C, 25°C и 2-8°C
Были исследованы приведенные ниже составы ротавирусной вакцины с объемом дозы, составляющим 0,5 мл, без буфера (образцы 1-12, 14-16) и со смешанным буфером при объеме дозы 0,5 мл (образец 13) в течение продолжительного периода времени, составляющего вплоть до 5 лет. Ниже приведены подробные сведения о различных составах наряду с данными о их стабильности при 37°C в течение периода вплоть до 4 недель, 25°C в течение по меньшей мере 6 месяцев и при 5±3°C в течение периода вплоть до 2-5 лет. Указанные исследования подтверждают, что указанные составы ротавирусной вакцины без буфера при объемах дозы, составляющих 0,5 мл, также являются стабильными по своей природе в течение продолжительных периодов времени при температурах охлаждения в течение по меньшей мере 2 лет. Также обнаружено, что составы ротавирусной вакцины также являются стабильными в течение периода 5 лет при температурах охлаждения.
Готовили образец 1, содержавший ротавирус 116Е, 50% сахарозы, 0,5% лактозы, 0,5% сывороточного альбумина человека (HSA) и 0,05% гидролизата лактальбумина.
Стабильность образца 1: ____________ _____ ____________________
| Темп. | 0 день | 1М | 2М | зм | 6М | 9М | 12М | 24М | 36М | 60М |
| 5±3 °C | 6,02 | 6,0 | 6,43 | 6,21 | 6,16 | 6,16 | 6,07 | |||
| 25°С | 6,02 | 6,07 | 5,81 | 5,9 | 5,51 | 4,65 | ||||
| 37°С | 6,02 | 5,32 | 2,63 |
Готовили образец 2, содержавший ротавирус 116Е, 50% сахарозы, 0,5% трегалозы, 0,5% HSA и 0,5% гидролизата лактальбумина.
Стабильность образца 2:
| Темп. | 0 день | 1М | 2М | ЗМ | 6М | 9М | 12М | 24М | 36М | 60М |
| 5+3 °C | 6,09 | 6,14 | 6,19 | 6,07 | 6,10 | 6,05 | 6,01 | |||
| 25°С | 6,09 | 6,02 | 6,06 | 5,63 | 5,51 | 2,48 | ||||
| 37°С | 6,09 | 5,47 | 3,23 |
Готовили образец 3, содержавший ротавирус 116Е, 50% сахарозы, 1,0% трегалозы, 0,5% HSA и 0,5% гидролизата лактальбумина.
Стабильность образца 3:
| Темп. | 0 день | 1М | 2М | ЗМ | 6М | 9М | 12М | 24М | 36М | 60М |
| 5±3 °C | 6,22 | 6,24 | 6,26 | 6,14 | 6,20 | 6,13 | 6,04 | |||
| 25°С | 6,22 | 6,18 | 6,15 | 5,80 | 5.34 | 2,03 | ||||
| 37°С | 6,22 | 5,35 | 3,22 |
Готовили образец 4, содержавший ротавирус 116Е, 40% сахарозы, 0,5% лактозы и 1,0% гидролизата лактальбумина.
- 12 043650
Стабильность образца 4:
Готовили образец 5, содержавший ротавирус 116Е, 40% сахарозы, 5,0% мальтозы и 1,0% гидролизата лактальбумина.
Стабильность образца 5:
Готовили образец 6, содержавший ротавирус 116Е, 40% сахарозы, 0,5% трегалозы и 1% гидролизата лактальбумина.
Стабильность образца 6:
| Темп. | 0 день | 1М | 2М | ЗМ | 6М | 9М | 12М | 15М | 24М | 60М |
| 5+3 °C | 6,19 | 6,15 | 6,10 | 6,03 | 6,22 | 6,13 | ||||
| 25°С | 6,19 | 5,87 | 5,43 | 5,12 | 3,25 | |||||
| 37°С | 6,19 | 4,02 | 2,52 |
Готовили образец 7, содержавший ротавирус 116Е, 40% сахарозы, 1,0% трегалозы и 1,0% гидролизата лактальбумина.
Стабильность образца 7:
Готовили образец 8, содержавший ротавирус 116Е, 50% сахарозы, 0,5% трегалозы и 0,5% гидролизата лактальбумина.
Стабильность образца 8:
Готовили образец 9, содержавший ротавирус 116Е, 70% сахарозы, 0,5% трегалозы.
Стабильность образца 9:_____________________________________________________
| Темп. | 0 день | 1М | 2М | ЗМ | 6М | 15М | 18М | 24М | 36М | 60М |
| 5±3 °C | 6,38 | 6,31 | 6,23 | 6,44 | 6,35 | 6,26 | 6,18 | |||
| 25°С | 6,38 | 6,41 | 6,35 | 6,23 | 5,57 | |||||
| 37°С | 6,38 | 5,07 | 4,01 |
Готовили образец 10, содержавший ротавирус 116Е, 50% сахарозы, 0,5% лактозы, 0,5% мальтозы, 0,5% HSA и 0,05% гидролизата лактальбумина.
Стабильность образца 10:
| Темп. | 0 день | 1М | 2М | ЗМ | 6М | 15М | 18М | 24М | 36М | 60М |
| 5+3 °C | 6,25 | 6,15 | 6,03 | 6,34 | 6,08 | 6,12 | 6,11 | 6 | ||
| 25°С | 6,25 | 6,14 | 6,27 | 6,12 | 5,88 | |||||
| 37°С | 6,25 | 5,02 | 4,35 |
- 13 043650
Готовили образец 11, содержавший ротавирус 116Е, 50% сахарозы, 0,5% трегалозы, 0,5% мальтозы, 0,5% HSA.
Стабильность образца 11:
| Темп. | 0 день | 1М | 2М | ЗМ | 6М | 9М | 12М | 24М | 36М | 60М |
| 5±3 °C | 6,68 | 6,62 | 6,95 | 6,84 | 6,64 | 6,65 | 6,37 | 6,72 | 6,05 | |
| 25°С | 6,68 | 6,50 | 6,20 | 6,04 | 5,32 | 4,47 | ||||
| 37°С | 6,68 | 6,10 | 5,58 | 4,26 |
Готовили образец 12, содержавший ротавирус 116Е, 50% сахарозы, 0,5% трегалозы, 0,5% HSA и 0,05% гидролизата лактальбумина.
Стабильность образца 12: _______________________ _____
| Темп. | 0 день | 1М | 2М | ЗМ | 6М | 9М | 12М | 24М | 36М | 60М |
| 5±3 °C | 6,62 | 6,76 | 6,98 | 7,00 | 6,86 | 6,74 | 5,99 | 6,46 | 6,17 | |
| 25°С | 6,62 | 6,46 | 6,42 | 5,99 | 5,13 | 3,25 | ||||
| 37°С | 6,62 | 5,58 | 5,06 |
Готовили образец 13, содержавший ротавирус 116Е, сахарозу (40%), трегалозу (0,5%), лактозу (5%), rHSA (0,5%), LAH (1%) и смешанный буфер (ацетат аммония + бикарбонат аммония + гидроортофосфат аммония).
Стабильность образца 13:
| Темп. | 0 день | 1М | 2М | ЗМ | 6М | 9М | 12М | 24М | 36М | 60М |
| 5±3 °C | 6,61 | 6,59 | 6,58 | 6,60 | 6,53 | 6,54 | 6,18 | 6,01 | 5,83 | |
| 25°С | 6,61 | 6,46 | 6,44 | 5,79 | 5,25 | 4,15 | ||||
| 37°С | 6,61 | 5,56 | 5,01 |
Стабильность образца 13 при -20°C:
| Темп. | 0 день | 1М | 2М | ЗМ | 6М | 9М | 12М | 24М | 36М | 60М |
| -20°С | 6,61 | 6,59 | 6,59 | 6,56 | 6,54 | 6,52 | 6,21 | 6,11 | 6,13 | 6,09 |
Образцы 14, 15 и 16 готовили с применением ротавируса 116Е, 10% SPG, растворенного в DMEM. Образцы 14, 15 и 16 хранили при -20°C, и их стабильность проверяли в течение 60 месяцев. Было обнаружено, что составы вакцины 13, 14 и 15 очень стабильны при -20°C в течение периода по меньшей мере
составляющим 0,5 мл, являются стабильными при -20°C в течение 5 лет, при 2-8°C в течение 2 лет, при 25°C в течение 6 месяцев и при 37°C в течение 1 недели. Также обнаружено, что независимо от состава вакцины указанная ротавирусная вакцина при объеме дозы, составляющем от 0,5 до 1 мл, также является кислотоустойчивой, как представлено в варианте реализации 3 при рН в диапазоне 2-4. Таким образом, заявители хотели бы упомянуть, что независимо от подробных сведений о композициях вакцины любая ротавирусная вакцина, содержащая живой аттенуированный ротавирус 116Е, способна противостоять сильнокислой среде в желудке ребенка и обеспечивать индуцирование необходимого иммунного ответа на ротавирусные инфекции. Составы вакцины, представленные в настоящей патентной заявке, приведены только с целью уточнения широты и объема настоящего изобретения. Заявителю нецелесообразно предоставлять подробные сведения обо всех возможных составах вакцины, хотя заявителем были указа
-
Claims (12)
- ны многочисленные стратегии приготовления в варианте реализации 3, примере 3 и варианте реализации 5. Таким образом, все возможные изменения, очевидные специалисту в данной области техники, для стратегии приготовления ротавирусной вакцины, содержащей штамм ротавируса 116Е, также входят в настоящее изобретение. Следует понимать и соответствующим образом истолковывать, что композиции вакцины, содержащие живой аттенуированный ротавирус 116Е, которые конкретно не включены в настоящую патентную заявку, также входят в объем настоящего изобретения.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Ротавирусная вакцина, содержащая:а) штамм ротавируса 116Е;Ь) комбинацию сахаров, выбранных из сахарозы в концентрации 40-70%, лактозы в концентрации 0,5% и трегалозы в концентрации 0,5-1%;с) гидролизат лактальбумина в концентрации 0,05-1% иd) рекомбинантный сывороточный альбумин человека в концентрации 0,4-0,5%, причем указанная вакцина не содержит буфер или антацид, причём указанная вакцина является стабильной в желудке при от pH 2 до pH 4 без снижения титра, способна выдерживать воздействие кислой среды желудка у человека в течение по меньшей мере 20 мин и не требует введения какого-либо антацида или буфера до или после введения указанной вакцины.
- 2. Ротавирусная вакцина по п.1, содержащая ротавирус 116Е, при этом объем дозы на единицу вакцины составляет не более 1 мл.
- 3. Ротавирусная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что объем дозы на единицу вакцины составляет 0,8 мл на единицу вакцины.
- 4. Ротавирусная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что объем дозы на единицу вакцины составляет 0,5 мл на единицу вакцины.
- 5. Ротавирусная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что указанная вакцина является стабильной при -20°С в течение по меньшей мере 60 месяцев.
- 6. Ротавирусная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что указанная вакцина является стабильной при 2-8°С в течение по меньшей мере 36 месяцев, при 25°С в течение 6 месяцев и при 37°С в течение по меньшей мере 4 недель.
- 7. Ротавирусная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что индуцируемый иммунный ответ, определенный по четырехкратной сероконверсии после вакцинации, является аналогичным или более сильным чем иммунный ответ, определенный по сероконверсии, достигаемой с применением состава вакцины в присутствии буферов или при введении антацидов.
- 8. Ротавирусная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что указанная вакцина представляет собой жидкий пероральный состав вакцины.
- 9. Способ индукции иммунного ответа на ротавирус у субъекта, включающий пероральное введение 0,5 мл стабилизированной ротавирусной вакцины, не содержащей какого-либо антацида или буфера, причем указанная вакцина содержит штамм ротавируса 116Е; комбинацию сахаров, выбранных из сахарозы в концентрации 40-70%, лактозы в концентрации 0,5% и трегалозы в концентрации 0,5-1%; гидролизат лактальбумина в концентрации 0,05-1%; рекомбинантный сывороточный альбумин человека в концентрации 0,4-0,5%, без присутствия какого-либо буфера или антацида в указанной ротавирусной вакцине, причём указанная вакцина является стабильной в желудке при от pH 2 до pH 4 без снижения титра, способна выдерживать воздействие кислой среды желудка у человека в течение по меньшей мере 20 мин и не требует введения какого-либо антацида или буфера до или после введения субъекту указанной вакцины.
- 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанная ротавирусная вакцина сохраняет стабильность в течение периода по меньшей мере 60 месяцев при -20°С.
- 11. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанная ротавирусная вакцина сохраняет стабильность в течение периода по меньшей мере 3 года при 2-8°С, периода по меньшей мере 6 месяцев при 25°С и в течение периода по меньшей мере 4 недели при 37°С.
- 12. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанная вакцина при пероральном введении субъекту в отсутствие антацида или буфера способна индуцировать аналогичный или более сильный иммунный ответ, определённый по четырехкратной сероконверсии после вакцинации по сравнению с иммунным ответом, определенным по сероконверсии, достигаемой при применении состава вакцины или в присутствии буферов, или при введении антацидов.Евразийская патентная организация, ЕАПВРоссия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IN201641020675 | 2016-06-16 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA043650B1 true EA043650B1 (ru) | 2023-06-08 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8192747B2 (en) | Live attenuated rotavirus vaccine for oral administration | |
| RU2643929C2 (ru) | Новые ротавирусные вакцинные композиции и способ получения вышеуказанных композиций | |
| SK2432002A3 (en) | Attenuated rotavirus population, method for producing thereof, a vaccine containing the same and use thereof | |
| EA014328B1 (ru) | Ротавирусная вакцина, индуцирующая гетеротипический перекрестный иммунитет | |
| KR20150000389A (ko) | 액상 백신 제제 | |
| EA043650B1 (ru) | Не содержащая буфера кислотоустойчивая ротавирусная вакцина с малым объемом дозы | |
| US11351245B2 (en) | Buffer free, acid stable low dose volume rotavirus vaccine | |
| US20220370595A1 (en) | Buffer Free, Acid Stable Low Dose Volume Rotavirus Vaccine | |
| ES2566394T3 (es) | Vacuna de rotavirus | |
| KR20180095817A (ko) | 열적으로 안정한 로타바이러스 백신 제제 및 그의 사용 방법 | |
| US7431931B2 (en) | Compositions and method for preventing reactogenicity associated with administration of immunogenic live rotavirus compositions | |
| Chugh et al. | Development of a bioprocess for rotavirus vaccine | |
| PT1676586E (pt) | Métodos para separar variantes do rotavírus e vacina de rotavírus vivo atenuado | |
| Scott et al. | Live Attenuated Influenza Vaccine (Fluenz [superscript](TM)[/superscript]) |