CN110227152A - 轮状病毒疫苗组合物及其制备方法 - Google Patents

轮状病毒疫苗组合物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110227152A
CN110227152A CN201910302646.8A CN201910302646A CN110227152A CN 110227152 A CN110227152 A CN 110227152A CN 201910302646 A CN201910302646 A CN 201910302646A CN 110227152 A CN110227152 A CN 110227152A
Authority
CN
China
Prior art keywords
vaccine preparation
vaccine
buffer
preparation
concentration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910302646.8A
Other languages
English (en)
Inventor
克里什纳·莫汉·瓦德雷夫
萨伊·德瓦拉居鲁·普拉萨德
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bharat Biotech International Ltd
Original Assignee
Bharat Biotech International Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bharat Biotech International Ltd filed Critical Bharat Biotech International Ltd
Publication of CN110227152A publication Critical patent/CN110227152A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/15—Reoviridae, e.g. calf diarrhea virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/12011—Reoviridae
    • C12N2720/12311—Rotavirus, e.g. rotavirus A
    • C12N2720/12334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)

Abstract

本申请涉及轮状病毒疫苗组合物及其制备方法。本发明提供了包括轮状病毒抗原、稳定剂和缓冲液的轮状病毒疫苗组合物。本发明中的缓冲液被预混合在轮状病毒疫苗组合物中以中和胃部的高度酸性pH，而无需在疫苗施用前单独施用抗酸剂。具有本发明的缓冲液的疫苗组合物是用于口服施用的稳定的液体轮状病毒疫苗制剂。

Description

轮状病毒疫苗组合物及其制备方法
本申请是申请日为2013年4月23日，申请号为201380033018.5，发明名称为“轮状病毒疫苗组合物及其制备方法”的申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及新型轮状病毒疫苗组合物以及用于制备该新型轮状病毒疫苗组合物的方法。更具体地，本发明涉及包括轮状病毒抗原、稳定剂和新型缓冲液的新型轮状病毒疫苗组合物。缓冲液被预混合在本发明的轮状病毒疫苗组合物中。本发明的疫苗组合物是用于口服施用的稳定的液体轮状病毒疫苗制剂。
背景技术
在全世界，轮状病毒是严重的脱水性腹泻的最常见原因。每年，五十多万小于5岁的儿童死于轮状病毒腹泻。这些轮状病毒相关的死亡多于80％发生在撒哈拉以南的非洲和南亚的发展中国家。此外，轮状病毒引起发展中国家和发达国家中全部腹泻住院治疗的25–50％，并且门诊卫生医疗每年接纳两千三百万幼儿。几乎每个孩子在5岁之前便已感染了轮状病毒。由于轮状病毒疾病的巨大全球负担，针对这种病原体的疫苗的开发在过去三十年就已经是优先事项。市购可得的两种活的、口服施用的轮状病毒疫苗是(Merckand Co.有限公司，PA,USA和Sanofi Pasteur MSD SNC,Lyon,France)和(GSKBiologicals,Rixensart,Belgium)。在2009年4月和10月，WHO的战略咨询专家组(SAGE)查阅了来自非洲和亚洲的不同人群的另外的效力数据，以及在美国许可后(post-licensure)的研究，并将疫苗接种推荐推广到世界所有地区。
轮状病毒衣壳由三个同心蛋白层组成。由VP7和VP4组成的外层在病毒进入宿主细胞期间丢失。通过用胰蛋白酶(其将VP4裂解为VP8*和VP5*两段，VP8*和VP5*)处理并通过用胰蛋白酶补充培养基的组织培养，轮状病毒野外分离株(field isolate)可被调适(adapted)为高滴度生长。已知蛋白酶抑制剂减弱轮状病毒的体外和体内复制。当与三层颗粒(TLP)缔合时，胰蛋白酶失活并且不能接近蛋白酶抑制剂，诸如抑肽酶。当外层被钙螯合剂溶解时，释放VP5*、VP8*和VP7，并且缔合的胰蛋白酶被活化，允许裂解病毒衣壳蛋白，以及其他外源蛋白。表明，胰蛋白酶抑制剂的加入显著降低细胞中病毒mRNA和病毒蛋白的合成，并且发挥主要的抑制效应，如果在病毒进入细胞时存在胰蛋白酶抑制剂的话。这指示轮状病毒颗粒摄入胰蛋白酶可增强其感染性。
通过用胰蛋白酶处理来增强感染性。胰蛋白酶通过允许病毒的非传染性部分裸露在受感染的细胞中而将该部分转化为传染性病毒。发现胰蛋白酶裂解牛轮状病毒的88,000道尔顿的结构多肽，生成67,000道尔顿和20,000道尔顿的裂解产物。用胰蛋白酶(猪起源)活化轮状病毒被认可，并在感染后也进行培养基中胰蛋白酶的添加以获得最佳产量。然而，胰蛋白酶的来源是猪源的，即来自猪。已表明来自猪来源的胰蛋白酶可能包含不期望的其他污染性病毒如猪圆环病毒1和2。当猪源胰蛋白酶用于培养轮状病毒时，还可发现痕量的其他风险性污染物如多氯联苯(PCB)。因此，在可能的程度上从轮状病毒培养的生物工艺中避免动物来源的胰蛋白酶是重要的。另外，由于猪相关的产品还是某些宗教信仰特别是世界上伊斯兰地区的障碍，因此绝对不含猪来源物的疫苗将更为有益和有用的。工艺开发研究被启动以引入重组胰蛋白酶的使用来克服疫苗制剂中PCB和其他动物来源产物的风险，重组胰蛋白酶的使用是该生物工艺中的新型步骤的。重组胰蛋白酶不含动物组分(ACF)、活性极为特异、不含污染性糜蛋白酶、不含动物来源的外来物质，并且对人类消耗是安全的。
最早在1998-99年，惠氏(Wyeth)拥有在市场上推出商业轮状病毒疫苗的特权。惠氏Rotashield的组合物包括在恒河猴胎二倍体细胞系中培养的两性霉素B的培养基中的活的人-猴重配体四价轮状病毒抗原、蔗糖、谷氨酸单钠、磷酸氢二钾、焦磷酸钾、胎牛血清、硫酸新霉素。然而，由于疫苗施用后与肠套叠相关的问题，以及相关的不良反应，惠氏从市场上撤回了其商业轮状病毒疫苗制剂。目前的疫苗，包括包含单价人血清型–P1A[8]G1(Rotarix)的一种疫苗和包含五种人-牛重配体–G1、G2、G3、G4和P1A[8](RotaTeq)的另一种疫苗已在临床试验中表现出普通的效力和安全性。尽管对于与轮状病毒疫苗相关的肠套叠已取得了相当大的进展，然而主要的悬而未决的问题仍有待解决。已观察到并证明了，当在发展中国家测试可得的轮状病毒疫苗时，通常产生欠佳的效力，这导致了关于任何未来活的口服轮状病毒疫苗在这些环境中可能的效力的担忧。(Bresee JS,Glass RI,Ivanoff B,Gentsch J.Current status and future priorities for rotavirus vaccinedevelopment,evaluation and implementation in developing countries.Vaccine1999；17:2207-22)。在高收入国家，极少儿童死于轮状病毒，反之，全球每年因轮状病毒感染死亡的大部分儿童来自低收入国家。不管是什么疫苗接种计划，不像高收入国家，对轮状病毒疫苗的研究在低收入国家显示中等效力。多种因素的组合，包括受限的医疗保健(水化治疗)享用、差的基础设施、较高的疫苗运输成本、施用疫苗的方式的特殊性特点、血清型覆盖的特异性、连同较大的营养不良普遍性，可能造成轮状病毒疫苗在发展中国家的这些中等的结果。目前在该领域的研究需要在低收入国家进一步研究轮状病毒疫苗并找出改进疫苗性能的新方法。最重要的是，需要提高轮状病毒疫苗制剂的稳定性以克服感兴趣的这些低收入国家中的昂贵且长期的运输以及存储设施。尽管，针对轮状病毒感染的轮状病毒疫苗的领域中可用的在先专利提供了用于轮状病毒疫苗制剂的稳定性的实验数据，然而对本领域现状的实践意义反映了在自疫苗生产日期的第一年之后的主要的稳定性障碍。因此，需要证明轮状病毒疫苗制剂储存至少24个月的有效的稳定性研究以确保全世界疫苗接种计划遍及其中针对轮状病毒的斗争可被认为仍处于其初级阶段的最不发达国家或其他低收入国家。
轮状病毒是在pH 2.0下具有小于12分钟的半衰期的酸不稳定性病毒。其在这样的酸性pH下迅速失活。轮状病毒疫苗被期望通过口服途径对婴儿施用，其中轮状病毒疫苗中的抗原最可能被胃部的胃酸失活。因此，为了防止病毒被胃酸灭活，需要在口服轮状病毒疫苗接种之前施用抗酸剂或缓冲液或与口服轮状病毒疫苗接种组合施用抗酸剂或缓冲液。
拥有美国专利号6616931的默克，首先进入轮状病毒疫苗领域。美国6616931要求保护包含以下的轮状病毒疫苗组合物：包含轮状病毒毒株(1X105至1000X105pfu/ml)的液体轮状病毒疫苗制剂，选自由以下组成的组的糖：蔗糖、乳糖[1％至70％w/v]、甘露糖醇、山梨糖醇、葡萄糖、岩藻糖、海藻糖、聚天冬氨酸、或N-乙酰神经氨酸、肌醇六磷酸盐(植酸)、和唾液酸，选自由以下组成的组的磷酸盐[0.01M至2M]：单磷酸盐、多磷酸盐、磷酸化的糖，以及选自由以下组成的组的羧酸盐[0.05M至2M]：琥珀酸盐(0.05M)、柠檬酸盐(0.07M)、延胡索酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、重组人血清白蛋白(0.5％至1.25％)、和聚山梨醇酯(0.1％至2％)，为液体和冻干制剂。在冻干制剂的情况下，需要选自由聚山梨醇酯、聚山梨醇酯80(0.00％至0.1％)组成的组的非离子表面活性剂。0.05M至2M和0.01M至2M范围内的柠檬酸盐和磷酸盐已用作缓冲剂以在抗轮状病毒制剂中对抗胃部胃酸的酸性环境。默克的商品化疫苗“Rotateq”包括5种活的轮状病毒毒株(G1、G2、G3、G4、和P1)、蔗糖、柠檬酸钠、磷酸二氢钠一水合物、氢氧化钠、聚山梨醇酯80和胎牛血清。这种商购可得的轮状病毒疫苗反映了其被授予专利US 6616931的组合物。该Rotateq疫苗已提供为5种活的人-牛重配体轮状病毒的用于口服施用的2ml液体溶液，其包含，取决于血清型，最低2.0–2.8x106个感染单位(IU)/重配体剂量，和不大于116x106IU/总剂量(aggregate dose)。
然而，US6616931(WO2002/011540)还引述了轮状病毒疫苗的冻干可导致冷冻干燥期间病毒滴度的损失。这可导致低产率，并且此外冻干的疫苗制剂的效力也将降低到所要求的水平以下，导致无效免疫。其还认识到，冻干的制剂的在先冻干将损失在室温下的效力。该专利中公开的用于液体制剂的缓冲剂包括柠檬酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、碳酸氢盐以及与其他羧酸盐诸如延胡索酸盐、酒石酸盐、乳酸盐和马来酸盐的组合。另外，教导了磷酸盐的浓度应保持低于0.35M，以避免病毒疫苗制剂的沉淀。由于碳酸氢盐的使用被教导对制剂的稳定性不利，还明确劝阻使用碳酸氢盐用于稳定病毒疫苗制剂。另外，说明书中缺乏除了柠檬酸盐、琥珀酸盐和磷酸盐之外的多种缓冲成分的工作实例。因此，似乎存在对用于轮状病毒疫苗和液体缓冲制剂的增强的稳定性的新型缓冲液组分的需要。
继默克之后，葛兰素史克(Glaxo Smithkline)也提交并随后被授予关于轮状病毒疫苗制剂的美国专利号7285280。US7285280要求保护用于口服施用的活的减毒轮状病毒疫苗组合物，其用有机抗酸剂柠檬酸钠、或无机抗酸剂氢氧化铝或碳酸钙、和黄原胶配制。该疫苗制剂用作为抗酸剂存在的碳酸钙冻干以在施用之前用含水溶液重构。可选地，该专利还要求保护作为冻干形式的迅速溶解的片剂以直接放置在婴儿/儿童的舌头上的疫苗制剂，其中轮状病毒抗原、抗酸剂和黄原胶已经存在于该片剂中。因此，US7285280对GSK的商购可得的“Rotarix”的相应产品说明是需要在施用前通过添加随疫苗单独提供的稀释剂重构的冻干疫苗。用于口服悬浮液的Rotarix粉末和溶剂”在冻干粉末中包含在Vero细胞上产生的不小于106.0CCID50的活的减毒的人轮状病毒RIX4414毒株、蔗糖9mg和山梨糖醇13.5mg、葡聚糖、Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)、氨基酸，而重构溶剂包括黄原胶、碳酸钙和无菌水。重构后的疫苗剂量为1ml并且在第一次和第二次给药之间，需要以至少4周的时间间隔来施用两个单独的剂量。尽管1ml的给药制剂已成为可得的，然而其在实践中作为完全稳定的单一液体制剂并不可行。Rotarix的疫苗制剂是冻干的制剂，并随附着包含稀释剂的单独的口腔给药器和包含粉末形式的冻干的疫苗抗原的玻璃小瓶连同单独的传送接头。具体的10个独立的步骤必须在时间上遵循正确的顺序，以确保正确的重构。这种通过将疫苗和稀释剂混合的疫苗的重构具有其自身的缺点。这种疫苗的施用经历以下冗长的过程：首先将传送接头连接至包含粉末形式的疫苗抗原的玻璃小瓶，随后将传送接头连接至口腔给药器，将疫苗抗原和稀释剂适当地混合，确保重构的溶液的浊度，除去传送接头，然后施用疫苗。全部这些步骤各自需要对婴儿/儿童/患者施用疫苗的人/医疗护理提供者的高效的操作技能。因此，仍期望具备具有适当给药体积的轮状病毒疫苗制剂的单一液体制剂。
随后GSK的美国专利8192747要求保护液体口服轮状病毒制剂，所述液体口服轮状病毒制剂包括活的减毒轮状病毒抗原，选自以下的糖(35％至70％w/w)：蔗糖、甘露糖醇、麦芽糖、葡聚糖、乳糖和海藻糖(40％-70％)，是己二酸钠的羧酸盐(50mM至2M，限制到100mM至1M，进一步限制到400至700mM)，和羧酸，己二酸连同钙离子，其中组合物具有至少12分钟的抗酸能力。在该专利中被证实具有缓冲能力的羧酸盐包括柠檬酸盐、乙酸盐、丙二酸盐、苹果酸盐、谷氨酸盐、延胡索酸盐、乳糖醛酸盐、马来酸盐、葡萄糖醛酸盐(glucouronate)、半乳糖醛酸盐(galactouronate)、粘酸盐(galactarate)、和酒石酸盐连同相应的酸和氢氧化钠盐，以及其他。另外，该专利中公开的制剂还可包括某些同样商购可得的抗酸剂组分，优选地氢氧化铝和氢氧化镁，所提到的其他水不溶性抗酸剂是碳酸镁、碳酸铝、磷酸铝、氢氧化铝和碳酸镁的混合物、碱式碳酸镁铝(aluminium magnesium hydrocarbonate)、氢氧化铝-碳酸镁-山梨糖醇-甘露糖醇、羟基铝钠碳酸盐、二羟基铝钾碳酸盐。虽然抗酸剂的列表已在该专利中提到，但是必须确定具有特定抗酸剂的疫苗制剂的稳定性。此外，虽然抗酸剂与其他疫苗抗原和其他稳定剂/防腐剂或赋形剂一同作为的疫苗制剂的成分存在，然而抗酸剂对活的病毒的作用还是有疑问的。与疫苗制剂混合的商购可得的抗酸剂可能导致疫苗抗原凝结并使液体制剂形成厚的团块。此外，在液体疫苗制剂中，抗酸剂多保持为悬浮液，且因此不建议被包括在疫苗制剂中。GSK的商购可得的下一代Rotarix疫苗的产品说明书描述了液体疫苗制剂，“于预填充口腔给药器中的Rotarix口服悬浮液”，其以待口服施用的1.5ml剂型包含Vero细胞中生产的不小于106.0CCID50的活的减毒人轮状病毒RIX4414毒株、蔗糖1073mg、己二酸二钠、Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)和无菌水。
巴拉特生物技术国际有限公司(Bharat Biotech International Limited)在印度拥有已授权专利242868(PCT公布WO2007/132480)，其还公开了分别使用100mM至150mM和310mM至400mM范围内的柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液连同其他独特的制剂组分的在2℃-8℃是稳定的独特轮状病毒疫苗制剂。该专利涉及在施用疫苗之前单独向受试者施用柠檬酸盐-碳酸氢盐。根据该专利，柠檬酸盐-碳酸氢盐未被包括在制剂本身中。巴拉特生物技术(Bharat Biotech)的PCT公布WO2011/07363随后要求保护并公开了在感染了病毒的宿主细胞增殖期间用人血清白蛋白预处理，从而给予更好的疫苗稳定性特征的新型生物工艺。
如以上所提到的，在轮状病毒疫苗制剂中，对抗胃部的胃酸环境的特定的缓冲成分是必需的。尽管最初GSK的商品化轮状病毒疫苗制剂包括抗酸剂，但GSK最新的商品化形式的轮状病毒疫苗已从抗酸剂转向了缓冲液。简单地讲，可以表述为，虽然已知抗酸剂中和胃部酸性环境的pH，但是缓冲液在胃部的高度酸性环境中保持疫苗制剂本身的pH。将可保护疫苗抗原免受胃部的胃酸并还同样维持疫苗稳定性的缓冲液混合到制剂中始终是有利的。
现有技术中已提到了对抗胃酸环境的缓冲成分或抗酸剂的列表，最优选的是柠檬酸盐磷酸盐缓冲液。目前的技术状态认识到在疫苗制剂中使用柠檬酸盐磷酸盐缓冲液的一些固有问题。它们是常用的缓冲液中最接近生理环境的，并且模拟细胞外液的某些成分，其仍然具有许多潜在的缺点。例如，磷酸盐抑制许多酶促反应，包括限制性内切酶对DNA的裂解、DNA的连接和细菌转化。磷酸盐更可能容易被微生物污染并趋向在固定期间沉淀。Merck的US’931专利家族劝阻使用超过0.35M的特定限度的磷酸盐作为缓冲液以避免磷酸盐在疫苗制剂中的沉淀。GSK的US’797专利明确提到，轮状病毒疫苗制剂优选不含磷酸盐。GSK在其US’280专利中已使用柠檬酸钠作为无机抗酸剂。然而，GSK在其随后的US’797中似乎完全取缔了使用柠檬酸盐作为缓冲液。US’797要求保护羧酸盐，所述羧酸盐明文指定源自二羧酸。柠檬酸盐缓冲液源自柠檬酸。柠檬酸具有三个羧基官能团。柠檬酸盐缓冲液通过混合柠檬酸和优选地柠檬酸钠以获得期望pH值来制备。因此，柠檬酸盐缓冲液是由三羧酸制备的缓冲液。
从背景公开内容中还明显的是，轮状病毒疫苗需要抗酸剂或缓冲液以承受胃部的高度酸性环境。缓冲液是重要的，因为悬浮在溶液中的轮状病毒抗原不允许经历效力损失并应以有利的方式与其余的赋形剂反应以优化疫苗效力。它们对疫苗的效力和稳定性是至关重要的，因为溶液的pH的急剧增加或减少可引起疫苗中的蛋白/轮状病毒活抗原的变性。与疫苗制剂一起使用的缓冲液需要实现价廉并易于制备以及耐氧化、稳定的标准。选择对制品无毒的缓冲液也是重要的。合适的缓冲体系不应降低抗原疫苗的滴度，以及作为潜在的对抗应施用该疫苗的患者内的高度酸性环境的成分的功能。缓冲液是轮状病毒疫苗内的主要部分，因为其需要在胃部的高度酸性pH中保持疫苗制剂的pH，还需要确保疫苗滴度不被损害至低于其免疫原性的水平。缓冲液作为轮状病毒疫苗制剂的意在对抗胃部的酸性环境的另一个成分需要建立疫苗制剂用于其长期使用的稳定性。现有技术中可能已提到了使用其他羧酸盐作为缓冲液的可能性，还需要建立这些缓冲液与轮状病毒疫苗制剂的抗原和其他稳定赋形剂的绝对和特定的组合。适当的缓冲液与抗原在单一小瓶中的特定组合不应显示任何沉淀物的形成，并应当显示长期的稳定性。尽管在默克和GSK的现有技术中发现了对许多可能的缓冲液组分的详细清单的提及，然而生物组合物不能以单纯的假设和可能性而被接受，其中所述单纯的假设和可能性未被现有技术通过任何实验数据支持。仅柠檬酸盐、磷酸盐，以及在一定程度上琥珀酸盐已在现有技术被通过实验证明为疫苗中的最广泛地可接受的缓冲液。
已知缓冲液在组合体系中起作用。各组合缓冲体系特异地具有其自身独特的物理化学性质和缓冲能力。选择特定溶液中的特定缓冲组合体系取决于组合物的种类。
因此，具有新型缓冲液组合系统的新颖的疫苗组合物被创造以用于轮状病毒疫苗制剂，另外所述轮状病毒疫苗制剂是安全的并且也是有效的以确保最大的轮状病毒疫苗的效力，同时还持续相对较高量的时间是稳定的以实现对轮状病毒疫苗跨越全球的更好的运输。本发明提出了完全不存在于现有技术中的新型缓冲液组合体系用于轮状病毒疫苗制品的用途，，所述轮状病毒疫苗制品能够被人容易地摄入并吸收而不影响病毒滴度并同时也高度稳定。通过本文描述的该理想的疫苗和缓冲液制剂克服了与轮状病毒疫苗制剂相关的现存缺点，本发明将在针对轮状病毒感染的全世界疫苗接种中具有巨大的优势。
虽然冻干的疫苗制剂具有长期的稳定性，但却承担更高的制造成本。涉及冻干的疫苗的情形的物流也减少了使轮状病毒疫苗在世界偏远地区可获得的机会。用于冻干的小瓶的复杂的运输设施加重了疫苗的物流问题和增加的花费。
发明内容
本发明克服了这一缺点，其中在疫苗制剂中连同轮状病毒抗原一起存在的柠檬酸盐-碳酸氢盐缓冲体系的使用，已被证明保留了缓冲能力，而不会影响制剂的疫苗稳定性。
本发明涉及轮状病毒疫苗组合物，其包括活的减毒病毒和广泛范围的其他制剂成分诸如连同其他可能的稳定组分一起存在的一种或多种糖、以及部分水解的蛋白。这些组分以多种方式彼此相互作用，并因此，必须确认适合特定制剂的种类由此保持其功能活性的特定缓冲液-组合体系的选择。与仅在现有技术中被提到的可能的缓冲液相反，现有技术中未提到的新型组合缓冲液体系及其在稳定轮状病毒疫苗制剂中的作用已在本发明中详细地呈现，关键特征是最低2的年稳定性。
因此，本发明的发明人已通过实验展示了在持续长达至少两年的延长的时期的、在包括低至1ml制剂至2.5ml剂量体积制剂的范围内的剂量体积中的、具有新型的可替换缓冲液的液体轮状病毒疫苗制剂。与关于轮状病毒疫苗制剂的可获得的当前技术状态相比，这是相当大的进步。同时，在冷藏温度下长达2年稳定的轮状病毒疫苗制剂将促进疫苗以低得多的成本容易地运输，维持制剂中的病毒滴度以提高所需的免疫原性也将自然地成为可能。
本发明的主要目的是开发用于预防并治疗人的轮状病毒感染的疫苗制剂。
本发明的另一个目的是提供具有用于在疫苗组合物中为轮状病毒抗原提供稳定性的合适的可替换的新型缓冲液的轮状病毒疫苗组合物。
本发明的又另一个目的是提供具有将在施用疫苗期间在高酸性胃部pH下保持轮状病毒疫苗组合物的pH的新型的可替换缓冲液的轮状病毒疫苗组合物。
本发明的另一个目的是提供用于口服施用而无需预施用抗酸剂的具有稳定剂和缓冲液的稳定轮状病毒疫苗组合物。
本发明的另外的目的是提供将使轮状病毒抗原的长至多达至少2年的长期稳定性而不损失疫苗的效力成为可能的稳定的轮状病毒疫苗组合物。
本发明的又另一个目的是在重组胰蛋白酶的存在下调适轮状病毒以制备新型轮状病毒疫苗组合物的方法，所述重组胰蛋白酶不含来自动物来源的任何污染物以及绝对没有其他动物来源物。
特别地，本申请提供了以下内容：
1.一种液体疫苗制剂，所述液体疫苗制剂包括：
i.轮状病毒抗原；
ii.组合缓冲液体系；
iii.糖的组合；
vi.重组人血清白蛋白；
v.部分水解的乳白蛋白水解物。
2.如1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是柠檬酸盐-碳酸氢盐缓冲液体系。
3.如2所述的疫苗制剂，其中所述柠檬酸盐的浓度以0.01M至0.05M之间的范围存在。
4.如2所述的疫苗制剂，其中所述碳酸氢盐的浓度以0.01M至2M之间的浓度范围存在。
5.如3所述的疫苗制剂，其中所述柠檬酸盐的浓度是0.03M。
6.如4所述的疫苗制剂，其中所述碳酸氢盐的浓度以0.3M的浓度存在。
7.如1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液体系。
8.如7所述的疫苗制剂，其中所述碳酸盐-碳酸氢盐以0.01M至0.5M之间的范围存在。
9.如8所述的疫苗制剂，其中所述碳酸盐-碳酸氢盐以0.1M的浓度存在。
10.如8所述的疫苗制剂，其中所述碳酸盐-碳酸氢盐以0.2M的浓度存在。
11.如1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是碱式碳酸镁缓冲液体系。
12.如11所述的疫苗制剂，其中所述碱式碳酸镁缓冲液体系以0.01M至0.5M之间的浓度范围存在。
13.如12所述的疫苗制剂，其中所述碱式碳酸镁以0.1M的浓度存在。
14.如1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是包含乙酸铵、碳酸氢铵和正磷酸氢二铵的混合的缓冲液体系。
15.如14所述的疫苗制剂，其中所述混合的缓冲液以0.01M至2M之间的浓度范围存在。
16.如15所述的疫苗制剂，其中所述混合的缓冲液以0.5M的浓度存在。
17.如1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液体系，其中所述柠檬酸盐浓度是0.35M。
18.如1所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合包括蔗糖、乳糖和海藻糖。
19.如1所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合是蔗糖和海藻糖。
20.如1所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合是蔗糖和乳糖。
21.如1所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合包括以20％至75％w/v之间的浓度范围存在的蔗糖。
22.如1和19中任一项所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合包括以多达10％w/v的浓度范围存在的乳糖。
23.如1和18中任一项所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合包括以多达1％w/v的浓度范围存在的海藻糖。
24.如1所述的疫苗制剂，其中人血清白蛋白以多达0.4％w/v的浓度范围存在。
25.如1所述的疫苗制剂，其中乳白蛋白水解物以多达10％w/v的浓度范围存在。
26.如24所述的疫苗制剂，其中所述乳白蛋白水解物以多达5％w/v的浓度范围存在。
27.如1所述的疫苗制剂，所述疫苗制剂还包括3mM浓度的氯化锌。
28.如1所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂的剂量体积在0.5ml至1.5ml之间，所述疫苗制剂的剂量体积足够中和胃部环境的酸度，能够针对轮状病毒感染产生长期免疫原性。
29.如1和27中任一项所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂的剂量体积为1ml，能够中和所述胃部环境的酸度，从而能够用于引发所需要的量的针对由轮状病毒引起的感染的长期保护性免疫应答。
30.如1所述的疫苗制剂，其中所述轮状病毒抗原以104.5至105.5ffu/剂量之间的浓度范围存在。
31.如1所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂的pH在7至8.5之间。
32.如1所述的疫苗制剂，所述疫苗制剂在2℃-8℃下持续至少2年是稳定的，且在25℃下持续6个月是稳定的。
33.如1所述的疫苗制剂，其中所述轮状病毒抗原在重组胰蛋白酶的存在下被调适，能够产生更高产量的病毒收集物。
附图说明
图1：具有柠檬酸盐磷酸盐缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在2℃-8℃下的稳定性。
图2：具有柠檬酸盐磷酸盐缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在25℃下的稳定性。
图3：具有柠檬酸盐磷酸盐缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在37℃下的稳定性。
图4：待研究制剂的缓冲能力的不同制剂的Baby Rossete Rice测定结果。图5：使用柠檬酸盐碳酸氢盐缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在2℃-8℃下的稳定性研究。
图6：使用柠檬酸盐碳酸氢盐缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在25℃下的稳定性研究。
图7：使用碳酸盐碳酸氢盐缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在2℃-8℃下的稳定性研究。
图8：使用碳酸盐碳酸氢盐缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在25℃下的稳定性研究。
图9：使用碱式碳酸镁缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在2℃-8℃和25℃下的稳定性研究。
图10：使用基于铵的混合的缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在2℃-8℃下的稳定性研究。
图11：具有基于铵的混合的缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在25℃下的稳定性。
图12：具有基于铵盐的混合的缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在37℃下的稳定性。
图13：不同缓冲液对ORV制剂的关于log滴度对时间的效应。
图14：不同缓冲液对ORV制剂的关于log损失滴度对时间的效应。
具体实施方式
定义：
FFU/ml:对活病毒在给定量的液体/收集物中的浓度的测量。这通过将已知量的病毒液体散布一层培养的细胞上(所述培养的细胞被病毒感染)，然后计数培养物中看起来被感染的区域的数目来测量。
靶滴度：直到疫苗的保质期结束，轮状病毒疫苗的每个单人剂量应包含不少于105.5ffu/剂量以产生疫苗的免疫原性，这称为靶滴度。
所需的病毒批次(virus bulk)根据批次滴度(bulk titer)和制剂的靶滴度基于体积加入。典型的轮状病毒批次滴度是每剂量约107.5，而制剂滴度被靶定在每剂量约106.0或105.5，除了少数批次也被配制为约104.0滴度的以检查疫苗滴度对给定组合物的稳定性的效应之外。所有成分最终表示为重量/体积百分数。
在制备疫苗时，通常的靶滴度为约106.0；目的是在2℃–8℃下存储2年后，在给予0.5log滴度损失(以约+/-0.30的滴度估计误差余度)的允许后，得到具有最小105.0的滴度的疫苗制剂。与第零天2℃-8℃下的滴度相比，显示滴度损失大于0.3的任何组合物被视为展现不稳定的迹象。当然，作为存储时间的函数，滴度损失在25℃和37℃下是相当高的，但是这些结果仅用于筛选目的。
以从0.5ml至2.0ml范围内的各种制剂例示的总剂量体积具有考虑到疫苗能够容易地被婴儿吸收的事实的配方。作为生物制品中的习惯作法，将赋形剂(糖)溶解于期望的新型缓冲溶液中，同时将稳定剂[(人血清白蛋白(HSA)/乳清蛋白水解产物(LAH)]制成为含水溶液(在注射用水中)且将全部溶液无菌过滤。这两种溶液基于重量/体积基准来制备。虽然疫苗+缓冲液以2.5ml作为总体积是已知的，基于酸中和研究，还测试了更低的缓冲液体积。这还被公共领域中有关商业轮状病毒疫苗的可获得的信息所证实。
如所需要的，本文在实施例的帮助下公开了本发明的详细实施方案；然而应理解，所公开的实施方案仅是可以以各种形式实施的本发明的实施例。因此，本文所公开的具体结构和功能细节不应被解释为限制性的，而是仅作为权利要求书的基础，并且作为教导本领域技术人员以各种方式以几乎任何适当的具体的结构利用本发明的代表性基础。此外，本文中使用的术语和短语不意在为限制性的，而是意在提供可理解的对本发明的描述。
实施例1：在重组胰蛋白酶的存在下调适轮状病毒的方法。
使用T型瓶(T flask)和CF1(细胞工厂1)进行小规模研究，进一步按比例放大至CF40以研究轮状病毒在Vero细胞中的可比较的感染性和产量。感染后，每48小时后根据收集物产量观察每ml液体病毒收集物(VH)。使用T型瓶和细胞堆(Cell stack)进行三组实验，并且考虑三组实验的平均值，且结果如下表所示。
表1：在重组胰蛋白酶和胰蛋白酶(动物起源)的存在下感染后每48小时后获取的病毒收集物的产量。
因此，从这些实验中明显的是，由于猪胰蛋白酶包含糜蛋白酶作为杂质，重组胰蛋白酶提供比猪胰蛋白酶相对较好的产量，而且不含与PCV 1和2以及PCB相关的任何潜在危害。
实施例2：各种新型缓冲液的缓冲能力以及具有缓冲液制剂的疫苗。
可通过测量特定缓冲液的缓冲能力选择理想的缓冲液。缓冲能力被测量为在高度酸性环境中将给定制剂的pH维持至中性的缓冲液的量。通常被缓冲的pH越接近pKa，缓冲能力越大。使用34mEq的盐酸测试各种缓冲液的缓冲能力。缓冲能力的结果充当将此类缓冲液包括在疫苗制剂中的基础。使用34mEq的盐酸和现有技术中充分认可的Baby Rosette Rice测定进行缓冲液和疫苗制剂的缓冲能力的测量。
实施例2.1：各种缓冲液的缓冲能力：
可能被包括在轮状病毒疫苗制剂中的以下新型缓冲液已被检验了其缓冲能力。
表2(a)：可用作具有病毒疫苗的潜在的疫苗+缓冲液制剂中的其他缓冲液的缓冲能力。
结论：碱式碳酸镁、碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液和柠檬酸盐-碳酸氢盐缓冲液组合体系是强缓冲液，并且甚至在添加20ml浓盐酸(HCl)后pH也从最初pH下降至约6.5至7.0。乳酸盐碳酸氢盐缓冲液和0.05M柠檬酸盐和0.1M碳酸氢盐缓冲液是中等的，其中在添加20ml的HCl后pH达到5.5至6.0。全部以上所述缓冲液能够中和5ml的HCl，其中pH在9.0至约7.0的范围内。由于胃液的体积约是3.0ml至5.0ml，所有这些缓冲液可用作用于在胃中保持疫苗pH的缓冲液。当这些缓冲液用于制剂时，由于其他赋形剂与缓冲液一同存在，1ml的疫苗能够中和5ml的酸，但pH为约6.0而不是7.0。pH 6.0不会使病毒抗原不稳定，且因此可将这些缓冲液添加至口服疫苗制剂中。
除了以上提及的新型缓冲液之外，还检验了基于乙酸铵的混合的缓冲液的缓冲能力。在与轮状病毒疫苗制剂相关的任何现有技术文献中未曾提到基于乙酸铵的混合的缓冲液组合体系。已评价了该基于铵的混合的缓冲液的缓冲能力。检验了具有铵盐的混合的缓冲液(0.5M的乙酸铵+碳酸氢铵+正磷酸氢二铵(Di ammonium ortho phosphate))以确认其缓冲能力。向0.5ml的浓盐酸中添加0.5ml至2ml的混合的缓冲液并检验pH。
表2(c)；具有铵盐的混合的缓冲液的缓冲能力
从上表中明显的是，甚至在将浓盐酸添加至0.5ml的缓冲液之后，缓冲液能够保持7.25的pH，这表明这些铵盐缓冲液是强缓冲液，其可抵抗添加浓酸后的pH变化，且当逐渐地添加0.5ml至2.0ml的缓冲液时，pH也在7.7至8.0的范围内增加。
实施例2.2：各种疫苗和新颖缓冲液制剂的缓冲能力。
在我们开发稳定的新型疫苗和缓冲液组合物的尝试中，已用具有广泛范围浓度的各种缓冲液制备了大量的制剂。当开发此类组合物时，已框出了几个指导因素：
所选缓冲液的酸中和能力或缓冲能力。
用于规定的酸系统的缓冲液的体积要求小于2.0ml。
缓冲液+病毒疫苗组合的稳定性。
对于此类研究，被发现在2℃–8℃下是稳定的不含缓冲液的纯的液体疫苗组合物用作基础组合物。再次重述，显示滴度损失小于0.5log的组合物或其最终滴度大于105.50的那些组合物被认为是稳定的组合物。
2.2.1.还使用34mEq HCl测试了具有柠檬酸盐碳酸氢盐、碳酸盐碳酸氢盐和柠檬酸盐磷酸盐缓冲液的不同疫苗制剂的缓冲能力并将缓冲能力提供在以下提到的表中。
表2(b)：具有缓冲液的各种轮状病毒制剂的缓冲能力。
2.2.2.Baby Rossette Rice测定：由于轮状病毒疫苗通过口服施用，其将被暴露于其中pH为约1.8至2.0的胃液酸度，由于该胃液酸度轮状病毒抗原将被灭活。为了防止病毒被这样灭活的可能性，制剂中使用的缓冲液将保持制剂在中性pH水平。轮状病毒灭活发生在pH 2.0或3.0，但在pH 4.0时，没有发生灭活或发生最小灭活。给定制剂的缓冲能力被定义为所测量到的维持制剂的pH在4.0以上时间，并通过现有技术中有效的并被提到的Baby Rossette Rice测定来估计。
BRR测定的程序：在50ml烧杯中将注射用水添加到制剂中达10ml的终体积。将烧杯置于水浴中，并将温度维持在37℃下。测量并记录溶液的初始pH。此后，将4.0ml的0.1N盐酸添加至包含10ml终体积的制剂的烧杯中。同时，使用蠕动泵用于以每分钟0.5ml添加0.1NHCl的泵被开启。记录每分钟随时间变化的pH值，直到pH被保持在4.0或以上。关闭时钟和泵。(参考文献：Geigy scientific Tables，第1卷,1981增刊，第126页)。检查具有新型缓冲液-组合体系的几种轮状病毒疫苗制剂的缓冲能力(已在合适的位置提到了制剂的各组分的详情)。缓冲能力的结果被记载于下表中。
表2(d)：新型缓冲液制剂和参考制剂的BRR测定结果(图4)。
柠檬酸盐碳酸氢盐缓冲液为0.03M柠檬酸三钠和0.3M碳酸氢钠缓冲液。
制剂实例BV-8包含1ml剂量体积的蔗糖40.0％w/v、海藻糖0.5％w/v、乳糖5.0％w/v、乳白蛋白水解物0.5％w/v、rHSA 0.08％w/v、0.5M正磷酸氢二铵、乙酸铵和碳酸氢铵混合的缓冲液以及轮状病毒抗原116E。
制剂实例BV-9包含1.5ml剂量体积的蔗糖30.0％w/v、海藻糖2％w/v、乳糖5.0％w/v、乳白蛋白水解物1％w/v、rHSA 0.08％w/v、0.5M正磷酸氢二铵、乙酸铵和碳酸氢铵混合的缓冲液以及轮状病毒抗原116E。
CPB为0.35M柠檬酸三钠和0.05M磷酸钾缓冲液。
制剂实例BV-10包含蔗糖40.0％w/v、海藻糖-0.5％w/v、乳白蛋白水解物-0.5％w/v、rHSA-0.35％w/v、0.05M磷酸钾和0.35M柠檬酸三钠缓冲液以及轮状病毒抗原116E，达到2.0ml的剂量体积。
制剂实例BV-11包含蔗糖-40.0％w/v、海藻糖-0.5％w/v、乳白蛋白水解物0.5％w/v、rHSA-0.35％w/v、1.1M磷酸钾缓冲液，达到2ml的剂量体积。
结论：
还根据前面的实践单独测量了在施用疫苗之前单独对婴儿施用的2.5ml的柠檬酸盐碳酸氢盐，其维持4及以上的pH约12分钟。BBIL的制剂实例BV-8和BV-9是基于铵盐的混合的缓冲液的批次并能够中和且维持4.0以上的pH约15分钟。
某些制剂实例BV-10包括所制备的缓冲液组合体系，其中柠檬酸盐浓度提高至0.35M且磷酸盐降低至0.05M并使用2.0ml作为剂量体积检验了缓冲能力。观察缓冲能力，并发现缓冲能力为12分钟。该制剂还能够中和足够的酸，并显示良好的缓冲能力。因此0.35M柠檬酸盐被考虑在该缓冲液中。
实施例3：具有新型缓冲液的轮状病毒疫苗的稳定性
在多种新型缓冲液之间，与其他相比显示更好稳定性的一些最有利的缓冲液包括碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液体系、碱式碳酸镁缓冲液、柠檬酸盐-碳酸氢盐缓冲液体系和具有铵盐的混合的缓冲液。已测试了具有这些新型缓冲液的疫苗连同最终的轮状病毒疫苗制剂及制造该疫苗以及最终的轮状病毒疫苗制剂的工艺的最终稳定性。
实验包括掺入锌离子以获得最终的轮状病毒疫苗制剂的另外的稳定性。已观察到锌离子通过以本领域已知的方式与组合物相互作用来增强疫苗的稳定性。Inge Erk等人Journal of Virology,第77卷,第6期，2003年3月,第3595–3601页阐明了，在给定的pH和温度下在锌离子的存在下，轮状病毒的VP6三聚体的主要衣壳蛋白在实现病毒适应性方面起重要作用。因此轮状病毒疫苗的新型制剂包括锌离子也为了赋予轮状病毒抗原在最终制剂中的更好的稳定性。
人轮状病毒毒株116E是天然减毒的(人-牛重配体)毒株。已在各种温度范围下进行了具有轮状病毒抗原的最终制剂的稳定性研究。各种疫苗制剂已经历2℃至8℃，和25℃时的温度。根据FFU/剂量(病灶形成单位(focus forming units))进行疫苗滴度的观察，所述观察基于操作方案以规律性的时间间隔进行。在2℃-8℃下，在0.3log损失的范围内疫苗滴度的最大下降被认为通过新型缓冲液体系被维持为稳定的轮状病毒疫苗制剂。如前面所解释的，疫苗的病毒滴度被测量为存储时间的函数以评价制剂稳定性。对于如以下实施例中描述的每个例子，，观察到，在2℃-8℃下存储24个月后，发现疫苗制剂是稳定的(考虑到误差棒，具有最小损失或没有损失)。然而，在室温下持续六个月的时间，观察到疫苗滴度最大1.5log的损失。这样的疫苗滴度损失得出在25℃下持续六个月的疫苗稳定性。
实施例3.1：具有柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液组合的轮状病毒制剂的稳定性。
制剂实例BV-10包含蔗糖40.0％w/v、海藻糖-0.5％w/v、乳白蛋白水解物-0.5％w/v、rHSA-0.35％w/v、0.05M磷酸钾和0.35M柠檬酸三钠缓冲液以及轮状病毒抗原116E一起，达到2.0ml的剂量体积。
制剂实例BV-11包含蔗糖-40.0％w/v、海藻糖-0.5％w/v、乳白蛋白水解物0.5％w/v、rHSA-0.35％w/v、1.1M磷酸钾缓冲液，达到2ml的剂量体积。
BV-10和BV-11的稳定性数据提供如下：
表3(a)：BV-10和BV-11在2℃-8℃下的稳定性(图1)
B.编号 第0天 2周 4周 8周 12周 16周 24周
BV-10 6.00 5.93 5.78 5.63 5.45 5.31 4.89
BV-11 6.38 6.01 5.95 5.71 5.52 5.25 4.79
表3(b)：BV-10和BV-11在25℃下的稳定性(图2)
B.编号 第0天 1周 2周 3周 4周
BV-10 6.00 5.51 4.3 3.98 3.05
BV-11 6.38 5.78 4.85 4.11 3.68
表3(c)：BV-10和BV-11在37℃下的稳定性(图3)
实施例3.2：具有0.03M柠檬酸盐和0.3M碳酸氢盐缓冲液的疫苗制剂(CB缓冲液)。
将9.6gm的量的脱水柠檬酸三钠(分子量294.1gm)和25.6gm的量的无水碳酸氢钠(分子量84.01gm)连续地加至500ml无菌玻璃瓶中以达到0.032M的柠檬酸盐和0.3M的碳酸氢盐。使组分完全溶解并用WFI(注射用水)将体积补足至1升。检查pH并将其维持在8.2和8.4之间的水平。然后将缓冲容器转移到2L不锈钢(SS)压力容器中并与过滤器连接。在生物安全柜下通过使用压缩空气使溶液通过0.2μ过滤器过滤。将缓冲液收集到另一个无菌瓶中，并标记该瓶且存储于2℃-8℃下用于将来使用。
制剂使用所制备的该柠檬酸盐(0.3M)碳酸氢盐缓冲液组合体系(0.032M)制备，包括106ffu/剂量下的轮状病毒抗原116E和低于如下表对应各种制剂(由表中巴拉特生物技术国际有限公司酌情分配的独特的制剂编号表示)提到的剂量体积的其他稳定剂和成分，，并在大约2年内以不同的时间间隔测试了疫苗制剂在2℃至8℃和25℃下的稳定性，所述稳定性被提供在所附的图表中(图5和6)。
表3(d)：具有CB缓冲液的轮状病毒疫苗制剂。
制剂编号 第0天 1个月 4个月 6个月 12个月 18个月 24个月
BV-12 6.31 6.12 6.08 6.04 6.18 5.98 6.01
BV-13 6.27 6.03 6.14 6.07 5.97 6.03 5.93
BV-14 6.35 6.19 6.21 6.18 6.21 6.12 6.07
表3(e)：具有CB缓冲液的轮状病毒疫苗在2℃-8℃下的稳定性(图5)。
表3(f)：具有CB缓冲液的轮状病毒疫苗在25℃下的稳定性(图6)。
实施例3.3：具有碳酸盐和碳酸氢盐缓冲液(0.2M和0.1M)(CAB缓冲液)的疫苗制剂。
用于将被人体摄入和吸收的疫苗制品的其他的非常适合的缓冲液体系之一是碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液体系。这是因为该缓冲液系统负责约80％的细胞外缓冲，并以碳酸(H2CO3)和碳酸氢根(HCO3-)的组合的形式存在于血浆中，以维持在7.35-7.45之间的pH。该体系高度利于在有机环境中使用，因为其满足下列要求：不抑制酶促活性、有用的碱性pH范围、简易性和合理的好的稳定性。在现有技术中未曾报道过该组合缓冲液体系，特别是小于0.15M的摩尔浓度下的碳酸氢盐。
实施例5.1：0.2M碳酸盐碳酸氢盐缓冲液：
将1.69gm的量的无水碳酸钠(分子量105.99gm)以及15.4gm的量的无水碳酸氢钠(分子量84.01gm)以连续地加至500ml无菌玻璃瓶中以达到0.2M的碳酸盐和0.2M的碳酸氢盐。使这些成分完全溶解并用WFI(注射用水)将体积补足至1升。检查pH，并将其保持在9.2和9.5之间的水平。然后将缓冲容器转移到2L不锈钢压力容器中并与过滤器连接。在生物安全柜下通过使用压缩空气使溶液通过0.2μ过滤器过滤。将缓冲液收集到另一个无菌瓶中，并标记该瓶且存储于2℃-8℃下用于将来使用。
实施例5.2：0.1M碳酸盐碳酸氢盐缓冲液
将0.53gm的量的无水碳酸钠(MW.105.99)以以及7.98gm的量的无水碳酸氢钠(MW.84.01gm)连续地加至500ml无菌玻璃瓶中以达到0.1M的碳酸盐和0.1M的碳酸氢盐。使这些成分完全溶解并用WFI(注射用水)将体积补足至1升。检查pH，并将其保持在9.2和9.5之间的水平。然后将缓冲容器转移到2L不锈钢压力容器中并与过滤器连接。在生物安全柜下通过使用压缩空气使溶液通过0.2μ过滤器过滤。将缓冲液收集到另一个无菌瓶中，并标记该瓶且存储于2℃-8℃下用于将来使用。
制剂使用所制备的该0.2M碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液组合体系和0.1M碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液组合体系制备，包括106ffu/剂量下的轮状病毒抗原116E和低于如下表对应各种制剂(由表3(g)中提到的独特制剂编号表示)提到的剂量体积的其他稳定剂和成分，并在约2年内以不同的时间间隔测试了疫苗制剂在2℃至8℃和25℃下的稳定性，所述稳定性被提供在所附的图表中(图7和8)。
表3(g)：具有CAB缓冲液的轮状病毒疫苗制剂。
表3(h)：具有CAB缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在2℃-8℃下的稳定性(图7)。
25℃下的稳定性
表3(i)：具有CAB缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在25℃下的稳定性(图8)。
实施例3.4：具有0.1M碱式碳酸镁缓冲液(MHC缓冲液)的疫苗制剂
将碱式碳酸镁二水合物(314.98gm的分子量)连续地加至无菌玻璃瓶中的500ml注射用水中以得到0.1M的碱式碳酸镁。由于该盐是水不溶性的，充分震摇这些成分以获得均一性。用注射用水将悬浮液制备成1升的体积，充分溶解并用WFI(注射用水)将体积补足至1升。检查pH，并将其保持在10至10.5之间的水平。通过在121℃下持续30分钟的高压灭菌来对溶液灭菌。将缓冲液收集到另一个无菌瓶中，并标记该瓶且存储于2℃-8℃下用于将来使用。
制剂使用所制备的该0.1M碱式碳酸镁缓冲液组合体系来制备，包括106ffu/剂量下的轮状病毒抗原116E和低于如下表对应各种制剂(由表3(j)中提到的独特制剂编号表示)提到的剂量体积的其他稳定剂和组分，并在约2年内以不同的时间间隔下测试了疫苗制剂在2℃至8℃，和25℃下的稳定性，所述稳定性被提供在所附的图表中(图9)。
表3(j)：具有MHC缓冲液的轮状病毒疫苗制剂。
2℃-8℃和25℃下的稳定性
温度 第0天 1个月 4个月 6个月 12个月 18个月 24个月
25℃ 6.75 6.03 5.31 4.24 -- -- --
2℃-8℃ 6.75 6.61 6.45 6.47 6.39 6.34 6.28
表3(k)：具有MHC缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在2℃-8℃和25℃下的稳定性(图9)。
实施例3.5：具有0.5M具有铵盐混合的缓冲液(混合的缓冲液)的疫苗制剂
将66.03gm的量的正磷酸氢二铵(分子量132.06gm)、38.54gm的量的乙酸铵(分子量77.08gm)以及39.51gm的量的碳酸氢铵(分子量79.02gm)加至无菌玻璃瓶中的500ml注射用水中以得到0.5M的具有铵盐的混合的缓冲液。使这些成分完全溶解并用WFI(注射用水)将体积补足至1升。检查pH，并将其保持在7.6和7.8之间的水平。然后将缓冲容器转移进2L不锈钢压力容器中并与过滤器连接。生物安全柜下通过使用压缩空气使溶液通过0.2μ过滤器过滤。将缓冲液收集到另一个无菌瓶中，并标记该瓶且存储于2℃-8℃下用于将来使用。
制剂使用所制备的该0.5M混合的缓冲液组合体系来制备，包括106ffu/剂量下的轮状病毒抗原116E和低于如下表对应各种制剂(由表3(l)中提到的独特制剂编号表示)提到的剂量体积的其他稳定剂和组分，并持续1年在不同的时间在测试了疫苗制剂在2℃至8℃下的稳定性，所述稳定性被提供在所附的图表中(图10至13)。
表(3l)：具有混合的缓冲液(乙酸铵+碳酸氢铵+正磷酸氢二铵)0.5M的轮状病毒疫苗制剂
2℃-8℃下的稳定性
BV 9和BV 10在2℃-8℃下的稳定性
B.编号 第0天 1个月 3个月 6个月 9个月 12个月
BV-20 6.12 6.17 6.07 6.03 6.08 6.11
BV-21 6.23 6.25 6.25 6.18 6.21 6.23
表3(m)：具有混合的缓冲液的轮状病毒疫苗制剂在2℃-8℃下的稳定性(图10)。
实施例4：缓冲液和疫苗制剂在制剂的稳定期之前和之后的pH值
检验不同制剂中使用的缓冲液的pH以及当这些缓冲液存在于最终疫苗制剂中时的相应pH值也是重要的。这是为了检验最终疫苗制剂在疫苗的储存时期以及在储存时期之后的既定pH范围。该数据被呈现如下。基于碳酸氢盐的体系高于pH 8，这高于生理缓冲液pH。然而，在稳定期之后，疫苗甚至超过2年在2℃-8℃下是稳定的。
表3(n)：在第0天和24个月之前和之后的缓冲液pH和疫苗pH。
另外，用固定的制剂成分同时更换不同的缓冲液进行实验，并且跨越延长的时间周期研究了疫苗制剂的稳定性。对应的图号13和14展示了具有不同的新型缓冲液和固定的制剂成分的可比较的疫苗稳定性，所述固定的制剂成分包括蔗糖40％w/v、海藻糖0.5％w/v、LAH 1％w/v、rHSA 0.35％w/v和轮状病毒抗原116E。
参考文献
1.Wainwright,WH.The Development of Live,Attenuated RotavirusVaccines:A Manufacturer’s Resource Guide.Seattle:PATH；2006.
2.巴拉特生物技术的国际PCT公布WO2007/132480(被授权的印度专利242868和被授权的UK 0821386.0)和WO2011/07363。
3.美国专利6403098(默克)和美国专利6616931(默克)。
4.Inge Erk等人Journal of Virology，第77卷,第6期,2003年3月，第3595–3601页。
5.http://www.ou.edu/research/electron/bmz5364/buffers.html 2012年2月10日访问。
6.http://nature.berkeley.edu/soilmicro/methods/phosphate％ 20buffer.pdf 2012年2月10日访问。
7.Guidelines to assure the quality,safety and efficacy of liveattenuated rotavirus vaccines(oral)WHO技术报告系列第941,2007号.
8.Harry B.Greenberg,Mary K.Estes,Rotaviruses:From Pathogenesis toVaccination,doi:10.1053/j.gastro.2009.02.076.(Gastroenterology 2009).
9.Penelope H.Dennehy,Rotavirus Vaccines:an Overview,ClinicalMicrobiology Reviews，2008年1月，第21卷，第1期，第198–208页。
10.Bresee JS,Glass RI,Ivanoff B,Gentsch J.Current status and futurepriorities for rotavirus vaccine development,evaluation and implementation indeveloping countries.Vaccine 1999；17:2207-22.
11.(参考文献：Geigy scientific Tables，第1卷，1981增刊，第126页)。

Claims (33)

1.一种液体疫苗制剂，所述液体疫苗制剂包括：
i.轮状病毒抗原；
ii.组合缓冲液体系；
iii.糖的组合；
vi.重组人血清白蛋白；
v.部分水解的乳白蛋白水解物。
2.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是柠檬酸盐-碳酸氢盐缓冲液体系。
3.如权利要求2所述的疫苗制剂，其中所述柠檬酸盐的浓度以0.01M至0.05M之间的范围存在。
4.如权利要求2所述的疫苗制剂，其中所述碳酸氢盐的浓度以0.01M至2M之间的浓度范围存在。
5.如权利要求3所述的疫苗制剂，其中所述柠檬酸盐的浓度是0.03M。
6.如权利要求4所述的疫苗制剂，其中所述碳酸氢盐的浓度以0.3M的浓度存在。
7.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液体系。
8.如权利要求7所述的疫苗制剂，其中所述碳酸盐-碳酸氢盐以0.01M至0.5M之间的范围存在。
9.如权利要求8所述的疫苗制剂，其中所述碳酸盐-碳酸氢盐以0.1M的浓度存在。
10.如权利要求8所述的疫苗制剂，其中所述碳酸盐-碳酸氢盐以0.2M的浓度存在。
11.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是碱式碳酸镁缓冲液体系。
12.如权利要求11所述的疫苗制剂，其中所述碱式碳酸镁缓冲液体系以0.01M至0.5M之间的浓度范围存在。
13.如权利要求12所述的疫苗制剂，其中所述碱式碳酸镁以0.1M的浓度存在。
14.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是包含乙酸铵、碳酸氢铵和正磷酸氢二铵的混合的缓冲液体系。
15.如权利要求14所述的疫苗制剂，其中所述混合的缓冲液以0.01M至2M之间的浓度范围存在。
16.如权利要求15所述的疫苗制剂，其中所述混合的缓冲液以0.5M的浓度存在。
17.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液体系，其中所述柠檬酸盐浓度是0.35M。
18.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合包括蔗糖、乳糖和海藻糖。
19.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合是蔗糖和海藻糖。
20.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合是蔗糖和乳糖。
21.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合包括以20％至75％w/v之间的浓度范围存在的蔗糖。
22.如权利要求1和19中任一项所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合包括以多达10％w/v的浓度范围存在的乳糖。
23.如权利要求1和18中任一项所述的疫苗制剂，其中所述糖的组合包括以多达1％w/v的浓度范围存在的海藻糖。
24.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中人血清白蛋白以多达0.4％w/v的浓度范围存在。
25.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中乳白蛋白水解物以多达10％w/v的浓度范围存在。
26.如权利要求24所述的疫苗制剂，其中所述乳白蛋白水解物以多达5％w/v的浓度范围存在。
27.如权利要求1所述的疫苗制剂，所述疫苗制剂还包括3mM浓度的氯化锌。
28.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂的剂量体积在0.5ml至1.5ml之间，所述疫苗制剂的剂量体积足够中和胃部环境的酸度，能够针对轮状病毒感染产生长期免疫原性。
29.如权利要求1和27中任一项所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂的剂量体积为1ml，能够中和所述胃部环境的酸度，从而能够用于引发所需要的量的针对由轮状病毒引起的感染的长期保护性免疫应答。
30.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述轮状病毒抗原以104.5至105.5ffu/剂量之间的浓度范围存在。
31.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂的pH在7至8.5之间。
32.如权利要求1所述的疫苗制剂，所述疫苗制剂在2℃-8℃下持续至少2年是稳定的，且在25℃下持续6个月是稳定的。
33.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述轮状病毒抗原在重组胰蛋白酶的存在下被调适，能够产生更高产量的病毒收集物。
CN201910302646.8A 2012-04-23 2013-04-23 轮状病毒疫苗组合物及其制备方法 Pending CN110227152A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN667/CHE/2012 2012-04-23
IN667CH2012 2012-04-23
CN201380033018.5A CN104507495A (zh) 2012-04-23 2013-04-23 轮状病毒疫苗组合物及其制备方法

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201380033018.5A Division CN104507495A (zh) 2012-04-23 2013-04-23 轮状病毒疫苗组合物及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110227152A true CN110227152A (zh) 2019-09-13

Family

ID=48808420

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910302646.8A Pending CN110227152A (zh) 2012-04-23 2013-04-23 轮状病毒疫苗组合物及其制备方法
CN201380033018.5A Pending CN104507495A (zh) 2012-04-23 2013-04-23 轮状病毒疫苗组合物及其制备方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201380033018.5A Pending CN104507495A (zh) 2012-04-23 2013-04-23 轮状病毒疫苗组合物及其制备方法

Country Status (7)

Country Link
US (1) US10568957B2 (zh)
EP (1) EP2945650B1 (zh)
JP (1) JP6126684B2 (zh)
CN (2) CN110227152A (zh)
BR (1) BR112014026407B1 (zh)
RU (1) RU2643929C2 (zh)
WO (1) WO2013160913A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113994925A (zh) * 2021-12-30 2022-02-01 北京赛尔富森生物科技有限公司 一种轮状病毒攻毒动物模型及其建立方法

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019502685A (ja) * 2015-12-18 2019-01-31 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． 熱安定性ロタウイルスワクチン製剤およびその使用方法
MA44557B1 (fr) 2016-06-16 2021-11-30 Bharat Biotech Int Ltd Vaccin contre le rotavirus sans tampon, stable en milieu acide, et d'un faible volume de dose à administrer
GB201614799D0 (en) * 2016-09-01 2016-10-19 Glaxosmithkline Biologicals Sa Compositions
CN110106291A (zh) * 2019-06-03 2019-08-09 中国食品药品检定研究院 猪圆环病毒1型病毒核酸参考品及其制备方法与应用
MA56118A (fr) * 2019-06-10 2022-04-13 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vaccin vivant liquide stabilisé

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101489587A (zh) * 2006-05-12 2009-07-22 伯哈拉特生物技术国际有限公司 一种可用作疫苗的组合物

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4720460A (en) * 1985-04-04 1988-01-19 Miles Laboratories, Inc. Process for preserving acid producing bacteria and compositions produced thereby
US7150984B2 (en) * 1994-07-11 2006-12-19 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Attenuated human rotavirus vaccine
US6616931B1 (en) * 1996-09-26 2003-09-09 Merck & Co., Inc. Rotavirus vaccine formulations
US6403098B1 (en) 1996-09-26 2002-06-11 Merck & Co., Inc. Rotavirus vaccine formulations
US5914135A (en) * 1997-04-16 1999-06-22 Mcneil-Ppc, Inc. Liquid antacid compositions
AP1768A (en) 1999-08-17 2007-08-16 Smithkline Beecham Biologicals S A Vaccine
EP1391513A1 (en) * 2002-08-08 2004-02-25 Cytheris IL-7 drug substance, IL-7 comprising composition, preparation and uses thereof
ATE503491T1 (de) * 2003-02-13 2011-04-15 Becton Dickinson Co Verbesserte anthraximpfstoffe und abgabeverfahren
GB0503337D0 (en) * 2005-02-17 2005-03-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Compositions
ES2534637T3 (es) * 2005-08-17 2015-04-27 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vacuna de rotavirus que induce protección cruzada heterotípica
DE102006054260A1 (de) * 2006-02-28 2007-09-27 Lohmann Animal Health Gmbh & Co. Kg Wasser stabilisierende Zusammensetzung, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
CA2681159A1 (en) * 2007-03-13 2008-09-18 Peros Systems Technologies, Inc. Immunoactive compositions for improved oral delivery of vaccines and therapeutic agents
EP2197283B1 (en) * 2007-09-25 2013-07-17 Aridis Pharmaceuticals Formulations for preservation of rota virus
JP2012527406A (ja) * 2009-05-20 2012-11-08 リングアル コンセグナ ピーティーワイ エルティーディー 口腔内および／または舌下治療用製剤
WO2011007363A1 (en) * 2009-07-13 2011-01-20 Bharat Biotech International Limited A composition useful as rotavirus vaccine and a method therefor.
US20110243988A1 (en) 2009-10-01 2011-10-06 Aridis Pharmaceuticals Methods and Compositions for Stabilization of a Virus Vaccine
EP3225247B1 (en) * 2010-05-28 2020-09-02 3M Innovative Properties Company Aqueous formulations for coating microneedle arrays

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101489587A (zh) * 2006-05-12 2009-07-22 伯哈拉特生物技术国际有限公司 一种可用作疫苗的组合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
INGE ET AL.: "A Zinc Ion Controls Assembly and Stability of the Major Capsid Protein of Rotavirus", 《JOURNAL OF VIROLOGY》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113994925A (zh) * 2021-12-30 2022-02-01 北京赛尔富森生物科技有限公司 一种轮状病毒攻毒动物模型及其建立方法
CN113994925B (zh) * 2021-12-30 2022-04-26 北京赛尔富森生物科技有限公司 一种轮状病毒攻毒动物模型及其建立方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP2945650A1 (en) 2015-11-25
WO2013160913A1 (en) 2013-10-31
BR112014026407A2 (pt) 2017-06-27
JP2015514750A (ja) 2015-05-21
EP2945650B1 (en) 2023-07-05
RU2643929C2 (ru) 2018-02-06
US20150098967A1 (en) 2015-04-09
BR112014026407B1 (pt) 2020-12-22
RU2014146772A (ru) 2016-06-10
US10568957B2 (en) 2020-02-25
CN104507495A (zh) 2015-04-08
JP6126684B2 (ja) 2017-05-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110227152A (zh) 轮状病毒疫苗组合物及其制备方法
CN101300028B (zh) 口服施用的活减毒轮状病毒疫苗
CN101489587B (zh) 一种可用作疫苗的组合物
JP4138314B2 (ja) ロタウイルスワクチン調合物
JP5388842B2 (ja) インフルエンザワクチン含有凍結乾燥製剤、及びその製造方法
CN102470170B (zh) 用作轮状病毒疫苗的组合物及其方法
CN101679954A (zh) 用于活的减毒病毒的方法和组合物
CN103619349A (zh) 灭活登革热病毒疫苗
EP1129723B1 (en) Combined vaccine against both hav and measle virus and method of producing it
Desselberger Rotavirus infections: guidelines for treatment and prevention
BE1024685B1 (fr) Compositions
CN105377293A (zh) 减毒活甲病毒制剂的组合物和方法
KR20180095817A (ko) 열적으로 안정한 로타바이러스 백신 제제 및 그의 사용 방법
CN103316336B (zh) 一种适于口服的轮状病毒疫苗
CN103316335B (zh) 一种适于口服的脊髓灰质炎病毒疫苗
CN109562159A (zh) 无缓冲剂的、酸稳定的、低剂量体积的轮状病毒疫苗
US20220370595A1 (en) Buffer Free, Acid Stable Low Dose Volume Rotavirus Vaccine
AU2008202660B2 (en) Rotavirus vaccine formulations
EA043650B1 (ru) Не содержащая буфера кислотоустойчивая ротавирусная вакцина с малым объемом дозы

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination