CN101439181A - 一种稳定的乌司他丁水针剂药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种稳定的乌司他丁药物组合物，它包含有效剂量的乌司他丁以及一定比例的药用辅料。其中辅料可为可选自甘露醇、氯化钠、醋酸钠、醋酸中的一种或几种，pH值范围选自4.2－6.0。该组合物通常以注射剂的形式使用，临床应用时可直接作静脉输入，能明显改善乌司他丁冻干粉针制剂在配制时活性易降低的问题。

Description

一种稳定的乌司他丁水针剂药物组合物

技术领域

本发明涉及一种水针剂药物组合物，具体涉及含有有效剂量的乌司他丁和一定比例的辅料组成。

背景技术

乌司他丁(Ulinastatin，尿胰蛋白酶抑制剂Urlinary Trypsin Inhibitor，UT I)是从健康成年男性尿液中提取的一种糖蛋白，由143个氨基酸组成，N端为丙氨酸，C端为亮氨酸，在第10位丝氨酸和45位天冬氨酸有糖链。丝氨酸上的O-糖苷链包含多个硫酸软骨素单元。乌司他丁的分子量经HPLC法测定为60-70KD，经SDS-PAGE测定为40-50KD，等电点为2.6，是一种对热稳定的酸性蛋白。

乌司他丁对胰蛋白酶、透明质酸酶、纤溶酶等多种酶具有抑制作用，对细胞膜、溶酶体膜有明显的稳定作用，临床上常用于治疗急性胰腺炎、急性器官功能衰竭等。目前临床使用的乌司他丁大多是冻干粉针剂，配置过慢容易导致生物活性的降低、且有微生物污染的可能性，严重影响病人的治疗效果。特别是，乌司他丁用于急性器官功能衰竭的治疗时，用药时间是至关重要的，等到将冻干粉针溶解配制好，可能已经延误了病人的最佳治疗时间。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定、使用方便的乌司他丁水针剂药物组合物，以解决上述乌司他丁粉针剂在临床使用中存在的问题。

为达到上述目的，本发明人采用的技术方案是，选取能够对乌司他丁活性起保护作用，且不与乌司他丁药理作用产生拮抗、可以用于静脉注射的辅料，与乌司他丁按照一定比例制备成一定pH值范围的注射液，在临床使用时可直接用于静脉输注。辅料可选自甘露醇、氯化钠、醋酸钠、醋酸中的一种或几种，pH值范围选自4.2-6.0。

本发明所述的含有乌司他丁的药物组合物，其特征在于乌司他丁和辅料的配比为10万单位：0.02-0.2g，pH为4.2-6.0；优选的配比为10万单位：0.05-0.15g，pH为4.8-5.8；比较优选的配比为10万单位：0.1g，pH为5.0-5.5。

本发明优选的含有乌司他丁的药物组合物的组成及配比：乌司他丁和甘露醇，优选的配比为10万单位：0.05-0.15g，pH4.8-5.8，比较优选的配比为10万单位：0.1g，pH5.0-5.5；

或者为乌司他丁、甘露醇和氯化钠，优选的配比为10万单位：0.05-0.15g：0.0003-0.02g，pH4.8-5.8，比较优选的配比为10万单位：0.1g：0.015-0.016g，pH5.0-5.5；

或者为乌司他丁、甘露醇、氯化钠、醋酸钠和醋酸，优选的配比为10万单位：0.05-0.15g：0.0003-0.02g：0.0005-0.01g：0.0001-0.001g，pH4.2-5.8，比较优选的配比为10万单位：0.1g：0.015-0.016g：0.0035-0.004g：0.00065-0.0007g、pH4.8-5.8。

在本文中，乌司他丁单位被定义为2μg胰蛋白酶活性50％被抑制时乌司他丁的量为1个单位。

如上所述的任一药物组合物，可以注射剂形式存在，尤其可以水针剂形式存在。

本发明药物组合物的配制方法：

(1)称取所需乌司他丁，加入配液桶内，加入少量约95％的注射用水溶解；

(2)将配制所需的辅料加入到配液桶内，混匀；

(3)用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸溶液调节pH值至4.2-6.0；

(4)加入剩余的注射用水，混匀；

(5)过滤除菌，灌封，包装。

按照上述组成、配比及制备方法配制的乌司他丁注射剂，在临床应用时，可直接作静脉直接输入。根据患者的病情，治疗剂量为30万-300万单位，给药次数每天1-4次。

发明人应用本发明的配方制备的乌司他丁注射液进行了稳定性研究，结果表明：25℃放置两年，乌司他丁的效价仍保持在97％以上。特别是，按照优选配方，如乌司他丁5000万单位、甘露醇50g制备的乌司他丁注射液，25℃放置两年，乌司他丁的效价保持在99.9％以上，且在放置过程中，药液仍保持无色澄明。而未使用辅料的乌司他丁注射液，经过两年，效价降至81％以下，失去药用价值。

采用本方法制备所得的含有乌司他丁注射剂，进行了药效学试验，结果表明本发明所述的注射剂具有较好的治疗急性胰腺炎、急性器官功能衰竭等功效。

具体实施方式

发明人通过以下的实施例来进一步详细阐述本发明，但并不限于此实施范围。

实施例1 乌司他丁注射液的制备

本发明的所述的乌司他丁可按照专利“纯化的乌司他丁及其制备方法和含有该乌司他丁的药物组合物”(ZL200610000200.2)中公开的制备方法制备而得。以新鲜人尿为原料，通过以下工艺步骤制备：

a.将尿泵入搅拌池中，调节pH至4.5-6，加入甲壳素吸附，用硫酸铵溶液洗脱，洗脱液进行抽滤，抽干产品为乌司他丁粗制品；

b.取乌司他丁粗制品加2-3倍水溶解后，过滤，取上清液，调节pH为6-7.5后用乙醇沉淀，将沉淀用水溶解过滤，所得滤液上阴离子交换柱，用含有0.1-2mol/LNaCl及0.1-0.5mol/L磷酸盐的缓冲液洗脱，收集洗脱液；

c.调节该洗脱液pH至7.0-9.0，然后上金属螯合柱，用含有0.1-2mol/LNaCl及0.1-0.5mol/L磷酸盐的缓冲液洗脱，收集洗脱液；

d.调节洗脱液pH至4.0-6.0，上疏水柱吸附，用含有0.1-2mol/LNaCl及0.1-0.5mol/L磷酸盐的缓冲液进行梯度洗脱，收集洗脱液；

e.调整洗脱液pH至5.0-6.0，上阴离子交换柱，用含有0.1-2mol/LNaCl及0.1-0.5mol/L磷酸盐缓冲液洗脱，洗脱液用超滤膜超滤；

f.将超滤液pH调至6.0-8.0，上凝胶柱，用含有0.5％-5％NaCl及0.1-0.5mol/L磷酸盐的缓冲液洗脱，收集洗脱液；

g.洗脱液用超滤膜超滤，即得纯化的乌司他丁，浓度为5万单位/ml的溶液，纯度>99.9％；

以上述方法制备的乌司他丁(溶液或者冻干后的粉末)为原料，按照以下方法制备乌司他丁注射液：

处方1：

乌司他丁10000万单位，甘露醇100g，pH5.0-5.5

二者配比为10万单位：0.1g，pH为5.0-5.5

制备方法：

(1)称取所需原料，加入配液桶内，加入约95％(1900ml)的注射用水溶解；

(2)将配制所需的甘露醇注射液(或甘露醇)加入到配液桶内，混匀；

(3)用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸溶液调节pH值至5.0-5.5；

(4)加入注射用水至2000ml，混匀；

(5)过滤除菌，分装成1000支(每支10万单位/2ml)，灌封，包装。

实施例2：乌司他丁注射液的制备

处方2-10配比如下：

 

	乌司他丁(万单位)	甘露醇(g)	氯化钠(g)	醋酸钠(g)	醋酸(g)	乌司他丁：辅料(万单位：g)	pH
								处方2	10000	100	——	——	——	10：0.1	4.8-5.8
处方3	10000	200	——	——	——	10：0.2	5.0-5.5
								处方4	10000	120	——	——	——	10：0.12	5.0-5.5
处方5	10000	100	0.6	——	——	10：0.1006	4.8-5.8
								处方6	10000	120	0.8			10：0.1208	5.0-5.5
处方7	10000	160	1.0			10：0.161	5.0-5.5
								处方8	10000	100	3.0	0.6	0.12	10：0.1037	4.8-5.8
处方9	10000	120	3.6	1.0	0.2	10：0.1248	4.8-5.8
								处方10	10000	160	4.0	0.8	0.16	10：0.165	5.0-5.5

处方2-10乌司他丁注射液制备方法：按照实施例1所述的方法制备。

实施例3 稳定性试验

取按照处方1-10法制备的10万单位乌司他丁注射液剂各一支，另取按照实施例1制备方法制备而得的不含有辅料的10万单位乌司他丁注射液1支；25℃放置2年后，采用以下方法测定乌司他丁的活性，按照下式计算乌司他丁的活性残留率：

活性残留率＝放置后活性/放置前活性×100％

乌司他丁活性测定方法：

标准品溶液的制备精密称取乌司他丁标准品适量，加0.2mol/L三乙醇胺缓冲液(取三乙醇胺29.8g，加水900ml溶解，用4mol/L盐酸溶液调pH至7.8，加水至1000ml，摇匀，即得。)制成每1ml中含50单位的溶液。

供试品溶液的配制精密称取本品适量，加0.2mol/L三乙醇胺缓冲液制成每1ml中约含50乌司他丁单位的溶液。

结晶胰蛋白酶溶液精密称取结晶胰蛋白酶(每1mg含7500～10000BAEE单位)适量，加冷的氯化钙盐酸溶液(取氯化钙2.94g加0.001mol/L盐酸溶液1000ml溶解即得)制成每1ml含0.1mg的溶液，临用配制，并置4℃保存。

苯甲酰—L—精氨酸—P—对硝基苯胺盐酸溶液取苯甲酰—L—精氨酸—P—对硝基苯胺盐酸盐适量，加水制成每1ml中含1mg的溶液，临用时配制并置暗处保存。

测定法  取0.2mol/L三乙醇胺缓冲液(预热至25±0.1℃)1.6ml，至比色池中，加标准品溶液0.2ml，加结晶胰蛋白酶溶液0.2ml，混匀，保温5分钟，使比色池内温度保持在25±0.1℃，加苯甲酰—L—精氨酸—P—对硝基苯胺盐酸盐溶液1.0ml(预热至25±0.1℃)立即计时并摇匀，以水为空白，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV)在405nm波长处，每隔1分钟测定吸收度，共5分钟，吸收度的变化率应恒定。以反应时间为横坐标，吸收度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸收度变化率(ΔA_s)。

分别取0.2mol/L三乙醇胺缓冲液和供试品溶液0.2ml，代替标准品溶液同法操作，分别求出吸收度变化率ΔA₀和ΔA_t。

按下式计算每1mg供试品中乌司他丁的单位数。

$u/\mathrm{mg}=\frac{\mathrm{\Δ}{A}_0-\mathrm{\Δ}{A}_t}{\mathrm{\Δ}{A}_0-\mathrm{\ΔA}}\×\frac{B}{W}$

式中ΔA₀为三乙醇胺缓冲液对照管吸收度的变化率。

    ΔA_t为供试品溶液吸收度的变化率。

    ΔA_s为标准品溶液吸收度的变化率。

B：每1ml标准品溶液中含乌司他丁单位数。

W：每1ml供试品溶液中含供试品的mg数。

结果如表1：

表1 乌司他丁25℃放置2年的稳定性试验结果

本实验结果说明，乌司他丁注射液中含有上述处方1—10中的辅料，可以有效保持乌司他丁的活性，优选处方1中辅料和pH的最佳组合使得其中乌司他丁的活性残留率大于99.9％，且能够保持无色澄明，pH值基本不变，仍维持在5.0—5.5之间；而没有添加辅料的乌司他丁注射液中，乌司他丁易发生降解，常温放置2年后其活性残留率降至80％左右，不宜应用于临床。

Claims (9)

1、一种含有乌司他丁的药物组合物，其特征在于是由有效剂量的乌司他丁和选自甘露醇、氯化钠、醋酸钠、醋酸中的一种或几种辅料组成，pH值范围选自4.2-6.0。

2、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于乌司他丁和辅料的配比为10万单位：0.02-0.2g，pH为4.2-6.0。

3、根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于乌司他丁和辅料的配比为10万单位：0.05-0.15g，pH为4.8-5.8。

4、根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于乌司他丁和辅料的配比为10万单位：0.1g，pH为5.0-5.5。

5、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于组合物中组成及配比为：

乌司他丁和甘露醇，配比为10万单位：0.05-0.15g，pH4.8-5.8；或者，

乌司他丁、甘露醇和氯化钠，配比为10万单位：0.05-0.15g：0.0003-0.02g，pH4.8-5.8；或者，

乌司他丁、甘露醇、氯化钠、醋酸钠和醋酸，配比为10万单位：0.05-0.15g：0.0003-0.02g：0.0005-0.01g：0.0001-0.001g，pH4.2-5.8。

6、根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于组合物中组成及配比为：

乌司他丁和甘露醇，配比为10万单位：0.1g，pH5.0-5.5；或者，

乌司他丁、甘露醇和氯化钠，配比为10万单位：0.1g：0.015-0.016g，pH5.0-5.5；或者，

乌司他丁、甘露醇、氯化钠、醋酸钠和醋酸，配比为10万单位：0.1g：0.015-0.016g：0.0035-0.004g：0.00065-0.0007g、pH4.8-5.8。

7、根据权利要求1—6所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物以注射剂形式存在。

8、根据权利要求7所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物以水针剂形式存在。

9、一种含有乌司他丁的药物组合物的配制方法，其特征在于，

(1)称取所需乌司他丁，加入配液桶内，加入少量注射用水溶解；

(2)将配制所需的辅料加入到配液桶内，混匀；

(3)用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸溶液调节pH值至4.2-6.0；

(4)加入剩余的注射用水，混匀；

(5)过滤除菌，灌封，包装。