CN101972471A - 乌司他丁用于制备治疗自身免疫性脑脊髓炎药物的用途及其药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及乌司他丁作为制备治疗自身免疫性脑脊髓炎药物的一种应用。本发明涉及药物来源于人尿提纯的天然蛋白药物，质量稳定可靠，不良反应少，克服了现有糖皮质激素等治疗自身免疫性脑脊髓炎常用药物存在的副作用较多，影响患者的生活质量甚至死亡等缺点。通过对自身免疫性脑脊髓炎动物模型的疗效对比研究，发现乌司他丁疗效与激素相当。

Description

乌司他丁用于制备治疗自身免疫性脑脊髓炎药物的用途及其药物组合物

技术领域

本发明涉及药物化学领域。具体而言，本发明涉及一种治疗自身免疫性脑脊髓炎的药物，特别涉及乌司他丁作为制备治疗自身免疫性脑脊髓炎药物的一种应用。 

背景技术

多发性硬化(Multiple Sclerosis，MS)是最常见的神经免疫性疾病之一，在温带患病率接近千分之三。年轻人易患病，发病年龄太约在28岁；具有迁延、复发并逐渐恶化的特点，50％患者在首次发病15年后需借助拐仗行走，致死率高。因此，本病危害极大。由于MS发病机制迄今不清，目前尚无有效的治疗方法。 

MS病理上有炎症浸润、髓鞘脱失和神经变性，其发病机制复杂，Th17细胞是MS的最关健致病因素，其他如CD8+T细胞、DC细胞等也参与发病。多种炎性因子在MS的早期诱导和疾病进展上起重要作用。大量研究也证实MS炎症期间产生的细胞内外蛋白水解酶与MS的中枢神经系统脱髓鞘和神经损伤有关，抑制MS关健蛋白酶活动可以抑制与致病有关的多重通路。 

目前MS药物治疗主要针对抗炎和免疫调节，急性期标准经典治疗是大剂量的激素冲击治疗，它常常伴有严重的副作用如感染、性腺抑制、及肿瘤等，并且抑制内源性脑保护通路，增加神经元丢失，因些需要寻找更安全更有效的治疗药物。 

乌司他丁，又名人尿胰蛋白酶抑制剂(Human Urinary Trypsin Inhibitor，UTI，Urinastatin；或Ulinastatin)，是从人体尿液中分离纯化的由143个氨基酸组成的酸性糖蛋白，它不仅是一种广谱蛋白酶抑制剂，还有抗炎、抗肿瘤及免疫调节等多种作用，可以抑制免疫细胞的活化增殖，调节细胞因子网络，其抗炎和免疫调节与MS致病过种的靶点有重合。 

发明内容

本发明的目的是为治疗自身免疫性脑脊髓炎提供一种高效、安全且副作用少的方法。 

本发明的乌司他丁对自身免疫性脑脊髓炎有明显的治疗作用，一般以药物组合物的形式使用，这种组合物含有治疗有效量的作为活性成分的乌司他丁和可药用辅料，主要剂型包括冻干粉针剂和注射液剂，通常以静脉注射途径给药。 

经静脉注射给药的乌司他丁组合物，一般是固体的灭菌组合物形式。这些组合物还可以含有添加剂，特别是甘露醇、右旋糖苷、水解明胶、柠檬酸钠、甘氨酸等。在使用时溶解于灭菌注射用水或其它注射用灭菌介质中。 

经静脉注射给药的乌司他丁组合物也可以是水溶液形式，组合物还可以含有添加剂，特别是甘露醇、氯化钠、葡萄糖等。 

乌司他丁的剂量根据病情的严重程度、治疗时间而定，一般静脉注射给药量是每天给药1-4次，每次给药10万～100单位/支(瓶)，优选20-60万单位。 

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。 

实施例1制备乌司他丁干粉针 

取过滤灭菌乌司他丁水溶液10000万单位，加20克甘露醇溶解，调节PH到中性，加注射用水至2000毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装于1000个西林瓶中，无菌条件下冷冻干燥，即得。 

实施例2制备乌司他丁注射液 

取过滤灭菌的乌司他丁水溶液10000万单位，加20克甘露醇溶解，调节PH到中性，加注射用水至2000毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个西林瓶中，即得。 

实施例3乌司他丁对实验性自身免疫性脑脊髓炎 

(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)小鼠的治疗作用 

第一部份：EAE小鼠模型的建立 

取6-8周龄C57BL/6雌性小鼠，体重(18-20)g，先准备以下制剂： 

A液：MOG35-55，每只鼠0.2mg，溶于无菌无内素素的PBS中。 

B液：结核菌素H37RA，每只鼠0.4mg，溶于含结核菌素H37RA的完全福氏佐剂中。 

A液在B液中用乳化器乳化30分钟以上，充分乳化，制成MOG乳化液。 

小鼠皮肤消毒后，于两侧下腹部多点皮下注射乳化液。在第0天和48小时再分别注射百日咳毒素，每只小鼠0.4μg(溶于0.1ml的PBS中)，第7天于双侧腋窝部位再次皮下加强注射等量的MOG乳化液。 

第二部分：乌司他丁治疗EAE小鼠模型的实验研究 

选取免疫后第13天的EAE小鼠模型72只，随机分为六组：空白对照组、溶剂对照组、激素治疗组、乌司他丁治疗I组、乌司他丁治疗II组、乌司他丁治疗III组。空白对照组不予治疗；溶剂对照组为等容积的含有选自甘露醇、氯化钠或葡萄糖的添加剂组成的缓冲液，其成份比与乌司他丁注射液内添加剂相同；激素治疗组为甲基强的松龙，剂量30mg/kg，每日1次，持续5天一个疗程；乌司他丁I组剂量为50,000单位/kg，II组剂量为200,000单位/kg，III组剂量为400,000单位/kg，均为每日一次，持续5天一个疗程。各组用药途径均采用尾静脉注射方法。 

主要检测项目为：治疗结束时小鼠病情评分、EAE神经病理学评分。 

小鼠病情临床评分标准如下： 

0分：无任何症状和体征； 

1分：尾部部分无力； 

2分：尾部完全无力； 

3分：后肢轻度瘫痪或步态共济失调； 

4分：双后肢完全瘫痪或前肢受累； 

5分：涉死状态或死亡。 

脑及脊髓炎症细胞浸润评分标准： 

0分：无细胞浸润； 

1分：脊膜细胞浸润； 

2分：1到2个血管周围小范围细胞浸润； 

3分：3到4个血管周围小范围细胞浸润和/或1个累及实质的大范围细胞浸润； 

4分：大量细胞浸润累及20％以上的白质区域。 

髓鞘脱失评分标准： 

0分：无髓鞘脱失； 

1分：软膜下面少量的髓鞘改变； 

2分：软膜下和血管周围明显的脱髓鞘； 

3分：广泛的血管套形成，并延伸到邻近实质区域，或血管周围脱髓鞘斑块融合； 

4分：软膜下和血管周广泛的脱髓鞘累及一半脊髓，并伴有中枢神经系统实质内炎症细胞浸润； 

5分：广泛的软膜下和血管周脱髓鞘累及整个脊髓横断面，伴有中枢神经系统实质内的炎症细胞浸润。 

结果： 

1.临床病情评分比较 

EAE小鼠模型经治疗后，乌司他丁II组，III组及激素治疗组临床病情平均评分明显改善，差异有统计学意义(P＜005)，乌司他丁治疗I组差异不显著。结果表明乌司他丁对EAE的病情改善有激素同样的效果。 

表2临床病情评分比较(X±S)

2.EAE神经病理学评分比较 

空白对照组及溶剂对照组的EAE小鼠HE染色显示腰段脊髓有大量的炎症细胞浸润，有大量的血管套形成，砂罗硌花染色示腰段脊髓折质肿胀，有大块的脱髓鞘，主要分布于前索和侧索。乌司他丁治疗II组，III组及激素治疗组的病理改变明显减轻，腰段脊髓的炎症和脱髓鞘差别有统计学意义(P＜005)。 

表5各治疗组小鼠造模后24周肾脏病理变化的统计 

本试验表明：乌司他丁能明显抑制自身免疫性脑脊髓炎的发生发展，为临床应用提供了可靠依据。 

Claims (6)

1.乌司他丁用于制备治疗自身免疫性脑脊髓炎药物的用途，所述药物含有治疗有效量的乌司他丁以及药学上可接受的载体。

2.根据权利要求1的用途，其中所述药物的给药量是每天给药1-4次，每次给药10万～100单位/支(瓶)，优选20-60万单位。

3.根据权利要求1的用途，其中所述药物为冻干粉针剂，载体可选用葡萄糖、氯化钠、甘露醇、乳糖或水解明胶中的一种或其任意混合物。

4.根据权利要求1的用途，其中所述药物为注射液，载体可选用注射用水、葡萄糖、氯化钠或甘露醇的一种或其任意混合物。

5.根据权利要求3的用途，其中所述药物还含有选自甘露醇、右旋糖苷、水解明胶、柠檬酸钠或甘氨酸的添加剂。

6.根据权利要求4的用途，其中所述药物还含有选自甘露醇、氯化钠或葡萄糖的添加剂。