WO2016066068A1 - 金属硫蛋白复合制剂作为制备穴位介入治疗脑中风后遗症药物的应用 - Google Patents

金属硫蛋白复合制剂作为制备穴位介入治疗脑中风后遗症药物的应用 Download PDF

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WO2016066068A1
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metallothionein
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刘添如
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刘添如
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans

Definitions

  • the present invention belongs to the field of metallothionein medicine use, in particular to a metallothionein (MT) composite preparation as a medicament for preparing acupoint interventional therapy for sequelae of stroke.
  • MT metallothionein
  • Passive recovery exercise effective treatment of cerebral apoplexy, atherosclerotic plaque formation, high blood viscosity and other basic lesions to prevent arteriosclerosis
  • the thrombus is formed again; it improves the blood supply and oxygen supply of the brain tissue, creates a good internal environment for the brain tissue, restores the brain nervous system, improves the signs of exercise, language and nervous system, limb dysfunction controlled by it, and effectively prevents the disease.
  • the recurrence progressed.
  • Traditional Chinese medicine mainly uses traditional Chinese medicine, combined with acupuncture, moxibustion, electroacupuncture, cupping, sputum collateral bloodletting, drug acupoint injection as a supplement, Chinese medicine prescription for promoting blood circulation and removing blood stasis, and aromatherapy; Chinese medicine treatment of stroke disease, with or without The drug resistance, long-lasting effect, and safety are suitable for long-term use, but the disadvantage is that the quality is unstable and the dosage is large.
  • the object of the present invention is to provide a new use of a metallothionein (MT) composite preparation, that is, as a preparation point The application of interventional therapy for sequelae of stroke.
  • MT metallothionein
  • a metallothionein (MT) complex preparation is used as a medicament for preparing acupoint interventional therapy for sequelae of stroke.
  • the metallothionein preparation has a weight ratio of metallothionein MT-I 50%, metallothionein ⁇ - ⁇ 50%, and purity of more than 95% lyophilized powder of rabbit liver metallothionein.
  • the present invention uses a metallothionein compound preparation (metallothionein MT-I and metallothionein- ⁇ , hereinafter referred to as: MT-I, MT-II) to directly absorb and exert its influence in human acupoints Physiologically, in the treatment of cerebral apoplexy sequela, by removing the body and the disease garbage (clearing free radicals, eliminating residuals and vascular embolisms that are not absorbed after hemorrhage due to vascular rupture in the brain, repairing damaged nerve cells by reducing intracranial pressure Activates the dormant nerve cells, normalizes the differentiation of nerve cells, and removes nerve cells that have been damaged and dead.
  • MT-I, MT-II metallothionein compound preparation
  • Cells are the most basic unit of the human body. All life activities are completed between cells. The supply of energy ultimately serves the cells. Only healthy cells can perform normal physiological functions.
  • the human body is in the process of life activities; it constantly carries out metabolism, and continuously produces metabolites (garbage) in the metabolic process. Metabolites are present between the interstitial cells, and if they are not cleared in time, they become endotoxin and continue to attack healthy cells. It causes cell lipid peroxidation to become pathological, accelerates calcium influx, directly affects the normal elastic function of vascular smooth muscle cells, and denatures vascular calcification. It is worth pointing out that the body has accumulated Multi-metabolites and excessive heavy metal elements are factors that cause the decrease of body fluid ra value, and also cause the normal elastic function of vascular smooth muscle cells and the increase of blood consistency.
  • Metallothionein has been discovered since the 1950s, and more and more scientists are attracted by the strange metallothionein, the structure, properties, physiological functions of metallothionein and its biological, medical, environmental Various applications have been extensively studied, and metallothionein (MT) has been held in the world for five international seminars.
  • metallothionein has been engaged in clinical medicine for more than 30 years, and has been clinically applied to metallothionein (MT) for more than ten years. Since 2003, metallothionein (MT) has been used as a strong antioxidant (radical strong scavenger). ) and heavy metal antidote and cell growth promoting agent have been used in the treatment of sequelae of stroke, and have received very satisfactory therapeutic effects.
  • Eliminate free radicals in the body (clearing brain waste, promoting cell growth and differentiation, restoring brain cell function, thereby improving symptoms such as dysfunction), the efficacy has exceeded the traditional treatment standard, metal sulfur egg (MT) is non-toxic, no adverse reactions, metal Sulfur egg (MT) acupoint intervention is safer than any acupuncture intervention in Chinese and Western medicine preparations. Therefore, in order to relieve the suffering of the majority of patients as soon as possible, it is necessary to be widely used in clinical practice.
  • Metallothionein is a class of low molecular weight, cysteine-rich metal binding proteins.
  • MT is a class of low molecular weight, cysteine-rich metal binding proteins.
  • Margoshes. M and Vallee. B. L [l] first isolated the substance from the horse kidney, which was not taken seriously at the time. It was not until the 1980s that it gradually discovered that it had many important biological functions, which led to scientists. Their attention. It has been found that MT is present in all organisms, including mammals, various lower animals, plants and microorganisms.
  • metallothionein and its analogues can be divided into three categories: That is, humans, mammals have all the structure and properties of metallothionein.
  • the second class of similar metallothioneins present in lower motility, plants and microorganisms.
  • the third root widely present in lower plants is actually a glutathione-based polymer.
  • the first class the true metallothionein, has the strongest biological function, especially in humans, followed by various mammals.
  • Most of the products currently on the market are rabbit liver metallothionein.
  • rabbit liver can be similar to MT from the liver of pigs, cattle, sheep and other mammals.
  • the rabbit liver MT is the deepest and easy to obtain, it is safer and more reliable to use rabbit liver MT.
  • Rabbit liver MT is a single peptide chain protein molecule consisting of 68 amino acids with a molecular weight of about 6500.
  • the molecule is rich in 7 divalent metals, mainly zinc, followed by copper. , cobalt, etc., also contain toxic heavy metals such as mercury, cadmium, lead, etc. in toxic environments. It can also be combined with a monovalent metal such as monovalent copper. Gold and silver combined. In normal body, it is mainly zinc, a small amount of copper, cobalt, etc., and its molecular characteristic is rich in cysteine, which is about 30% of all amino acids (that is, about 20). The most interesting thing is that they are in the molecule.
  • Metallothionein is an inducible protein that is mainly synthesized by the liver in the body, usually in very small amounts, but when exposed to environmental stimuli, such as zinc and heavy metals, thiolation reagents, certain cytokines (such as Interferon, interleukin%) and bacteria, the invasion of the virus, can also accelerate the biosynthesis in the body due to serious adverse effects on the body (such as extreme cold, high temperature, nervousness, crisis, hunger, etc.), so this can also It is regarded as a means of self-defense of the body.
  • MT Metallothionein
  • MT can significantly improve the learning and memory ability of mice, reduce the content of MDA (malondialdehyde, a carcinogenic and aging chemicals) and increase the SOD activity. , indicating that MT has a good antagonistic effect on the aging effect of D-galactose.
  • MDA malondialdehyde, a carcinogenic and aging chemicals
  • MT has a protective effect on D-galactose-induced Drosophila shortening lifespan (delayed lifespan 1/10), other effects such as anti-static hypoxia, LD50 on mouse tail vein emboli, and multiple brains in rats
  • D-galactose-induced Drosophila shortening lifespan delayed lifespan 1/10
  • other effects such as anti-static hypoxia, LD50 on mouse tail vein emboli, and multiple brains in rats
  • embolization lethal effects and the effects of cerebral embolism memory function decline in mice have shown good anti-aging effects.
  • scavenging free radicals especially hydroxyl radicals. It has been found that MT has a strong ability to scavenge free radicals. It is worth noting that it is especially strong against SOD and is the strongest natural product. This is consistent with the strong anti-oxidation effect of MT described above, and can be used for the improvement and remission of anti-tumor, diabetes, cardiovascular diseases and neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease. Regarding the relationship between MT and these senile diseases, research is still underway and it is likely to become a pharmaceutical product in this area (there is currently no pharmaceutical product).
  • MT S Metallothi 0 yield S
  • MT S is a protein with a wide range of biological activities.
  • MTs play an important role in anti-oxidation, anti-apoptosis, scavenging free radicals, maintaining essential metal homeostasis, and detoxification of heavy metals. (hereinafter referred to as MTs for the MT family).
  • the currently known MT family includes four subtypes of MT-I, ⁇ - ⁇ , ⁇ - ⁇ , ⁇ -IV, wherein MT-I and ⁇ - ⁇ are present in various tissues, and expression of MT-III Limited to brain tissue, MT-IV is only expressed in stratified phosphorous epithelium
  • MT-I and ⁇ - ⁇ are the most representative subtypes, accounting for 2/3 of the total content of metallothionein in the brain; and MT-III is only present in the brain.
  • Immunohistochemistry was performed using different antibodies for the expression of MT-I and ⁇ - ⁇ in brain tissue. The results consistently showed that MT-I and ⁇ - ⁇ are mainly present in the brain and spinal cord, and its main expression cell is star-shaped gel.
  • MT-I, MT-II and MT-III are mainly expressed in astrocytes and have low levels of expression in neurons (and MT-III > MT-I and ⁇ - ⁇ ).
  • MT-III and MT-I/ ⁇ in astrocytes are mostly expressed in the same central nervous system region, including cortex, brain stem and spinal cord.
  • MT-III is more expressed in dentate cells of hippocampal dentate gyrus, especially neurons that store zinc in synaptic vesicles.
  • the function of MTs in the central nervous system is to regulate the homeostasis and metabolism of essential metals, to regulate the storage and detoxification of non-essential metals, as well as to anti-apoptosis, scavenge free radicals and regulate intracellular redox balance.
  • Metals such as zinc, copper and cadmium play an important role in the regulation of MTs expression, and can induce the production of MTs.
  • the interaction between zinc and MTs plays an important role in the regulation of normal physiological functions. Zinc deficiency can affect growth, immune activity, and brain function, but excess zinc can also be toxic to cells, so there must be a sophisticated system in the animal to maintain the steady state balance of zinc.
  • MTs are involved in the storage and transport of zinc ions, and zinc regulates the synthesis of MTs at the transcriptional level via metal responsive transcrip tion factor-1 (MTF-1) and MTs gene promoters.
  • MRE metal respon- sive elements
  • studies have shown that the antioxidant action of zinc is achieved by inducing the synthesis of MTs, so the role of MTs as an antioxidant protein in central nervous system injury has received increasing attention.
  • Current studies have shown that the neurobiological function of MT-I/ ⁇ is significantly different from that of MT-III after brain injury.
  • MT-I/ ⁇ has neuroprotective effects in the central and peripheral nervous systems and inhibits delayed injuries such as oxidative stress and degeneration.
  • MT-III has biological functions such as nerve growth inhibition, neuroprotection and nerve regeneration regulation.
  • the MT family plays an important role in central nervous system injury. It is important to study the regulation mechanisms of different subtypes of MT in central nervous system injury.
  • MT-I/ ⁇ gene knockout mice were more sensitive to central nervous system damage caused by alginic acid induced seizures, and the number of seizures was significantly increased compared with the control group, and the time was significantly increased. Specifically, after 3 days of administration of alginic acid to seaweed, MT2 ⁇ / ⁇ knockout mice showed a decrease in hippocampal astrocytes and microglia, and neuronal damage and apoptosis were enhanced, and obvious Oxidative stress is manifested in elevated levels of nuclear factor ⁇ ⁇ , Cu, Zn-superoxide dismutase (Cu, Zn-SOD) and tyrosine protein nitration.
  • MT-I/ ⁇ expression-deficient mice were given 6-aminonicotinamide for 3 days, which resulted in decreased astrocyte and microglia/macrophage infiltration, granulocyte 2 macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and its receptor expression are reduced.
  • GM-CSF granulocyte 2 macrophage colony stimulating factor
  • the healing ability of brain tissue in MT-I/ ⁇ knockout mice was significantly lower than that in the control group, and the glial cells were damaged, and most cells developed apoptosis (mainly neurons). And significantly higher than the control group, which indirectly indicates that MT has the effect of inhibiting apoptosis of the central nervous system.
  • MT-I/II Increased expression of MT-I/II was also observed in transgenic mice such as GFAP-L3 and GFAP-interferon (IFN)- ⁇ , and gliosis and neurons were observed in these transgenic mice. damage.
  • the above studies strongly support the protective effect of MT-I/II after central nervous system injury, and its mechanism may be related to its zinc-copper binding ability and antioxidant capacity. Zinc is an essential metal for the brain, and excessive zinc is neurotoxic. Increased levels of zinc chelate synthase in MT-I/ ⁇ knockout mice may be due to increased neurodegenerative degeneration in these mice. In vitro and in vivo experiments have shown that MT-II has anti-oxidative function in the central nervous system.
  • glutamate is an important signaling factor that mediates neuronal and astrocyte damage, while other signaling factors such as cytokines, zinc, and free radicals may interact with glutamate. Co-regulate the expression of MT-I/II.
  • MTs can directly attenuate the inflammatory response associated with central nervous system damage and enhance repair capacity. Excessive inflammatory response after central nervous system injury is an important factor causing re-injury and affecting nerve regeneration. Studies have shown that most acute cytokines such as IL-1, IL-6, TNF- ⁇ and interferon- ⁇ , which mediate post-injury inflammatory responses, are capable of inducing MT expression. In addition, direct effects of sputum and immune cells, including lymphocytes and macrophages, were also observed. This interaction may alter the immune process that cells and cells recognize.
  • Hidalgo et al. extensively studied the changes in the inflammatory response of MT knockout mice after central nervous system injury. It was found that in some animal experimental injury models, administration of MT-I/ ⁇ can regulate the inflammatory response after injury. After cerebral cortex injury, MT-I / II can significantly reduce the expression of pro-inflammatory cytokines and reduce reactive gliosis. In mice with experimental autoimmune encephalomyelitis treated with MT-II, the expression of pro-inflammatory cytokines (such as IL-6 and TNF- ⁇ ) in the brain was decreased, and neuronal apoptosis was also significantly reduced.
  • pro-inflammatory cytokines such as IL-6 and TNF- ⁇
  • MTs can significantly reduce the induction of T lymphocytes (CTL) and inhibit the lytic activity of homologous target cells. Since CTLs play an important role in the protective immune response, MT has an important protective effect on the immune system. In vivo, MT also regulates the body of the body caused by T cell-dependent antigens. The liquid immune response is consistent with a decrease in the immune response observed after injection of exogenous MT and an increase in ovalbumin immunoreactivity after injection of monoclonal MT antibody. Similarly, MT-I/ ⁇ knockout mice exhibited elevated humoral immune responses to T cell-dependent antigens. The above studies indicate that MTs are involved in the immune response following central nervous system injury, and may protect the nervous system by reducing the immune response after injury.
  • MT Metallothionein
  • MT-I / ⁇ has a nutritional effect on neurons after injury and can accelerate the repair of damaged neurons. This effect of MT-I/ ⁇ may be through two different mechanisms: one is to reduce the inflammatory response caused by injury; the other is to accelerate the repair of injured neurons by directly acting on neurons.
  • MT-I / II is essential for the repair process after injury. For example, activation and migration of astrocytes, as well as reduction of immune responses.
  • MT-I/ ⁇ has a protective effect on neuronal death, but it is not certain whether this protective effect is due to a reduction in immune response or directly to neurons, or both.
  • MT-I I II can accelerate wound healing by directly acting on neurons or increasing neuronal survival and subsequent regeneration of axons at the injury site.
  • exogenous MT-I / II can significantly accelerate neuronal repair after local injury in adult rat cerebral cortex.
  • Metallothionein ⁇ - ⁇ / ⁇ is the most powerful antioxidant and free radical scavenger in the biological world, and has significant effects on metabolic and damaging diseases of various tissues and organs of the human body. It is currently a drug that is comparable to the repair and protection of brain nerve cells without any drugs. It is also the ideal preparation for the treatment of sequelae of stroke.
  • Metallothionein (MT) in the treatment of stroke sequelae, although local acupoint intervention, but the metabolic improvement of the overall organ and tissue repair is very significant.
  • MT metallothionein
  • MT150 mg to 300 mg for 90 days the in vivo environment is unprecedentedly clean, which cures the disease and makes the patient appear younger.
  • Metallothionein (MT) is the most effective bioactive substance in nature to resist oxidation and scavenge free radicals. It is one of the most ideal cytoprotective agents.
  • Embodiments of the invention [0043] Acupuncture intervention for stroke after sequelae:
  • Metallothionein is a rabbit liver treated by a special induction technique, which is isolated and purified.
  • the metallothionein complex preparation has a weight ratio of MT-I 50%, MT-II 50, and a lyophilized powder of rabbit liver metallothione with a purity greater than 95%.
  • Rabbit liver metallothionein (MT) complex preparation solvent sterile water for injection.
  • rabbit liver metallothionein (MT) complex preparation lyophilized powder and solvent dilution ratio 5-10m g / ml. (5-10 grams of metallothionein per liter of solution).
  • Acupoint method Main points: Dumb door through the wind, auxiliary points, Xin Yu, Guan Yuan, Neiguan, bone, balance function obstacles and long needles.
  • A draw a metallothionein (MT) dilution with a 2-4 ml-secondary syringe.
  • MT metallothionein
  • B acupoints 0. 5 C m obliquely deep to 0. 4 inch line needle to gas to, retreat to subcutaneous intervention 0. 25_10mg, (ie metallothionein (MT) complex preparation lyophilized powder diluted Solution 0. 4-2ml) to cover the acupuncture points.
  • MT metallothionein
  • a three-month course of treatment usually one to three courses of treatment can be cured.
  • MT metallothionein
  • the course of the disease was within 3 months, 7 cases, 3 months to half a year, 21 cases, 7 months to 1 year, 20 cases, more than 1 year, 14 cases. Exclusion of severe heart and kidney disease, no infection, surgery, pregnancy and other stress conditions.
  • 3 cases there were 4 cases with unfavorable speech, 3 cases with hemianopia, 4 cases with sacral eyes, 4 cases with severe upper limbs, and 5 cases with lower limbs. Eight patients with severe upper and lower limbs were combined.
  • M R 1 or C T shows:
  • Treatment The same basic treatment (Fufang danshen Tablets, Cerebrolysin Capsule) was administered orally in both groups, and the course of treatment was 3 months.
  • the treatment group added a metallothionein (MT) compound preparation acupoint intervention on the above-mentioned basis, acupoint selection criteria; according to the syndrome differentiation of Chinese medicine stroke arrhythmia; main point; dumb door ventilation Fengfu, auxiliary point, Xinshu, Guanyuan , Neiguan, bones, balance dysfunction plus acupuncture and long-term strength; dosage: a course of 90 days.
  • Acupuncture points were divided into 15 times: the first 5 times, 1 time / 3 days; the last 10 times, 1 time / 7 days 10-20 mg / time.
  • Control group Compound Danshen tablets, 4 tablets/time, Cerebrolysin capsules, 2 capsules/time, 3 times/d, 30 minutes after meal Lunar New Year, the course of treatment is 3 months.
  • the clinical cure rate of the treatment group was 51.6% (16/31), and the total effective rate was 93.5% (29/31).
  • the clinical cure rate of the control group was 12.9% (4/31) and the total effective rate was 83.8% (2631).
  • the difference between the two groups was statistically significant (P ⁇ 0.05).
  • Example 1 patient Mr. Li, male, aged 5, Huizhou City, Guangdong province, self-reported 8 years ago due to numbness of the left limb, fatigue was admitted. The patient felt numbness in the left limb one month before, and could not move. He was treated by Western medicine, but the left limb was not used, the numbness was weak, the left hand could not hold the chopsticks, the left lower limb could not stand, could not walk, no dizziness, and the eyes were skewed. Turning to treatment, the left lower limb is still standing, still sitting in a wheelchair, after Knowing that there are new therapies for treating hemiplegia, he will come to the clinic on August 20, 2009.
  • M R 1 shows; right brain cerebral infarction.
  • T 36. 5 ° C
  • ⁇ 80 beats / min
  • R 17 beats / min.
  • Treatment acupoints: main points; dumb door ventilating house, auxiliary points, Xinshu, Guanyuan, Neiguan, extinct bones, (operated as above)
  • Compound Danshen tablets 4 tablets / time, brain active capsules, 2 capsules / time, 3 times / d, 30 minutes after meal, oral treatment, 3 months.
  • Example 2 patient Huang Yalan, female, 76 years old, Dongguan City, Guangdong province, self-reported 3 years ago suffering from cerebral hemorrhage, bleeding volume
  • M R 1 shows: left brain hemorrhage.
  • T 36. 7 ° C
  • P 75 times / min
  • R 18 times / min.
  • Treatment acupoints: main points; dumb door ventilation, acupoints, heart Yu, Guan Yuan, Neiguan, bones, (operated as above).
  • Compound Danshen Tablets 4 tablets/time, brain Active capsules, 2 capsules/time, 3 times/d, orally 30 minutes after meal, the course of treatment is 3 months.
  • Example 3 patient Mr. Zhang, businessman, male, 41 years old, Changde City, Hunan province, self-reported cerebral hemorrhage 3 months ago, bleeding volume 3m 1, notably, the ambulance was sent to the hospital in time, after rescue, hemostasis And through the dangerous period, but left behind the sequelae. Hemiplegia, the left upper and lower limbs can not move, the left hand and the five fingers can not hold and no movement, life can not take care of themselves, hospitalized for nearly 3 months, the daily hanging bottle still does not improve, making Zhang feel very distressed. Visited on April 02, 2012.
  • M R 1 shows: right brain cerebral hemorrhage.
  • T 36. 5 ° C
  • P 78 beats / min
  • R 17 beats / min.
  • Treatment First take the four god window, Xinshu, liver and bloodletting treatment, after the treatment, the head is easy to see clearly, the head swelling and pain, and sleep growth for 5 hours that night.
  • Acupoints Main points; Dumb door ventilation, Auxiliary points, Xinshu, Guanyuan, Neiguan, Abdominal, (administered according to the above method).
  • Compound Danshen tablets 4 tablets / time, brain active capsules, 2 capsules / time, 3 times / d, 30 minutes after meal, oral treatment, 3 months.
  • Example 4 patient Mr. Ye, business owner, male, 48 years old, from Heyuan City, Guangdong Province, self-reported 6 years ago unfortunately Brain stroke, notably, the family sent him to the hospital in time, after the full rescue, finally saved his life, but left behind the sequelae. Hemiplegia, life can not take care of himself, so Ye is very distressed. After the stroke, I have been lying in bed, suffering pain and depression every day, and bringing great mental and material pressure to my family. The family took Ye Fang around for medical treatment, and the effect was not very obvious.
  • C T shows: left cerebral thrombosis.
  • T 36. 5 ° C
  • P 80 beats / min
  • R 18 beats / min.
  • Diagnosis cerebral stroke sequelae.
  • Treatment acupoints: main points; dumb door ventilation, auxiliary points, Xinshu, Guanyuan, Neiguan, extinct, (operated as above).
  • Compound Danshen tablets 4 tablets / time, brain active capsules, 2 capsules / time, 3 times / d, 30 minutes after meal, oral treatment, 3 months.

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Abstract

公开了一种金属硫蛋白复合制剂作为制备穴位介入治疗脑中风后遗症药物的应用。所述金属硫蛋白复合制剂为纯度大于95％的冻干粉兔肝金属硫蛋白，其重量比例为MT-I 50％，MT-II 50％。

Description

说明书
发明名称： 金属硫蛋白复合制剂作为制备穴位介入治疗脑中风后遗 症药物的应用
技术领域
[0001] 本发明属于金属硫蛋白医药用途领域， 具体地说是一种金属硫蛋白 （MT) 复合 制剂作为制备穴位介入治疗脑中风后遗症药物的应用。
背景技术
[0002] 目前在治疗脑中风后遗症方面， 西医采用口服或注射药物以抗血小板聚集类， 钙离子拮抗剂： 卡托普利 阿斯匹林， 氯吡格雷， 尼莫地平， 甘露醇， 脑活素为 主， 是通过扩张血管， 抗凝血， 改善脑组织供血。 减轻脑中风后遗症症状、 降 低高复发率的有效方法， 被动恢复锻炼的同时， 通过可靠的药物治疗， 对脑中 风诱因动脉粥样硬化斑块形成、 血液粘度高等基础病变进行有效治疗， 防止动 脉硬化血栓再次形成； 改善脑组织供血供氧量， 为脑组织创造一个良好的内环 境， 恢复脑神经系统， 使由其控制的运动、 语言神经系统， 肢体功能障碍等体 征得到改善， 并且有效防止病症复发进展。
[0003] 多数西药， 包括阿司匹林都有不同程度的耐药性， 而绝大多数西药的副作用明 显， 对胃肠、 肝肾造成不同程度的损伤。 所以在脑中风急性发作期多以西药治 疗为主， 但不适合在恢复期和预防期长期服用。
[0004] 中医采用中药为主， 结合针剌、 艾灸、 电针、 拔罐、 剌络放血、 药物穴位注射 为辅、 中药方剂用活血化瘀、 芳香开窍疗法； 中药治疗脑中风疾病， 具有无耐 药性、 药效持久、 安全适合长期服用的优势， 但缺点是质量不稳定， 服用剂量 大。
[0005] 目前传统疗法治疗脑中风后遗症不论中药或西药， 都是扩张血管。 抗凝血， 活 血化瘀、 芳香开窍进行康复治疗， 康复时间长。
发明概述
技术问题
[0006] 本发明目的是提供一种金属硫蛋白 （MT) 复合制剂的新用途， 即在作为制备穴 位介入治疗脑中风后遗症药物的应用。
问题的解决方案
技术解决方案
[0007] 一种金属硫蛋白 （MT ) 复合制剂作为制备穴位介入治疗脑中风后遗症药物的应 用。 所述金属硫蛋白制剂重量比例为金属硫蛋白 MT- I 50% , 金属硫蛋白 ΜΤ- Π 50% , 纯度大于 95%的冻干粉兔肝金属硫蛋白。
发明的有益效果
有益效果
[0008] 本发明作用机理如下：
[0009] 一、 本发明采用金属硫蛋白复合制剂 （金属硫蛋白 MT- I与金属硫蛋白 ΜΤ- Π , 以下简称为： MT- I、 MT- II ) 介入人体穴位内能直接吸收并发挥其生理作， 在 治疗脑中风后遗症中， 是通过清除体内及病灶垃圾 （清除自由基， 消除脑内因 血管破裂出血后未吸收的残余物及血管栓塞物， 通过降低颅内压， 修复受损神 经细胞， 激活处于休眠状态的神经细胞， 实现神经细胞的正常分化， 并清除已 经受损残和死亡的神经细胞。 修复损伤的 DNA， 提升体液 ra值， 恢复脑细胞正常 功能） ， 为脑细胞提供良好的洁净生理环境， 分化年轻细胞， 使脑组织得于修 复活化， 恢复脑神经系统， 使由其控制的运动、 语言神经系统体征得到改善。 从根本上改善脑中风后遗症的语言不利， 肢体功能障碍等症状， 并且有效防止 病症复发及进展。 金属硫蛋白 （MT ) 参与体内微量金属元素的运输、 储存和代 谢， 使人体内金属元素的重新分配， 对体内重金属元素铅， 汞， 镉， 铜等有强 力清除力， 对治疗脑中风后遗症神经轴突的修复再生起着重要的作用， 使脑内 及整体代谢处于动态平衡来实现的。
[0010] 细胞是组成人体最基本的单位， 一切生命活动都在细胞之间完成， 能量的供给 最终是为细胞服务； 只有健康的细胞； 人体才能发挥正常的生理功能。 人体在 生命活动过程中； 不断地进行新陈代谢， 在代谢过程中不断产生代谢产物 （垃 圾） 。 代谢产物存在于细胞间质之间， 如得不到及时的清除则成为内毒素不断 攻击健康细胞。 致使细胞脂质过氧化而成病态， 加速细胞钙内流， 直接影响血 管平滑肌细胞的正常弹性功能， 使血管钙化变性。 值得指出的是； 体内积蓄过 多代谢产物及过量重金属元素是导致体液 ra值降低的因素， 也是影响血管平滑 肌细胞的正常弹性功能和血液稠度增大而成血栓的原因。
[0011] 金属硫蛋白 （MT) 从上世纪 50年代发现至今， 越来越多的科学家被奇特的金属 硫蛋白吸引， 对金属硫蛋白的结构， 性质， 生理功能及其在生物， 医学， 环境 等方面的应用进行了广泛的研究， 目前金属硫蛋白 （MT) 在世界上召开过五次 国际研讨会议。
[0012] 发明人从事临床医学三十余年， 对金属硫蛋白 （MT) 的临床应用已有十余年， 自 2003年起把金属硫蛋白 （MT) 作为强抗氧化剂 （自由基强力清除剂） 和重金 属解毒剂及促进细胞生长剂， 应用于治疗脑中风后遗症至今， 收到非常理想的 治疗效果。 清除体内自由基 （清除脑内垃圾， 促进细胞生长分化， 恢复脑细胞 功能， 从而改善功能障碍等症状） ， 疗效已超过传统治疗标淮， 金属硫蛋 （MT ) 无毒， 无不良反应， 金属硫蛋 （MT) 穴位介入比任何中西药制剂的穴位介入 都安全。 因此， 为尽快解除广大患者的疾苦， 得于临床普及应用。
[0013] 金属硫蛋白 （Metallothionein) ， 简称 MT是一类低分子量、 富含半胱氨 酸的金属结合蛋白。 1957年 Margoshes. M和 Vallee. B. L [l]首次从马肾中分离 出该物质， 当时并未引起重视， 直到 80年代之后， 逐步发现其具有多种重要的 生物学功能， 才引起科学家们的重视。 现已发现 MT同时存在于所有的生物体中 ， 包括哺乳动物、 各种低等动物、 植物和微生物中， 从广义上讲， 金属硫蛋白 和其类似物可分为三大类： 第一类即人， 哺乳动物的具有全部金属硫蛋白结构 和特性的。 第二类存在于较低等动、 植物和微生物中的类似金属硫蛋白。 第三 种广泛地存在于低等植物中的根部， 实为谷胱甘肽类聚合物。 第一类也就是真 正的金属硫蛋白的生物功能的效果最强， 尤其是人， 其次是各种哺乳动物。 目 前市场上销售的多为兔肝金属硫蛋白。 当然从猪、 牛、 羊等哺乳动物肝脏中也 可制得兔肝类似 MT， 但由于其中对兔肝 MT研究得最深， 且易获得， 所以还是使 用兔肝 MT比较安全可靠。
[0014] 兔肝 MT与其它哺乳动物 MT—样， 是由 68个氨基酸构成的一个单肽链蛋白质分子 ， 分子量约为 6500， 分子中富含 7个二价金属， 主要为锌， 其次为铜， 钴等， 在 有毒环境下也会含有毒重金属如汞、 镉、 铅等。 它也能与一价金属如一价铜、 金、 银结合。 在正常体内主要为锌， 少量的铜， 钴等， 其分子最大特点是富含 半胱氨酸， 即占全部氨基酸中约 30% (即 20个左右） ， 最有意思的是它们在分子 中都是以金属一巯基簇形式存在， 使整个分子结构十分紧密和牢固， 稳定。 在 金属存在下， 它可以有效地拮抗高温和蛋白酶对其的分解。 但在酸性条件下极 不稳定， 在 PH4. 0以下， 就易脱掉金属， 暴露自由巯基而使整个分子松弛 （变性 态） ， 此时易受蛋白酶的攻击而被降解， 导致生物活性的丧失。 所以 MT不能口 月艮， 否则易被胃液所破坏导致失效， 因此， 制成肠溶衣胶囊不失为一种有效的 方法， 但它一进入肠道就不易再被蛋白酶所破坏， 人体对 MT吸收最有效的途径 是舌下或皮下粘膜。
[0015] 金属硫蛋白是一种诱导蛋白， 在体内主要由肝脏合成， 通常情况下含量甚微， 但当受环境剌激下， 诸如锌和重金属， 垸基化试剂， 某些细胞因子 （如干扰素 ， 白介素…） 和细菌， 病毒的侵入， 也可因在对机体严重不利的情况下 （诸如 极度寒冷， 高温， 紧张， 危急， 饥饿等） 会加速其体内的生物合成， 所以这也 可被看作是机体的一种自卫手段。
[0016] 二、 金属硫蛋白 （MT) 具有多种生物学作用。
[0017] ( 1 ) 参与体内微量金属元素的运输、 储存和代谢等。 研究表明体内很多参与 新陈代谢的酶类， 包括参与体内蛋白质、 核酸生物合成的多种酶， 参与体内能 量合成的某些酶， 参与体内解毒作用的酶， 以及参与体内蛋白质分子折叠 （保 持蛋白质的天然构象与生物功能的蛋白质分子） ， 以及参与体内金属代谢的蛋 白质、 酶类， 都需要有某种一定量的金属参与， 否则就不会有生物活性和功能 。 类似老年人与儿童缺锌、 缺铁等等都会引起某些疾病的发生和影响健康。 但 如单纯补锌补微量元素， 体内多数未被吸收而被排出， 如在肝脏内富有 MT， 它 就可从食物中吸收和固定金属元素， 贮藏下来， 一旦机体需要， 它就可以将其 运输和缓慢释放， 起到 "银行" "仓库" 的作用。 尤其是老年人、 幼儿的补锌
[0018] ( 2 ) 参与体内重金属解毒作用。 目前由于环境的污染， 尤其是土壤与水域中 大量重金属 （如镉， 汞， 铅， 铬等） 的存在， 通过食物链 （粮食， 蔬菜， 水果 ， 空气， 饮用水…） 进入体内， 严重危害人体健康， 尤其是铅对儿童神经系统 的破坏最为严重。 由于 MT结构的特殊性， 它能有效地将细胞内游离的有毒重金 属结合 （高度专一性和亲和性） 而排出体外， 起到解毒作用。
[0019] ( 3 ) 抗氧化， 抗衰老作用及护肝作用。 通过多年分子、 细胞和整体动物水平 研究发现， 它是自然界抗氧化、 抗衰老的最有效的生物活性物质之一。 在细胞 内发现它具有大幅度地提高抗氧化活性物质谷胱甘肽、 谷胱甘肽过氧化物酶， S 0D等的含量， 反之， 却能降低氧化作用产物如肝脏脂质过氧化物， 心肌脂褐素 的含量。 通过抗小鼠 D-半乳糖拟老化 （衰老） 效应模型试验结果发现 MT可明显 改善小鼠的学习记忆能力， 降低 MDA (丙二醛， 一种致癌促衰老化学物质） 的含 量及提高 SOD活性， 说明 MT对 D-半乳糖的致衰老效应有很好的对抗作用。 同时还 发现 MT对 D-半乳糖诱导果蝇寿命缩短具有保护作用 （延缓寿命 1/10) ， 其它诸 如抗静态缺氧效应， 对小鼠尾静脉栓子 LD50的影响， 对大鼠脑多发性栓塞致死 效应的影响以及对小鼠脑栓塞记忆功能衰退的影响等都显示出良好的抗衰老作 用。
[0020] ( 4) 参与抗辐射， 保护机体， 尤其是细胞核， DNA的辐射受损进行修复。 实验 证明， 它不单可修复受损细胞 DNA， 而且还可预防， 效果显著， 它能提高因辐射 而引起的淋巴细胞、 白细胞的下降， 且呈量效关系， 高剂量的 MT可以抵御高剂 量的辐射， 同样动物因辐射的死亡率也大大下降， 提高了存活率和存活时间。 因而明显地具有提高机体抵抗放射性辐射的能力， 由此可见可被用于预防辐射 损伤的诸行业人员的劳保和预防， 也可用于肿瘤病人放疗中的保护。
[0021] ( 5 ) 清除自由基， 尤其是羟基自由基。 经研究发现， MT具有很强的清除自由 基能力， 值得注意的是它尤其对危害人类健康最甚的羟基自由基， 远远强于 SOD ， 是目前最强的天然产物。 这与上述 MT具有强抗氧化作用是一致的， 可用于抗 肿瘤、 糖尿病、 心血管疾病及神经退行性病变 （如老年性痴呆症等） 的改善和 缓解。 有关 MT对这些老年性疾病的关系， 尚在进行研究， 将有可能成为这方面 的医药产品 （目前尚无医药产品） 。
[0022] ( 6 ) 促进细胞生长， 机体发育和能量代谢等。 这很显然与 MT本身的结构与功 能有关。 由于它是体内多种参与代谢的蛋白质、 酶的活性必须成份一微量金属 元素的供应者和运输者， 由它才能调节体内物质的新陈代谢， 包括能量代谢与 细胞的生长、 分化。 另外又据近来利用蛋白质组学技术的研究， 发现它还能抑 制细胞凋亡和促进蛋白质正确折叠 （使具有正常的生物学功能） 和抗氧化作用 ， 即抗衰老作用。 因而可以判断 MT将可发展成为营养保健， 抗衰老和治疗药物
[0023] 目前在国内外， 有关 MT的研究主要已涉及医学和环保， 尤其是老年性疾病。 但 是， 金属硫蛋白 （MT) 在用于治疗脑中风后遗症尚无这方面的应用报道。
[0024] 三、 技术来源和先进性。
[0025] 本技术来自北京大学生命科学学院以茹炳根教授领导的蛋白质课题组， 其 MT研 究处于国际领先地位， 先后获得七五、 八五、 九五国家科委的国家攻关项目， 七五、 八五、 九五的 [863] 项目， 和国家自然科学基金多项。 1995年 5月获国 家教委科技进步一等奖， 1999年 5月通过了国家教育部组织的产业化技术鉴定， 2001年和 2004年又分别获中国高校科学技术二等奖 (2个）。 其中兔肝金属硫蛋白 产品已为国家九五攻关产品。 受国际组织委托， 由北京大学茹炳根教授主持在 2 005年 10月在北京胜利召开了第五届金属硫蛋白国际会议。
[0026] 四、 金属硫蛋白对神经系统疾病的作用。
[0027] 1、 金属硫蛋白 （MT) 在中枢神经系统中的表达及生物学功能。
[0028] 金属硫蛋白（metal lothi0neinS, MTS)是一种具有广泛生物学活性的蛋白 质。 MTs作为一种多功能蛋白，在抗氧化、 抗凋亡、 清除自由基、 维持必需金属 稳态、 重金属解毒等方面具有重要作用。 （以下称 MTs表示 MT家族） 。
[0029] 现已知的 MT家族包括 MT- I , ΜΤ- Π , ΜΤ-ΙΙΙ, ΜΤ-IV四种亚型，其中 MT- I和 ΜΤ- Π存 在于各种组织中， MT- III的表达局限于脑组织中， MT-IV仅在复层磷状上皮中表达
[0030] 脑组织表达的 MTs中， MT- I和 ΜΤ- Π是最具代表性的亚型，占脑中金属 硫蛋白总含量的 2/3 ;而 MT-III仅存在于脑中。 使用不同抗体进行免疫组织化学 研究脑组织中 MT- I和 ΜΤ- Π的表达，结果都一致地显示 MT- I和 ΜΤ- Π主要存在于 脑和脊髓中，它的主要表达细胞是星形胶质细胞，并在脑室脉络丛上皮细胞、 软 脑 (脊)膜细胞、 血管内皮细胞中表达，而神经元很少表达 MT- I / 11，但也有少数 报告显示神经元中有 MT- I / Π的阳性表达。 原位杂交结果与免疫细胞化学和细 胞培养结果一致，显示 MT- I和 MT- II mRNAs主要存在于星形胶质细胞中，但在个 别神经元中有低水平的 mRNAs,特别是海马 CA3区的神经元。 与 MT- I / 11不同^丁- III存在于哺乳动物脑的神经元和胶质细胞中，而且 MT-III mRNA和 MT-III蛋白研究 结果不一致，所以 MT-III 在细胞内的定位尚存在争议，但是目前一致认为
MT- I，MT- II和 MT-III都主要在星形胶质细胞内表达，在神经元中有低水平的表达 (且 MT-III〉MT- I 和 ΜΤ- Π )。 关于区域分布，星形胶质细胞内的 MT-III和 MT- I / Π多数在相同中枢神经系统区域中表达，包括皮层、 脑干和脊髓。 而神经元内 MT -III 在海马齿状回颗粒细胞中表达较多，特别是在突触小泡中储存锌的神经元。
[0031] MTs在中枢神经系统中的功能是调节必需金属的内环境稳态和代谢，调 节非必需金属的贮存和解毒，以及抗凋亡、 清除自由基和调节细胞内氧化还原平 衡。 锌、 铜、 镉等金属对 MTs的表达调控具有重要的作用，均能诱导 MTs的产生。 其中，锌与 MTs的相互作用对正常生理功能的维持具有重要的调节作用。 锌缺乏 可以影响生长、 免疫活性以及脑功能，但过量锌也可以对细胞产生毒性，因此动 物体内必须有一个精密的系统来维持锌的稳态平衡。 MTs 参与锌离子的贮存和 转运，同时锌又在转录水平调节 MTs的合成，这种调节是通过金属反应转录因子- 1 (metal responsive transcrip tion factor-1, MTF-l)与 MTs基因启动子上 的金属反应元件（metal respon- sive elements, MRE)的相互作用来实现的。 而且研究显示，锌的抗氧化作用是通过诱导 MTs的合成而实现的，所以 MTs作为一 种抗氧化蛋白在中枢神经系统损伤中的作用日益得到关注。 目前研究表明脑损 伤后 MT- I / Π的神经生物功能明显不同于 MT-III。 MT- I / Π在中枢及外周神经 系统中具有神经保护作用和抑制迟发性损伤如氧化应激和退化。 而脑中 MT-III具 有神经生长抑制、 神经保护及神经再生调控等生物学功能。 MT家族在中枢神经 系统损伤中具有重要的作用，研究中枢神经系统损伤中 MT不同亚型表达的调控机 制具有重要意义。
[0032] 2、 金属硫蛋白 （MT) 在中枢神经系统损伤中的表达调控及其保护作用
[0033] MT- I / II在损伤后的表达及其保护作用 研究表明 ΜΤ- Ι / Π在中枢神经 系统损伤后的表达上调对脑组织具有保护作用。 MT- I / II除了在神经系统退行 性疾病中表达上调之外，在许多的中枢神经系统损伤实验模型中也出现表达上调 ，如由海人藻酸、 6-氨基烟酰胺和 NMDA等引发的化学性脑损伤，以及低温、 局部 缺血等物理性损伤。 这种表达升高主要发生在损伤后最初几小时至几天内损伤 附近的星形胶质细胞和小胶质细胞中。 转基因小鼠的研究进一步确证了 MT- I I II的这种表达上调对中枢神经系统损伤的保护作用。 MT- I / Π基因敲除小鼠对 海人藻酸诱导癫痫发作的中枢神经系统损伤更敏感，与对照组相比惊厥的次数显 著增加，时间显著增长。 具体表现在给予海人藻酸 3 d后， MT2 Ι / Π基因敲除小 鼠显示出海马星形胶质细胞和小胶质细胞的减少，神经元的损伤和凋亡都增强， 并出现明显的氧化应激，表现在核因子 κ Β、 Cu, Zn-超氧化物歧化酶 (Cu， Zn-SOD)和酪氨酸蛋白硝基化水平的升高。 同样， MT- I / Π表达缺失小鼠给予 6_ 氨基烟酰胺 3 d后可引起星形神经胶质细胞和小胶质细胞 /巨噬细胞浸润减少，粒 细胞 2巨噬细胞集落剌激因子 (GM-CSF)和其受体表达的降低。 在中枢神经系统低 温损伤模型中， MT- I / Π基因敲除小鼠脑组织的愈合能力明显低于对照组，其神 经胶质细胞出现损伤， 大多数细胞发生凋亡 (主要是神经元） ，且明显高于对照 组，这间接表明 MT具有抑制中枢神经系统细胞凋亡的作用。 在缺锌饮食大鼠的低 温脑损伤中也观察到相似的结果，同时伴随着 MT- I / Π的表达降低。 在皮层局部 缺血损伤中， MT- I过表达小鼠比同类野生型小鼠恢复能力要快。 除了这些损伤 模型的研究外，最近一些研究显示 MT- I / Π还能够显著影响其他细胞因子 /生长 因子和皮层低温损伤后的血管发生。
以上研究都表明 MT- I / II的表达升高主要发生在损伤后的星形胶质细 胞以及小胶质细胞中，且对神经损伤有保护作用。 在其他转基因模型小鼠的研究 也得到相似的结果，髓鞘遗传性缺损小鼠的星形胶质细胞和小胶质细胞中可观察 至 IJMT- I / II的强诱导效应，这种突变鼠的遗传性障碍导致严重的中枢神经系统病 理性改变，包括髓质减少、 少突神经胶质细胞死亡、 星形胶质细胞和小胶质细胞 活动增强。 在具有临床症状的 GFAP-L6, GFAP-TNF,
GFAP-L3和 GFAP-干扰素（IFN) - α等转基因小鼠中也能观察到 MT- I / II表达升高， 而且在这些转基因小鼠上都可观察到神经胶质增生及神经元的损伤。 [0035] 以上研究有力地支持了中枢神经系统损伤后 MT- I / II的保护作用，其机 制可能与它的锌和铜的结合能力及抗氧化能力有关。 锌是脑必需金属，而过多的 锌具有神经毒性。 MT- I / Π基因敲除小鼠中锌鳌合酶水平升高，这可能是由于这 些小鼠的神经退行性变性增强。 体外和体内试验表明在中枢神经系统中 MT- I I Π有抗氧化功能。 此外近期采用组织培养方法研究发现在脑损伤中， MT- I / Π的 表达上调是通过星形胶质细胞调节的，这种调节是通过一种尚未确定的神经元和 星形胶质细胞之间的相互作用来进行的。 然而，神经元损伤后介导星形胶质细胞 表达 MT- I / Π的信号通路尚不明确。 神经元和星形胶质细胞共培养的环境中加 入谷氨酸可以引起 MT- I / II的表达增强， 而谷氨酸的受体阻断剂则明显减少这 种 ΜΤ- Ι / Π 的表达。 由此，他们认为谷氨酸是一种重要的介导神经元和星形胶 质细胞损伤后联系的信号因子之一，同时其他一些信号因子如细胞因子、 锌以及 自由基可能与谷氨酸共同调控 MT- I / II的表达。
[0036] 3、 金属硫蛋白 （MT) 在中枢神经系统损伤后免疫应答中的作用。
[0037]
近期研究发现 MTs能够直接减轻伴随着中枢神经系统损伤发生的炎症应答，并增 强修复能力。 中枢神经系统损伤后的过度炎症反应是引起再次损伤及影响神经 再生的重要因素。 研究表明介导损伤后炎症反应的大多数急性细胞因子如 IL-1, IL-6, TNF- α和 interferon- γ都能够诱导 MT表达。 此外， 还观察到 ΜΤ和免疫细 胞的直接作用，其中包括淋巴细胞和巨噬细胞。 这种相互作用可能改变细胞与细 胞识别的免疫过程。
[0038] Hidalgo等广泛研究了中枢神经系统损伤后 MT基因敲除小鼠的炎症应 答的变化，发现一些动物实验性损伤模型中，给予 MT- I / Π可以调节损伤后的炎 症应答。 脑皮层损伤后， MT- I / II能够明显减少促炎症反应细胞因子的表达，以 及降低反应性神经胶质增生。 实验性自身免疫脑脊髓炎小鼠给予 MT- II处理后， 脑中促炎症反应细胞因子 (如 IL-6和 TNF- α )表达降低，神经元的凋亡也明显减 少。 还有研究显示 MTs能够显著降低 T淋巴细胞 (CTL)的诱导作用并抑制同源靶细 胞的溶解活性。 由于 CTLs在保护性免疫应答中起到重要作用，所以 MT对免疫系统 有重要的保护作用。 体内试验中， MT也能够调节 T细胞依赖性抗原引起的体外体 液免疫应答，这与注射外源性 MT后观察到的免疫应答降低和注射单克隆 MT抗体后 卵白蛋白免疫应答性增高是一致的。 同样， MT- I / Π基因敲除小鼠呈现出对 T细 胞依赖性抗原引起的体液免疫反应升高。 以上研究表明 MTs参与了中枢神经系统 损伤后的免疫应答，而且可能通过减少损伤后的免疫应答而对神经系统起保护作 用。
[0039] 4、 金属硫蛋白 （MT) 对中枢神经系统损伤后神经元的修复作用。
[0040] 研究表明 MT- I / Π对损伤后的神经元有营养作用，能够加速损伤神经元 的修复。 MT- I / Π的这种作用可能是通过两种不同的机制:一是通过减少损伤引 起的炎症应答;二是通过直接作用于神经元而加速损伤神经元的修复。 MT- I / II 对于损伤后的修复过程是必不可少的。 例如星形细胞的激活和迁移，以及减少免 疫应答。 还有一些明显的证据表明 MT- I / Π对神经元的死亡有保护作用，但不确 定这种保护效应是由于减少免疫应答还是直接作用于神经元，或两者皆有。 通过 采用缺少免疫系统的神经元损伤组织培养模型进行研究，发现 MT- I I II可通过 直接作用于神经元或增加神经元存活率和损伤部位轴突的后续再生而加快损伤 愈合。 有研究表明 MT- I / II能够加速轴突横断面处突起反应性增生，而 MT-III能 够抑制这种再生反应应答。 此外在成年大鼠大脑皮层局部损伤后给予外源性 MT- I / II能够明显加速神经元的修复。
[0041] 金属硫蛋白 ΜΤ- Ι / Π , 是生物界最理想的极强的抗氧化剂和自由基清除剂， 对 人体全身各组织器官的代谢性及损伤性疾病有显著疗效。 是目前无任何药物可 比的对脑神经细胞特效修复和保护的物质， 也是对脑中风后遗症治疗的首选的 理想制剂。
[0042] 金属硫蛋白 （MT) 在治疗脑中风后遗症过程中， 虽局部穴位介入， 但对整体器 官组织的代谢改善及损伤后修复非常显著。 金属硫蛋白 （MT) 使用一个细胞周 (90天使用 MT150 mg至 300 mg) 后， 体内环境空前洁净， 既治愈了疾病， 患者 又显得明显的年轻化。 金属硫蛋白 （MT) 是自然界抗氧化、 清除自由基的最有 效的生物活性物质， 是目前最理想的细胞保护剂之一。
发明实施例
本发明的实施方式 [0043] 脑中风后遗症穴位介入治疗：
[0044] 金属硫蛋白 （MT) 为通过特殊的诱导技术处理后的兔肝为原料， 经分离、 纯化
， 制得的冻干粉的兔肝金属硫蛋白。
[0045] 金属硫蛋白复合制剂重量比例为 MT- I 50%， MT- II 50 , 纯度大于 95 %的冻干 粉兔肝金属硫蛋白。
[0046] 兔肝金属硫蛋白 （MT) 复合制剂溶剂： 灭菌注射用水。
[0047] 兔肝金属硫蛋白 （MT) 复合制剂冻干粉与溶剂稀释配比： 5-10mg / ml。 （每亳 升溶液中含 5-10亳克金属硫蛋白） 。
[0048] 取穴方法： 主穴： 哑门透风府， 辅穴， 心俞， 关元， 内关， 绝骨， 平衡功能障 碍加针剌长强。
[0049] 用法：
[0050] A、 用 2— 5 ml—次性注射器吸取金属硫蛋白 （MT) 稀释液。
[0051] B、 距离穴位 0. 5 C m斜剌深至 0. 4寸行针至气至， 退至皮下介入 0. 25_10mg， ( 即金属硫蛋白 （MT) 复合制剂冻干粉稀释后的溶液 0. 4-2ml ) 至覆盖穴位。
[0052] 用量：
[0053] 一个疗程 90天。 分 15次穴位介入： 前 5次， 1次 / 3天； 后 10次， 1次 / 7天， 10-
20mg /次。 三个月一疗程， 一般一至三个疗程即可治愈。
[0054] 发明人把金属硫蛋白 （MT) 复合制剂应用于对照治疗脑中风后遗症 73例， 随访 到 62例， 治疗效果如下。
[0055] 诊断与病例选择标准， 临床资料：
[0056] 1、 一般资料： 本组 62例患者， 为 2003年 03月〜 2012年 04月治疗， 病例入选 标准： 脑中风后遗症诊断标准。 男 36例， 女 26例； 年龄 38〜81岁， 平均年龄 54 岁；
[0057] 脑出血 24例， 脑血栓 18例， 脑栓塞 20例。
[0058] 病程在 3个月之内 7例， 3个月〜半年 21例， 7个月〜 1年 20例， 1年以上 14例 。 均排除有严重的心、 肾疾病， 无感染、 手术、 妊娠等应激情况。
[0059] 2、 治疗方法： 用随机数字表将患者随机分为治疗组和对照组， 每组各 31例患 者， 两组均给予相同的基础治疗 （复方丹参片， 脑活素胶囊） 口服， 治疗组在 此基础上用金属硫蛋白 （MT) 复合制剂穴位介入， 对照组口服复方丹参片， 脑 活素胶囊， 两组年龄、 性别、 病程等一般资料比较， 差异无统计学意义 （P〉0. 05 ) ， 可以进行组间比较。
[0060] 其中， 治疗组 31例，男性 17例，女性 14例；年龄 38 78岁，平均 51. 6岁；病程 03 8 年，平均 3. 5年； 除偏瘫外， 合并口眼歪斜病者 3例， 合并言语不利者 4例， 合并 偏盲者 3例，合并嘴歪眼斜者 4例，合并上肢患侧障碍重者 4例， 合并下肢患侧障碍 重者 5例。 合并上下肢患侧障碍重者 8例。
[0061] 对照组 31例，男性 19例，女性 12例。 年龄 40 81岁，平均 52. 4岁；病程 03 10年， 平均 2. 4年； 除偏瘫外， 合并口眼歪斜病者 2例， 合并言语不利者 5例， 合并偏盲 者 2例，合并嘴歪眼斜者 4例，合并上肢患侧障碍重者 5例， 合并下肢患侧障碍重者 6例。 合并上下肢患侧障碍重者 7例
[0062] 3、 临床表现及实验室检查：
[0063] M R 1或 C T显示：
[0064] (1)治疗组 左脑溢血 5例， 右脑溢血 9例， 左脑血栓 8例， 右脑血栓 9例，
[0065] (2)对照组 左脑溢血 6例， 右脑溢血 8例， 左脑血栓 11例， 右脑血栓 6例
[0066] 血压：
[0067] (1) 治疗组； 收治时； 130 139/80 89mmHg 7例， 140 149/90 95mmHg 13 例， 小于 130/80 Hg 11例。
[0068] (2) 对照组； 收治时； 130 139/80 89mmHg 11例， 140 149/90 95mmHg
10例， 小于 130/80mmHg 10例。
[0069] 治疗实施： 两组均相同的基础治疗 （复方丹参片， 脑活素胶囊） 口服， 疗程均 为 3个月。
[0070] 治疗组在上述基础上加用金属硫蛋白 （MT) 复合制剂穴位介入， 取穴标准； 按 中医脑中风后遗症辨证诊断； 主穴； 哑门透风府， 辅穴， 心俞， 关元， 内关， 绝骨， 平衡功能障碍加针剌长强； 用量： 一个疗程 90天。 分 15次穴位介入： 前 5 次， 1次 / 3 d; 后 10次， 1次 / 7 d 10-20mg /次。 复方丹参片， 4片 /次， 脑活 素胶囊， 2粒 /次， 3次 /d， 餐后 30 min口服， 疗程为 3个月。
[0071] 对照组； 复方丹参片， 4片 /次， 脑活素胶囊， 2粒 /次， 3次 /d， 餐后 30 min口 月艮， 疗程为 3个月。
[0072] 4、 统计学分析： 建立 FOXPRO数据库， 用 SAS6. 12软件进行数据分析， 统计学方 法用 t检验和 X 2检验。 P〈0. 05为差异有统计学意义。
[0073] 5、 疗效判定标准 （1 ) ； 临床治愈： 患侧肢体有力， 能徒步行走， 生活可自理 。 （2 ) ； 显效： 患侧肢体功能明显改善， 可扶杖行走， 生活可基本自理。 （3 ) ； 好转： 患侧肢体功能恢复有进步。 （4) ； 无效： 治疗前后症状无改善。 治 疗总有效率 = (临床治愈例数 +显效例数 +有效例数) /总例数 X 100%。
[0074] 6、 临床治疗结果见下表。
[0075] 治疗 1个疗程治疗组与对照组患者疗效比较 （例） 。
[] [表 1]
Figure imgf000014_0001
[0076] 7、 治疗组临床治愈率为 51. 6% (16/31) ， 总有效率为 93. 5% (29/31) 。 对照组 临床治愈率为 12. 9% (4/31)总有效率为 83. 8% (2631)， 两组比较差异有统计学意 义 (P<0. 05 ) 。
[0077] 8、 脑中风后遗症病变在脑内， 出血或血管栓塞是导致脑内环境改变的原因， 因此造成大量脑细胞因环境不适， 缺血而死亡。 从而又进一步加重脑内环境恶 化， 使脑组织加重吸收和代谢的负担， 故而康复时间漫长。 在传统治疗的基础 上加用金属硫蛋白 （MT) 复合制剂穴位介入， 加快了对脑内环境的代谢和净化 ， 恢复了脑神经细胞的修复和正常分化， 故患者康复时间短， 临床治愈高， 值 得推广。
[0078] 典型病例 ：
[0079] 例 1， 患者李先生， 男性， 5 8岁， 广东惠州市人， 自述 8年前因左侧肢体麻木 ， 乏力入院。 患者前一个月突感左侧肢体麻木乏力， 不能活动， 经西医治疗， 但左侧肢体偏废不用， 麻木乏力， 左手不能持筷， 左下肢不能站立， 不能行走 ， 无眩晕、 口眼歪斜。 展转治疗， 左下肢还是无站立， 至今还是坐轮椅， 后得 知有新疗法可治偏瘫， 于 2009年 08月 20日来诊。
[0080] 2009年 08月 20日检查： 左侧除偏瘫外， 左下肢患侧功能障碍严重， 不能站立， 左手握力及运动功能尚可。
[0081] M R 1显示； 右脑脑梗塞。
[0082] 血压： 139/88mmHg。
[0083] T: 36. 5°C , Ρ: 80次 /分 ， R: 17次 /分。
[0084] 诊断： 脑中风后遗症。
[0085] 治疗： 取穴： 主穴； 哑门透风府， 辅穴， 心俞， 关元， 内关， 绝骨， （按上述 方法施术）
[0086] 用金属硫蛋白复合制剂穴位介入； 用量： 一个疗程 90天。 分 15次穴位介入： 前
5次， 1次 / 3 d; 后 10次， 1次 / 7 d， 10-20mg /次。 复方丹参片， 4片 /次， 脑 活素胶囊， 2粒 /次， 3次 /d， 餐后 30 min口服， 疗程为 3个月。
[0087] 经治疗五周后病情明显好转。 症状有了改善， 能下地用拐杖能行走。 因患病时 间长， 故嘱患者渐进功能锻炼。 经过一个疗程治疗， 不用拐杖， 自己行走了， 生活基本能自理， 痊愈。 2010年 11月 10日电话随访， 生活能自理， 能做轻活。
[0088] 例 2， 患者黄雅兰， 女， 76岁， 广东东莞市人， 自述 3年前患上脑出血， 出血量
4m 1， 当时急叫救护车把他送往医院抢救， 却留下后遗症。 偏瘫， 右侧上下肢 不能动， 卧床不起， 生活不能自理， 且夜尿频繁， 给家人带来了诸多不便， 她 先后在各大医院做过检查治疗， 均无显著疗效。 于 2007年 06月 08日来诊。
[0089] 2007年 06月 08日检查： 右侧除偏瘫外， 下肢患侧功能障碍严重， 不能站立。
[0090] M R 1显示： 左脑脑溢血。
[0091] 血压： 140/85mmHg。
[0092] T: 36. 7°C ， P: 75次 /分 ， R: 18次 /分。
[0093] 诊断： 脑中风后遗症。
[0094] 治疗： 取穴： 主穴； 哑门透风府， 辅穴， 心俞， 关元， 内关， 绝骨， （按上述 方法施术） 。
[0095] 用金属硫蛋白复合制剂穴位介入； 用量： 一个疗程 90天。 分 15次穴位介入： 前
5次， 1次 / 3 d; 后 10次， 1次 / 7 d， 10-20mg /次。 复方丹参片， 4片 /次， 脑 活素胶囊， 2粒 /次， 3次 /d， 餐后 30 min口服， 疗程为 3个月。
[0096] 经治疗三周后病情明显好转。 症状有了改善， 能下床用拐杖能行走， 嘱患者渐 进功能练习。 经过一个疗程治疗， 不用拐杖， 自己行走了， 生活能自理， 痊愈 。 2007年 12月 10日电话随访， 生活能自理， 并能做轻活。 血压基本正常。
[0097] 例 3， 患者张先生， 商人， 男， 41岁， 湖南常德市人， 自述 3个月前患上脑出血 ， 出血量 3m 1， 幸好当时及时救护车送往医院， 经过抢救， 止血并度过危险期 ， 但却留下了后遗症。 偏瘫， 左上下肢不能动， 左手五指不能握且无动静， 生 活完全不能自理， 住院治疗近 3个月， 每天打吊瓶仍不见好转， 使张某感到十分 苦恼。 于 2012年 04月 02日来诊。
[0098] 2012年 04月 02日检查： 左侧除偏瘫外， 上下肢患侧功能障碍严重， 不能站立， 左手指不能握， 头胀痛， 精神差。 足下垂内翻。
[0099] M R 1显示： 右脑脑溢血。
[0100] 血压： 170/105mmHg。
[0101] T: 36. 5°C ， P: 78次 /分 ， R: 17次 /分。
[0102] 诊断： 脑中风后遗症。
[0103] 治疗： 先取四神窗， 心俞， 肝俞放血治疗， 治疗完后即觉头部轻松目清， 头胀 痛立止， 当晚睡眠增长 5小时。
[0104] 取穴： 主穴； 哑门透风府， 辅穴， 心俞， 关元， 内关， 绝骨， （按上述方法施 术） 。
[0105] 用金属硫蛋白复合制剂穴位介入； 用量： 一个疗程 90天。 分 15次穴位介入： 前
5次， 1次 / 3 d; 后 10次， 1次 / 7 d， 10-20mg /次。 复方丹参片， 4片 /次， 脑 活素胶囊， 2粒 /次， 3次 /d， 餐后 30 min口服， 疗程为 3个月。
[0106] 经治疗二周后病情明显好转。 症状有了改善， 用拐杖能单独行走， 兴奋不已 。 三周后不用拐杖， 自己行走了， 嘱患者加强功能练习。 经过一个疗程治疗， 左手能握手机， 可垂直举过头， 自己行走了， 生活能自理， 血压： 140/90mmHg ， 痊愈。 2012年 12月 12日电话随访， 生活能自理， 照常做生意。 左手功能大改 善， 足肌张力升高。 平时骑自行车锻炼。
[0107] 例 4， 患者叶先生， 企业老板， 男， 48岁， 广东河源市人， 自述 6年前不幸患上 脑中风， 幸好当时家人及时把他送往医院， 经过的全力抢救， 总算保住了性命 ， 但却留下了后遗症。 偏瘫， 生活完全不能自理， 使叶某感到十分苦恼。 中风 以后便一直瘫痪在床， 每天过着痛苦、 忧郁， 还给家人带来很大的精神和物质 上的压力。 家人带着叶某四处求医， 效果都不是很明显。
[0108] 于 2007年 07月 18日由家人就带着叶某来诊。
[0109] 2007年 07月 18日检查： 右侧除偏瘫外， 合并上下肢患侧功能障碍严重， 意识清 楚， 言语流利。
[0110] C T显示： 左脑血栓形成。
[0111] 血压： 130/85mmHg。
[0112] T: 36. 5°C ， P: 80次 /分 ， R: 18次 /分。
[0113] 诊断： 脑中风后遗症。
[0114] 治疗： 取穴： 主穴； 哑门透风府， 辅穴， 心俞， 关元， 内关， 绝骨， （按上述 方法施术） 。
[0115] 用金属硫蛋白复合制剂穴位介入； 用量： 一个疗程 90天。 分 15次穴位介入： 前
5次， 1次 / 3 d; 后 10次， 1次 / 7 d， 10-20mg /次。 复方丹参片， 4片 /次， 脑 活素胶囊， 2粒 /次， 3次 /d， 餐后 30 min口服， 疗程为 3个月。
[0116] 经治疗三周后病情明显好转。 症状有了改善， 用拐杖能单独行走， 兴奋不已。
嘱患者渐进功能锻炼。 经过一个疗程治疗， 不用拐杖， 自己行走了， 生活能自 理， 痊愈。 2009年 09月 10日电话随访， 生活能自理， 并能做力所能及之轻活。

Claims

权利要求书
[权利要求 1] 一种金属硫蛋白复合制剂作为制备穴位介入治疗脑中风后遗症药物的 应用。
[权利要求 2] 根据权利要求 1所述的金属硫蛋白复合制剂作为制备穴位介入治疗脑 中风后遗症药物的应用， 其特征在于： 所述金属硫蛋白复合制剂为纯 度大于 95 %的冻干粉兔肝金属硫蛋白， 其重量比例为金属硫蛋白 MT- I 50% , 金属硫蛋白 ΜΤ- Π 50%。
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