CN103143000B - 一种重组人干扰素α2b制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种注射用重组人干扰素α2b制剂，该制剂包括重组人干扰素α2b、磷酸盐缓冲液、乙二胺四乙酸二钠盐、组氨酸、氯化钠和制剂用水构成，该制剂的pH值为6.0～7.5。本发明可在不加入表面活性剂和防腐剂的同时，能够在2～8℃条件下能稳定重组人干扰素α2b有效期2年以上，在25℃条件下能保持有效期6个月以上，在振摇和反复冻融等破坏性试验中也能很好的保持重组人干扰素α2b活性和稳定性；提高重组人干扰素α2b制剂使用的安全性。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种可直接注射用的重组人干扰素α2b制剂及其制备方法。
背景技术
干扰素属蛋白质类物质，可广泛应用于治疗各种疾病。但是蛋白质类物质在水性溶液中容易变性或者丧失其生物活性，因此通常将其制成冻干制剂或通过添加稳定剂将其制成液体制剂。由于冻干制剂的冻干工艺复杂且操作费用高，病人使用之前还需要复溶，因此从经济和使用便捷性方面考虑，更趋向于研制可长期稳定保存干扰素液体制剂。
重组人干扰素α2b属于干扰素的一种，被广泛的应用于急慢性病毒性肝炎（乙型、丙型）、尖锐湿疣、毛细胞性白血病、慢性粒细胞白血病等的治疗。目前将其制成液体制剂的研究主要有以下报道：
名称为“稳定的α干扰素水溶液制剂”（CN1160355A）的中国专利文献公开了以下方案：采用稳定剂（多乙氧基醚80）、螯合剂（乙二胺四乙酸盐）、张力剂（氯化钠）、抗菌防腐剂（间-甲酚）、缓冲剂和干扰素α-2b制成pH范围在4.5～7.1的重组人干扰素液体制剂。
名称为“一种稳定的重组人干扰素制剂”（CN1255377A）的中国专利文献公开了以下方案：采用pH5.0～7.5的柠檬酸盐缓冲液，氯化钠浓度为0.4-1.0%，然后加入助剂物质，即浓度为0.1-1‰的EDTA、制剂中含浓度为1-20μl/100ml的Tween80、制剂中含保护剂浓度为0.5-1.8‰的对羟基苯甲酸甲酯和浓度为0.05-0.18‰的对羟基苯甲酸丙酯，同时通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm，最后加入重组人α-干扰素蛋白100-600万单位/毫升，配置成水针制剂。
以及，名称为“一种稳定的干扰素水溶液”（CN1256148A）的中国专利文献公开的方案：该干扰素由α干扰素、稳定剂、等渗剂、pH4.5-9.0范围的缓冲体系、非离子表面活性剂（聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯）、制剂用水配置而成，不含防腐剂。
上述三种方案中，虽然都能够制取得到稳定的干扰素液体制剂，但其所采用的方案中均不同程度的需要添加表面活性剂和/或防腐剂。而表面活性剂和防腐剂的添加会带来安全风险，如表面活性剂：聚山梨酯80，会发引发过敏反应，产生皮疹、荨麻疹、呼吸抑制、心跳过速、溶血等不良反应，发生率约为5%～40%；丙二醇、聚乙二醇和苯甲醇也都均可引起溶血现象。另外，防腐剂虽然能抑菌生长，但其带来的安全风险非常大，儿童用药和静脉注射中都已明确规定禁用防腐剂。
发明内容
本发明的首要目的是提供一种可直接注射用的重组人干扰素α2b制剂，不含有表面活性剂和防腐剂，且稳定性好、存储时间长，使用风险低。
其采取的方案为：
一种重组人干扰素α2b制剂，该制剂是由以下组分和制剂用水构成：
本发明中通过长期对重组人干扰素α2b稳定性、活性实验研究发现，按上述方案配制的重组人干扰素α2b制剂，可在不加入表面活性剂和防腐剂的同时，能够在2～8℃条件下能稳定重组人干扰素α2b有效期2年以上，在25℃条件下能保持有效期6个月以上，在振摇和反复冻融等破坏性试验中也能很好的保持重组人干扰素α2b活性和稳定性；提高重组人干扰素α2b制剂使用的安全性。另外本发明中也不需要采用人血清白蛋白作为稳定剂，防止血液制品带来的污染风险，降低医药的生产成本。
本发明的另一目的是提供该重组人干扰素α2b制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：
S1:按制剂的原料比称取各原料药品待用；
S2:将称取好的氯化钠配置成氯化钠水溶液，然后将称取好的磷酸盐缓冲液、乙二胺四乙酸二钠盐、组氨酸按顺序依次加入氯化钠水溶液中溶解混匀配制成稳定剂母液，磷酸盐缓冲液、乙二胺四乙酸二钠盐和组氨酸各原料的加入是分别在前一原料完全溶解混匀后再加入后一原料进行溶解混匀；
S3:将称取好的重组人干扰素α2b加入S2中得到的稳定剂母液中，混匀后再加制剂用水进行定容，使得混合溶液中各原料组分的浓度与制剂的要求相一致，再将定容后的溶液经滤膜过滤除菌后即可制得该制剂。
通过上述操作方法依次溶解各原料和经滤膜过滤除菌后即可制得该能够稳定储存且保持重组人干扰素α2b活性的制剂。具体实施时，优选采用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠配制磷酸盐缓冲液，以取得最佳效果。可根据制剂的PH值来选取磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的比例进行配置。
为了获取更好的储存稳定性和临床治疗效果，本申请优选采用以下方案生产该重组人干扰素α2b制剂，亦即：该制剂是由以下组分和制剂用水构成，
该实施方案相对于实现本发明目的的其它技术参数方案在制剂的稳定性、重组人干扰素α2b活性以及临床治疗效果上都有显著的提升。
附图说明
图1是本发明制得的重组人干扰素α2b的蛋白纯度检测结果。
具体实施方式
以下通过具体实施例来对本申请作进一步的详细说明，但以下实施例不应构成限制本发明保护范围的理由。其中实施例1～4为本申请的具体实施方案，实施例5为利用本发明公开的制备方法制取与现有技术中重组人干扰素α2b制剂组分相一致的重组人干扰素α2b制剂的实施方案，实施例6是对实施例1～5中制取得到的重组人干扰素α2b制剂在不同条件下的稳定性进行测试的实验，实施例7为实施例4中制取得到的重组人干扰素α2b制剂在不同条件性的蛋白纯度进行检测的实验。
实施例1
取氯化钠9g，加入制剂用水500ml溶解混匀，按顺序依次加入5mmolpH6.0磷酸二氢钠-磷酸氢二钠，100mg乙二胺四乙酸二钠盐，1g组氨酸分别进行溶解混匀得到稳定剂母液；然后再量取重组人干扰素α2b1.0×106IU，缓慢加入稳定剂母液中，混匀，加制剂用水定容至1000ml，混匀；最后将配制好的含有重组人干扰素α2b的溶液用滤膜过滤除菌后，即可得到重组人干扰素α2b制剂。
实施例2
取氯化钠9g，加入制剂用水500ml溶解混匀，按顺序依次加入10mmol pH6.5磷酸二氢钠-磷酸氢二钠，300mg乙二胺四乙酸二钠盐，2g组氨酸分别进行溶解混匀得到稳定剂母液；然后再量取重组人干扰素α2b3.0×106IU，缓慢加入稳定剂母液中，混匀，加制剂用水定容至1000ml，混匀；最后将配制好的含有重组人干扰素α2b的溶液用滤膜过滤除菌后，即可得到重组人干扰素α2b制剂。
实施例3
取氯化钠9g，加入制剂用水500ml溶解混匀，按顺序依次加入15mmol pH7.0磷酸二氢钠-磷酸氢二钠，500mg乙二胺四乙酸二钠盐，2g组氨酸分别进行溶解混匀得到稳定剂母液；然后再量取重组人干扰素α2b3.0×106IU，缓慢加入稳定剂母液中，混匀，加制剂用水定容至1000ml，混匀；最后将配制好的含有重组人干扰素α2b的溶液用滤膜过滤除菌后，即可得到重组人干扰素α2b制剂。
实施例4
取氯化钠9g，加入制剂用水500ml溶解混匀，按顺序依次加入20mmol pH7.5磷酸二氢钠-磷酸氢二钠，1g乙二胺四乙酸二钠盐，5g组氨酸分别进行溶解混匀得到稳定剂母液；然后再量取重组人干扰素α2b6.0×106IU，缓慢加入稳定剂母液中，混匀，加制剂用水定容至1000ml，混匀；最后将配制好的含有重组人干扰素α2b的溶液用滤膜过滤除菌后，即可得到重组人干扰素α2b制剂。
实施例5
取氯化钠9g，加入制剂用水500ml溶解混匀，按顺序依次加入10mmol pH7.0磷酸二氢钠-磷酸氢二钠，100μl吐温80，20g人血白蛋白分别进行溶解混匀得到稳定剂母液，然后再量取重组人干扰素α2b6.0×106IU，缓慢加入稳定剂母液中，混匀，加制剂用水定容至1000ml，混匀；最后将配制好的含有重组人干扰素α2b的溶液用滤膜过滤除菌后，即可得到重组人干扰素α2b制剂。
实施例6
为了确定本发明公开的重组人干扰素α2b制剂的稳定性，分别将实施例样品置于2～8℃、25℃、37℃条件下保存，在规定时间点取样，对实施例1～5中制取得到的重组人干扰素α2b制剂进行稳定性考察。分别将实施例样品置于装有日光灯的冰箱里，照度条件为4500±5001x，温度6±2℃，第10天取样，按考察项目检测。分别将实施例样品在避光，室温下，置于摇床（250r/min）中振摇8d，按考察项目检测。分别将供试品置于-20℃冰箱中12小时使供试品溶液完全冻结，然后取出置于2～8℃冰箱中8小时使供试品溶液完全融化成液体状态，如此反复6次，分别取样检测。结果：本发明制取的可直接注射使用的制剂在2～8℃条件下能稳定重组人干扰素α2b有效期至2年以上，在25℃条件下能稳定储存6个月以上，在光照、振摇和反复冻融等破坏性试验中也能很好的保持重组人干扰素α2b的活性和稳定，具体结果详见表1～6。
表1实施例1～5制取的制剂在2～8℃贮存12个月的稳定性结果
表2实施例1～5制取的制剂在2～8℃贮存24个月的稳定性结果
表3实施例1～5制取的制剂在25℃贮存6个月的稳定性结果
表4实施例1～5制取的制剂在37℃贮存2个月的稳定性结果
表5实施例1～5制取的制剂振摇8天、室温条件的稳定性结果
表6实施例1～5制取的制剂反复冻融6次的稳定性结果
实施例7
本发明制取的制剂可以通过采用高效液相色谱法检测其蛋白纯度，高效液相色谱检测所采取色谱条件为：色谱柱TSK G2000SWXL；流动相为0.1mol/L-磷酸盐0.1mol/L氯化钠缓冲液，pH7.0；上样量200μl；在波长214nm处检测，以重组人干扰素α2b色谱峰计算的理论塔板数应不低于1000。按面积归一化法计算，重组人干扰素α2b主峰面积应不低于总面积的95%。其中附图1为实施例1～实施例5制取得到的制剂分别在4℃、25℃、37℃条件下和光照、振摇及反复冻融试验中的蛋白纯度的检测结果。
Claims (4)
1.一种重组人干扰素α2b制剂，该制剂是由以下组分和制剂用水构成：
2.如权利要求1所述的注射用重组人干扰素α2b制剂，其特征在于：磷酸盐缓冲液由磷酸二氢钠和磷酸氢二钠配制而成。
3.如权利要求2所述的重组人干扰素α2b制剂，其特征在于：该制剂是由以下组分和制剂用水构成，
4.一种如权利要求1所述的重组人干扰素α2b制剂的制备方法，包括以下操作步骤：
S1:按制剂的原料比称取各原料药品待用；
S2:将称取好的氯化钠配置成氯化钠水溶液，然后将称取好的磷酸盐缓冲液、乙二胺四乙酸二钠盐、组氨酸按顺序依次加入氯化钠水溶液中溶解混匀配制成稳定剂母液，磷酸盐缓冲液、乙二胺四乙酸二钠盐和组氨酸各原料的加入是分别在前一原料完全溶解混匀后再加入后一原料进行溶解混匀；
S3:将称取好的重组人干扰素α2b加入S2中得到的稳定剂母液中， 混匀后再加制剂用水进行定容，使得混合溶液中各原料组分的浓度与制剂的要求相一致，再将定容后的溶液经滤膜过滤除菌后即可制得该制剂。
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