CN109602705A - 一种重组人干扰素α2b喷雾剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种重组人干扰素α2b喷雾剂，以10L计，其组成包括10‑1000mg的重组人干扰素α2b和辅料，本发明的制剂是重组人干扰素α2b喷雾剂，是利用基因工程技术获得的重组人干扰素为原料，与能稳定重组人干扰素α2b活性的稳定剂、保湿剂、渗透压调节剂等所形成的一种口咽部给药的液体制剂，pH值在6.0～7.5，制剂在由病毒引起的儿童疱症性咽峡炎和手足口Ⅰ期的口腔疱疹的治疗中可获得良好的效果。

Description

一种重组人干扰素α2b喷雾剂
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种重组人干扰素α2b喷雾剂。
背景技术
疱疹性咽峡炎是一种急性传染性咽峡炎，能够引起疱疹性咽峡炎的病原体较复杂，已有的文献报道包括肠道病毒71型(EV71)，柯萨奇病毒A组6型、8型、10型、16型(CV-A6、CV-A 8、CV-A 10、CV-A 16)柯萨奇B组病毒(1～3、5型)及ECHO病毒6型和9型等。疱疹性咽峡炎与手足口(HFMD)的致病病原体有一定的重合性，主要为CA 16和EV71，临床症状也具有类似性，在同一地区发病趋势接近，且两者病原体大部分相平行，第1期HFMD中部分病例仅表现为皮疹或疱疹性咽峡炎，个别病例可无皮疹。我国台湾的研究显示EV71暴发流行时期间，约10％儿童发生症状性EV71感染表现为疱疹性咽峡炎。该病夏秋季发病率最高，主要累及1～7岁小儿。初起时咽部充血并有散在灰白色疱疹，直径约1～2mm四周绕有红晕，2～3日后红晕加剧扩大，疱疹不久破溃，形成黄色溃疡，数目多少不等，大致在5个左右。此种黏膜疹多见于扁桃体前柱，也可见于软腭、悬雍垂及扁桃体上，但不见于齿龈及颊粘膜。国家卫生健康委员会发布的《手足口病诊疗指南(2018年版)》中指出手足口病第1期部分病例表现为疱疹性咽峡炎；
IFN-α是参与抗病毒免疫的重要效应分子，首先作用于IFN-α受体(IFNAR)，激活后的IFNAR可以导致IFN-α信号传导通道Janus激酶(Janus kinase)家族及信号转导和转录活化因子(signal transducers and activators of transcription，STAT)通道，即JAK-STAT通道中一系列分子的激活，最终产生抗病毒蛋白而发挥抗病毒作用；
重组人干扰素α2b喷雾剂是利用基因工程技术获得的重组人干扰素为原料，与能稳定重组人干扰素α2b活性的稳定剂、保湿剂、渗透压调节剂等所形成的一种口咽部给药的液体制剂，其适应症是用于病毒引起的疱症性咽峡炎。
本发明的首要目的是提供一种重组人干扰素α2b喷雾剂，该喷雾剂干扰素活性稳定性好，对口腔及咽喉无刺激，通过口咽部、咽峡部给药，治疗由肠道病毒引起的疱症性咽峡炎及手足口Ⅰ期的口腔疱疹有良好的效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种重组人干扰素α2b喷雾剂，其主要适用于治疗由病毒引起的儿童疱症性咽峡炎和手足口Ⅰ期的口腔疱疹。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种重组人干扰素α2b喷雾剂，以10L计，其组成包括10-1000mg的重组人干扰素α2b和辅料。
所述的辅料为：
甘露醇 100～500g
人血白蛋白 50～200g
pH调节剂 适量
所述的pH调节剂为NaOH。
该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将甘露醇置于注射用水中，搅拌至完全溶解；
b)加入pH调节剂，调节pH值至6.5-7.5；
c)加入人血白蛋白，使人血白蛋白的含量为0.5％-2％(W/V)，得溶媒溶液；
d)将重组人干扰素α2b加入到上述溶媒溶液中，混匀，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
本发明还包括可以不添加人血白蛋白的配方，以10L计，其组成包括：
剩余的为浓度为5～40mM、pH为6.0-7.5的磷酸盐缓冲液。
该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将依地酸二钠、组氨酸、蔗糖置于浓度为5～40mM、pH为6.0-7.5的磷酸盐缓冲液中，搅拌至完全溶解，得溶媒溶液；
b)将重组人干扰素α2b加入到溶媒溶液中，混匀，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
所述的重组人干扰素α2b的生物学活性为1.0×109-1.0×1011IU，其代表的是每1mg重组人干扰素α2b蛋白质的生物学活性不低于1.0×108国际单位。
本发明所述的辅料还可以包括抑菌剂，包括但不限于季铵盐类，如苯扎氯铵、苯扎溴铵；酯类，如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯等；醇类，如三氯叔丁醇等；酸及盐类，如山梨酸、硼酸等，优选羟苯甲酯和羟苯丙酯的合用。
本发明的优点：
本发明提供了2种技术方案，技术方案1采用人血白蛋白作为干扰素保护剂，甘露醇作为渗透压调节剂。技术方案2采用蔗糖作为干扰素保护剂，不含人血白蛋白，同时蔗糖有甜味，可以提高口腔内喷雾时的依从性。
具体实施方式
实施例1
一种重组人干扰素α2b喷雾剂，以10L计，其组成包括10mg的重组人干扰素α2b和辅料。
所述的辅料为：
甘露醇 100g
人血白蛋白 50g
NaOH 适量
该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将甘露醇置于注射用水中，搅拌至完全溶解；
b)加入NaOH，调节pH值至6.5；
c)加入人血白蛋白，使人血白蛋白的含量为0.5％(W/V)，得溶媒溶液；
d)将重组人干扰素α2b加入到上述溶媒溶液中，混匀，定容，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
实施例2
一种重组人干扰素α2b喷雾剂，以10L计，其组成包括100mg的重组人干扰素α2b和辅料。
所述的辅料为：
甘露醇 300g
人血白蛋白 100g
NaOH 适量
该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将甘露醇置于注射用水中，搅拌至完全溶解；
b)加入NaOH，调节pH值至7.0；
c)加入人血白蛋白，使人血白蛋白的含量为1％(W/V)，得溶媒溶液；
d)将重组人干扰素α2b加入到上述溶媒溶液中，混匀，定容，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
实施例3
一种重组人干扰素α2b喷雾剂，以10L计，其组成包括1000mg的重组人干扰素α2b和辅料。
所述的辅料为：
甘露醇 500g
人血白蛋白 200g
NaOH 适量
该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将甘露醇置于注射用水中，搅拌至完全溶解；
b)加入NaOH，调节pH值至7.5；
c)加入人血白蛋白，使人血白蛋白的含量为2％(W/V)，得溶媒溶液；
d)将重组人干扰素α2b加入到上述溶媒溶液中，混匀，定容，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
实施例4
一种重组人干扰素α2b喷雾剂，以10L计，其组成包括：
剩余的为浓度为5mM、pH 6.0的磷酸盐缓冲液。
该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将依地酸二钠、组氨酸、蔗糖置于5mmol、pH 6.0的磷酸盐缓冲液中，搅拌至完全溶解，得溶媒溶液；
b)将重组人干扰素α2b加入到溶媒溶液中，混匀，定容，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
实施例5
一种重组人干扰素α2b喷雾剂，以10L计，其组成包括：
剩余的为浓度为20mM、pH 7.0的磷酸盐缓冲液。
该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将依地酸二钠、组氨酸、蔗糖置于20mmol、pH 7.0的磷酸盐缓冲液中，搅拌至完全溶解，得溶媒溶液；
b)将重组人干扰素α2b加入到溶媒溶液中，混匀，定容，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
实施例6
一种重组人干扰素α2b喷雾剂，以10L计，其组成包括：
还包括浓度为40mM、pH 7.5的磷酸盐缓冲液。
该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将依地酸二钠、组氨酸、蔗糖置于40mmol、pH 7.5的磷酸盐缓冲液中，搅拌至完全溶解，得溶媒溶液；
b)将重组人干扰素α2b加入到溶媒溶液中，混匀，定容，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
实施例7
一种重组人干扰素α2b喷雾剂，以10L计，其组成包括100mg的重组人干扰素α2b和辅料。
所述的辅料为：
该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将甘露醇，羟苯甲酯，羟苯丙酯置于注射用水中，搅拌至完全溶解；
b)加入NaOH，调节pH值至7.0；
c)加入人血白蛋白，使人血白蛋白的含量为1％(W/V)，得溶媒溶液；
d)将重组人干扰素α2b加入到上述溶媒溶液中，混匀，定容，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
实施例8
一种重组人干扰素α2b喷雾剂，以10L计，其组成包括：
剩余的为浓度为20mM、pH 7.0的磷酸盐缓冲液。
该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将依地酸二钠、组氨酸、蔗糖、羟苯甲酯，羟苯丙酯置于20mM、pH 7.0的磷酸盐缓冲液中，搅拌至完全溶解，得溶媒溶液；
b)将重组人干扰素α2b加入到溶媒溶液中，混匀，定容，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
性能测试：
稳定性研究：
表1重组人干扰素α2b喷雾剂在2～8℃条件下贮存的稳定性试验结果(效价以理论值百分比表示)
表2重组人干扰素α2b喷雾剂在20～25℃条件下贮存的稳定性试验结果(效价以理论值百分比表示)
表3重组人干扰素α2b喷雾剂在30～37℃条件下贮存的稳定性试验结果(效价以理论值百分比表示)
体外药效研究
重组人干扰素α2b和利巴韦林(RBV)进行体外抗EV71和CVA16的药效研究，结果如下：
体外抗EV71研究
感染前预给药2h：在Vero细胞中，CPE法测定IFNα2b和RBV预给药2h对EV71均没有抑制作用。
0h给药：IFNα2b对EV71的IC50为61.3±22.18IU/ml，选择指数SI为1631.32；RBV对EV71的IC50为6.97±3.98IU/ml，选择指数SI为1435.41。
2h给药：IFNα2b对EV71的IC50为185.04±43.07IU/ml，选择指数SI为540.42；RBV对EV71IC50为39.86±8.44IU/ml，选择指数SI为250.88；
体外抗CVA16研究
感染前预给药2h：在Vero细胞中，CPE法测定IFNα2b和RBV预给药2h对柯萨奇病毒A16均没有抑制作用。
0h给药：在Vero细胞中，CPE法测定IFNα2b 0h给药对柯萨奇病毒A16的IC50为100.34±28.14IU/ml，选择指数SI为996.62；RBV在0h给药对柯萨奇病毒A16没有抑制作用。
感染后2h给药：在Vero细胞中，CPE法测定IFNα2b感染后2h给药对柯萨奇病毒A16的IC50为218.42±25.78IU/ml，选择指数SI为457.84；RBV感染后2h给药对柯萨奇病毒A16没有抑制作用。

Claims (9)

1.一种重组人干扰素α2b喷雾剂，其特征在于，以10L计，其组成包括10-1000mg的重组人干扰素α2b和辅料。
2.根据权利要求1所述的一种重组人干扰素α2b喷雾剂，其特征在于，所述的辅料为：
甘露醇 5～30g
人血白蛋白 50～200g
pH调节剂 适量。
3.根据权利要求2所述的一种重组人干扰素α2b喷雾剂，其特征在于，所述的pH调节剂为NaOH。
4.根据权利要求1所述的一种重组人干扰素α2b喷雾剂，其特征在于，所述的辅料为：
依地酸二钠 0.1～0.5g
组氨酸 0.5～1.5g
蔗糖 500～1000g。
5.根据权利要求4所述的一种重组人干扰素α2b喷雾剂，其特征在于，所述的辅料还包括浓度为5～40mM、pH为6.0-7.5的磷酸盐缓冲液。
6.根据权利要求2所述的重组人干扰素α2b喷雾剂，其特征在于，该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将甘露醇置于注射用水中，搅拌至完全溶解；
b)加入pH调节剂，调节pH值至6.0-7.5；
c)加入人血白蛋白，使人血白蛋白的含量为0.5％-2％(W/V)，得溶媒溶液；
d)将重组人干扰素α2b加入到上述溶媒溶液中，混匀，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
7.根据权利要求5所述的重组人干扰素α2b喷雾剂，其特征在于，该重组人干扰素α2b喷雾剂的制备过程具体为：
a)将依地酸二钠、组氨酸、蔗糖置于5～40mM、pH 6.0-7.5的磷酸盐缓冲液中，搅拌至完全溶解，得溶媒溶液；
b)将重组人干扰素α2b加入到溶媒溶液中，混匀，制成重组人干扰素α2b溶液；搅拌均匀后除菌过滤灌装入喷雾剂装置中，即得成品。
8.根据权利要求1所述的一种重组人干扰素α2b喷雾剂，其特征在于，所述的重组人干扰素α2b的生物学活性为1.0×109-1.0×1011IU，其代表的是每1mg重组人干扰素α2b蛋白质的生物学活性不低于1.0×108国际单位。
9.根据权利要求1所述的一种重组人干扰素α2b喷雾剂，其特征在于，所述的辅料还可以包括抑菌剂，包括但不限于季铵盐类，如苯扎氯铵、苯扎溴铵；酯类，如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯等；醇类，如三氯叔丁醇等；酸及盐类，如山梨酸、硼酸等，优选羟苯甲酯和羟苯丙酯的合用。
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