CN105535951A - 一种乌司他丁注射液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种乌司他丁注射液及其制备方法。该乌司他丁注射液的配方为，每1000支：乌司他丁2500万单位～10000万单位、甘露醇1～30g、氯化钠0～10g、磷酸氢二钠0～5g、磷酸二氢钠0～5g和注射用水。本发明提供的乌司他丁注射液配制方法中，先配制2～4℃的辅料溶液，并使用添加量为1～5g、平均粒径为6～9μm的活性炭在2～4℃下对配置好的辅料溶液低温吸附处理12～20分钟后，再利用处理后的辅料溶液溶解乌司他丁。利用本发明提供的配方与制备方法配制的乌司他丁注射液，不良反应发生率相对较低、稳定性相对较高。

Description

一种乌司他丁注射液及其制备方法
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种乌司他丁注射液及其制备方法。
背景技术
乌司他丁（Ulinastatin）是从人体尿液中分离纯化的一种糖蛋白，其实质为一种胰蛋白酶抑制剂，因此也被称为人尿胰蛋白酶抑制剂(HumanUrinaryTrypsinInhibitor)。Beurer和Reich等人于1909年第一次报道了人体尿液中存在这种胰蛋白酶抑制剂。乌司他丁由143个氨基酸残基组成，相对分子量为60-70KD，等电点为2.6，是一种酸性蛋白。乌司他丁主要有三个功能域：O-糖苷键连接的糖基化区域(Ala1-Lys21)、N端的Kunitz型结构域I(Lys22-Arg77)以及具有胰蛋白酶抑制活性的C端Kunitz型结构域II(Thr78-Leu143)。两个Kunitz型结构域具有一定的同源性，每个结构域中都含有6个保守的半胱氨酸，通过形成3对二硫键维持一定的空间构型。有研究标明，乌司他丁的酶抑制剂活性主要存在于其主体蛋白骨架中的Kunitz型结构域。乌司他丁特殊的分子结构决定了其多样的生物学功能。
乌司他丁具有以下药理作用：减少促炎性细胞因子的生成和释放；调节凝血功能，抑制纤溶亢进，保护血小板；稳定溶酶体膜，抑制多种水解酶活性；免疫调节作用等。因此，乌司他丁在临床抗炎、脏器保护、脑损伤神经保护、改善微循环等方面具有重要作用。当机体处于由于多发伤、严重烧伤等引起的缺血缺氧状态时，体内氧自由基增加，炎性细胞因子产生，应用乌司他丁可使过度炎性反应被抑制，从而起到保护肠黏膜的作用。乌司他丁还可抑制凝血因子Ⅴ、Ⅷ、Ⅻ等的过度激活，从而使这些凝血因子的消耗减少，有益于维护术后凝血系统的正常功能。除此之外，乌司他丁是一种蛋白酶抑制剂，对胰蛋白酶、α－糜蛋白酶、弹力蛋白酶、透明质酸酶、纤溶酶等多种蛋白酶具有良好的抑制作用。另有研究发现，应用乌司他丁可调节T细胞数量，从而调整免疫功能。临床上乌司他丁常用于急性胰腺炎、急性循环障碍的治疗；大中型手术期的器官保护；以及危重症中全身性炎症反应、多器官功能障碍综合症的预防等。
按照WHO国际药物监测合作中心的规定，药物不良反应（AdverseDrugReactions,ADR）指正常剂量的药物用于预防、诊断、治疗疾病或调节生理机能时出现的有害的和与用药目的无关的反应。乌司他丁用于治疗急性胰腺炎的研究中显示其施用在一定程度上会引起用药对象发生皮疹、唾液分泌增多、注射部位血管痛、例恶心呕吐、ALT升高等不良反应。目前市售的商品乌司他丁注射剂的说明书中也明确说明该药物的不良反应包括：白细胞减少或嗜酸粒细胞增多；AST、ALT上升；恶心、呕吐、腹泻；注射部位血管痛、发红、瘙痒感、皮疹等；以及过敏等。上述药物不良反应可能会引起用药者的身体不适，甚至致使病情恶化，引发新的疾病。
本发明人长期致力于乌司他丁制剂的研发工作，并取得一定效果。例如，在中国专利申请CN101439181A中公开了一种稳定的乌司他丁水针剂药物组合物，该乌司他丁水针剂药物组合物的制备方法主要包括以下几步：称取所需乌司他丁以及其他辅料于入配液桶内；加入注射用水溶解；调节pH值；加入剩余的注射用水至所需体积；过滤除菌，灌封，包装。但该乌司他丁水针剂药物组合并不能满足实际生产中对降低乌司他丁制剂生产成本的需求。例如，在一个已公开的处方中，配制每10000万单位的乌司他丁需加入多达100g甘露醇，才能保持乌司他丁活性残留率＞99.9%。此外，目前临床使用的乌司他丁制剂多为粉针剂，其配制过程需要一定时间，在此过程中存在活性降低以及微生物污染的可能性。
因此，在降低生产成本的同时，如何最大限度地保持乌司他丁注射液中的乌司他丁活性成分在存储过程中的稳定性，并减少其药物不良反应，是其实际生产和临床使用需要解决的重要问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种稳定的、低不良反应的乌司他丁注射液及其制备方法，以解决乌司他丁制剂在临床使用中存在的问题。
在本发明中，乌司他丁单位被定义为：2μg胰蛋白酶活性被抑制50％时的乌司他丁的用量为1个单位。
一个方面，本发明提供了一种乌司他丁注射液，其pH值范围为6.2-6.8，其配方为，每1000支：
其中，甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠为该乌司他丁注射液的辅料成分。
药物制剂辅料指在药物制剂中，除活性成分之外，加入的有助于药物制剂成型、稳定、增溶、助溶、缓释等不同功能和作用的必须添加品。供注射液使用的药用辅料应该具有：在应用的有效浓度内，对人体安全无毒、水溶性好、理化性质稳定、与活性成分无配伍禁忌并对其有一定的辅助功能等五个方面的特性。注射液辅料根据功能和作用可分为：稳定剂、增溶剂、助溶剂、抗氧剂、酸碱调节剂、pH值缓冲剂、乳化剂、抑菌防腐剂等。
本发明所述的乌司他丁注射液中，甘露醇的用量优选为1～25g；进一步优选为1～15g。
本发明所述的乌司他丁注射液中，氯化钠的用量优选为0～6g；进一步优选为5g。
本发明所述的乌司他丁注射液中，磷酸氢二钠的用量优选为0～2g；进一步优选为1.28g。
本发明所述的乌司他丁注射液中，磷酸二氢钠的用量优选为0～2g；进一步优选为0.7g。
另一方面，本发明还提供了上述乌司他丁注射液的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
⑴.辅料溶液配制：按照配方用量称取甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，加总体积450mL～900mL、温度为2～4℃的注射用水，搅拌至溶解，加入医用活性炭吸附处理后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，得到辅料溶液，并保持该溶液温度为2～4℃；
⑵.按照配方用量称取乌司他丁，并于配液罐中依次加入步骤⑴所得辅料溶液、乌司他丁，搅拌至完全溶解，得到药液A，并保持该药液温度为2～4℃；
⑶.用盐酸或氢氧化钠溶液调节步骤⑵所得药液A的pH值至6.8，得到药液B，并保持该药液温度为2～4℃；
⑷.采用0.22μm滤膜对药液B过滤除菌后，得到药液C，并保持该药液温度为2～4℃；
⑸.用2～4℃注射用水将上述药液C补足体积至1500mL，混匀，得到药液D，并保持该药液温度为2～4℃；
⑹.采用0.22μm滤膜对药液D过滤除菌后，进行分装灌封，包装。
本发明所述的制备方法步骤⑴中的医用活性炭吸附处理的方式为在2～4℃下进行搅拌。
本发明所述的制备方法步骤⑴中的医用活性炭的添加量为1～5g；优选为1～4g；进一步优选为1～3g；最优选为2～3g。
本发明所述的制备方法步骤⑴中的医用活性炭的吸附处理时间为12～20分钟；优选为12～18分钟；进一步优选为13～17分钟；最优选为14～16分钟。
本发明所述的制备方法步骤⑴中的医用活性炭的平均粒径为6～9μm；优选为6～8μm；进一步优选为7～8μm。
本发明所述的制备方法步骤⑶中的盐酸和氢氧化钠溶液的浓度为3M。
与现有技术相比，本发明提供的乌司他丁冻干粉制剂的制备方法具有以下特点：
⑴.本发明提供的配方中，辅料总量为1-50g，辅料用量明显低于现有技术。在现有技术公开的一个配方中，配制每10000万单位的乌司他丁注射液，甘露醇的添加量多达100g。本发明提供的乌司他丁注射液配方中，辅料用量少，不仅降低了其生产成本，同时还降低了其不良反应发生率。
⑵.本发明先利用2～4℃的注射用水配制除乌司他丁以外的辅料溶液，在利用医用活性炭吸附处理该辅料溶液，吸附处理的方式为2～4℃下搅拌。本发明还对医用活性碳的添加量以及吸附时间进行了研究，能够实现本发明所述效果的医用活性炭的添加量为1～5g，吸附时间为12～20分钟。现有技术中活性炭处理方式通常采用高温加热吸附，乌司他丁作为一种生物活性蛋白质，高温加热容易使其变性，生物活性降低甚至丧失。本发明不同于现有技术，通过使用添加量为1～5g、平均粒径为6～9μm的活性炭在2～4℃下低温吸附处理12～20分钟，在吸附掉杂质的同时，保证了乌司他丁的稳定性。
综上所述，利用本发明提供的配方与制备方法配制的乌司他丁注射液，稳定性相对较高，不良反应发生率相对较低。
具体实施方式
本发明的具体实施方式仅限于进一步解释和说明本发明的内容，并不对本发明的内容构成限制。
本发明实施例中所述“精密称取“指称取重量应准确至所取质量的千分之一”
实施例1：一种乌司他丁注射液
配方如下：每1000支
配制方法：
⑴.辅料溶液配制：按照配方用量称取甘露醇、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，加总体积450mL、温度为2℃的注射用水，搅拌至溶解，加入1g在2℃下搅拌20min吸附处理后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，得到辅料溶液，并保持该溶液温度为2℃；
⑵.按照配方用量称取乌司他丁，并于配液罐中依次加入步骤⑴所得辅料溶液、乌司他丁，搅拌至完全溶解，得到药液A，并保持该药液温度为2℃；
⑶.用3M盐酸或氢氧化钠溶液调节步骤⑵所得药液A的pH值至6.8，得到药液B，并保持该药液温度为2℃；
⑷.采用0.22μm滤膜对药液B过滤除菌后，得到药液C，并保持该药液温度为2℃；
⑸.用2℃注射用水将上述药液C补足体积至1500mL，混匀，得到药液D，并保持该药液温度为2℃；
⑹.采用0.22μm滤膜对药液D过滤除菌后，进行分装灌封，包装。
实施例2：一种乌司他丁注射液
处方配比如下：每1000支
配制方法：
⑴.辅料溶液配制：按照配方用量称取甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，加总体积750mL、温度为3℃的注射用水，搅拌至溶解，加入2g在3℃下搅拌18min吸附处理后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，得到辅料溶液，并保持该溶液温度为3℃；
⑵.按照配方用量称取乌司他丁，并于配液罐中依次加入步骤⑴所得辅料溶液、乌司他丁，搅拌至完全溶解，得到药液A，并保持该药液温度为3℃；
⑶.用3M盐酸或氢氧化钠溶液调节步骤⑵所得药液A的pH值至6.8，得到药液B，并保持该药液温度为3℃；
⑷.采用0.22μm滤膜对药液B过滤除菌后，得到药液C，并保持该药液温度为3℃；
⑸.用3℃注射用水将上述药液C补足体积至1500mL，混匀，得到药液D，并保持该药液温度为3℃；
⑹.采用0.22μm滤膜对药液D过滤除菌后，进行分装灌封，包装。
实施例3：一种乌司他丁注射液
处方配比如下：每1000支
配制方法：
⑴.辅料溶液配制：按照配方用量称取甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，加总体积850mL、温度为3℃的注射用水，搅拌至溶解，加入3g在3℃下搅拌16min吸附处理后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，得到辅料溶液，并保持该溶液温度为3℃；
⑵.按照配方用量称取乌司他丁，并于配液罐中依次加入步骤⑴所得辅料溶液、乌司他丁，搅拌至完全溶解，得到药液A，并保持该药液温度为3℃；
⑶.用3M盐酸或氢氧化钠溶液调节步骤⑵所得药液A的pH值至6.8，得到药液B，并保持该药液温度为3℃；
⑷.采用0.22μm滤膜对药液B过滤除菌后，得到药液C，并保持该药液温度为3℃；
⑸.用3℃注射用水将上述药液C补足体积至1500mL，混匀，得到药液D，并保持该药液温度为3℃；
⑹.采用0.22μm滤膜对药液D过滤除菌后，进行分装灌封，包装。
实施例4：一种乌司他丁注射液
处方配比如下：每1000支
配制方法：
⑴.辅料溶液配制：按照配方用量称取甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，加总体积500mL、温度为4℃的注射用水，搅拌至溶解，加入4g在4℃下搅拌14min吸附处理后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，得到辅料溶液，并保持该溶液温度为4℃；
⑵.按照配方用量称取乌司他丁，并于配液罐中依次加入步骤⑴所得辅料溶液、乌司他丁，搅拌至完全溶解，得到药液A，并保持该药液温度为4℃；
⑶.用3M盐酸或氢氧化钠溶液调节步骤⑵所得药液A的pH值至6.8，得到药液B，并保持该药液温度为4℃；
⑷.采用0.22μm滤膜对药液B过滤除菌后，得到药液C，并保持该药液温度为4℃；
⑸.用4℃注射用水将上述药液C补足体积至1500mL，混匀，得到药液D，并保持该药液温度为4℃；
⑹.采用0.22μm滤膜对药液D过滤除菌后，进行分装灌封，包装。
实施例5：一种乌司他丁注射液
处方配比如下：每1000支
配制方法：
⑴.辅料溶液配制：按照配方用量称取甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，加总体积600mL、温度为4℃的注射用水，搅拌至溶解，加入3g在4℃下搅拌12min吸附处理后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，得到辅料溶液，并保持该溶液温度为4℃；
⑵.按照配方用量称取乌司他丁，并于配液罐中依次加入步骤⑴所得辅料溶液、乌司他丁，搅拌至完全溶解，得到药液A，并保持该药液温度为4℃；
⑶.用3M盐酸或氢氧化钠溶液调节步骤⑵所得药液A的pH值至6.8，得到药液B，并保持该药液温度为4℃；
⑷.采用0.22μm滤膜对药液B过滤除菌后，得到药液C，并保持该药液温度为4℃；
⑸.用4℃注射用水将上述药液C补足体积至1500mL，混匀，得到药液D，并保持该药液温度为4℃；
⑹.采用0.22μm滤膜对药液D过滤除菌后，进行分装灌封，包装。
实施例6：一种乌司他丁注射液
处方配比如下：每1000支
配制方法：
⑴.辅料溶液配制：按照配方用量称取甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，加总体积900mL、温度为2℃的注射用水，搅拌至溶解，加入5g在2℃下搅拌12min吸附处理后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，得到辅料溶液，并保持该溶液温度为2℃；
⑵.按照配方用量称取乌司他丁，并于配液罐中依次加入步骤⑴所得辅料溶液、乌司他丁，搅拌至完全溶解，得到药液A，并保持该药液温度为2℃；
⑶.用3M盐酸或氢氧化钠溶液调节步骤⑵所得药液A的pH值至6.8，得到药液B，并保持该药液温度为2℃；
⑷.采用0.22μm滤膜对药液B过滤除菌后，得到药液C，并保持该药液温度为2℃；
⑸.用2℃注射用水将上述药液C补足体积至1500mL，混匀，得到药液D，并保持该药液温度为2℃；
⑹.采用0.22μm滤膜对药液D过滤除菌后，进行分装灌封，包装。
对比例1：一种乌司他丁注射液
配方同实施例1。
配制方法：
以下步骤均在室温下进行，且使用的所有溶液均为室温温度。
⑴.按照配方用量称取乌司他丁，加入配液桶内，加入200mL注射用水溶解，得到乌司他丁溶液；
⑵.按照配方用量称取甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，加入步骤⑴所述乌司他丁溶液，混匀，得到药液A；
⑶.用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸溶液调节步骤⑵所得药液A的pH值至6.0，得到药液B；
⑷.用注射用水将上述药液B补足体积至1500mL，得到药液C；
⑸.采用0.22μm滤膜对药液C过滤除菌后，进行分装灌封，包装。
对比例2：一种乌司他丁注射液
配方同实施例2；配制方法同对比例1。
对比例3：一种乌司他丁注射液
配方同实施例3；配制方法同对比例1。
实施例7：乌司他丁注射液稳定性实验
实验方法：
取实施例1-6以及对比例1-6所述的乌司他丁注射液各一支，分别按照下述三种条件存放：（1）25℃，相对湿度60%，存放2年；（2）25℃，相对湿度60%，存放3年（3）30℃，相对湿度60%，存放2年。按照以下公式计算乌司他丁的活性残留率：活性残留率＝放置后活性/放置前活性×100％
采用以下方法测定乌司他丁的活性：
1.溶液配制
标准品溶液：精密称取乌司他丁标准品，加0.2M三乙醇胺缓冲液配制成浓度为50单位/1mL的乌司他丁标准品溶液。
上述0.2M乙醇胺缓冲液的配制方法：称取三乙醇胺29.8g，加蒸馏水900mL溶解，用4M盐酸溶液调pH值至7.8，加蒸馏水定容至1000mL，摇匀，即得。
待测品溶液：精密称取本发明涉及地实施例1-6和对比例1-6所述乌司他丁注射液，加0.2M三乙醇胺缓冲液配制成浓度为50单位/1mL的乌司他丁待测品溶液。
结晶胰蛋白酶溶液：精密称取结晶胰蛋白酶，加预冷氯化钙盐溶液制成浓度为0.1mg/1mL的结晶胰蛋白酶溶液，该溶液现配现用，且于4℃保存。
上述胰蛋白酶的纯度为：7500-10000BAEE单位/1mg蛋白。
上述氯化钙盐溶液的配制方法：称取氯化钙2.94g，加0.001M盐酸溶液1000mL溶解即得。
苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐溶液：称取苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐，加蒸馏水制成浓度为1mg/mL的溶液，该溶液现配现用，并置暗处保存。
2.测定方法
取0.2M三乙醇胺缓冲液1.6mL,预热至25±0.1℃后，加至比色池中；加标准品溶液0.2mL，加结晶胰蛋白酶溶液0.2mL，混匀，25±0.1℃保温5分钟；加预热至25±0.1℃的苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐溶液1.0mL，立即计时并摇匀；以蒸馏水作为空白对照，依照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV)在405nm波长处测定吸光度，测定时间间隔为1分钟，共测定5分钟，吸光度的变化率应恒定。以反应时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸光度变化率(ΔAs)。
取0.2M三乙醇胺缓冲液1.6mL,预热至25±0.1℃后，加至比色池中；加0.2M三乙醇胺缓冲液0.2mL，加结晶胰蛋白酶溶液0.2mL，混匀，25±0.1℃保温5分钟；加预热至25±0.1℃的苯甲酰-L-精氨酸-P-对硝基苯胺盐酸盐溶液1.0mL，立即计时并摇匀；以蒸馏水作为空白对照，依照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV)在405nm波长处测定吸光度，测定时间间隔为1分钟，共测定5分钟，吸光度的变化率应恒定。以反应时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸光度变化率(ΔA0)。
取0.2M三乙醇胺缓冲液1.6mL,预热至25±0.1℃后，加至比色池中；加待测品溶液0.2mL，加结晶胰蛋白酶溶液0.2mL，混匀，25±0.1℃保温5分钟；加预热至25±0.1℃的苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐溶液1.0mL，立即计时并摇匀；以蒸馏水作为空白对照，依照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV)在405nm波长处测定吸光度，测定时间间隔为1分钟，共测定5分钟，吸光度的变化率应恒定。以反应时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸光度变化率(ΔAt)。
按下式计算每1mg供试品中乌司他丁的单位数：
U/mg=[（ΔA0-ΔAt）/（ΔA0-ΔAs）]·B/W
其中：ΔA0为三乙醇胺缓冲液对照管吸光度的变化；
ΔAt为待测品溶液吸收度的变化率；
ΔAs为标准品溶液吸收度的变化率；
B为每1mL标准品溶液中含乌司他丁单位数。
W为每1mL供试品溶液中含待测品的mg数。
实验结果：
表1乌司他丁注射液的稳定性实验结果
表1中实验结果显示，本发明中实施例1-6所述的六种乌司他丁注射液在25℃下放置2年，均能维持大于99.9%的活乌司他丁性残留率；在25℃下放置3年，也能够维持大于98%的乌司他丁活性残留率；在30℃下放置2年，仍然能够维持大于90%的乌司他丁活性残留率。在常温状态下配制，且没有经过活性炭处理的对比例1-3所述乌司他丁注射液和市售乌司他丁注射液在表1中所述三种条件下的乌司他丁活性残留率均明显低于实施例1-6在同样条件下的活性残留率。由实验结果可见，本发明按照本发明所述配方及制备方法制备的乌司他丁注射液具有相对较高的稳定性。
实施例8：乌司他丁注射液不良反应发生率实验
实验方法：
1.小鼠处理
取168只6-8周龄健康昆明种雌性小鼠，体重18-20g，随机分为14组：空白对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、实施例6组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组、对比例5组、对比例6组和市售乌司他丁组。空白对照组不进行任何注射，正常饲喂；实施例1组注射如实施例1所述乌司他丁注射液10万单位/kg体重，每日一次，连续注射5天。实施例2-6组、对比例1-6组和市售乌司他丁组分别注射实施例2-6和对比例1-6所述乌司他丁注射液以及市售乌司他丁注射液，其余操作同实施例1组。除空白对照组外，各组用药途径均采用尾静脉注射方法。
2.生化指标测定方法
注射前对各组小鼠白细胞数、嗜酸粒细胞数、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）进行测定；连续注射5天后再次对各组小鼠上述指标进行测定，并统计各组小鼠在首次注射后注射部位发生红肿的小鼠数目。
白细胞计数方法：断尾取20μL血，采用常规显微镜计数法。
AST和ALT：断头处死小鼠取全血，将全血置于2mL离心管中静止0.5小时，以3500转/分钟离心（离心半径16厘米）10分钟后取上清液，用TRACE-CB171自动生化分析仪检测AST和ALT。
嗜酸粒细胞计数方法：取处死小鼠双侧股骨，去掉两端骨骺，剖开骨干髓腔，以磷酸盐缓冲液将骨髓细胞洗出，1000转/分钟离心5分钟后沉渣涂片，瑞氏染色，计数任意500个粒细胞中的嗜酸粒细胞数。
3.肉眼直接观察首次注射后注射部位是否发生红肿。
实验结果：
分别统计注射不同实施例或对比例的各组小鼠中，在注射前后上述指标发生变化的小鼠数目，统计结果见下表。
表2乌司他丁注射液不良反应发生率的实验结果
表2中实验数据显示，实施例1-6组小鼠生化指标发生变化的平均频次为0.83，且未观察到小鼠出现注射部位红肿现象；而在常温状态下配制，且没有经过活性炭处理的的对比例1-3组小鼠生化指标发生变化的平均频次为7，且观察到5只小鼠注射部位发生红肿；市售乌司他丁组小鼠生化指标发生变化的平均频次为4，且观察到2只小鼠注射部位发生红肿；空白对照组小鼠生化指标发生变化的平均频次为1。由实验结果可见本发明按照本发明所述配方及制备方法制备的乌司他丁注射液具有相对较低的不良反应发生率。
上述“频次”的定义为每组每种生化指标发生变化的小鼠数目的总和与组数的比值。
应当理解，本文所述的实施例和实施方案仅用于例证目的，并且提示本领域技术人员可以以此为依据做出各种变型或改变，且它们应当被包括在本申请的精神和范围以及所附权利要求的范围内。

Claims (8)

1.一种乌司他丁注射液的制备方法，所述乌司他丁注射液的配方为，每1000支：
乌司他丁2500万单位～10000万单位
甘露醇1～30g
氯化钠0～10g
磷酸氢二钠0～5g
磷酸二氢钠0～5g
注射用水定容至1500mL，
其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
⑴.辅料溶液配制：按照配方用量称取甘露醇、或氯化钠、磷酸氢二钠、和磷酸二氢钠，加总体积450mL～900mL、温度为2～4℃的注射用水，搅拌至溶解，加入医用活性炭吸附处理后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，得到辅料溶液，并保持该溶液温度为2～4℃；
⑵.按照配方用量称取乌司他丁，并于配液罐中依次加入步骤⑴所得辅料溶液、乌司他丁，搅拌至完全溶解，得到药液A，并保持该药液温度为2～4℃；
⑶.用盐酸或氢氧化钠溶液调节步骤⑵所得药液A的pH值至6.8，得到药液B，并保持该药液温度为2～4℃；
⑷.采用0.22μm滤膜对药液B过滤除菌后，得到药液C，并保持该药液温度为2～4℃；
⑸.用2～4℃注射用水将上述药液C补足体积至1500mL，混匀，得到药液D，并保持该药液温度为2～4℃；
⑹.采用0.22μm滤膜对药液D过滤除菌后，进行分装灌封，包装。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述医用活性炭的加入量为1～5g。
3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述医用活性炭的加入量为1～4g。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述医用活性炭的吸附处理时间为12～20分钟。
5.如权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于：所述医用活性炭的吸附处理时间为12～18分钟。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述医用活性炭的平均粒径为6～9μm。
7.如权利要求1或6所述的制备方法，其特征在于：所述医用活性炭的平均粒径为6～8μm。
8.一种按照权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的乌司他丁注射液。
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