CN101721700A - 一种抗人Her2抗体的冻干制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了抗Her2抗体冻干制剂的制备方法。所述抗Her2抗体冻干制剂是由抗Her2抗体，保护剂，赋型剂，缓冲盐经过冻干制备而成。本发明提供的抗Her2抗体冻干制剂稳定性好，有效期延长，易于保存和运输。

Description

一种抗人Her2抗体的冻干制剂

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种稳定的抗Her2单克隆抗体冻干制剂。

背景技术

Her2受体是人表皮生长因子受体家族四成员之一，在乳腺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、非小细胞肺癌等多种肿瘤中均有表达。Her2过表达会增加肿瘤细胞侵袭，转移的能力，因此Her2表达的高低与乳腺癌、卵巢癌等的临床诊断、药物疗效及愈后判断关系密切，也就是说Her2是治疗乳腺癌、卵巢癌的特异性靶点。

人源化的抗HER2抗体是由悬养于无菌培养基中的哺乳动物细胞(中国仓鼠卵巢细胞CHO)产生的，用亲合色谱法和离子交换法纯化，包括特殊的病毒灭活的去除程序。抗Her2抗体是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，选择性地作用于人表皮生长因子受体-2(HER2)的细胞外部位，此抗体属IgG1型，含人的框架区，及能与HER-2结合的鼠抗-p185 HER2抗体的互补决定区，因此抗HER2抗体可以在体外及动物实验中均显示可抑制HER2过度表达的肿瘤细胞的增殖。

现有的抗Her2抗体制剂专利：

美国加利福尼亚州基因技术股份有限公司J·安德亚，J·L·克莱伦德，C·C·赫苏，X·M·拉姆，D·E·奥维卡谢尔，S·J·夏尔，J·Y·杨，S·S·吴利用IgE型抗体制做了一种冻干蛋白质制剂(专利申请号：200710192806.5)。其优点在于经重建后可以得到比较稳定的与人体等渗的蛋白溶液。其缺点在于等渗的蛋白溶液使其浓度无法改变，将蛋白的浓度限制在较低的水平(20mg/mL)；其选用的缓冲体系是组氨酸醋酸体系，根据实验证明在这一缓冲体系下由于组氨酸对抗Her2抗体有氧化作用而导致杂质的增加，因此对于抗Her2抗体蛋白组氨酸缓冲体系并不是最好的选择。

上海中健生物技术研究院王皓等人申请的专利一种稳定的抗HER2人源化抗体制剂(专利号：200610147280.4)也存在上述这一缺点。

美国加利福尼亚州健泰科生物技术公司詹姆斯·D·安迪亚；魏俊湘；刘骏；沈晔发明抗Her2抗体蛋白的液体制剂(专利名称：组氨酸-醋酸盐缓冲液中的抗体制剂，专利号：200580043463.5)它的不足之处在于首先以液体制剂的形式存在的蛋白，更容易发生理化反应，比如发生脱酰胺反应、被其他物质氧化或水解，其次当蛋白在水溶液中浓度过高时容易聚集，注入人体后易产生免疫反应。更重要的是，液体制剂在长途运输中，剧烈震荡会使蛋白质容易变性，失去活性。

发明内容

抗Her2单克隆抗体包括鼠源的、人鼠嵌合的、完全人源化的抗Her2单克隆抗体。

本发明制剂配方简单，蛋白体系稳定。冻干得到的制剂，蛋白稳定性更高，便于大规模生产，贮存和运输。冻干蛋白经复溶后蛋白理化性质及活性没有显著变化，并且不存在药理上不可接受的试剂，从而具有良好的安全性和耐受性。

本发明是一种含有抗Her2单克隆抗体的冻干制剂，制剂的组成包括抗Her2单克隆抗体、赋形剂、保护剂、缓冲盐。

抗Her2单克隆抗体冻干制剂复溶后抗体蛋白含量为2-100mg/mL，更优选为25-75mg/mL。这种高浓度的蛋白制剂更便于工业化的生产，可以大大减轻患者用药注射量大的痛苦。

在赋形剂的帮助下抗Her2抗体更容易赋形冻干保存。赋形剂为糖类、多醇类，更优选为甘露醇、蔗糖、葡萄糖、山梨醇。赋形剂在制剂中的含量为0-20％，更优选为2-10％。

本发明选择的保护剂为氨基酸、糖类、醇类、吐温。更优选为吐温、精氨酸、山梨醇。保护剂在冻干制剂经注射用水复溶后的含量为10mmol/L-200mmol/L，更优选为50-100mmol/L。其中山梨醇既可以作为保护剂又可以作为赋形剂。

本发明选择的冻干制剂缓冲盐为磷酸盐缓冲体系，更适合人体注射的要求。冻干制剂经注射用水复溶后缓冲盐浓度为0-200mmol/L，更优选为5mmol/L-50mmol/L，pH在6.5-8.0之间，优选为6.8-7.4。

制剂冻干过程包括预冻，抽真空和循环冷冻2步。预冻时间不少于1.5小时，更优选3-8小时。抽真空和循环冷冻是同时进行，程序化步骤，循环冷冻不少于15小时。冻干后药品含水量不高于3％。

具体实施方式

以下通过实施例、实验例详细说明本发明的内容，但这些实施例并不构成对本发明的限制。

实施例1：组氨酸缓冲体系对比溶液

成分	浓度
		抗Her2抗体	20g/L
蔗糖	38g/L
		L组氨酸	0.32g/L
L组氨酸盐酸盐一水合物	0.5g/L
		吐温20	0.09g/L
氯化钠	4g/L
		注射用水	加至1L
PH值	6.1

实施例2：溶液A

成分	浓度
		抗Her2抗体	50g
精氨酸	50mmol
		磷酸氢二钠	10g
甘露醇	5％
		吐温80	0.001％
注射用水	加至1L
		PH值	7.1

实施例3：溶液B

成分	浓度
		抗Her2抗体	50g
精氨酸	50mmol
		磷酸氢二钠	10g
甘露醇	2.5％
		吐温80	0.005％
注射用水	加至1L
		PH值	7.1

实施例4：冻干

将组氨酸缓冲体系对比溶液、溶液A、溶液B按照以下程序冻干：

预冻：-50℃，5小时。

循环冷冻：从-50℃程序性升温到30℃，共20小时，真空度70bar。

在冻干期间，可使用掺气来达到温度均匀的目的。也可以更长时间进行循环冷冻而不会影响产品的质量。

实施例5：

稳定性考察，采用药品加速稳定性实验考察以上3种配方的贮存稳定性，温度25℃。

检测方法：

纯度检测：高效液相色谱法，柱子用TSK3000SW_XL。流动相：20mmol磷酸盐缓冲液0.4mol/L Na₂SO₄。

等电点：根据《中国药典》2005年版等点聚焦电泳法。

内毒素检测：根据《中国药典》2005年版细菌内毒素检测方法。

外观：根据《中国药典》2005年版可见异物检查法。

活性：根据A418检测方法以市售赫赛汀(上海罗氏制药有限公司)做为对照品。设定其活性为100％，组氨酸缓冲体系对比溶液、溶液A、溶液B采用与其活性的比较值。

加速稳定性实验结果(25℃)

根据稳定性试验结果表明：磷酸盐缓冲体系下的冻干制剂的贮存稳定性明显优于组氨酸盐酸缓冲体系下的冻干制剂。

Claims (13)

1.一种含有抗Her2抗体的冻干制剂，其特征是制剂的组成部分含有抗Her2抗体、赋形剂、保护剂、缓冲盐、表面活性剂。

2.根据权利要求1，其特征在于抗Her2抗体冻干制剂复溶重建后含量为2-100mg/mL，更优选为25-75mg/mL。

3.根据权利要求1，其特征在于赋形剂为糖类、多醇类，更优选为甘露醇、蔗糖、葡萄糖、山梨醇。

4.根据权利要求3，其特征在于赋形剂在制剂中的含量为0-20％，更优选为2-10％。

5.根据权利要求1，其特征在于保护剂为氨基酸、糖类、醇类、吐温。更优选为吐温、精氨酸、山梨醇。

6.根据权利要求5，保护剂在冻干制剂经注射用水复溶重建后的含量为10mM/L-200mM/L，更优选为50-100mM/L。

7.根据权利要求1，其特征在于冻干制剂缓冲盐为人体可接受的缓冲盐，更优选磷酸盐缓冲体系，冻干制剂经注射用水复溶后缓冲盐浓度为0-200mM/L，更优选为5mM/L-50mM/L，pH在6.5-8.0之间。

8.根据权利要求1，其特征在于表面活性剂为吐温类，更优选吐温80。

9.根据权利要求8，其特征在于冻干制剂经注射用水复溶后表面活性剂浓度为0.001％-0.05％，更优选0.001％-0.005％。

10.根据权利要求1，其特征在于制剂冻干过程包括预冻，抽真空和循环冷冻2步。

11.根据权利要求10，其特征在于预冻时间不少于1.5小时，更优选3-8小时。

12.根据权利要求10，其特征在于抽真空和循环冷冻是同时进行，程序化步骤，循环冷冻不少于15小时。

13.根据权利要求12，冻干后药品含水量不高于3％。