CN103235062B

CN103235062B - 一种水产品中多种多溴联苯醚的检测方法

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Publication number: CN103235062B
Application number: CN201310139755.5A
Authority: CN
Inventors: 张卫; 陈雷; 刘扣; 赵莉; 林匡飞; 郭杰; 王俊霞; 张�荣; 李靖; 陈星�; 张刚; 张龙; 王雅珏; 刘瑞红; 张政; 梁思; 梁峻; 彭洪江; 刘高; 温东东
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2013-04-19
Filing date: 2013-04-19
Publication date: 2015-01-07
Anticipated expiration: 2033-04-19
Also published as: CN103235062A

Abstract

本发明涉及一种水产品中多种多溴联苯醚的检测方法，包括将水产品样品进行提取、去脂处理、硅胶柱纯化、浓缩，然后采用气相色谱-负化学源质谱联用法进行分析检测。通过这些处理手段和合适工艺参数的使用，所述方法能够简单、快速、准确地同时测定出水产品中高达11种多溴联苯醚的含量，具有检测灵敏度高、稳定性好、结果准确等优点，为水产品中多溴联苯醚残留的定性定量和食品安全监控提供了一种可靠、快捷的检测方法。

Description

一种水产品中多种多溴联苯醚的检测方法

技术领域

本发明提供了一种具有生物毒性有害物质的检测方法，特别地提供一种水产品中高达十一种多溴联苯醚的测定方法，属于农副产品中有害物质残留安全检测领域。

背景技术

多溴联苯醚（Polybrominated Diphenyl Ethers，PBDEs）是一类溴代阻燃剂，由于其具有优异的阻燃性能、良好的热稳定性、添加量小、价格便宜等诸多优点而在电子工业、泡沫塑料、纺织品、建材、家电、家居装饰、化工产品、石油、采矿等领域中得到了广泛应用，且每年的需求量巨大。

多溴联苯醚由于溴的数量和位置的改变而具有高达209种同系物，主要包括：4,4’-二溴联苯醚(BDE-15)、2,4,4’-三溴联苯醚(BDE-28)、2,2’,4,4’-四溴联苯醚(BDE-47)、2,2’4,4’,6-五溴联苯醚(BDE-100)、2,2’,4,4’,5-五溴联苯醚(BDE-99)、2,2’,4,4’,5,6’-六溴联苯醚(BDE-154)、2,2’,4,4’,5,5’-六溴联苯醚(BDE-153)、2,2’,3,4,4’,5’,6-七溴联苯醚(BDE-183)、2,2’,3,3’,4,5,5’,6,6’-九溴联苯醚(BDE-208)、2,2’,3,3’,4,4’,5,5’,6-九溴联苯醚(BDE-206)和十溴联苯醚(BDE-209)。

作为一类添加型阻燃剂，由于缺乏化学键的直接键合和束缚作用，多溴联苯醚非常容易通过焚烧、酸洗、渗出等方式离开基质材料而进入到周围环境中，并可随着大气、水体、废弃材料的迁移而造成气、水、土等生物圈的广泛污染，目前已成为一类在环境中广泛存在的全球性有机污染物。由于PBDEs具有持久性、远距离传输性、脂溶性、生物富集性和放大性等特点，导致其在越来越多的生物载体和环境介质中被检出。据报道，在环境水体、大气、土壤、污泥、河流沉积物甚至是深海沉积物、哺乳动物、鱼、蛋以及人类的奶、血清和脂肪组织等介质中均已检出PBDEs，在环境介质中的浓度也呈逐年上升的趋势。此外，研究发现，长时间的低浓度PBDEs暴露可导致行为和记忆的持久性混乱，并可对人类的大脑、甲状腺、肝脏和肾脏等器官，以及生殖系统和内分泌系统等产生严重的损害。

随着人类对于环境安全的日益重视，有关环境介质和生物样品中PBDEs的检测方法引起了科学家的广泛关注，并对此进行了深入研究：

1.赵茜等(“五氟苯甲酰氯衍生物色谱法分析水体中痕量羟基多溴联苯醚”，《环境化学》，第31卷第5期，2012年5月)公开了一种使用气相色谱-电子捕获检测器分析水体中痕量多溴联苯醚的方法，并确定了最佳的衍生化条件。

2.CN102590397A公开了一种水样中4,4’-二溴联苯醚的测定方法。所述方法是将水溶液过滤膜，然后萃取、离心，将离心得到沉积相用氮气吹干，残渣用正己烷溶解后用气相色谱分析，并与标准溶液的色谱分析结果相对照，即可测定水样中的二溴联苯醚。

3.CN101592641A公开了一种沉积物中痕量十溴联苯醚的检测方法。所述方法是首先进行样品预处理，采用外标法绘制含有十溴联苯醚的标准曲线，然后取实际样品采用外标法处理，以液相色谱检测样品中的十溴联苯醚含量。

4.CN101526508A公开了一种纺织品中多溴联苯醚残留的检测方法。所述方法包括将样品粉碎、底液浸渍和水浴超声辅助提取后，采用固相微萃取富集目标化合物，热脱附后以气相色谱-质谱联用定性定量检测多溴联苯醚。

5.CN101592643A公开了一种电子电气设备样品中多溴联苯醚检测的前处理方法。所述方法包括样品粉碎、加速溶剂萃取、在线过滤和固相萃取净化。经过如此处理，缩短了样品的前处理时间，减少了萃取剂用量，萃取效率高，回收率和重复性好。

6.CN101718752A公开了一种气相色谱-质谱测定化妆品中多溴联苯醚残留的检测方法。所述方法将样品经溶剂加速萃取，再经过凝胶净化、弗罗里硅土柱净化，然后用气相色谱-质谱选择离子扫描检测，外标法定量，具有检测限低、灵敏度高的特点。

7.黄英等(“加速溶剂萃取-高效液相色谱/紫外检测电子电气塑料中十溴联苯醚”，《分析实验室》，第28卷第1期，2009年1月)公开了使用加速溶剂萃取法结合高效液相色谱/紫外检测器来检测电子电气塑料中十溴联苯醚的方法。

8.向彩红等(“鱼肉组织中多溴联苯醚的定量分析”，《分析测试学报》，第25卷第6期，2006年11月)公开了鱼肉中多溴联苯醚的检测方法，包括索氏抽提、凝胶渗透色谱柱和多层硅胶氧化铝柱净化、气相色谱-负离子化学源/质谱法检测。

9.王俊平等(“气相色谱-电子轰击源质谱测定海产品中多溴联苯(醚)”，《食品工业科技》，第32卷第3期，2011年)公开了通过样品制备、提取、气相色谱-质谱法测定海产品中多溴联苯（醚）的方法。

10.马玉等（“海洋生物样品中多溴联苯醚和多溴联苯的分析研究”，《海洋环境科学》，第30卷第5期，2011年10月)公开了使用气相色谱-负离子化学源/质谱法来分析各种鱼和贝类中多溴联苯醚的方法。

11.李敬瑶等(“多溴联苯醚检测方法的研究”，《现代化工》，第30卷，2010年11月)公开了一种鱼肉中多溴联苯醚的检测方法，包括索氏抽提、硅胶柱净化、气相色谱-质谱联用检测。

12.王旭亮等(“加速溶剂萃取/凝胶渗透色谱净化/气相色谱-负化学离子源质谱测定生物样品中的四溴联苯醚”，《环境化学》，第30卷第6期，2011年6月)公开了快速溶剂萃取、全自动凝胶渗透色谱和多层硅胶-氧化铝复合柱净化的前处理过程，然后采用GC/NCI-MS测定生物样品中四溴联苯醚的分析方法。

13.何迎春等(“饮用水及牛奶中多溴联苯醚毒性及检测研究进展”，《现代预防医学》，第39卷第13期，2012年)总结了对于多溴联苯醚的多种检测方法，包括GC法、GC-MS法、HPLC法等。

然而，在现有技术报道中，仍存在一些缺陷：1.只能针对某一种或几种具体的PBDEs进行检测，而PBDEs的同系物数量繁多(高达209种)，它们无法同时检测出更多种类的PBDEs；2.部分前处理过程操作复杂、耗时长、设备要求高且消耗溶剂量大；3.有些分析检测过程无法做到多种PBDEs的同时分离且出峰时间很长，有些能做到多种PBDEs的同时分离但无法做到残留级别的检出，特别是难以做到BDE209(在检测仪器中响应比较低)与其它PBDEs的同时检出，而不得不分别采用不同方法进行检测。因此，针对环境和生物样品中PBDEs多残留快速检测仍有待深入研究。

水产品安全是当今食品安全问题的热点之一。随着食品安全标准的日益提高，对于能够快速、灵敏、准确地测定水产品中尽可能多的PBDEs残留的检测方法存在迫切需求，也是目前水产品领域中深入研究的重点和难点课题之一。然而迄今为止，针对水产品中PBDEs的多残留快速检测尚无一套完整可靠的专利，因而本发明应运而生。该方法能快速、灵敏、准确地测定出水产品中11种PBDEs，将大大降低检测成本和缩短检测时间。

发明内容

针对上述缺陷，本发明人进行了大量的深入研究和探索，在付出了创造性劳动后，完成了本发明。

具体而言，本发明提供了一种同时检测水产品中高达11种PBDEs的检测方法，尤其是能够快速、低检出限地检测出BDE209的方法。所述方法通过合适的前处理、纯化、气相色谱和负离子源质谱联用检测，实现了11种PBDEs的同时良好分离，最终所得的各组分峰分离度大、峰形尖锐、对称性好，能够高灵敏、准确和稳定地进行定性定量，从而为水产品安全的检测提供了一种新颖可靠的手段与方法。

本发明的所述检测方法，包括如下步骤：

(1)样品制备：取水产品的肌肉和/或组织冷冻干燥后，研磨均匀，得到样品并低温保存；

(2)样品提取：将步骤(1)的样品使用有机溶剂进行抽提提取，得到提取液后过滤，再进行浓缩；

(3)样品纯化

(3.1)向步骤(2)的浓缩液中加入浓硫酸，轻微振荡，离心后静置分层，弃去硫酸层，浓缩上清液，并用正己烷溶解，得到层析液；

(3.2)在硅胶柱中自下而上依次填充中性Al₂O₃、中性硅胶、酸性硅胶、碱性硅胶和无水Na₂SO₄，用有机溶剂预淋洗后加入层析液，然后洗脱硅胶柱；

(4)样品浓缩：将过柱后的组分洗出液蒸发溶剂至近干，溶解定容，并经有机膜过滤，得到待测分析样品；

(5)样品检测，将步骤(4)的待分析样品按下述条件顺次进行气相色谱仪分离和质谱检测；

(5.1)气相色谱仪分离：色谱柱：DB-5HT，柱长15m，内径0.25mm，膜厚0.10μm；进样口温度280℃，柱初始温度110℃，保持1分钟后以8℃/分钟的速度升温至300℃，停留5分钟，至样品组分完全流出色谱柱，并进行随后的质谱检测；

(5.2)质谱检测，使用负化学离子源(NCI)，离子源温度为150-200℃，气质接口温度270-300℃，检测器电压1000-1100V，溶剂切割时间3-6min，灯丝点燃时间3-6min，同时采用全扫描(SCAN)和选择离子监测(SIM)模式记录。

在本发明所述检测方法的上述步骤(1)中，所述样品制备的方式并没有特别的限定，只要能够得到水产品中的肌肉和/或组织即可。例如，可将水产品样品置于清洁的工作台上，剔除皮肤，用不锈钢手术刀解剖，切去表层，剥离不受污染的肌肉和/或组织样品，将其尽量切成小块，放入冷冻干燥仪中冷冻干燥至少24h，然后取出进行研磨得到样品。

其中，得到研磨均匀的样品进行低温保存时，所述低温可为-30℃至-15℃，非限定性地可例举-30℃、-25℃、-20℃或-15℃。

在本发明所述检测方法的上述步骤(2)中，所述抽提提取的方式并没有特别的限定，例如可为索氏抽提，抽提液为正己烷和丙酮以体积比为1:1的混合溶剂，相对于每1g样品，抽提液体积为为100-150mL，例如可为100mL、110mL、120mL、130mL、140mL或150mL；抽提时间为4-8小时，例如可为4小时、6小时或8小时；抽提温度为65-80℃，例如可为65℃、70℃或80℃。

在本发明所述检测方法的上述步骤(3)的(3.1)中，作为一个实施方式，可将提取液用漏斗(多层滤纸处填充无水Na₂SO₄)过滤转移至圆底烧瓶，用正己烷润洗提取罐2次，合并三次提取液，将其浓缩。将浓缩液用正己烷洗入离心管中，加入适量浓硫酸(与离心管中浓缩液的体积之比为1:1)，轻微振荡，离心后静置分层。根据上清液颜色的深浅重复操作1-3次，直到颜色变浅或无色为止。将上清液在水浴中用高纯氮吹仪浓缩，然后进如下一步的固相硅胶柱净化。其中，所加入的浓硫酸的质量百分比浓度为95-98%。

在本发明所述检测方法的上述步骤(3)的(3.2)中，以硅胶柱的体积计，自上而下依次填充20%中性Al₂O₃、20%中性硅胶、20%酸性硅胶、20%碱性硅胶和10%无水Na₂SO₄。例如，以10mL硅胶柱的填充方式为例，先在硅胶柱底部垫一小团脱脂棉，然后自下而上依次填充2mL中性Al₂O₃、2mL中性硅胶、2mL酸性硅胶、2mL碱性硅胶和1mL无水Na₂SO₄；装填完毕后，用正己烷预淋洗后加入上步所得层析液，用有机溶剂洗脱硅胶柱；

其中，所述中性硅胶可为任何已知的呈现中性的硅胶，例如100目-200目普通硅胶。所述碱性硅胶或酸性硅胶是中性硅胶经处理后得到，其中先对中性硅胶进行活化，具体为：将中性硅胶在马弗炉中550℃烘烤12h，降温到180℃保留1h，得到活化硅胶。

酸性硅胶可如下获得：向活化硅胶中滴入浓硫酸，便可得到酸性硅胶。

碱性硅胶可如下获得：向活化硅胶中滴入碱，便可得到碱性硅胶。其中所述碱可为NaOH或KOH。

作为一种具体实施方式，可列举如下的酸性硅胶和碱性硅胶的制备方法。

酸性硅胶：在烧瓶中称取56g活化硅胶，于硅胶上逐滴滴入质量百分比浓度为95-98%的浓硫酸44g，置于摇床上震荡，直至没有结块；

碱性硅胶：在烧瓶中称取70g活化硅胶，向其中逐滴加入30g1mol/LNaOH水溶液，置于摇床上震荡，直至没有结块。

其中，洗脱硅胶柱所述的有机溶剂先后为正己烷、正己烷/二氯甲烷(1:1，体积比)的混合溶液，即先使用正己烷对硅胶柱进行活化，然后使用正己烷/二氯甲烷混合溶液进行洗脱。

在本发明所述检测方法的上述步骤(4)中，将过柱后的组分洗出液蒸发溶剂至近干，溶解定容，并经有机膜过滤，得到分析样品。

其中，所述蒸发溶剂至近干所采用的实施方式并没有特别的限定，例如可以自然溶剂挥发、加热挥发、水浴下用高纯氮吹仪温和吹至近干等，为了快速得到样品，优选采用水浴温度可为40-55℃，如40℃、50℃或55℃。高纯氮吹仪温和吹至近干的操作方式，例如将过柱后的组分洗出液在水浴45℃下用高纯氮吹仪温和吹至近干。

其中，溶解定容所使用的溶剂并没有特别的限定，例如可为正己烷、异辛烷。

其中，过滤所使用的有机膜并没有特别的限定，例如可为PTFE(聚四氟乙烯)，其孔径可为0.22-0.45μm，非限定性地可例举0.22μm或0.45μm。其目的是过滤去除杂质，防止后续对GC检测的影响。

在本发明所述检测方法的上述步骤(5)的(5.1)中，气相色谱仪的进样量可为1μL，不分流进样，载气可使用高纯氦气，载气流速为1-1.5mL/min，例如可为1.0mL/min、1.2mL/min或1.5mL/min。柱温初始温度110℃，保持1分钟后以8℃/分钟的速度升温至300℃，停留5分钟，直至样品组分完全流出色谱柱。

在本发明所述检测方法的上述步骤(5)的(5.2)中，所述质谱检测是使用负化学离子源(NCI)的电离模式，离子源温度为150-200℃，例如可为150℃或200℃；气质接口温度270-300℃，例如可为270℃、280℃或300℃；检测器电压1000-1100V，例如可为1000V或1100V；溶剂切割时间3-6min，例如可为3min，4.5min、5min或6min；灯丝点燃时间3-6min，例如可为3min，4.5min、5min或6min。

其中，m/z的全扫描范围为50-1000；SIM离子m/z，BDE-209监测离子为78.9、80.9、486.4，488.4，其他BDE监测离子为78.9、80.9。

通过使用本发明的所述检测方法，尤其是创造性地通过对各种工艺条件、参数的合适选择和确定，获得了如下的诸多优点：

1.很好地实现了高达11种PBDEs的同时分离，所得各组分峰分离度大、峰形尖锐、对称性好。

2.本发明所述方法的检测时间短、方便快捷、处理简单，比现有方法大大缩短了检测周期，降低了检测成本。

3.本发明检测限低，完全能适应水产品中多溴联苯醚的多残留检测，尤其是能够检测出极难检出的痕量BDE209。

附图说明

图1为BDE-15、BDE-28、BDE-47、BDE-100、BDE-99、BDE-154、BDE-153、BDE-183、BDE-208、BDE-206和BDE-209共11种PBDEs溶解于正己烷中的标准混合液色谱图，其中BDE-209浓度为10000ng/mL，BDE-206和BDE-208浓度为2000ng/mL，剩余PBDEs的浓度均为1000ng/mL。

图2为鲫鱼肌肉样品中BDE-15、BDE-28、BDE-47、BDE-100、BDE-99、BDE-154、BDE-153和BDE-183加标量均为50ng/g，BDE-208和BDE-206加标量为100ng/g，BDE-209加标量为500ng/g的色谱图。

图3为鲢鱼肌肉中5种PBDEs的色谱图。

图4为对比例1鲢鱼肌肉样品中4种PBDEs的色谱图。

图5为对比例1鲢鱼肌肉样品中BDE-209的色谱图。

具体实施方式

如下将通过实施例对本发明的所述检测方法进行进一步地详细说明和/或阐述，但应该理解，这只是对本发明所述方法做出的示例性描述，其意图是用来解释/阐述本发明的方法，而非用来限定和/或限制本发明，更非将本发明的保护范围局限于此。

实施例1

由于本发明中涉及到的11种PBDEs同系物，其各自的沸点、极性和吸附性质均有所差异，导致固定相对样品中各组分吸附或溶解能力不同，即各组分在固定相和流动相之间的分配系数有差别，因此它们的出峰时间会不一样。为了保证各目标污染物具有良好的分离效果和色谱峰形，通过采用本发明的检测方法，不但很好地实现了11种PBDEs的分离，并且各峰分离度大，峰形尖锐，对称性好。经过多次实验反复鉴定，得出各标准物质在本发明操作条件下的参考保留时间，具体示于下表1中。

实验结果表明：所有十一种PBDEs同系物组分均能在27min内出峰且峰形良好。

仪器分析检测条件：

气相色谱条件，进样方式：1μL不分流进样；进样口温度：280℃；载气：高纯氦气；载气流速：1.5mL/min；色谱柱：DB-5HT，柱长15m，内径0.25mm，膜厚0.10μm；升温程序：初始温度110℃，保持1分钟后以8℃/分钟的速度升温至300℃，停留5分钟。

质谱仪条件，反应气为高纯甲烷；负化学离子源(NCI)，离子源温度150℃，气质接口温度300℃，检测器电压1100V，溶剂切割时间3min，灯丝点燃时间3min。同时采用全扫描(SCAN)和选择离子监测(SIM)模式记录，m/z的全扫描(SCAN)范围为50-1000；SIM离子m/z，BDE-209监测离子为78.9、80.9、486.4，488.4，其它BDE监测离子为78.9、80.9。

表111PBDEs标准物质参考保留时间

由此可见，当采用本发明的检测方法时，各种PBDEs的出峰时间短，对于难以检出的BDE-209也可在27分钟内完全出峰。

实施例2

将11种PBDEs用正己烷分别配制成一定浓度的单一标准溶液，然后各自取一定量，混合制备成一系列浓度的11种PBDEs标准工作液：其中BDE206和208的系列浓度分别为0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、10.0、20.0、40.0、100.0、200.0和2000.0ng/mL，BDE209的系列浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1000.0和10000.0ng/mL，其它PBDEs的系列浓度分别为0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0和1000.0ng/mL。按实施例1的上述仪器检测条件进样检测，分别以各成分的峰面积y对标准工作溶液的质量浓度x(ng/mL)进行线性回归分析，得出各标准物质的线性回归方程、相关系数和方法检测限(MDL)，结果示于下表2中。

实验结果表明：所有11种PBDEs同系物组分在本发明所述检测条件下，BDE206、208在0.1-2000.0ng/mL的浓度范围内线性关系良好，BDE209在0.5-10000.0ng/mL的浓度范围内线性关系良好，其他BDE在0.05-1000.0ng/mL的浓度范围内线性关系良好，11种PBDEs的方法检测限在0.016-0.092ng/g，完全能适应水产品中多种多溴联苯醚残留级别的检测。

表211种PBDEs标准物质线性回归方程、相关系数及方法检测限

实施例3

分别以鲫鱼和青鱼为测试对象进行加标回收率实验，以考察所建立检测方法的适用性。

分别称量1.00g未检测出PBDEs的鲫鱼和青鱼肌肉样品，各向其中加入量均为200ng的BDE-15、BDE-28、BDE-47、BDE-100、BDE-99、BDE-154、BDE-153和BDE-183标样，加入量均为400ng的BDE-208和BDE-206标样，加入量为2000ng的BDE-209标样。这三组所加入PBDEs的加标量分别相当于200ng/g、400ng/g和2000ng/g。

分别称量1.00g未检测出PBDEs的鲫鱼和青鱼肌肉样品，各向其中加入量均为100ng的BDE-15、BDE-28、BDE-47、BDE-100、BDE-99、BDE-154、BDE-153和BDE-183标样，加入量均为200ng的BDE-208和BDE-206标样，加入量为1000ng的BDE-209标样。这三组所加入PBDEs的加标量分别相当于100ng/g、200ng/g和1000ng/g。

分别称量1.00g未检测出PBDEs的鲫鱼和青鱼肌肉样品，各向其中加入量均为50ng的BDE-15、BDE-28、BDE-47、BDE-100、BDE-99、BDE-154、BDE-153和BDE-183标样，加入量均为100ng的BDE-208和BDE-206标样，加入量为500ng的BDE-209标样。这三组所加入PBDEs的加标量分别相当于50ng/g、100ng/g和500ng/g。

所得出鲫鱼和青鱼肌肉样品在实施例1检测操作条件下的回收率及精密度测定结果示于下表3和表4中。

实验结果表明：所有11种PBDEs同系物组分的回收率范围为83.8-108.5%，相对标准偏差均小于10%，完全符合检测要求。

表3鲫鱼肌肉中11种PBDEs加标回收率和相对标准偏差(n=6)

表4青鱼肌肉中十一种PBDEs加标回收率和相对标准偏差(n=6)

实施例4

将冷冻干燥好的鲢鱼肌肉样品在研钵中研磨均匀，精确称量1.00g放入方形滤纸中包好，将其置于Buchi B-811索氏抽提仪中进行提取，加入正己烷和丙酮混合溶剂(1:1，体积比)100mL作为提取液，提取温度设为80℃，提取时间4h。将提取液用漏斗(多层滤纸处填充无水Na₂SO₄)过滤至圆底烧瓶，并润洗提取罐2次(每次5mL正己烷)，合并三次提取液，在水浴40℃下用Buchi R-210旋转蒸发仪浓缩至2-3mL，并用8mL的正己烷清洗圆底烧瓶，将其一并转入50mL离心管中。向离心管中加入10mL的浓硫酸，轻微振荡，在3000r/min下离心10min，静置分层后，将上清液移入10mL的小试管中(用二氯甲烷润洗)，在水浴40℃下用高纯氮吹仪浓缩至近干，加入1mL正己烷转换溶剂，备用。

净化硅胶柱的制备：取10mL容积的一次性注射器(作为纯化柱)，在底部垫一小团脱脂棉，自下至上依次填入2mL中性Al₂O₃、2mL中性硅胶、2mL酸性硅胶、2mL碱性硅胶以及1mL无水Na₂SO₄。先用5mL正己烷预淋洗硅胶柱，移取试管中样品液过柱，同时取少量正己烷清洗试管至少3次，清洗液同样需要过柱，再用10mL正己烷/二氯甲烷混合溶液(1:1，体积比)淋洗硅胶柱后，对硅胶小柱抽滤5min。然后将过柱液移入10mL小试管中(用二氯甲烷润洗)，在水浴45℃下用高纯氮吹仪浓缩至近干，用正己烷定容至1mL，溶解小试管中的固体后，移入注射针管(拔下针头，装上0.45μm PTFE孔径的有机膜过滤头)后过滤至棕色玻璃进样瓶，密封低温(-20℃)保存以备仪器分析。

按照实施例1中的色谱和质谱条件进行检测，鲢鱼肌肉样品的色谱图见图3。实验结果表明：鲢鱼肌肉样品中含有的有6种PBDEs均被同时检出，它们分别为BDE-47、BDE-99、BDE-100、BDE-153、BDE-209，其含量分别是7.74ng/g、8.64ng/g、11.71ng/g、12.51ng/g、22.88ng/g。由此可见，采用本发明的所述方法，能够同时检测出包括BDE209在内的多种PBDEs。

对比例1

使用实施例4中相同的鲢鱼肌肉样品，与本发明检测方法的区别之处主要在于如下不同的气相色谱条件，其它程序以与实施例4中的相同方式进行。

对三-七溴联苯醚的检测采用：色谱柱：DB-XLB(30m×0.25mm×0.25μm，J&W Scientific)；载气：高纯氮气；载气流速：1.0mL/min；升温程序：110℃(1min)，以8℃/min升至180℃(1min)，再以2℃/min升至240℃(5min)，再以2℃/min升至280℃(25min)，最后5℃/min升至290℃(13min)。

对十溴联苯醚BDE209的检测采用：色谱柱：12.5m色谱柱(CP-Sil13CB，Varian)；升温程序：自110℃以8℃/min升至300℃(20min)，柱流速1.5mL/min，1μL无分流高压进样。

按照上述所列色谱条件，对三-七溴联苯醚的检测结果见图4，实验结果表明：即便是对于两种方法均检出的相同物质，其各峰的出峰时间也均大大长于本发明的所述方法。

按照上述所列色谱条件，对十溴联苯醚BDE209的检测结果见图5，实验结果表明：对于BDE209的检出时间为36分钟左右，高于本发明方法的27分钟。

由本发明实施例和对比例的两种色谱相比，可以看出当采用本发明的所述检测方法时，不但很好地同时（一次性）实现了多种PBDEs(包括BDE209)的分离，并且检测时间短（27min内），且各峰分离度大，峰形尖锐，对称性好。而当使用其它方法时，难以同时检测出包括BDE209在内的PBDEs，且累计检出时间要远长于本发明。

本发明优化和/或改进之处在于：本发明条件下，索氏提取时间较短，提取液用量小，提取效果良好且可靠；采用浓硫酸去脂，效果较好且操作简单、成本低廉；净化采用填充硅胶小柱，成本低，耗溶剂量小且效果良好；检测过程中，气相色谱条件采用了高纯氮气作为载气，流速为1.5mL/min；色谱柱为DB-5HT(柱长15m，内径0.25mm，膜厚0.10μm)；柱升温程序为初始温度110℃，保持1分钟后以8℃/分钟的速度升温至300℃，停留5分钟。本发明从而实现了包括BDE209在内的多种PBDEs残留的同时快速、经济、良好的检测效果。

尽管为了举例和描述之目的，而介绍了本发明的上述实施方式和附图所示结构及处理过程。但这些并非是详尽的描述，也不能将本发明的范围局限于此。对本领域技术人员来说，可对本发明的上述实施方式做出多种修改和变化，而这些所有的修改和/或变化都包括在如本发明的权利要求所限定的范围之内，并不脱离如所述权利要求所限定的本发明的范围和精神。

Claims

1.一种水产品中多种多溴联苯醚的检测方法，包括如下步骤：

(2)样品提取：将步骤(1)的样品使用有机溶剂进行抽提提取，所述抽提提取为索氏抽提，抽提液为正己烷和丙酮以体积比为1:1的混合溶剂，抽提时间为4-8小时，得到提取液后过滤，进行浓缩；

(3)样品纯化；

(3.2)在硅胶柱中以硅胶柱的体积计，自上而下依次填充20％中性Al₂O₃、20％中性硅胶、20％酸性硅胶、20％碱性硅胶和10％无水Na₂SO₄，用有机溶剂预淋洗后加入层析液，用有机溶剂洗脱硅胶柱；

(4)样品浓缩：将过柱后的组分洗出液蒸发溶剂至近干，溶解定容，并经有机膜过滤，得到待分析样品；

(5.2)质谱检测，使用负化学离子源，离子源温度为150℃，气质接口温度300℃，检测器电压1100V，溶剂切割时间3min，灯丝点燃时间3min。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中的低温为-30℃至-15℃。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3.1)中的浓硫酸质量百分比浓度为95-98％。

4.如权利要1所述的方法，其特征在于：所述酸性硅胶如下获得：将中性硅胶在马弗炉中于550℃烘烤12h，降温到180℃保留1h，得到活化硅胶，向活化硅胶中滴入浓硫酸，得到酸性硅胶。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述碱性硅胶如下获得：将中性硅胶在马弗炉中于550℃烘烤12h，降温到180℃保留1h，得到活化硅胶，向活化硅胶中滴入碱，得到碱性硅胶。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述的碱为NaOH或KOH。

7.如权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于：在步骤(3.2)中，洗脱硅胶柱的有机溶剂先后为正己烷、体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷混合溶液。