CN103228640A - 奈必洛尔的制备过程 - Google Patents

Abstract

本发明涉及如方案1所描绘的用于合成奈必洛尔产物的新方法，其包含数目减少的高产率步骤，并且其特征在于色满酯前体的酶拆分。

Description

奈必洛尔的制备过程

技术领域

本发明涉及用于合成奈必洛尔的新方法。

背景技术

奈必洛尔是两种对映异构体[2S[2R[R[R]]]]α,α'-[亚氨基-双(亚甲基)]双[6-氟-色满-2-甲醇]和[2R[2S[S[S]]]]α,α'-[亚氨基-双(亚甲基)]双[6-氟-色满-2-甲醇]的外消旋混合物（结构式1）。

奈必洛尔

结构式1

特别地，据报道，起始的色满基酯（1）的酶拆分采用立体选择性酶处理，所述立体选择性酶属于酯酶家族，以天然的或重组的形式存在，并且能够从微生物新榆蛇口壳（Ophiostoma novoulmi）中获得。

如此获得的酯和酸能够通过本领域技术人员已知的方法被转化为相应的“半手性”环氧化物，即方案（1）的（RR+RS，4）对儿和（SS+SR，5）对儿。

接下来，通过利用每一对儿的成分与苄胺在由叔醇组成的溶剂中的不同的反应性能够分离每一对儿的成分。在这些动力学拆分条件下，环氧化物RS和SR将被转化为相应的开环产物（6和8），而环氧化物RR和SS将保持不变。

然后采用本领域技术人员已知的方法并且优选通过基本成分的结晶，所述环氧化物RR（7）从所述胺RS（6）中被分离，并且所述环氧化物SS（9）从所述胺SR（8）中被分离。

然后，所述胺RS与所述环氧化物SS反应以获得l-苄基奈必洛尔。同样地，所述胺SR与所述环氧化物RR反应以获得d-苄基奈必洛尔。

根据本领域技术人员已知的方法，由此获得的1-和d-苄基奈必洛尔被等摩尔量合并、结晶化并转化为奈必洛尔盐酸盐。

奈必洛尔被称为肾上腺素能β-受体拮抗剂、抗高血压剂、血小板凝集抑制剂和血管舒张剂。

奈必洛尔具有碱的性质，并且通过酸的处理可以被转化为可接受的药用盐形式。盐酸盐是市售形式。

奈必洛尔含有四个不对称中心。因此，理论上可能有16个立体异构体。然而，由于分子的特定结构（对称轴的存在），实际上只能够形成10个立体异构体（方案2）。

方案2.奈必洛尔的可能的立体异构体

事实上，由于分子的对称性，RSSS=SSSR、RRSS=SSRR、SRSS=SSRS、RRSR=RSRR、SRSR=RSRS和RRRS=SRRR。

4654362号美国专利（EP0145067，Janssen）描述了在合成中使用环氧化物异构体作为关键中间体的奈必洛尔系列产品的合成。该产品有时以混合物并且有时以对映纯（enantiopure）获得，而未限定绝对构型。特别地，所述专利的实施例84描述了如方案3所定义的异构体的混合物的获得。

方案3

采用色谱柱，这些被分离为两种环氧化物外消旋体（RS/SR，4/5）和（RR/SS，7/9）。随后用苄胺进行一对儿环氧化物（4+5）的开环，并且使用所述反应的产物（6+8）使第二对儿环氧化物（7+9）开环。该操作导致4个苄基化非对映异构体（10-14）的生产。

EP0334429（Janssen）描述了在EP0145067中报道的相同方法，但是具有更多的实验细节并且着眼于奈必洛尔单一异构体的制备。在这种情况下，特别地，通过用(+)-脱氢松香胺的处理将6-氟色满羧酸拆分为单一的对映异构体。根据以下合成方案，将由此获得的单一的对映异构体转化为相应的半手性环氧化物（示出S异构体)：

方案4

描述了异构体[2R,αS,2'S,α'S]-α,α'-[亚氨基双亚甲基]双[6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-甲醇]的立体选择性合成。

所使用的用于拆分酸酯的方法受制于关乎其工业应用的若干个缺点。事实上，引入了额外的步骤（酰胺形成、分级结晶、酰胺水解），而且总产率相当低。由此获得的非对映异构环氧化物的混合物在制备型HPLC上运行以分离所需手性的异构体。

在WO2006/016376和在随后的WO2007/083318中的Hetero DrugsLimited描述了分级结晶方法，所述方法在苄基奈必洛尔的非对映异构混合物（10，11，13，14）水平上被应用，同样在这种情况下，其导致大约50%的起始原料的丢弃，涉及到需要除去不需要的非对映异构体。

WO2007/041805（Egis Gyógyszergyár）描述了用于制备[2S*[R*[R*[R*]]]]和[2R*[S*[S*[S*]]]]-(±)-α,α'-[亚氨基双(亚甲基)]双[6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-甲醇]及其起始于非常不同的化合物的单一的纯净的[2S*[R*[R*[R*]]]]和[2R*[S*[S*[S*]]]]对映异构体的方法。用于合成作为对映异构体混合物的奈必洛尔的步骤大约为三十步，使得所述合成非常长而且不经济（方案5）。

方案5

WO2008/010022（Cimex Pharma）中报道了一种路线，该路线起始于根据文献中的方法拆分的6-氟-色满羧酸，其根据两种单独的顺序导致两种奈必洛尔对映异构体的合成（方案6，针对d-奈必洛尔）。

在通过苄胺的环氧化物开环中，单一的开环产品从反应混合物中结晶，但是其他的非对映异构体随着母液被除去，在这种情况下同样导致材料中相当可观的部分在合成顺序的一个已经相当晚的阶段被除去。另外，通过酮的还原（一种相当敏感的反应）在倒数第二个步骤增加最后一个手性中心，为了获得最佳效果，所述酮的还原面临使用KBH₄和异丙醇钛。

WO2008/064826（Zach System）报道了用于拆分环氧化物的方法，一旦非对映异构体对儿(RS/SR和RR/SS)已经被色谱法分离，经历由钴II的手性络合物介导的相同环氧化物的对映选择性开环（方案7）。在这种情况下，色谱法分离步骤是必要的，从工艺的角度来说比实际少，然而钴络合物需要谨慎操作和处置。

方案6

WO2008/064827（Zach System）描述了起始于受保护的甘油醛（如2,2-二甲基丙二缩酮）的两种光学异构体的d-和1-奈必洛尔的分离和对映选择性合成（方案7）。采用已知的方法分离非对映异构体，但未有描述。合成步骤的数目高于经典合成，而醛前体被认为是并不很稳定的化合物，当醛前体以纯净物的形式于室温存储时，其易于聚合。

方案7

至于在6-氟-色满-2-羧酸水平上的对映异构体分离，已知采用(+)-脱氢松香胺的酰胺形成，然后进行分级结晶和酰胺水解以回收酸（EP0334429）的方法是费力的并且提供相当低的产率。

关于羧酸酯的酶拆分，这是文献中已知的方法，但是其从未被用于色满-2-羧酸的氟衍生物的酯，因此也未被用于奈必洛尔的合成。

特别地，报道了有关色满-2-羧酸酯的已知实例。

在US5037747中，(2R)-羟基-取代的苯并吡喃-2-羧酸酯和(2S)-羟基-取代的苯并吡喃-2-羧酸通过相应的外消旋物的假单胞菌（Pseudomonas）脂肪酶催化的选择性水解被制备。

Urban（5,089,637号美国专利，EP0448254）利用了采用衍生自荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）的酯酶的酶水解来拆分通式（I）（其中R=C₁-C₃烷基）的外消旋混合物。

WO96/40975报道了衍生自粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens）的微生物酯酶用于具有相同通式（但其中R>C₃）的色满-2-羧基烷基酯的拆分。

DE4430089中报道了一系列实施例，其中色满-2-羧酸酯与一组选定的酶（胰凝乳蛋白酶、来自于解脂假丝酵母Candida lipolytica的脂肪酶、来自于米曲霉Aspergillus oryzae的脂肪酶、来自于白地霉Geotrichumcandidum的脂肪酶、来自于黑曲霉Aspergillus niger的脂肪酶）经历酶水解。

最后，至于衍生自新榆蛇口壳子囊菌的酯酶，例如由M.N.Isupov等人在Acta Crystallographica-Biological Crystallography Section D60,p.1879-1882(2004)中或者在EP0687305中报道了涉及其分离、在大肠杆菌中的克隆及其在酯的拆分中的应用的详细信息，而其在芳基生物碱酸的对映异构体以及更特别地，在酮洛芬的对映异构体的拆分中的用途在EP0693134中有所描述。

在目前可获得的文献证据的基础上，奈必洛尔的合成仍然具有众多的合成问题。经历环氧化物的原始的Janssen合成（方案3，混合物6）肯定是较短的一个，但需要通过制备型HPLC分离两个非对映异构体的环氧化物对儿。其他的方法通常面临更多的合成步骤。

在相当大的一部分已报道的合成中，中间体产物的百分比（其可能会达到50%）被丢弃以除去不需要的非对映异构体，在所应用的合成顺序中不可避免地产生这样的非对映异构体。

因此，明显感觉到需要开发一种适用于工业用途并且避免使用色谱法分离的新的合成方法，并且需要除去相当大百分比的中间体化合物，而保持有限数目的合成步骤。

发明内容

现已惊奇地发现一种用于合成奈必洛尔的更加有效的方法（方案1），其允许消除针对先前已知的合成路线的在这里突出强调的缺点，即，它：

a）避免了或可观地减少了用制备型HPLC分离环氧化物对映异构体对儿(RR/SS RS/SR)或其他的非对映异构中间体；

b）明显减少了以不希望的异构体为代表的产物的损失，从而增加了总产率。

采用从蛇口壳属（Ophiostoma）中能够获得的真菌酯酶（脂肪酶）进行6-氟色满-2-羧酸酯的两种对映异构体的混合物的处理。优选的种类是来自于新榆蛇口壳的酯酶，文献中已经描述了其对萘普生或酮洛芬化合物的酯的立体选择性活性。

在水性的或水性/有机的介质中进行的反应导致以选择性的方式水解为两种对映异构体之一的羧酸，而另一种仍为酯的形式。所述反应进行迅速并且具有高度的立体选择性。由此产生的两种化合物能够通过酸-碱萃取很容易地被分离。

因此，本发明的目的是一种用于制备奈必洛尔的方法，所述方法包含：

a.通过酶水解反应，拆分6-氟-2-羧酸酯的对映异构体混合物（1），其中R₁是直链的或支链的C_1-5烷基，

以得到酸（2）和酯（3）的混合物，

其中，R酸（2）以>70%的对映体过量存在并且S酯（3）以>70%的对映体过量存在，这两种成分中的对映体过量优选>80%，甚至更优选>90%；

b.使用由此获得的酸（2）和酯（3）用于合成的环氧化物混合物（4）和（5），

c.1）采用在空间位阻醇中的苄胺对环氧化物混合物（4）和（5）进行动力学拆分反应以分别获得化合物（6）+（7）和（8）+（9）以及它们的分离，

c.2）作为c.1）中所描述的动力学拆分的替代方案，环氧化物混合物（4）和（5）的色谱法分离和随后的RS环氧化物与苄胺的反应得到氨基醇RS（6）以及随后的环氧化物SR与苄胺的反应得到氨基醇SR（8）。

d.氨基醇RS（6）与环氧化物（9）反应获得l-苄基奈必洛尔（10）并且氨基醇SR（8）与环氧化物（7）反应获得d-苄基奈必洛尔（11），

e.脱保护，除去苄基伴随着奈必洛尔的形成，

奈必洛尔

直至本发明的末尾，基团R₁（被定义为直链的或支链的C_1-5烷基）表示选自以下的基团：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、叔戊基；优选地，其为选自甲基、乙基、丙基的基团，甚至更优选其为乙基。

具体实施方式

根据本发明，采用如方案1中所述方法，从6-氟色满-2-羧酸酯（1）的外消旋混合物起始获得奈必洛尔化合物。

通过能够从蛇口壳属中获得的真菌酯酶（脂肪酶）催化的对映选择性水解，可以以高度的立体选择性将6-氟色满-2-羧酸酯（1）拆分为其两个对映异构体。优选的种类是来自于新榆蛇口壳的酯酶，文献中已经描述了其对萘普生或酮洛芬化合物的酯的立体选择性活性。

所述酶（以分离的和结晶的表达蛋白的形式）由M.N.Isupov等人在Acta Crystallographica-Biological Crystallography Section D60,p.1879-1882(2004)中描述。所述酶同样被描述于EP-B1-0687305（WO94/20634）、EP-0693134、US5912164和EP1626093中。

大肠杆菌中的酶表达可以如M.N.Isupov等人（见上文）或EP-B1-0687305（WO94/20634）中的描述而进行。

该菌株提供了一个很好的活性实例，然而，考虑到各种各样的相关菌株的相当分散的活性性质，本发明的范围并不意味着仅局限于此。蛇口壳属微生物及其酶活性也可以用于以立体选择性的方式水解6-氟色满-2-羧酸乙酯的外消旋酯，以便为酸（显著地富集为对映异构体R)带来例如93-100%的对映体过量伴随着45-50%的转化，并且使富集的残余酯为对映异构体S。

因此产生了(R)-6-氟色满-2-羧酸（2）伴随着>70%的对映体过量，优选>80%，甚至更优选>90%，而(S)-6-氟羧酸保持酯（3）的形式伴随着>70%的对映体过量，优选>80%，甚至更优选>90%。

所述反应可以在对映异构体的任何混合物中进行，但是通常使用外消旋体。

用于该反应的酯是6-氟-2-羧酸酯（1），其中R₁是直链的或支链的C_1-5烷基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、叔戊基；优选自甲基、乙基、丙基，甚至更优选乙基。

优选地，所述反应在pH8-11，优选8.5-10.0进行。

温度可以包含在10和35°C之间，但是优选在20和25℃之间。

反应混合物可在水性环境中，或在水不混溶性溶剂的存在下。

通过本领域技术人员已知的方法并且优选通过一系列的酸-碱萃取能够回收两种化合物。

然后将两种化合物用于奈必洛尔的合成（方案1）。

通过本领域技术人员已知的方法（通过非限制性实例，类似于WO2007041805中描述的），酸（2）被转变为环氧化物(RS)和(RR)的混合物（4），二者之间为非对映异构，而酯（3）被转变成环氧化物(SR)+(SS)的混合物（5）。

通过进行环氧化物的混合物（4）与苄胺在空间位阻醇溶剂（如异丙醇、仲丁醇、叔丁醇、2-甲基-2-丁醇、异戊醇、2-甲基-2-戊醇）中的开环反应来完成动力学拆分，伴随着唯一的氨基醇RS（6）的形成，而环氧化物RR（7）以无变化的形式被回收。

相同的过程，被应用于混合物（5），产生氨基醇SR（8）和环氧化物SS（9）。

作为所描述的动力学拆分的替代方案，环氧化物的混合物（4）可以被色谱法分离为两种环氧化物RS和RR，并且环氧化物的混合物（5）被色谱法分离为两种环氧化物SR和SS；随后环氧化物RS与苄胺反应，得到氨基醇RS（6），而环氧化物SR与苄胺反应，得到氨基醇SR（8）。

最后，氨基醇（6）与环氧化物（7）的反应产生了l-奈必洛尔（10）的N-苄基化衍生物，并且类似地，氨基醇（8）与环氧化物（9）的反应提供了d-奈必洛尔（11）的N-苄基化衍生物。

将化合物（10）和（11）等摩尔量合并，通过结晶化纯化（以便除去任何杂质，所述杂质由不需要的非对映异构化合物构成，所述不需要的非对映异构化合物衍生自起始酯/酸的非完全对映异构纯度），脱苄基化，并随后成盐以获得所需的最终奈必洛尔盐。

实施例

在下文中，将通过下列实施例来详细描述本发明，所述实施例仅作为说明之用而并非出于限制性的目的：

实施例1

如EP-0687305中所描述，根据本领域技术人员熟知的技术培养包含原本在新榆蛇口壳中表达的酯酶的重组大肠杆菌菌株。通过声波降解法裂解细胞部分并且离心分离裂解物以获得无细胞的上清液。将1.6mL包含从新榆蛇口壳中获得的酯酶（脂肪酶）的溶液（6800单位/mL）以及大约25g的6-氟色满-2-羧酸乙酯（1）在25mL去离子水与100μL吐温80中的悬浮液加入到500mL的0.1N NaHCO₃缓冲溶液（pH9.7）中，任选地用2N NaOH将pH值调节至9.7。将由此获得的混合物缓慢搅拌。

采用控制添加量的2N NaOH溶液将pH值自动保持在9.7。

通过HPLC控制反应的进展。

在水解反应结束时，采用二氯甲烷萃取混合物以获得在有机相中的酯。用1N盐酸将水溶液酸化至pH1，然后用二氯甲烷萃取以回收酸。

用盐水分别洗涤两个有机相，并浓缩以分别得到12.2g乙酯和11.0g酸。

对映异构体比率（HPLC）：

(S)酯（3）/(R)酯：95.31/4.69

(R)酸（2）/(S)酸：95.36/4.64

针对酸的混合物（包含酸（2））在DMF中于25℃的旋光度的评价表明所述混合物是左旋的并且根据EP0334429中所报道的为R异构体。

酸（2）1H-NMR(DMSO-D6,400MHz):δ_H.(ppm):2.04(2H,m,OCHCH₂CH₂),2.64(1H,m,OCHCH₂CH₂),2.79(1H,m,OCHCH₂CH₂),4.75(1H,t,J=4.5Hz,OCHCO),6.80-7.00(3H,m,CHar),13.00(1H,b,COOH).

乙酯（3）1H-NMR(DMSO-D6,400MHz):δ_H.(ppm):1.19(3H,t,J=7.2Hz,CH₃),2.04(1H,m,OCHCH₂CH₂),2.14(1H,m,OCHCH₂CH₂),2.62(1H,m,OCHCH₂CH₂),2.80(1H,m,OCHCH₂CH₂),4.86(1H,t,J=4.5Hz,OCHCO),6.80-7.00(3H,m,CHar)

分析方法：Kromasil5-AmyCoat（4.6x250mm）色谱柱；洗脱剂：（A）己烷（0.1%TFA），（B）异丙醇，等度的（A）/（B）85/15；流速：1mL/min，温度：40°C；检测器：UV于280nm处；

实施例2酰基麦德鲁姆（Meldrum）衍生物的制备

将28g已拆分的(R)酸溶解于250mL无水二氯甲烷中；向所得的溶液中滴加1.4当量的草酰氯和DMF。将该溶液保持在搅拌、室温和N₂气氛条件下；1.5小时以后，蒸发溶剂，获得油状物，将该油状物再次溶解于200mL无水二氯甲烷中。另外，将麦德鲁姆酸（1.05当量）和吡啶（2当量）溶解于无水二氯甲烷（150mL）中，并于0℃搅拌15分钟。向该溶液中添加先前形成的酰氯。在添加结束时，将混合物于0℃搅拌1小时，并于室温搅拌另外的45分钟。然后，用另外的500mL二氯甲烷将其稀释，并用H₂O（2×200mL）、2N HCl（100mL）、水和盐水洗涤有机相，并在Na₂SO₄上干燥。获得油状物，用20倍体积的二异丙基醚处理该油状物，获得棕色固体（40g，HPLC纯度=81%，λ=280nm），将该固体过滤并干燥。获得的固体未经进一步纯化而用于后续反应。

实施例3β-酮酯的制备

将40克酰基麦德鲁姆衍生物(R)粗品与110mL叔丁醇置于搅拌下；将得到的混合物加热至80℃共1小时，直至通过HPLC的对照显著显示起始产物的消失。在反应结束时，减压蒸发叔丁醇；用500ml乙酸乙酯将其处理，并用饱和的NaHCO₃溶液、中性H₂O、盐水洗涤有机相，并将其在Na₂SO₄上干燥。然后将溶剂蒸发，获得作为油状物的28gβ-酮酯粗品（HPLC纯度=69%，λ=280nm），其未经进一步纯化而用于后续反应。

实施例4-氯代β-酮酯的制备

将28gβ-酮酯(R)粗品溶解于250ml乙酸乙酯中，并向该溶液中添加0.26当量的Mg(ClO₄)₂。30分钟后，在2小时内加入0.95当量N-氯代琥珀酰胺。在添加结束时，将所得混合物于室温搅拌1小时。然后，在用另外的350mL乙酸乙酯稀释之后，将形成的固体除去，将澄清的溶液转移至分液漏斗中；用盐水、H₂O洗涤有机相，并在Na₂SO₄上干燥。蒸发溶剂，得到34g氯代衍生物粗品（HPLC纯度=79.40%，λ=280nm），其未经进一步纯化而用于后续反应。

实施例5α-氯代酮（clorochetone）的制备

将34g氯代β-酮酯(R)粗品与HCOOH（100mL）、CH₃COOH（120mL）和H₂O（30mL）回流；1.5小时以后，通过HPLC的对照显著显示反应的结束。然后将混合物减压蒸发，用乙酸乙酯处理，并用盐水、饱和的NaHCO₃、H₂O洗涤有机相，并在Na₂SO₄上干燥。然后减压蒸发溶剂，获得作为油状物的21gα-氯代-酮（HPLC纯度=60%，λ=280nm），其未经进一步纯化而原样用于后续反应。

实施例6α-卤代醇的制备

将从前述反应中获得的21g油状物溶解于15倍体积的甲醇中，用刮刀向该溶液中添加2.0当量的NaBH(OCOCH₃)₃，并将其在磁力搅拌下保持于室温。45分钟以后，添加另一当量的NaBH(OCOCH₃)₃。最终添加完1小时以后，通过HPLC的对照指示反应的结束。减压蒸发溶剂，用乙酸乙酯将其全部转移至分液漏斗中，用H₂O和盐水洗涤有机相，并在Na₂SO₄上干燥。获得21g油状物，通过闪式色谱法纯化油状物（硅胶/粗品比率：30:1，洗脱剂：石油醚/AcOEt92:8），获得14.2gα-卤代醇（HPLC纯度=86.5%，λ=280nm）。

实施例7(RR+RS)环氧化物（4）的制备

将14gα-氯代-醇溶解于20倍体积的无水Et₂O中，向该溶液中添加预先用石油醚洗涤的2.8gNaH。1小时以后，通过TLC（硅胶，洗脱剂：石油醚/AcOEt85:15）的对照指示起始氯代醇的消失（TLC中一个斑点）以及两个环氧化物的形成（TLC上两个明显不同的斑点）。然后用另外的30倍体积的Et₂O稀释反应混合物，并将其全部倾到入100mL1M NaHSO₄中，保持轻快的搅拌。用NaHCO₃、H₂O、盐水洗涤有机相，并在Na₂SO₄上干燥。然后减压蒸发溶剂，获得11.4g作为油状物的以51:48比率的环氧化物混合物（HPLC纯度>98%，λ=280nm）。

只有以手性HPLC分析中显示的比率的两个主峰的存在表明在从(R)酸至非对映异构的(RR+RS)环氧化物混合物的反应顺序中没有外消旋化，伴随着手性立体中心的明显保留。

(SR+SS)环氧化物的混合物（5）的制备类似于实施例2-7中所描述的，所述制备起始于酯（3），在其水解为相应的酸以后。在这种情况下，针对由此获得的酸在DMF中于25℃下的旋光度的评价表明其为右旋并且根据EP0334429A1中所报道的为异构体S。

实施例8(SS+SR)环氧化物混合物的动力学拆分

将(SS+SR)环氧化物混合物（4.50g，22.5mmol）与苄胺（3.8mL，35mmol）在2-甲基-2-丁醇（38mL）中的溶液于室温混合12小时。在反应结束时，将形成的(SR)胺8真空下过滤并干燥（1.90g，6.30mmol）。将过滤后的溶液倾倒入环己烷（250mL）中，并用1M的NaHSO₄（100mL）和H₂O（50mL×2）洗涤由此获得的溶液，然后减压浓缩以获得1.30g（6.00mmol）(SS)环氧化物9。

类似于实施例8中所描述的进行(RS+RR)环氧化物混合物的动力学拆分。

实施例9：1-苄基奈必洛尔(SSSR)的合成

将化合物(RS)-2-苄氨基-1-(6-氟色满-2-基)乙醇和(SS)环氧化物溶解于绝对乙醇（6mL）中并保持回流直至起始试剂消失。在反应结束时，将混合物放置以达到室温，并真空除去溶剂。

实施例10：d-苄基奈必洛尔(RRRS)的合成

将化合物(SR)-2-苄氨基-1-(6-氟色满-2-基)乙醇和(RR)环氧化物按照实施例9中的方法处理，以获得d-苄基奈必洛尔。

实施例11：d,1-苄基奈必洛尔的合成

将实施例9中描述的1-苄基奈必洛尔（3.00g）和实施例10中描述的d-苄基奈必洛尔（3.00g）合并并通过结晶纯化由此获得的混合物（6.0g），获得5.0g N-苄基奈必洛尔（83%，HPLC纯度=99.6%）。在通过结晶的纯化过程中，同样除去了由不合意的异构体组成的杂质，所述不合意的异构体衍生自起始6-氟色满-2-羧酸乙酯（1）的非完全对映选择性水解。

实施例12：奈必洛尔盐酸盐的合成

将化合物d,1-苄基奈必洛尔（5.0g，410mmol）与20%的Pd(OH)₂/C（1%b/w）一起溶解于甲醇（400mL）中。将混合物保持在搅拌和氢气气氛下。在反应结束时，在多孔隔板上过滤催化剂，并向滤液中添加浓HCl（36mL）。减压浓缩溶液，并用绝对乙醇（50ml）对获得的残余物进行热处理。真空下过滤并干燥获得的固体（1.0g，产率：82%，HPLC纯度：99.9%）

HPLC分析方法

Claims (16)

1.一种用于合成下式的d-奈必洛尔和/或1-奈必洛尔的方法，

奈必洛尔

其包括以下步骤：

a）水解6-氟-2-羧酸酯的对映异构体混合物（1），其中R₁是直链的或支链的C_1-5烷基，

以得到酸（2）和酯（3）的混合物，

b）使用由此获得的酸（2）和酯（3）用于环氧化物混合物（4）和（5）的分别合成，

c)拆分环氧化物混合物（4）和（5）以分别获得化合物（6）+（7）和（8）+（9），

d）氨基醇（6）和（8）与环氧化物（7）和（9）反应以获得l-苄基奈必洛尔（10）和d-苄基奈必洛尔（11），

e)脱去苄基保护基，

其特征在于，在步骤（a）中进行通过立体选择性酶水解反应的水解，以得到具有>70%的对映体过量的R酸（2）的混合物和具有>70%的对映体过量的S酯（3）的混合物，以及，在步骤（c）中，通过使环氧化物混合物（4）和（5）与在空间位阻醇中的苄胺反应，对所述环氧化物混合物（4）和（5）进行动力学拆分。

2.根据权利要求1所述的合成方法，其中通过使用从蛇口壳属中获得的酯酶，并且特别是衍生自新榆蛇口壳的AJ3菌株的酯酶，来进行所述酶水解反应。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述酶水解反应在介于8和11之间的pH中进行。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述酶水解反应在介于8.5和10之间的pH中进行。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述酶水解反应在介于10°和35℃之间的温度中进行。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述酶水解反应在介于20°和25℃之间的温度中进行。

7.根据权利要求2所述的方法，其中所述酶水解反应在水性环境中或者在水不混溶性溶剂的存在下进行。

8.根据权利要求2所述的方法，其中所述酯的混合物（1）的酶水解进行以产生两种成分具有>80%或>90%的对映体过量的(R)酸（2）和(S)酯（3）的混合物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述酸（2）被转化为RR+RS环氧化物混合物（4），而所述酯（3）被转化为SS+SR环氧化物混合物（5）。

10.根据权利要求1所述的方法，其中环氧化物混合物（4）和（5）的用苄胺的动力学拆分在空间位阻醇中进行，所述空间位阻醇选自异丙醇、仲丁醇、叔丁醇、2-甲基-2-丁醇、异戊醇、2-甲基-2-戊醇。

11.根据权利要求10所述的方法，其中环氧化物混合物（4）的用苄胺的动力学拆分在空间位阻醇中进行，仅获得氨基醇RS（6），而环氧化物RR（7）以无变化的形式被回收，所述空间位阻醇选自异丙醇、仲丁醇、叔丁醇、2-甲基-2-丁醇、异戊醇、2-甲基-2-戊醇。

12.根据权利要求10所述的方法，其中环氧化物混合物（5）的用苄胺的动力学拆分在空间位阻醇中进行，仅获得氨基醇SR（8），而环氧化物SS（9）以无变化的形式被回收，所述空间位阻醇选自异丙醇、仲丁醇、叔丁醇、2-甲基-2-丁醇、异戊醇、2-甲基-2-戊醇。

13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述空间位阻醇是2-甲基-2-丁醇。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述氨基醇RS（6）与环氧化物SS（9）反应以得到1-苄基化奈必洛尔（10）和/或所述氨基醇SR（8）与环氧化物RR（7）反应以得到d-苄基化奈必洛尔（11）。

15.根据权利要求14所述的方法，其中将所述化合物（10）和（11）以1:1的比率混合，脱掉苄基保护，以得到最终产物奈必洛尔。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中将所述最终产物奈必洛尔用盐酸成盐，以获得相应的盐酸盐。