PT2646426E

PT2646426E - Processo para a preparação de nebivolol

Info

Publication number: PT2646426E
Application number: PT118155746T
Authority: PT
Inventors: Sandro Mauro; Daniela Fattori; Piero D Andrea; Amalia Cipollone
Original assignee: Menarini Int Operations Lu Sa
Priority date: 2010-11-30
Filing date: 2011-11-30
Publication date: 2015-12-04
Also published as: EA022194B1; US20130295622A1; CA2818465A1; IL226153A; MX2013005930A; EP2646426B1; IT1402974B1; BR112013013224B1; EA201300646A1; BR112013013224A2; AU2011355143A1; AU2011355143B2; IL226153A0; ES2553266T3; CA2818465C; EP2646426A1; CN103228640B; ITRM20100622A1; KR101797799B1; JP5973459B2

Description

DESCRIÇÃO

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NEBIVOLOL

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a um processo inovador para a síntese de Nebivolol.

Nebivolol é uma mistura racémica dos dois enantiómeros [ 2 S[2R[R[R]]], a,a'-[imino-bis (metileno)] bis[6-fluoro-croman-2-metanol] e [2R[2 S[S[S]]] a,a'-[imino-bis (metileno)] bis[6-fluoro-croman-2-metanol] (Figura 1).

nebivolol Figura 1

Em particular, é relatada a resolução enzimática do éster cromanilo de partida (1) por tratamento com uma enzima estereoseletiva, pertencente à família de esterases, numa forma nativa ou recombinante, também obtenível a partir do microrganismo Ophiostoma novo-ulmi.

Os ésteres e ácidos assim obtidos podem ser convertidos, por processos conhecidos por um perito na especialidade, como os correspondentes epóxidos "semiquirais", ou seja, os pares (RR+RS, 4) e (SS+SR, 5) do Esquema (1).

Por sua vez, os componentes de cada par podem ser separados explorando a sua diferente reatividade com benzilamina num solvente que consiste num álcool terciário. Sob estas condições de resolução cinética, os epóxidos RS e SR serão convertidos nos produtos de abertura correspondentes (6 e 8) , enquanto os epóxidos RR e SS permanecerão inalterados. 0 epóxido RR (7) é então separado da amina RS (6) e o epóxido SS (9) é separado da amina SR (8) com processos conhecidos de um perito na especialidade e preferentemente pela cristalização do componente básico. A amina RS é então feita reagir com o epóxido SS para obter 1-benzilonebivolol. Da mesma forma, a amina SR é feita reagir com o epóxido RR para obter d-benzilonebivolol.

Os 1- e d-benzilo Nebivolol assim obtidos são agrupados em montantes equimolares, cristalizados e convertidos em Nebivolol HC1 de acordo com processos conhecidos dos peritos na especialidade.

ESTADO DA TÉCNICA 0 Nebivolol é conhecido como um antagonista beta-recetor adrenérgico, um agente anti-hipertensivo, um inibidor de agregação plaquetária e um agente vasodilatador. 0 Nebivolol tem propriedades básicas e pode ser convertido numa forma de sal farmacêutico aceitável por tratamento com ácido. 0 sal de cloridrato é a forma comercializada.

Nebivolol contém quatro centros assimétricos, e, portanto, 16 estereoisómeros são teoricamente possíveis. No entanto, devido à particular estrutura da molécula (a presença de um eixo de simetria) , apenas 10 estereoisómeros podem realmente ser formados (Esquema 2).

Esquema 2. Estereoisómeros possíveis para Nebivolol De facto, por causa da simetria da molécula, RSSS=SSSR, RRSS=SSRR, SRSS=SSRS, RRSR=RSRR, SRSR=RSRS e RRRS=SRRR. A Patente US No 4.654.362 (EP 0145067, Janssen) descreve a síntese de produtos de série Nebivolol com a utilização de isómeros de epóxido como intermediários chave na síntese. Os produtos são obtidos por vezes em mistura e por vezes enantiopuros, sem definir a configuração absoluta. Em particular, o exemplo 84 da dita patente descreve a obtenção de uma mistura de isómeros como definido no Esquema 3.

Estes são separados, com uma coluna de cromatografia, em dois epóxidos racematos (RS/SR, 4/5) e (RR/SS, 7/9). A seguir a abertura de um par de epóxidos (4 + 5) com a benzilamina e a utilização dos produtos da reação referida (6 + 8) para abrir o segundo par de epóxidos (7 + 9) . Esta operação leva à produção de 4 diastereómeros benzilados (10-14). 0 documento EP 0334429 (Janssen) descreve o mesmo processo relatado no documento EP 0145067, mas com mais detalhes experimentais e com a atenção focada na preparação de um único isómero de Nebivolol. Neste caso, especificamente o ácido 6-fluorocromano carboxílico é resolvido nos enantiómeros individuais por tratamento com ( + ) -dehidroabietilamina. Os enantiómeros individuais assim obtidos são convertidos nos epóxidos semiquirais correspondentes de acordo com o seguinte esquema sintético (mostrado o isómero S):

A síntese estereosseletiva do isómero [2R, aS, 2'S, a'S]- a, a'-[iminobismetileno]bis[6-fluoro-3,4-dihidro-2H-l-benzopirano-2-metanol] é descrita. O processo de resolução de ésteres de ácido usados sofre várias desvantagens no que diz respeito a sua aplicação industrial. De facto, etapas adicionais (formação de amida, cristalização fracionada, hidrólise de amida) são introduzidas, e além disso, o rendimento geral é bastante baixo. A mistura de epóxidos diastereoisómericos assim obtida é executada em HPLC preparativa para isolar o isómero da quiralidade desejada. A Hetero Drugs Limited, no documento WO 2006/016376 e no subsequente documento WO 2007/083318, descreve processos de cristalização fracionada aplicados ao nível da mistura diastereoisómerica (10, 11, 13, 14) de benzilo Nebivolol, que levou também neste caso ao descartar de cerca de 50% dos materiais de partida, relacionados com a necessidade de remover diastereoisómeros indesejados. O documento WO 2004/041805 (Egis Gyogyszergyar) descreve um processo para a preparação de [2S*[R*[R*[R*]]]] e [2R*[S*[S*[S*]]]]-(±)-a,a'-[iminobis(metileno)] bis[6-fluoro-3,4-dihidro-2H-l-benzopirano-2-metanol] e seus enantiómeros puros individuais [2S*[R*[R*[R*]]]] e [2R*[S*[S*[S*]]]] a partir de diferentes compostos. As etapas usadas para a síntese de Nebivolol como mistura de enantiómeros são cerca de trinta, fazendo a síntese muito longa e não rentável.

No documento WO 2008/010022 (Cimex Pharma) é relatada uma via que a partir de ácidos 6-fluoro cromano carboxílicos, resolvidos de acordo com processos na literatura, leva à síntese dos dois enantiómeros de Nebivolol de acordo com duas sequências separadas (Esquema 5, para d-Nebivolol) .

Na abertura de epóxidos por uma benzilamina, um único produto de abertura cristaliza-se a partir da mistura de reação, mas o outro diastereoisómero é removido com os licores-mãe, levando também neste caso à eliminação de uma fração considerável de material numa fase já bastante avançada da sequência sintética. Adicionalmente, o último centro quiral é adicionado durante a penúltima etapa pela redução de uma cetona, uma reação bastante sensível, que a fim de obter resultados ótimos prevê a utilização de KBH4 e isopropóxido de titânio. 0 documento W02008/064826 (Zach System) relata um processo para a resolução de epóxidos, uma vez que os pares de diastereoisómeros (RS/SR e RR/SS) tenham sido separados cromatograficamente através da abertura enantioseletiva dos mesmos epóxidos mediada por complexos quirais de cobalto II (Esquema 6) . Neste caso, uma etapa de separação cromatográfica é necessária, menos do que prática do ponto de vista do processo, enquanto os complexos de cobalto exigem cuidado na manipulação e eliminação.

0 documento WO 2008/064827 (Zach System) descreve a síntese separada e enantioseletiva de d- e 1-Nebivolol a partir dos dois isómeros óticos do gliceraldeído protegido, tais como 2,2-dimetil acetalo (Esquema 7) . Os diastereoisómeros são separados com processos conhecidos, mas não descritos. O número de etapas sintéticas é maior do que as da síntese clássica, enquanto precursores de aldeído são conhecidos como compostos não excessivamente estáveis, que tendem a polimerizar quando armazenados numa forma pura e à temperatura ambiente.

Quanto à separação do enantiómero a nível do ácido 6-croman-fluoro-2-carboxílico, sabe-se que o processo de formação de amida com (+)-desidroabietilamina, seguido por cristalização fracionada e hidrólise de amida para recuperar o ácido (documento EP 0334429), é árduo e proporciona rendimentos relativamente baixos.

No que se refere à resolução enzimática de ésteres de ácidos carboxílicos, este é um processo conhecido na literatura, mas nunca tinha sido empregue em ésteres de derivados de flúor de ácidos croman-2-carboxílico, nem consequentemente utilizado para a síntese de Nebivolol.

Especificamente, exemplos conhecidos relacionados com croman-2-carboxilatos são relatados.

No documento US 5.037.747, ésteres benzopirano-2-carboxílicos (2R)-hidroxi-substituído e ácidos benzopirano-2- carboxilicos (2 S)-hidroxi-substituídos são preparados pela hidrólise seletiva catalisada por lipase de Pseudomonas do racemato correspondente.

Urban (Patente US. N° 5.089.637, documento EP 0448254) explora uma hidrólise enzimática com uma esterase derivada de Pseudomonas fluorescens para resolver as misturas racémica de fórmula geral (I), onde R = Ci- C3 alquilo.

O documento WO 96/40975 relata a utilização de uma esterase microbiana, derivada de Serratia marcescens para a resolução de croman-2-carboxil alquilos da mesma fórmula geral, mas com R > C3.

No documento DE 4430089 é relatado uma série de exemplos em que ésteres de croman-2-carboxilo são submetidos a hidrólise enzimática, com um grupo selecionado de enzimas (quimiotripsina, lipase de Candida lipolytica, lipase de Aspergillus oryzae, lipase de Geotrichum candidum, lipase de Aspergillus niger).

Finalmente, quanto a esterase derivada a partir do ascomiceto Ophiostoma novo-ulmi, os detalhes relacionados ao seu isolamento, clonagem em E. Coli a sua utilização na resolução de ésteres são relatados, por exemplo, por M. s. Isupov et ai. em Acta Crystallographica - Biological Crystallography section D60, p. 1879-1882 (2004), ou no documento EP 0687305, enquanto uma utilização do mesmo na resolução dos enantiómeros de ácidos arilalcanoide e mais especificamente, do cetoprofeno, é descrito no documento EP 0693134 .

Com base nas provas de literatura disponíveis até à data, a síntese de Nebivolol implica ainda numerosos problemas sintéticos. A síntese original de Janssen passando através dos epóxidos (Esquema 3, mistura 6) é certamente a mais curta, mas requer uma separação por HLPC preparativa dos dois pares de epóxidos diastereoisómericos. Os outros processos geralmente preveem muitas mais etapas sintéticas.

Numa parte considerável da síntese relatada, percentagens de produto intermediário, que podem chegar até aos 50%, são descartadas para eliminar diastereoisómeros indesejados que inevitavelmente foram produzidos na sequência sintética aplicada.

Portanto, a necessidade de desenvolver um processo sintético novo, adequado para utilização industrial e evitando a utilização de separações cromatográficas e a necessidade de eliminar percentagens consideráveis de compostos intermadiárioss, embora mantendo um número limitado de etapas sintéticas, é marcadamente sentida.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Foi agora surpreendentemente encontrado um processo mais eficaz para a síntese de Nebivolol (Esquema 1) que permite eliminar as desvantagens destacadas aqui para as vias de síntese previamente conhecidas, ou seja, que: a) evita ou reduz consideravelmente, separação por HPLC preparativa dos pares (RR/SS RS/SR) de enantiómeros de epóxidos ou de outros intermediários de diastereoisómericos; b) reduz sensivelmente a perda de produto representado por isómeros indesejáveis, com um consequente aumento do rendimento global. O tratamento da mistura dos dois enantiómeros do éster de ácido 6-fluorocroman-2-carboxílico é realizado com uma esterase fúngica (lipase) obtenível do género Ophiostoma. A espécie preferida é esterase de Ophiostoma novo-ulmi, já descrita na literatura para a sua atividade de estereoseletividade nos ésteres de compostos naproxeno ou cetoprofeno. A reação realizada num meio aquoso ou orgânico/aquoso leva à hidrólise para ácido carboxílico de um dos dois enantiómeros de forma seletiva, enquanto o outro permanece sob a forma de um éster. A reação procede rapidamente e com uma elevada estereoseletividade. Os dois compostos produzidos podem, portanto, ser facilmente separados por extração com ácido-base.

Portanto, o objeto da presente invenção é um processo para a preparação de Nebivolol, compreendendo o processo: a. resolução, por uma reação de hidrólise enzimática, da mistura de enantiómeros de um éster de ácido 6-fluoro-2-carboxílico (1) , em que Ri é um grupo de alquilo C1-5 linear ou ramificado,

(D para dar uma mistura de ácido

(2) e éster (3) em que o ácido R (2) está presente com excesso enantiomérico de > 70% e o éster S (3) está presente com excesso enantiomérico de > 70%; o excesso enantiomérico é preferentemente de > 80% e ainda mais preferentemente de > 90%, em ambos os componentes; b. utilizando o ácido (2) e o éster (3) assim obtidos para a síntese das misturas de epóxidos (4) e (5),

d. fazendo reagir o amino álcool RS (6) com o epóxido (9) para obter o /-benzilo Nebivolol (10) e o amino álcool SR (8) com o epóxido (7) para obter o d-benzilo Nebivolol (11)

e. desprotegendo com a remoção do grupo benzilo com formação de Nebivolol

caraterizado por serem efetuados na etapa (a), hidrolisação por uma reação de hidrólise enzimática de estereoseletiva realizada pela utilização de uma esterase obtida de género Ophiostoma, para dar a mistura de ácido R (2) com um excesso enant iomérico de >70% e de éster S (3) com um excesso enantiomérico de >70%; e na etapa (c) , cineticamente resolver as misturas de epóxidos (4) e (5) fazendo reagir com benzilamina num álcool impedido estericamente selecionado a partir de isopropanol, sec-butanol, terc-butanol, 2-metil-2-butanol, álcool isoamilico, 2-metil-2-pentanol.

Para os fins da presente invenção o grupo Ri, definido como um grupo alguilo Ci_5 linear ou ramificado, representa um radical selecionado a partir de: metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, tert-butilo, amilo, terc-amilo; preferentemente é um radical selecionado a partir de metilo, etilo, propilo e ainda mais preferentemente é um grupo etilo.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

De acordo com a presente invenção, o composto Nebivolol é obtido com o processo descrito no Esguema 1 a partir da mistura racémica do éster do ácido 6-fluorocroman-2-carboxílico (1). 6-fluorocroman-2-carboxilato (1) pode ser resolvido em seus dois enantiómeros com elevada estereoseletividade através da hidrólise enantioseletiva catalisada por uma esterase fúngica (lipase) obtenível do género Ophiostoma. A espécie preferida é esterase de Ophiostoma novo-ulmi, já descrita na literatura para a sua atividade de estereoseletividade nos ésteres de compostos naproxeno ou cetoprofeno. A enzima, na forma de uma proteína de expressão isolada e cristalizada, é descrita por Μ. N. Isupov et al. em Acta Crystallographica - Biological Crystallography Section D60, p. 1879-1882 (2004) . A enzima também é descrita nos documentos EP-B1-0687305 (W094/20634), EP-0693134, US5912164 e em EP1626093. A expressão da enzima em E. coli pode ser realizada conforme descrito por Μ. N. Isupov et al. (supra) ou no documento EP-B1-0687305 (W094/20634).

Esta estirpe proporciona um bom exemplo de atividade, no entanto, dado a natureza bastante difundida da atividade numa grande variedade das estirpes relacionadas, o âmbito da invenção não é destinado a ser limitado apenas aos mesmos. Os micro-organismos do género Ophistoma e a sua atividade enzimática podem ser usados para hidrolisar o éster racémico de 6-fluorocroman-2-carboxilado etilo de forma estereoseletiva, a fim de trazer para o ácido, consideravelmente enriquecido em enantiómero R., por exemplo, 93-100% de excesso de enantiomérico com 45-50% de conversão e deixar o éster residual enriquecido no enantiómero S. É, portanto produzido o ácido (R) 6-fluorocroman-2-carboxílico (2) com um excesso enantiomérico de >70%, preferentemente de >80% e ainda mais presentemente de >90%, enquanto o ácido (S) 6-fluoro carboxílico permanece sob a forma de um éster (3) com um excesso enantiomérico de >70%, preferentemente de >80% e ainda mais preferentemente de >90%. A reação pode ser realizada em qualquer mistura de enantiómeros, mas geralmente é utilizado o racemato. O éster utilizado para esta reação é um éster de ácido 6-fluoro-2-carboxílico (1) , em que R i é um grupo alquilo Ci-5 de cadeia linear ou ramificada, selecionado a partir do grupo compreendido de metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo, amilo, terc-amilo; preferentemente a partir de metilo, etilo, propilo e ainda mais preferentemente a partir de um grupo etilo. A reação é preferentemente realizada a um pH de 8-11, preferentemente 8,5-10,0. A temperatura pode estar compreendida entre 10 e 35°C, mas preferentemente entre 20 e 25°C. A mistura de reação pode estar num ambiente aquoso, ou na presença de solventes imisciveis com água. A recuperação de ambos os compostos é possível por meio de processos conhecidos por um perito na especialidade e preferentemente através de uma série de extrações de ácido-base.

Ambos os compostos são então utilizados para a síntese de Nebivolol (Esquema 1).

Através de processos conhecidos por um perito na especialidade (por meio de um exemplo não limitativo, de modo análogo ao descrito no documento W02008/010022) o ácido (2) é transformado na mistura de epóxidos (RS) e (RR) (4), entre as mesmas diastereoisómericas, enquanto o éster (3) é convertido na mistura de epóxidos (SR) + (SS) (5) .

Ao realizar a reação de abertura da mistura de epóxidos (4) com benzilamina num solvente alcoólico estericamente impedido selecionado a partir de isopropanol, sec-butanol, terc-butanol, 2-metil-2-butanol, álcool isoamílico, 2-metil-2-pentanol) é tida uma resolução cinética, com formação do único amino álcool RS (6), enquanto o epóxido RR (7) é recuperado como inalterado.

0 mesmo procedimento, aplicado à mistura (5) produz o amino álcool SR (8) e o epóxido SS (9).

Alternativamente para a resolução cinética descrita, a mistura de epóxidos (4) pode ser cromatograficamente separada nos dois epóxidos RR e RS, e a mistura dos epóxidos (5) nos dois epóxidos SR e SS; subsequentemente o epóxido RS é feito reagir com benzilamina obtendo o amino álcool RS (6) , enquanto o epóxido SR é feito reagir com benzilamina para obter o amino álcool SR (8).

Finalmente, a reação do amino álcool (6) com

o epóxido (9) produz o derivado N-benzilado de 1-Nebivolol (10) , e analogamente a reação do amino álcool (8) com o epóxido (7) proporciona o derivado N-benzilado de d-Nebivolol (11) .

Os compostos (10) e (11) são agrupados em quantidades equimoleculares, purificado por cristalização (de forma a eliminar quaisquer impurezas constituídas por compostos diastereoisómericos indesejados resultantes de pureza enantiomérica não completa dos ésteres/ácidos de partida) desbenzilado e subsequentemente salificados de obter o sal de Nebivolol final desejado.

EXEMPLOS A invenção será em seguida descrita em pormenor por meio dos seguintes exemplos, apenas a título de ilustração e não com fins limitativos: EXEMPLO 1

Como descrito no documento EP-0687305, uma estirpe de E. coli recombinante contendo a esterase originalmente expressa em Ophiostoma novo-ulmi é cultivada de acordo com técnicas bem conhecidas por peritos na especialidade. Uma fração de células é lisada por sonicação e o lisado é centrifugado para obter uma solução de sobrenadante isenta de células. 1,6 ml de solução contendo a enzima esterase (lipase) obtida a partir de Ophiostoma novo-ulmi (6800 unidades/ml) e uma suspensão de cerca de 25 g de ácido etil 6-fluorocroman -2-carboxílico (1) em 25 ml de água desionizada com 100 pL de Tween 80, são adicionados a 500 ml de uma solução tampão a 0,1 N de NaHCCg (pH 9,7), opcionalmente ajustando o pH com NaOH a 2 N para um valor de 9,7. A mistura assim obtida é suavemente agitada. O pH é automaticamente mantido no valor de 9,7 com adições controladas de uma solução a 2 N de NaOH. A evolução da reação é controlada por meio de HPLC.

No final da reação de hidrólise, a mistura é extraída com diclorometano, de modo a obter o éster na fase orgânica. A solução aquosa é acidificada com ácido clorídrico a 1 N para pH 1 e em seguida extraída com diclorometano para a recuperação do ácido.

As duas fases orgânicas são lavadas separadamente com salmoura e concentradas para obter, respetivamente, 12,2 g de éster etílico e 11,0 g de ácido.

Razão de enantiómeros (por HPLC) : éster (S) (3)/ éster (R) : 95,31/4,69 ácido (R) (2)/ ácido (S): 95,36/4,64, A avaliação do poder rotatório em DMF a 25°C para a mistura de ácidos (compreendendo o ácido (2)) mostra que a referida mistura é de levógira e em conformidade com o reportado no documento EP0334429 para o isómero R. ÁCIDO (2) 1H-RMN (DMSO-D6, 400 MHz) : δΗ □ (ppm): 2,04 (2H, m, OCHCH2CH2) , 2,64 (1H, m, OCHCH2CH2) , 2,79 (1H, m, OCHCH2CH2) , 4.75 (1H, t, J=4,5 Hz, OCHCO), 6,80-7,00 (3H, m, CHar), 13,00 (1H, a, COOH) . ÉSTER ETÍLICO (3) 1H-RMN (DMSO-D 6, 400 MHz): δΗ □ (ppm): 1,19 (3H, t, J=7,2 Hz, CH3) , 2,04 (1H, m, OCHCH2CH2) , 2,14 (1H, m, OCHCH2CH2) , 2,62 (1H, m, OCHCH2CH2) , 2,80 (1H, m, OCHCH2CH2) , 4,86 (1H, t, J=4,5 Hz, OCHCO), 6,80-7,00 (3H, m, CHar)

Processo de análise: Kromasil 5-AmyCoat (4,6 x 250 mm) coluna; eluentes: (A) hexano (0,l%deTFA), (B) , o isopropanol, isocrático (A)/ (B) 85/15; fluxo: 1 mL/min, temperatura: 40°C;

Detetor: UV a 280 nm; EXEMPLO 2. Preparação de derivado de Acilo de Meldrum

28 g do ácido resolvido (R) são solubilizados em 250 mL de diclorometano anidro; à solução resultante 1,4 equivalentes de cloreto de oxalilo e DMF são adicionados gota a gota. A solução é mantida sob agitação à temperatura ambiente e sob N2; após 1,5 horas o solvente é evaporado, obtendo-se um óleo que é redissolvido em 200 mL de diclorometano anidro. Separadamente, o ácido de Meldrum (1,05 equivalentes) e piridina (2 equivalentes) são dissolvidos em diclorometano anidro (150 mL) e deixados sob agitação a 0°C durante 15 min. A esta solução é adicionado o cloreto de ácido formado anteriormente. No final da adição a mistura é deixada sob agitação a 0°C durante 1 hora, e outros 45 minutos à temperatura ambiente.

Em seguida, é diluída com outros 500 mL de diclorometano e a fase orgânica é lavada com H20 (2 x 200 mL) , HC1 a 2 N (100 mL) , água e salmoura, e seca em Na2S04. É obtido um óleo que é absorvido com 20 volumes de éter diisopropílico, obtendo-se um sólido castanho (40 g, pureza por HPLC = 81%, λ = 280 nm) que é filtrado e seco. O sólido obtido é utilizado na reação subsequente sem purificação adicional. EXEMPLO 3. Preparação do β-ceto éster

40 gramas de derivado de acilo de Meldrum bruto (R) são colocados sob agitação com 110 mL de terc-butanol; a mistura resultante é aquecida até 80 °C durante 1 h até que um controlo por HPLC destaca o desaparecimento do produto de partida. No final da reação, o terc -butanol é evaporado sob pressão reduzida; é absorvido com 500 mL de acetato de etilo e a fase orgânica é lavada com uma solução de NaHCCt saturada, H20 até à neutralidade, salmoura e seca em Na2S04. O solvente é então evaporado, obtendo-se 28 g de β-ceto éster bruto (pureza por HPLC = 69%, λ = 280 nm) na forma de um óleo, o qual é utilizado na reação subsequente sem purificação adicional. EXEMPLO 4- Preparação de cloro β-ceto éster

28 g de β-ceto éster (R) bruto são dissolvidos em 250 mL de acetato de etilo e a esta solução 0,26 equivalentes de Mg(C104)2 são adicionados. Depois de 30 min, 0,95 equivalentes de N-clorosuccinimida são adicionados em 2 h. No final da adição, a mistura resultante é agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Em seguida, o sólido formado é eliminado, a solução límpida é transferida para um funil de separação, após diluição com outros 350 mL de acetato de etilo; a fase orgânica é lavada com salmoura, H20 e seca em Na2S04. O solvente é evaporado, obtendo-se 34 g de derivado de cloro bruto (pureza por HPLC = 79,40 %,λ = 280 nm) o qual é utilizado na reação subsequente sem purificação adicional. EXEMPLO 5. Preparação de a-clorocetona

34 g de cloro β-ceto éster bruto (R) são submetidos a refluxo com HCOOH (100 mL) , CH3COOH (120 mL) e H20 (30 mL) ; após 1,5 h um controlo por HPLC destaca o final da reação. A mistura é então evaporada sob pressão reduzida, absorvida com acetato etilo e a fase orgânica é lavada com salmoura, NaHC03 saturado, H20, e seca em Na2S04. O solvente é então evaporado sob pressão reduzida, obtendo-se 21 g de α -cloro cetona (purezapor HPLC = 60 %, λ = 280 nm) na forma de um óleo, o qual é utilizado tal qual na próxima etapa sem purificação adicional. EXEMPLO 6. Preparação de a-cloroálcool

21 q de óleo obtido a partir da reação anterior são dissolvidos em 15 volumes de MeOH, a esta solução 2,0 equivalentes de NaBH (OCOCH3) 3 são adicionados com uma espátula e é mantido sob agitação magnética à temperatura ambiente. Depois de 45 min é adicionado outro equivalente de NaBH (OCOCH3) 3. Depois de 1 hora a partir da última adição, um controlo por HPLC indica o final da reação. O solvente é evaporado sob pressão reduzida, tudo é transferido para funil de separação com acetato etilo e a fase orgânica é lavada com H20 e salmoura e seca em Na2S04. Obtêm-se 21 g de um óleo que é purificado por cromatografia flash (razão de silica/bruto: 30:1, eluente: éter de petróleo/AcOEt 92:8), obtendo 14,2 g de α cloro-álcool (pureza por HPLC= 86,5%, λ = 280 nm). EXEMPLO 7. Preparação de epóxidos (RR+RS) (4)

14 g de α -cloro-álcool são dissolvidos em 20 volumes de Et20 anidro e a esta solução 2,8 g de NaH precedente lavado com éter de petróleo, são adicionados. Após 1 hora, um controlo por TLC (gel de sílica, eluente: éter de petróleo / AcOEt 85:15) indica o desaparecimento do cloro álcool de partida (uma mancha em TLC) e a formação dos dois epóxidos (duas manchas claramente distintas em TLC). A mistura de reação é então diluída com outros 30 volumes Et20 e tudo é vertido em 100 mL de NaHS04 a 1 M, mantendo uma agitação rápida. A fase orgânica é lavada com NaHC03, H20, salmoura e seca sobre Na2S04. 0 solvente é então evaporado sob pressão reduzida, obtendo-se 11,4 g da mistura de epóxidos como um óleo (pureza por HPLC >98%, λ = 280 nm) numa razão de 51:48. A presença de apenas dois picos principais nas razões indicadas na análise com HPLC quiral demonstra que nenhuma racemização foi tida na sequência de reação indo do ácido (R) à mistura de epóxidos diastereoisómericos (RR + RS) com preservação evidente da quiralidade do estereocentro. A mistura de epóxidos (SR + SS) (5) é preparada de modo análogo ao descrito nos Exemplos 2-7, partindo do éster (3) após a sua hidrólise ao ácido correspondente. Neste caso, a avaliação do poder rotatório em DMF a 25°C para o ácido assim obtido mostra-o como dextrogiro e de acordo com o relatado no documento EP 0334 429A1 para o isómero S. EXEMPLO 8 (resolução cinética na mistura de epóxidos (SS + SR).

Uma solução da mistura de epóxidos (SS + SR) (4,50 g, 22,5 mmol) e benzilamina (3,8 mL, 35 mmol) em 2-metil-2-butanol (38 ml) é misturada à temperatura ambiente durante 12 horas. No final da reação a amina 8 formada (SR) é filtrada sob vácuo e seca (1,90 g, 6,30 mmol). A solução filtrada é vertida em ciclohexano (250 mL) e a solução assim obtida é lavada com NaHS04 a 1 M (100 mL) e H20 (50 mL x 2) e em seguida, concentrada sob pressão reduzida para obter 1,30 (6,00 mmol) g de (SS) de epóxido 9. A resolução cinética na mistura de epóxidos (RS + RR) é conduzida de modo análogo ao que se descreveu no Exemplo 8. EXEMPLO 9: síntese de 1-benzilo Nebivolol (SSSR) O composto (RS)-2-1-benzilamina-l-(6-fluorocroman-2-il) etanol e epóxido (SS) são dissolvidos em etanol absoluto (6 mL) e mantidos a refluxo até o desaparecimento dos reagentes de partida. No final da reação, a mistura é deixada atingir a temperatura ambiente e o solvente é removido sob pressão reduzida. EXEMPLO 10: síntese de d-benzil Nebivolol (RRRS) 0 composto (RS)-2-benzilamina-l-(6-fluorocroman-2-il) etanol e epóxido (RR) são tratados como no Exemplo 9 para obter d-benzilo Nebivolol. EXEMPLO 11: síntese de d,1-benzil Nebivolol 0 1-benzil Nebivolol descrito no Exemplo 9 (3,00 g) e o d-benzil Nebivolol descrito no Exemplo 10 (3,00 g) são reunidos e a mistura assim obtida (6,0 g) é purificada por cristalização, obtendo-se 5,0 g de N-benzil Nebivolol (83%, pureza por HPLC=99,6%). Durante a purificação por cristalização também são eliminadas as impurezas que consistem em isómeros indesejáveis resultantes da hidrólise enantioseletiva não-completa do ácido etil 6-fluorocroman-2-carboxílico de partida (1). EXEMPLO 12: síntese de cloridrato de Nebivolol O composto d,1-benzil Nebivolol (5,0 g, 410 mmol) é dissolvido em metanol (400 mL) juntamente com 20% de Pd (OH) 2/C (1% b/p). A mistura é mantida sob agitação e sob atmosfera de hidrogénio. No final da reação o catalisador é filtrado através de um septo poroso, e HC1 concentrado (36 ml) é adicionado ao filtrado. A solução é concentrada sob pressão reduzida e o resíduo obtido é tratado termicamente com etanol absoluto (50 mL) . O sólido obtido é filtrado e seco sob vácuo (1,0 g, rendimento: 82%, pureza por HPLC: 99,9%)

REFERENCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patentes citados na descrição • US 4654362 A [0013] • EP 0145067 A [0013] [0015] • EP 0334429 A, Janssen [0015] [0024] [0065] • WO 2006016376 A [0018] • WO 2007083318 A [0018] • WO 2004041805 A [0019] • WO 2008010022 A [0020] [0053] • WO 2008064826 A [0022] • WO 2008064827 A [0023] • US 5037747 A [0027] • US 5089637 A [0028] • EP 0448254 A [0028] • WO 9640975 A [0029] • DE 4430089 [0030] • EP 0687305 A [0031] [0060] • EP 0693134 A [0031] [0042] • EP 0687305 Bi [0042] [0043] • WO 9420634 A [0042] [0043] • US 5912164 A [0042] • EP 1626093 A [0042] • EP 0334429 AI [0080]

Documentos de não patente citados na descrição • Μ. N. ISUPOV et al. Acta Crystallographies - Biological

Crystallography, 2004, 1879-1882 [0031] [0042]

Lisboa, 20 de Novembro de 2015

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Um método para a síntese de d-Nebivolol e/ou 1-Nebivolol das seguintes fórmulas

compreendendo as seguintes etapas : a) hidrolisação de uma mistura de enantiómeros do éster de ácido 6-fluoro-2-carboxílico (1), em que Ri é um grupo de alquilo C1-5 linear ou ramificado

para dar uma mistura de ácido (2) e éster (3)

b) utilização do ácido (2) e do éster (3) assim obtidos para a síntese respetivamente das misturas dos epóxidos (4) e (5) ,

c) resolução das misturas de epóxidos (4) e (5) para obter respetivamente os compostos (6) + (7) e (8) + (9),

d) fazer reagir os amino álcoois (6) e (8) com os epóxidos (7) e (9) para obter 1 -benzil Nebivolol (10) e d-benzil Nebivolol (11)

e) remoção do grupo de proteção de benzilo, caracterizado por na etapa (a) a hidrolisação ser realizada por uma reação de hidrólise enzimática estereoseletiva utilizando uma esterase obtida do género Ophiostoma, para dar a mistura de ácido R (2) com um excesso enantiomérico de >70% e de éster S (3) com um excesso enantiomérico de >70%; e na etapa (c), a resolução as misturas de epóxidos (4) e (5) é realizada cineticamente fazendo-as reagir com benzilamina num álcool impedido estericamente selecionado a partir de isopropanol, sec-butanol, terc-butanol, 2-metil-2-butanol, álcool isoamilico, 2-metil-2-pentanol.
2. O método de síntese de acordo com a reivindicação 1, em que a reação de hidrólise enzimática se realiza através da utilização de uma esterase obtida a partir da estirpe AJ3 de Ophiostoma novo-ulmi.
3. 0 método de acordo com as reivindicações 1 ou 2, em que a reação de hidrólise enzimática é realizada a um pH compreendido entre 8 e 11.
4. 0 método de acordo com a reivindicação 3, em que a reação de hidrólise enzimática é realizada a um pH compreendido entre 8,5 e 10.
5. O método de acordo com as reivindicações 1 ou 2, em que a reação de hidrólise enzimática é realizada a uma temperatura compreendida entre 10° e 35°C.
6. O método de acordo com a reivindicação 5, em que a reação de hidrólise enzimática é realizada a uma temperatura compreendida entre 20° e 25°C.
7. O método de acordo com as reivindicações 1 ou 2, em que a reação de hidrólise enzimática é realizada num ambiente aquoso ou na presença de solventes imisciveis em água.
8. O método de acordo com as reivindicações 1 ou 2, em que a hidrólise enzimática da mistura de ésteres (1) rende uma mistura de ácido (R) (2) e éster (S) (3) com um excesso enantiomérico de >80% ou >90% em ambos os componentes.
9. Um método de acordo com a reivindicação 1, em que o ácido (2) é convertido na mistura de epóxidos (4) RR+RS, enquanto o éster (3) é convertido na mistura de epóxidos (5) SS+SR.
10. O método de acordo com a reivindicação 1, em que a resolução cinética com benzilamina da mistura de epóxidos (4) é realizada num álcool estericamente impedido selecionado a partir de isopropanol, sec-butanol, terc-butanol, 2-metil-2-butanol, álcool isoamilico, 2-metil-2-pentanol, obtendo apenas o amino álcool RS (6) , enquanto o epóxido RR (7) é recuperado como inalterado.
11. 0 método de acordo com a reivindicação 1, em que a resolução cinética com benzilamina da mistura de epóxidos (5) é realizada num álcool estericamente impedido selecionado a partir de isopropanol, sec-butanol, terc-butanol, 2-metil-2-butanol, álcool isoamilico, 2-metil-2-pentanol, obtendo apenas o amino álcool SR (8) , enquanto o epóxido SS (9) é recuperado como inalterado.
12. 0 método de acordo com as reivindicações 10 ou 11, em que o álcool estericamente impedido é 2-metil-2-butanol.
13. O método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, em que o amino álcool RS (6) é feito reagir com o epóxido SS (9) para dar 1-benzilado Nebivolol (10) e/ou o amino álcool SR (8) é feito reagir com o epóxido RR (7) para dar o d-benzilado Nebivolol (11).
14. 0 método de acordo com a reivindicação 13, em que os compostos (10) e (11) são misturados numa razão de 1:1, desprotegidos do grupo benzilo para dar o produto final Nebivolol.
15. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, em que o produto final Nebivolol é salificado com ácido clorídrico, obtendo-se o cloridrato correspondente. Lisboa, 20 de Novembro de 2015