CN103212706B - 基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法 - Google Patents
基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103212706B CN103212706B CN201310080609.XA CN201310080609A CN103212706B CN 103212706 B CN103212706 B CN 103212706B CN 201310080609 A CN201310080609 A CN 201310080609A CN 103212706 B CN103212706 B CN 103212706B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- golden nanometer
- nanometer particle
- primer
- reaction
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Abstract
基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法，属于材料化学技术领域。本发明主要内容为首先合成不同粒径25nm和10nm的金纳米粒子，通过对金纳米粒子表面引物偶联量的可控修饰，达到金纳米粒子在PCR体系中的稳定性，并对金纳米粒子-引物偶联物用PEG1000进行修饰。在合适的PCR条件下，进行大小金的链状可控组装，并对可控组装产物进行TEM表征和CD信号研究比较。本发明首次通过PCR方法进行了大金和小金的链状可控组装，并首次对不同循环数下PCR组装的不同长度链状组装产物的手性性质进行了研究和探讨。
Description
技术领域
一种基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法，属于材料化学技术领域。
背景技术
纳米材料的自组装是纳米技术的一个研究热点，原因在于自组装纳米材料能够表现出不同于单分散的纳米粒子的独特的光学、电学、磁学和化学性质，通过研究自组装材料的性质可以更好地理解宏观材料的物理和化学性质。链状组装体在光电和生物传感器设备上有很大的应用前景，一般的组装方法为模板法或者分子连接法，但后期的物理或化学处理对粒径间的间距以及组装体的空间排布有不可预计的影响。
聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction)，是分子生物学中应用的基础实验手段，是上世纪80年代中期发展起来的一种体外特定核酸序列扩增技术。它具有特异性强、扩增效率高、快速、简便、重复性好、易实现自动化等优点。纳米技术与生物技术相结合产生的纳米生物技术凭借其独特的性质得到了广泛的研究发展，被越来越多的科研人士所青睐。而金纳米粒子，由于其独特的物理、化学性质及生物相容性，在生物电化学、材料学及生物医学等领域都有很广泛的应用。将纳米材料结合到PCR过程中已成为近年来的研究热点，对于提高PCR的特异性和效率和组装结构手性性质的研究有很大的作用。本发明首次通过PCR方法进行了大金和小金的链状可控组装，并首先对链的手性性质进行了研究和探讨。圆二色谱（CD）的原理是由不对称分子组成的物质是光学各向异性的，物质对R和L两种圆偏振光吸收程度不同的现象称为圆二色性。这种吸收程度的不同与波长的关系称圆二色谱，是一种测定分子不对称结构的光谱法。可以用圆二色谱研究某些立体结构，对PCR组装后不同长度链状结构体的手性进行研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于聚合酶链反应的大金和小金的链状可控组装，并对组装产物的手性性质进行研究。
本发明的技术方案：基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物的手性研究方法，包括大金纳米粒子和小金纳米粒子的合成，其表面的引物修饰，金纳米粒子-引物偶联物的稳定修饰，不同长度的链状可控组装，组装产物的手性性质表征。
具体步骤：
（1）25nm金纳米粒子合成
采用柠檬酸三钠还原氯金酸合成25nm金纳米粒子。
（2）10nm金纳米粒子合成
采用单宁酸还原氯金酸合成10nm金纳米粒子。
（3）金纳米粒子和引物的偶联
将新合成的25nm金纳米粒子和巯基修饰的上游引物F-primer偶联，新合成的10nm金纳米粒子和巯基修饰的下游引物R-primer偶联，分别形成金纳米粒子-引物偶联物。
F-primer(50bp)：5’-SH-(CH2)6-TGGCTGACCCTGATGAGTTCG-3’，
R-primer(50bp)：5’-SH-(CH2)6-GGGCCATGATTACGCCAGTT-3’。
（4）金纳米粒子-引物偶联物的稳定
将金纳米粒子-引物偶联物和巯基修饰的聚乙二醇（PEG1000）反应，以达到稳定金纳米粒子的作用。
（5）链状可控组装
以λDNA为模板，通过优化PCR扩增条件，将金纳米粒子-引物偶联物在PCR体系中进行不同循环数下的组装，离心浓缩，得组装产物。
（6）组装产物的TEM和手性性质表征
组装产物进行TEM和CD表征。
所述不同粒径金纳米粒子合成：
25nm金纳米粒子合成：将47.5mL的超纯水加入到洁净的三角烧瓶中，搅拌条件下加入2.5mL的浓度为2g/L的氯金酸，加热搅拌，达沸腾，紧接着加入0.9mL1%的柠檬酸三钠溶液，边加热边搅拌，溶液颜色从淡紫色变成红色，反应持续6-8min以使柠檬酸三钠完全沉降；溶液冷却至4℃保藏，即制得粒径为25nm的金纳米粒子；
10nm金纳米粒子合成：配制1mL1%的氯金酸于79mL的超纯水中，混合均匀即为A溶液；将4mL1%柠檬酸三钠溶液、0.1mL1%的单宁酸溶液和0.1mL浓度为25mM的碳酸钾混于15.8mL的超纯水中，即为B溶液；将A和B溶液分别加热到60℃，在高速搅拌下把B溶液迅速加到A溶液中，反应液在60℃下继续搅拌反应，然后溶液加热回流2min，形成亮红色的溶液，最终冷却至室温合成粒径在10nm的金纳米粒子。
所述金纳米粒子和引物的偶联：
（ⅰ）将步骤（2）中制备好的1mL2nM25nm金纳米粒子及1mL10nM10nm金纳米粒子分别以7000rpm、13000rpm离心10min，弃上清，分别重悬在100μL的超纯水中，4℃保藏、待用；
（ⅱ）25nm金纳米粒子和上游引物F-primer偶联：取（ⅰ）制备好的50μL25nm金纳米粒子加入50μL200nM的F-primer，混匀，室温反应12h；
（ⅲ）10nm金纳米粒子和下游引物R-primer偶联：取（ⅰ）制备好的50μL10nm金纳米粒子加入50μL1μM的R-primer，混匀，室温反应12h；
（ⅳ）将上述（ⅱ）和（ⅲ）步骤中反应溶液分别在7000rpm、13000rpm离心10min，弃上清，后用50μL的超纯水分散沉淀，4℃保藏、待用；
所述金纳米粒子-引物偶联物的稳定：
将步骤（3）中的金纳米粒子-引物偶联物中加入2μL100μM的PEG1000，反应12h，反应后的溶液在8000rpm离心10min，弃上清，后用50μL的超纯水分散沉淀，4℃保藏、待用。
所述链状可控组装：
（a）PCR：以λDNA为模板，采用制得的25nm金纳米粒子-F-Primer及10nm金纳米粒子-R-Primer进行PCR，PCR反应体系：dNTPs1μL，0.5μL的TaqDNA聚合酶，λDNA模板质粒0.5μL，PCR反应缓冲液5μL，分别取25nm金纳米粒子-F-Primer4μL和10nm金纳米粒子-R-Primer4μL，加灭菌水至总体积为50μL；
（b）扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，2～20个循环；72℃再延伸10min；10℃保存，得PCR产物。
所述组装产物的TEM和手性性质表征：
取500μLPCR产物进行8000rpm离心10min，弃上清，沉淀用100μL的超纯水分散，进行TEM和CD表征。
其中：dNTPs（购自上海生工），TaqDNA聚合酶（购自上海生工），λDNA模板质粒（购自宝成生物工程有限公司），PCR反应缓冲液（购自上海生工）。
表1模板、上下游引物和模板序列及长度
| 编号 | 序列(5’-3’) | 长度 |
| 模板 | Plasmid λDNA | |
| F-primer (50bp) | -SH-(CH2)6-TGGCTGACCCTGATGAGTTCG | 21 |
| R-primer (50bp) | -SH-(CH2)6-GGGCCATGATTACGCCAGTT | 20 |
注：本发明所使用的DNA均购自中国上海生工生物工程有限公司，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯化。
本发明的有益效果：本发明首次通过PCR方法进行了大金和小金的链状可控组装，并首次对不同循环数下PCR组装的不同长度链状组装产物的手性性质进行了研究和探讨。
附图说明
图1合成的金纳米粒子的TEM图，（a）25nm金纳米粒子，（b）10nm金纳米粒子。
图2不同长度链组装产物的TEM图，a：2个循环，b：3个循环，c-e：5个循环，f-h：10个循环，i-l：20个循环。
图3不同循环数下不同长度链组装产物的CD图谱。
具体实施方式
实施例125nm和10nm粒径金纳米粒子的链状组装
（1）25nm金纳米粒子的合成
25nm金纳米粒子的合成方案为：将47.5mL的超纯水加入到洁净的三角烧瓶中，搅拌条件下加入2.5mL的浓度为2g/L的氯金酸，加热搅拌，达沸腾，紧接着加入0.9mL1%的柠檬酸三钠溶液，边加热边搅拌，溶液颜色从淡紫色变成红色，反应持续6-8min以使柠檬酸三钠完全沉降。最后，溶液分别冷却至室温，4℃保藏。即制得粒径在25nm的金纳米粒子。
（2）10nm金纳米粒子的合成
配制1mL1%的氯金酸于79mL的超纯水中，混合均匀即为A溶液。将4mL1%柠檬酸三钠溶液、0.1mL1%的单宁酸溶液和0.1mL浓度为25mM的碳酸钾混于15.8mL的超纯水中，即为B溶液。将A和B溶液分别加热到60℃，在高速搅拌下把B液迅速加到A液中，最终反应液在60℃下继续搅拌反应，然后溶液加热回流2min，形成亮红色的溶液，最终冷却至室温合成粒径在10nm左右的金纳米粒子。
（3）金纳米粒子和引物偶联
将制备好的1mL2nM25nm金纳米粒子和1mL10nM10nm金纳米粒子分别以7000rpm和13000rpm离心10min，弃上清，分别重悬在100μL的超纯水中，4℃保藏、待用。
25nm金纳米粒子和上游引物（F-primer）偶联：取上述制备好的50μL25nm金纳米粒子加入50μL200nM的F-primer，混匀，室温反应12h。
10nm金纳米粒子和下游引物（R-primer）偶联：取上述制备好的50μL25nm金纳米粒子加入50μL1μM的R-primer，混匀，室温反应12h。
④将上述②和③步骤中反应溶液在分别7000rpm及13000rpm离心10min，弃上清，后用50μL的超纯水分散沉淀，4℃保藏、待用。
（4）金纳米粒子和引物偶联物的稳定
将步骤（3）中的混合物中加入2μL100μM的PEG1000，反应12h。反应后的溶液在8000rpm离心10min，弃上清，后用50μL的超纯水分散沉淀，4℃保藏、待用。
（5）PCR组装
以λDNA为模板，采用制得的25nm金纳米粒子-F-Primer及10nm金纳米粒子-R-Primer进行PCR。PCR反应体系：dNTPs1μL（购自上海生工），0.5μL的TaqDNA聚合酶（购自上海生工），λDNA模板质粒0.5μL（购自宝成生物工程有限公司），PCR反应缓冲液5μL（购自上海生工），分别取25nm金纳米粒子-F-Primer4μL和10nm金纳米粒子-R-Primer4μL，加灭菌水至总体积为50μL；
扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，2～20个循环；72℃再延伸10min；10℃保存，得PCR产物。
取500μLPCR产物进行8000rpm离心10min，弃上清，后用100μL的超纯水分散沉淀，进行TEM和CD表征。
F-primer：5’-SH-(CH2)6-TGGCTGACCCTGATGAGTTCG-3’，
R-primer：5’-SH-(CH2)6-GGGCCATGATTACGCCAGTT-3’。
Claims (5)
1.一种基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法，其特征在于包括大金纳米粒子和小金纳米粒子的合成，其表面的引物修饰，金纳米粒子-引物偶联物的稳定，不同长度的链状可控组装，组装产物的手性性质表征；
具体步骤：
（1）25nm金纳米粒子合成
采用柠檬酸三钠还原氯金酸合成25nm金纳米粒子；
（2）10nm金纳米粒子合成
采用单宁酸还原氯金酸合成10nm金纳米粒子；
（3）金纳米粒子和引物的偶联
将新合成的25nm金纳米粒子和巯基修饰的上游引物F-primer偶联，新合成的10nm金纳米粒子和巯基修饰的下游引物R-primer偶联，分别形成金纳米粒子-引物偶联物；
F-primer：5’-SH-(CH2)6-TGGCTGACCCTGATGAGTTCG-3’，扩增长度为50bp；
R-primer：5’-SH-(CH2)6-GGGCCATGATTACGCCAGTT-3’，扩增长度为50bp；
（ⅰ）将步骤（1）中制备好的1mL2nM25nm金纳米粒子及步骤（2）中制备好的1mL10nM10nm金纳米粒子分别以7000rpm、13000rpm离心10min，弃上清，分别重悬在100μL的超纯水中，4℃保藏、待用；
（ⅱ）25nm金纳米粒子和上游引物F-primer偶联：取（ⅰ）制备好的50μL25nm金纳米粒子加入50μL200nM的F-primer，混匀，室温反应12h；
（ⅲ）10nm金纳米粒子和下游引物R-primer偶联：取（ⅰ）制备好的50μL10nm金纳米粒子加入50μL1μM的R-primer，混匀，室温反应12h；
（ⅳ）将上述（ⅱ）和（ⅲ）步骤中反应溶液分别在7000rpm、13000rpm离心10min，弃上清，后用50μL的超纯水分散沉淀，4℃保藏、待用；
（4）金纳米粒子-引物偶联物的稳定
将金纳米粒子-引物偶联物和巯基修饰的聚乙二醇PEG1000反应，以稳定金纳米粒子；
（5）链状可控组装
以λDNA为模板，通过优化PCR扩增条件，将金纳米粒子-引物偶联物在PCR体系中进行不同循环数下的可控组装，离心浓缩，得组装产物；
（6）组装产物的TEM和手性性质表征
组装产物进行TEM和CD表征。
2.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法，其特征在于不同粒径金纳米粒子合成：
25nm金纳米粒子合成：将47.5mL的超纯水加入到洁净的三角烧瓶中，搅拌条件下加入2.5mL的浓度为2g/L的氯金酸，加热搅拌，达沸腾，紧接着加入0.9mL1%的柠檬酸三钠溶液，边加热边搅拌，溶液颜色从淡紫色变成红色，反应持续6-8min以使柠檬酸三钠完全沉降；溶液冷却至4℃保藏，即制得粒径为25nm的金纳米粒子；
10nm金纳米粒子合成：配制1mL1%的氯金酸于79mL的超纯水中，混合均匀即为A溶液；将4mL1%柠檬酸三钠溶液、0.1mL1%的单宁酸溶液和0.1mL浓度为25mM的碳酸钾混于15.8mL的超纯水中，即为B溶液；将A和B溶液分别加热到60℃，在高速搅拌下把B溶液迅速加到A溶液中，反应液在60℃下继续搅拌反应，然后溶液加热回流2min，形成亮红色的溶液，最终冷却至室温合成粒径在10nm的金纳米粒子。
3.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法，其特征在于金纳米粒子-引物偶联物的稳定：
将步骤（3）所得的金纳米粒子-引物偶联物中加入2μL100μM的PEG1000，室温反应12h，反应后的溶液在8000rpm离心10min，弃上清，后用50μL的超纯水分散沉淀，4℃保藏、待用。
4.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法，其特征在于链状可控组装：
（a）PCR：以λDNA为模板，采用制得的25nm金纳米粒子-F-Primer及10nm金纳米粒子-R-Primer进行PCR，PCR反应体系：dNTPs1μL，TaqDNA聚合酶0.5μL，λDNA模板质粒0.5μL，PCR反应缓冲液5μL，分别取25nm金纳米粒子-F-Primer4μL和10nm金纳米粒子-R-Primer4μL，加灭菌水至总体积为50μL；
（b）扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，2～20个循环；72℃再延伸10min；10℃保存，得PCR可控组装产物。
5.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法，其特征在于组装产物的TEM和手性性质表征：
取500μLPCR产物进行8000rpm离心10min，弃上清，沉淀用100μL的超纯水分散，进行TEM和CD表征。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310080609.XA CN103212706B (zh) | 2013-03-13 | 2013-03-13 | 基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310080609.XA CN103212706B (zh) | 2013-03-13 | 2013-03-13 | 基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103212706A CN103212706A (zh) | 2013-07-24 |
| CN103212706B true CN103212706B (zh) | 2016-03-23 |
Family
ID=48811043
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310080609.XA Active CN103212706B (zh) | 2013-03-13 | 2013-03-13 | 基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103212706B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104014785B (zh) * | 2014-06-10 | 2016-03-23 | 江南大学 | 一种基于聚合酶链反应的磁性纳米手性组装体的制备方法 |
| CN104985176A (zh) * | 2015-06-11 | 2015-10-21 | 江南大学 | 一种具有可调控手性信号的银包金纳米棒二聚体的制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1723290A (zh) * | 2003-02-14 | 2006-01-18 | 英特尔公司 | 通过滚环扩增和sers检测进行的生物分子分析 |
| CN101368198A (zh) * | 2008-09-24 | 2009-02-18 | 江南大学 | 一种纳米金和λDNA链连接的自组装材料的制备方法 |
| CN102127541A (zh) * | 2010-12-25 | 2011-07-20 | 江南大学 | 一种基于聚合酶链反应的金纳米棒可控自组装方法 |
| CN102127445A (zh) * | 2010-12-23 | 2011-07-20 | 江南大学 | 一种具有手性信号的自组装纳米材料的制备方法 |
| CN102259834A (zh) * | 2011-06-27 | 2011-11-30 | 江南大学 | 一种具有手性信号的不对称四面体组装结构的制备方法 |
| CN102382817A (zh) * | 2011-09-15 | 2012-03-21 | 王利兵 | 基于聚合酶链反应进行手性金二聚体的可控组装方法 |
-
2013
- 2013-03-13 CN CN201310080609.XA patent/CN103212706B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1723290A (zh) * | 2003-02-14 | 2006-01-18 | 英特尔公司 | 通过滚环扩增和sers检测进行的生物分子分析 |
| CN101368198A (zh) * | 2008-09-24 | 2009-02-18 | 江南大学 | 一种纳米金和λDNA链连接的自组装材料的制备方法 |
| CN102127445A (zh) * | 2010-12-23 | 2011-07-20 | 江南大学 | 一种具有手性信号的自组装纳米材料的制备方法 |
| CN102127541A (zh) * | 2010-12-25 | 2011-07-20 | 江南大学 | 一种基于聚合酶链反应的金纳米棒可控自组装方法 |
| CN102259834A (zh) * | 2011-06-27 | 2011-11-30 | 江南大学 | 一种具有手性信号的不对称四面体组装结构的制备方法 |
| CN102382817A (zh) * | 2011-09-15 | 2012-03-21 | 王利兵 | 基于聚合酶链反应进行手性金二聚体的可控组装方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Rapid DNA detection by interface PCR on nanoparticles;Hua Kuang et al.,;《Biosensors and Bioelectronicsitm》;20101031;第26卷;2495－2499 * |
| Ultrasensitive detection of melamine based on a DNA-labeled immunosensor;Honghong Yin et al.,;《Biosensors and Bioelectronics》;20101105;第42卷;51－55 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103212706A (zh) | 2013-07-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102382817B (zh) | 基于聚合酶链反应进行手性金二聚体的可控组装方法 | |
| CN103212705B (zh) | 基于聚合酶链反应的金-金核壳结构二聚体的手性研究的方法 | |
| CN104308182B (zh) | 一种具有fret效应的金纳米粒子二聚体的组装方法 | |
| CN102886528B (zh) | 一种基于聚合酶链式反应的具有旋光特征的金纳米棒自组装材料制备方法 | |
| WO2007050715A3 (en) | Compositions and methods for safe delivery of biologically-active plant transformation agents using non-fibrous silicon carbide powder | |
| Am Hong et al. | Self-assembled DNA nanostructures prepared by rolling circle amplification for the delivery of siRNA conjugates | |
| CN102367589A (zh) | 一种二元金纳米粒子Janus组装体的制备方法 | |
| CN102127541B (zh) | 一种基于聚合酶链反应的金纳米棒可控自组装方法 | |
| CN110404081B (zh) | 一种DNA四面体和microRNA的纳米复合物 | |
| CN101368198A (zh) | 一种纳米金和λDNA链连接的自组装材料的制备方法 | |
| CN101987364A (zh) | 一种高稳定性和功能化的金纳米粒子的制备方法 | |
| CN103212706B (zh) | 基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法 | |
| CN106729710B (zh) | 一种热化疗一体化纳米颗粒及制备和应用 | |
| CN104070177A (zh) | 一种简单新颖的银、金纳米粒子的制备方法 | |
| CN104558321A (zh) | 硫醇-烯点击化学法制备poss／聚甲基丙烯酸二甲氨基乙酯有机／无机杂化材料的方法 | |
| US8557568B2 (en) | Method and apparatus for disrupting cells and amplifying nucleic acids using gold nanorods | |
| CN103212707B (zh) | 基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物拉曼性质研究的方法 | |
| CN105366730A (zh) | 一种使用dna纳米结构对疏水性纳米粒子相转换的方法 | |
| CN102382815B (zh) | 一种二元等离子纳米粒子位点特异性自组装的方法 | |
| CN102825261A (zh) | 一种二元等离子纳米粒子位点特异性自组装的方法 | |
| CN106434624A (zh) | 一种可控的dna树状分子组装的金纳米颗粒及其制备方法和应用 | |
| CN103212704B (zh) | 基于聚合酶链反应的金-银核壳结构二聚体的手性研究的方法 | |
| Rego et al. | Biologically inspired strategy for programmed assembly of viral building blocks with controlled dimensions | |
| CN103192089B (zh) | 基于聚合酶链反应的大小金二聚体-金核壳结构组装产物手性研究的方法 | |
| CN108310391A (zh) | 一种核酸蛋白纳米复合物及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: 214016 Jiangsu city of Wuxi Province District Liangxi No. 898 South Road 7 layer beam Creek area of food science and Technology Park Patentee after: Jiangnan University Address before: Lihu Avenue Binhu District 214122 Jiangsu city of Wuxi province Jiangnan University No. 1800 Patentee before: Jiangnan University |
|
| CP02 | Change in the address of a patent holder |