CN103205374A - 一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素b1的乳酸菌及其应用 - Google Patents

一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素b1的乳酸菌及其应用 Download PDF

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Abstract

一株在发酵饲料中抑制霉菌生长、降低黄曲霉毒素B1含量，改善发酵饲料品质的乳酸菌及其应用。技术方案是：所述乳酸菌为植物乳杆菌M-9（Lactobacillus plantarum M-9）已于2012年10月29日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号：CGMCC No.6740。本发明还公开了该乳酸菌的制备和使用方法。

Description

一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1的乳酸菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株发酵饲料用乳酸菌，具体是一株可抑制发酵饲料中霉菌生长、降低黄曲霉毒素含量、改善发酵饲料品质的降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1的乳酸菌及其应用。
背景技术
黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是一类结构和理化性质相似的真菌次级代谢物，分别为B1、B2、G1、G2、M1和M2等，在所有黄曲霉毒素中，B1的毒性最强且化学性质最稳定，它具有很强的致癌性、致突变性和致畸形，是国际上认可的A类致癌物。黄曲霉毒素在作物生长过程、饲料加工、贮藏及运输过程中皆可产生。饲料发霉及由此产生的毒素中毒是世界范围内普遍存在的问题，实验证明，动物摄入AFB1后，在肝、肾、肌肉、血、乳汁以及鸡蛋中可检测到黄曲霉毒素B1及其代谢产物，从而造成动物性食品的污染，威胁人类健康。因此掌握黄曲霉毒素的防治措施，对保障粮油食品质量安全和确保动物性食品安全尤为重要。目前，生物去除黄曲霉毒素由于效率高、无毒副作用越来越受到关注。
乳酸菌是近年来正在推广的微生物添加剂，一些研究表明乳酸菌的代谢产物乳酸、醋酸、苯乳酸、丙酸和蛋白类等物质具有抑制黄曲霉生长和产毒素的能力，乳酸菌在生长过程中形成的代谢物可以抑制毒素合成或将毒素转化成无毒性的物质，乳酸菌还可通过细胞壁成分吸附黄曲霉毒素，达到去除真菌毒素的目的。因此乳酸菌在降低饲料中的黄曲霉毒素具有广阔的发展前景。
本发明针对上述课题，从分离于自然发酵饲料的130株植物乳杆菌中，筛选出一株具有抑制霉菌、降低黄曲霉毒素、改善发酵饲料品质的植物乳杆菌M-9（Lactobacillus plantarum M-9）。
发明内容
本发明的目的在于提供一株能够抑制发酵饲料中霉菌生长、降低黄曲霉毒素含量、改善发酵饲料品质的降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1的乳酸菌及其应用。
本发明的技术方案是：
一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1的乳酸菌，其特征在于：所述乳酸菌为植物乳杆菌M-9（Lactobacillus plantarum M-9），从130株植物乳杆菌中筛选出，具有降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1含量的特性；已于2012年10月29日，在地址为中国北京市朝阳区大屯路，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.6740。
所述植物乳杆菌在发酵饲料中的应用，具体制备方法如下：
植物乳杆菌的活化和培养，其特征在于：将冷冻保存的Lactobacillusplantarum M-9接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养18-22h，如此传代培养2-3次得到所述的活化Lactobacillus plantarum M-9菌种；所述的MRS液体培养基组成如下：10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、1mL吐温80、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰加入1000mL蒸馏水，调节pH至6.5，121℃灭菌15min。
菌粉制备：将上述活化的菌种离心后，添加菌种保护剂冻干成菌粉，使其含Lactobacillus plantarum M-9活菌数在2.0×1011cfu/g。
植物乳杆菌在发酵饲料中的使用方法：向饲料原料中加入煮沸并冷却至室温的自来水，使饲料含水量达到40%。以接种量2×106cfu/g向全价饲料中接种Lactobacillus plantarum M-9菌粉，充分混匀。准确称取50g饲料原料于真空包装袋中，将包装袋压实以尽量排空空气，用封口机将包装袋封口，常温发酵。
发酵饲料的品质检测：全价饲料在恒温发酵期间，在0d，1d,2d，3d，4d和5d分别进行取样测定霉菌的活菌数和黄曲霉毒素B1等。
本发明提供的植物乳杆菌具有下述的积极效果：
本发明Lactobacillus plantarum M-9在发酵饲料中具有抑制霉菌生长的特性。
本发明Lactobacillus plantarum M-9添加到发酵饲料中可以降低饲料中黄曲霉毒素B1的含量、提高发酵饲料的品质。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明；下述实施例只是说明性的，并不限制本发明的保护范围。
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。
一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1的乳酸菌，所述乳酸菌为植物乳杆菌M-9（Lactobacillus plantarum M-9），从130株植物乳杆菌中筛选出，具有降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1含量的特性；已于2012年10月29日，在地址为中国北京市朝阳区大屯路，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.6740。
所述植物乳杆菌在发酵饲料中的应用，具体制备方法如下：
植物乳杆菌的活化和培养，其特征在于：将冷冻保存的Lactobacillusplantarum M-9接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养18-22h，如此传代培养2-3次得到所述的活化Lactobacillus plantarum M-9菌种；所述的MRS液体培养基组成如下：10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、1mL吐温80、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰加入1000mL蒸馏水，调节pH至6.5，121℃灭菌15min。
菌粉制备：将上述活化的菌种离心后，添加菌种保护剂冻干成菌粉，使其含Lactobacillus plantarum M-9活菌数在2.0×1011cfu/g。
植物乳杆菌在发酵饲料中的使用方法：向饲料原料中加入煮沸并冷却至室温的自来水，使饲料含水量达到40%。以接种量2×106cfu/g向全价饲料中接种Lactobacillus plantarum M-9菌粉，充分混匀。准确称取50g饲料原料于真空包装袋中，将包装袋压实以尽量排空空气，用封口机将包装袋封口，常温发酵。
实验1：Lactobacillus plantarum M-9在发酵豆粕饲料中抑制霉菌的特性
将活化的菌种离心后，添加保护剂冻干成菌粉，以接种量2×106cfu/g向含水量为40%豆粕饲料中接种Lactobacillus plantarum M-9菌粉，充分混匀。准确称取50g全价饲料于真空包装袋中，将包装袋压实以尽量排空空气，用封口机将包装袋封口，常温发酵。全价饲料在恒温发酵期间，分别在0d，1d，2d，3d，4d和5d进行取样，准确称取10g发酵饲料样品于装有玻璃珠的250mL灭菌三角瓶中，加入90g灭菌蒸馏水，置于摇床上160r/min摇动15min，取0.5mL稀释液用0.85%（w/v）灭菌生理盐水梯度稀释至适当倍数时，选取100μL稀释液涂布于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（Potato Dextrose Agar），30℃恒温培养箱中厌氧培养48h后，对霉菌进行计数。发酵豆粕样品在发酵过程中的霉菌动态变化见表1。
表1发酵豆粕样品在发酵过程中的霉菌的活菌数变化
注：同行肩标不同小写字母表示差异显著（P<0.05）
发酵豆粕中霉菌的动态变化如表1所示，在发酵初期，由于发酵温度适宜，豆粕中pH较高，发酵环境中含有少量的氧气，导致霉菌有一定程度的增殖。随着豆粕中pH的降低及环境中氧气的消耗，霉菌生长受到限制，发酵结束时，实验组中的霉菌活菌数降至1.10log CFU/g，而空白对照组为3.51log CFU/g。实验结果表明，添加Lactobacillus plantarum M-9可以有效的抑制霉菌的生长。
实验2：Lactobacillus plantarum M-9降低发酵豆粕饲料中黄曲霉毒素B1的含量
将活化的菌种离心后，添加保护剂冻干成菌粉，以接种量2×106cfu/g向含水量为40%豆粕饲料中接种Lactobacillus plantarum M-9菌粉，充分混匀。准确称取50g豆粕饲料于真空包装袋中，将包装袋压实以尽量排空空气，用封口机将包装袋封口，常温发酵。豆粕饲料在恒温发酵期间，分别在0d，1d，2d，3d，4d和5d进行取样，从密封袋中准确称取适量豆粕饲料置于65℃烘箱中风干至恒重，并将其粉碎后，称取1g左右采用酶联免疫测试盒来测定黄曲霉毒素B1的含量。发酵豆粕样品在发酵期间黄曲霉毒素B1含量的变化见表2。
表2发酵豆粕样品在发酵期间黄曲霉毒素B1含量的变化
Figure BDA00002923397700051
注：同行肩标不同小写字母表示差异显著（P<0.05）
由实验结果可知，同对照组相比，添加乳酸菌的豆粕在发酵期间AFB1含量降低，在发酵结束时，实验组中的AFB1为0.27μg/kg，AFB1含量分别减少了93.57%，结果表明，在豆粕添加乳酸菌能显著降低豆粕中AFB1的含量，从而提高豆粕的饲用安全性。

Claims (4)

1.一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1的乳酸菌，其特征在于：所述乳酸菌为植物乳杆菌M-9（Lactobacillus plantarum M-9），从130株植物乳杆菌中筛选出，具有降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1含量的特性；该菌菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.6740，保藏日期为2012年10月29日。
2.一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1的乳酸菌的活化和培养，其特征在于：将冷冻保存的Lactobacillus plantarum M-9接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养18-22h，如此传代培养2-3次得到所述的活化Lactobacillusplantarum M-9菌种；所述的MRS液体培养基组成如下：10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、1mL吐温80、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰加入1000mL蒸馏水，调节pH至6.5，121℃灭菌15min。。
3.一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1的乳酸菌菌粉的制备，其特征在于：将活化的菌种离心后，加入菌种保护剂冻成干粉，使其含乳酸菌活菌数在2.0×1011cfu/g。
4.一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素B1的乳酸菌的使用方法，其特征在于：向混合均匀的饲料中加入煮沸并冷却至室温的自来水，使饲料含水量达到40%。以接种量2×106cfu/g向饲料中接种Lactobacillus plantarum M-9菌粉，充分混匀。准确称取50g全价饲料于真空包装袋中，将包装袋压实以尽量排空空气，用封口机将包装袋封口，常温发酵。
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