CN103168618A - 一种富集sod的灵芝产品及其生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种富含SOD的灵芝产品及其生产方法。本发明通过在灵芝的培养基中添加甘氨酸铜、葡萄糖酸铜、甘氨酸锌、柠檬酸锌，再经合适的培养方法使得培育出的灵芝子实体SOD含量大大高于普通栽培灵芝的子实体SOD含量（18IU/mg），达到30IU/mg以上，从而获得了富含SOD的灵芝产品，为进一步开发和利用灵芝创造了条件。

Description

一种富集SOD的灵芝产品及其生产方法

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一种富集SOD的灵芝产品及其生产方法。

背景技术：

超氧化物歧化酶(SOD)是一种广泛分布于动植物、微生物体内专一清除超氧阴离子自由基的金属酶，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。SOD在预防氧中毒，抗辐射损伤以及抗衰老等方面起着重要的作用。SOD目前世界范围内的开发，大都从动物血里提取，不但代价昂贵，而且动物性SOD的排他性、不易常温保存、艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在危险，所以国际卫生组织呼吁：立刻停止动物性SOD的使用。SOD是中国卫生部批准的具有抗衰老、免疫调节、调节血脂、抗辐射、美容功能的物质之一，法定编号为ECl.15.1.1；CAS[905489]。

灵芝为我国名贵中药材。在中药书籍中记载其“味甘、性温，可补心、肝、脾、肺五脏之气，具有滋补强壮、扶正固本之功效”。现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效，还具有止痛、镇静、抑制组织胺释放、解毒、保肝、毒杀肿瘤细胞等功效，对人体无副作用。灵芝的生物活性成分也十分丰富，目前已分离到150余种活性成分，有多糖类、核苷类、生物碱类、三萜类、矿质元素、氨基酸蛋白质类和酶等。近年来，灵芝的开发利用越来越受到人们的重视，灵芝市场不断地增长。

发明内容：

本发明的目的是提供一种富含SOD的灵芝产品及其生产方法。

本发明的富含SOD的灵芝产品是通过以下方法制备的，该方法包括以下步骤：

a、将灵芝(Ganoderma lucidum)麦粒种接种到富集SOD灵芝栽培培养基中，接种量为富集SOD灵芝栽培培养基质量的5~15%，于温度22~35℃，相对湿度50%~85%下培菌房中培菌，暗培养40~60d，至菌丝充满培养基，再将温度调至10~15℃培养3~5d至长出原基，所述的富集SOD灵芝栽培培养基是由栽培基料和铜锌溶液按质量比1∶1.1~1.4组成，所述的栽培基料，按总质量分数100%计，包括玉米芯30%~50%，木屑20%~40%，麸皮或米糠20%~30%，蔗糖1%~5%和石膏粉1%~3%；所述的铜锌溶液是在每25L水中加有甘氨酸铜1~3g、葡萄糖酸铜1~3g、甘氨酸锌2~5g和柠檬酸锌1~3g；

b、原基于温度20~35℃、相对湿度75%~90%、光照强度100~1000lux下培育，每天通风1~2次，每次0.5~1h，至原基分化长出子实体，再保持湿度85%~98%，每天通风2~3次，每次0.5~1h，逐渐分化为菌盖后，光照强度增强到1000~2000lux、温度20~35℃，全天通风，促进灵芝生长至菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大光照强度到2000~5000lux，继续培养5~10d，菌盖颜色进一步加深，得到富集SOD的灵芝子实体，即为富含SOD的灵芝产品。

所述的灵芝麦粒种可以通过以下方法制备：

（1）灵芝母种的制备：采集新鲜灵芝的子实体进行组织分离，按培养基质量2%~5%接种量接种到斜面PDA培养基，于温度22~25℃、湿度50%~75%下培养10~30d，至菌丝长满斜面，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株再次接种到斜面PDA培养基，重复上述步骤3次，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株作为灵芝母种；

（2）灵芝麦粒种的制备：用PDA斜面培养基复活灵芝母种，灵芝母种复活培养10d后菌丝长满斜面，将含有气生菌丝的斜面接入麦粒种培养基，于25℃培养10d，每隔3~4d摇动一次培养容器，以促使菌丝加快生长与防止结块，经15d长结实后检查菌种有无污染，无污染就得到灵芝麦粒种，所述麦粒种培养基由麦粒96%，石膏2%，麸皮2%组成，pH自然，121℃高压灭菌30min。

本发明人发现灵芝能够吸收培养基中的铜、锌等金属元素，利用这个特点，通过在灵芝的培养基中添加甘氨酸铜、葡萄糖酸铜、甘氨酸锌、柠檬酸锌，为灵芝提供了在生长过程中转化合成SOD必需的物质基础，再经合适的培养方法使得培育出的灵芝子实体SOD含量大大高于普通栽培灵芝的子实体SOD含量（18IU/mg），达到30IU/mg以上，从而获得了富含SOD的灵芝产品，为进一步开发和利用灵芝创造了条件。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

以下实施例中的麦粒、石膏、麸皮购自广东省林中宝食用菌有限公司。甘氨酸铜、甘氨酸锌购自武汉市福德精细化工有限公司，葡萄糖酸铜、柠檬酸锌购自上海研拓生物科技有限公司。玉米芯、木屑、麸皮、米糠、蔗糖、石膏粉购自广东省林中宝食用菌有限公司。

实施例1

1、灵芝母种的制备：采集新鲜灵芝(Ganoderma lucidum)的子实体进行组织分离，按培养基质量2%的接种量接种到斜面PDA培养基，于温度22℃、湿度50%时培养25d，至菌丝长满斜面，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株再次接种到斜面PDA培养基，重复上述步骤3次，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株作为灵芝母种。

2、灵芝麦粒种的制备：按照总质量分数100%计，将麦粒96%，石膏2%，麸皮2%，混合搅拌均匀，pH自然，121℃高压灭菌30min，得到麦粒种培养基。将灵芝母种菌株接种于用PDA斜面培养基上于温度22℃、湿度50%时复活培养，复活培养10d后菌丝长满试管斜面，选气生菌丝少的斜面接入三角瓶装麦粒种培养基，25℃，培养10d，菌丝能长满三角瓶，在菌丝长满培养基表面后应隔3-4d摇动一次瓶子，以促使菌丝加快生长与防止结块，约经15d长结实，检查菌种有无污染杂菌，无污染杂菌的，即为灵芝麦粒种用于下述步骤中。

3、铜锌溶液的制备：称取甘氨酸铜1g、葡萄糖酸铜1g、甘氨酸锌2g、柠檬酸锌1.5g，溶解于25L水中，得到铜锌溶液。

4、富集SOD灵芝栽培培养基的制备，其由栽培基料和铜锌溶液按质量比1∶1.1混合搅拌均匀而成。所述的栽培基料按总质量分数100%计，将玉米芯30%，木屑40%，米糠22%，蔗糖5%和石膏粉3%混合搅拌均匀得到栽培基料。

5、接种：将步骤(2)得到的灵芝麦粒种接种至步骤(4)的富集SOD灵芝栽培培养基中，接种量为富集SOD灵芝栽培培养基质量的10%，于温度25℃，相对湿度75%的培菌房中培菌，暗培养45d，至菌丝充满培养基。

6、培养：将步骤(5)获得的长满菌丝的培养基，在12℃培养5d至出现白色状高1cm的原基，原基在温度25℃，相对湿度85%，光照强度500lux下培育，每天通风1~2次，每次0.5~1h，至原基分化长出子实体（菌柄），然后保持湿度85%~98%，每天通风2~3次，每次0.5~1h，逐渐分化为菌盖后，室内光照强度增强到1600lux，温度25℃，全天通风，促进灵芝生长使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到4000lux，继续培养8d，菌盖颜色进一步加深，则得到富集SOD的灵芝子实体，即为富含SOD的灵芝产品，子实体中SOD的含量为30IU/mg。

实施例2

1、灵芝母种的制备：采集新鲜灵芝(Ganoderma lucidum)的子实体进行组织分离，按培养基质量5%接种量接种到斜面PDA培养基，于温度24℃、湿度60%时培养18d，至菌丝长满斜面，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株再次接种到斜面PDA培养基，重复上述步骤3次，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株作为灵芝母种。

2、灵芝麦粒种的制备：按照总质量分数100%计，将麦粒96%，石膏2%，麸皮2%，混合搅拌均匀，pH自然，121℃高压灭菌30min，得到麦粒种培养基。将灵芝母种菌株接种于用PDA斜面培养基上于温度22℃、湿度50%时复活培养，复活培养10d后菌丝长满试管斜面，选气生菌丝少的斜面接入三角瓶装麦粒种培养基。25℃，培养10d，菌丝能长满三角瓶，在菌丝长满培养基表面后应隔3-4d摇动一次瓶子，以促使菌丝加快生长与防止结块。约经15d长结实，检查菌种有无污染杂菌，无污染杂菌的，即为灵芝麦粒种，用于下述步骤中。

3、铜锌溶液的制备：称取甘氨酸铜2g、葡萄糖酸铜2g、甘氨酸锌3g、柠檬酸锌1g，溶解于25L水中，得到铜锌溶液。

4、富集SOD灵芝栽培培养基的制备，其由栽培基料和铜锌溶液按质量比1∶1.4混合搅拌均匀而成。所述的栽培基料按总质量分数100%计，将玉米芯50%，木屑20%，麸皮25%，蔗糖3%和石膏粉2%混合搅拌均匀得到栽培基料。

5、接种：将步骤(2)得到的灵芝麦粒种接种至步骤(4)的富集SOD灵芝栽培培养基中，接种量为富集SOD灵芝栽培培养基质量的10%，于温度28℃，相对湿度70%的培菌房中培菌，暗培养50d，至菌丝充满培养基。

6、培养：将步骤(5)获得的长满菌丝的培养基，在12℃培养5d直至出现白色状高1cm的原基，原基在温度28℃，相对湿度85%，光照强度800lux下培育，每天通风1~2次，每次0.5~1h，至原基分化长出子实体（菌柄），再保持湿度85%~98%，每天通风2~3次，每次0.5~1h，逐渐分化为菌盖后，室内光照强度增强到1600lux，温度28℃，全天通风，促进灵芝生长使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到3800lux，继续培养8d，菌盖颜色进一步加深，则得到富集SOD的灵芝子实体，即为富含SOD的灵芝产品，子实体中SOD的含量为34IU/mg。

实施例3

1、灵芝母种的制备：采集新鲜灵芝(Ganoderma lucidum)的子实体进行组织分离，按培养基质量5%接种量接种到斜面PDA培养基，于温度25℃、湿度75%时培养10d，至菌丝长满斜面，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株再次接种到斜面PDA培养基，重复上述步骤3次，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株作为灵芝母种。

2、灵芝麦粒种的制备：按照总质量分数100%计，将麦粒96%，石膏2%，麸皮2%，混合搅拌均匀，pH自然，121℃高压灭菌30min，得到麦粒种培养基。将灵芝母种菌株接种于用PDA斜面培养基上于温度22℃、湿度50%时复活培养，复活培养10d后菌丝长满试管斜面，选气生菌丝少的斜面接入三角瓶装麦粒种培养基。25℃，培养10d，菌丝能长满三角瓶，在菌丝长满培养基表面后应隔3-4d摇动一次瓶子，以促使菌丝加快生长与防止结块。约经15d长结实，检查菌种有无污染杂菌，无污染杂菌的，即为灵芝麦粒种，用于下述步骤中。

3、铜锌溶液的制备：称取甘氨酸铜3g、葡萄糖酸铜3g、甘氨酸锌5g、柠檬酸锌3g，溶解于25L水中，得到铜锌溶液。

4、富集SOD灵芝栽培培养基的制备，其由栽培基料和铜锌溶液按质量比1∶1.2混合搅拌均匀而成。所述的栽培基料按总质量分数100%计，将玉米芯48%，木屑20%，麸皮30%，蔗糖1%和石膏粉1%混合搅拌均匀得到栽培基料。

5、接种：将步骤(2)得到的灵芝麦粒种接种至步骤(4)的富集SOD灵芝栽培培养基中，接种量为富集SOD灵芝栽培培养基质量的5%，于温度22℃，相对湿度50%的培菌房中培菌，暗培养60d，至菌丝充满培养基。

6、培养：将步骤(5)获得的长满菌丝的培养基，在10℃培养3d直至出现白色状高1cm的原基，原基在温度35℃，相对湿度75%，光照强度100lux下培育，每天通风1~2次，每次0.5~1h，至原基分化长出子实体（菌柄），再保持湿度85%~98%，每天通风2~3次，每次0.5~1h，逐渐分化为菌盖后，室内光照强度增强到1000lux，温度35℃，全天通风，促进灵芝生长使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到2000lux，继续培养10d，菌盖颜色进一步加深，则得到富集SOD的灵芝子实体，即为富含SOD的灵芝产品，子实体中SOD的含量为40IU/mg。

实施例4

1、灵芝母种的制备：采集新鲜灵芝(Ganoderma lucidum)的子实体进行组织分离，按培养基质量5%接种量接种到斜面PDA培养基，于温度24℃、湿度60%时培养30d，至菌丝长满斜面，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株再次接种到斜面PDA培养基，重复上述步骤3次，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株作为灵芝母种。

2、灵芝麦粒种的制备：按照总质量分数100%计，将麦粒96%，石膏2%，麸皮2%，混合搅拌均匀，pH自然，121℃高压灭菌30min，得到麦粒种培养基。将灵芝母种菌株接种于用PDA斜面培养基上于温度22℃、湿度50%时复活培养，复活培养10d后菌丝长满试管斜面，选气生菌丝少的斜面接入三角瓶装麦粒种培养基。25℃，培养10d，菌丝能长满三角瓶，在菌丝长满培养基表面后应隔3-4d摇动一次瓶子，以促使菌丝加快生长与防止结块。约经15d长结实，检查菌种有无污染杂菌，无污染杂菌的，即为灵芝麦粒种，用于下述步骤中。

3、铜锌溶液的制备：称取甘氨酸铜3g、葡萄糖酸铜3g、甘氨酸锌3g、柠檬酸锌1g，溶解于25L水中，得到铜锌溶液。

4、富集SOD灵芝栽培培养基的制备，其由栽培基料和铜锌溶液按质量比1∶1.3混合搅拌均匀而成。所述的栽培基料按总质量分数100%计，将玉米芯50%，木屑25%，麸皮20%，蔗糖3%和石膏粉2%混合搅拌均匀得到栽培基料。

5、接种：将步骤(2)得到的灵芝麦粒种接种至步骤(4)的富集SOD灵芝栽培培养基中，接种量为富集SOD灵芝栽培培养基质量的15%，于温度35℃，相对湿度85%的培菌房中培菌，暗培养40d，至菌丝充满培养基。

6、培养：将步骤(5)获得的长满菌丝的培养基，在15℃培养4d直至出现白色状高1cm的原基，原基在温度20℃，相对湿度90%，光照强度1000lux下培育，每天通风1~2次，每次0.5~1h，至原基分化长出子实体（菌柄），再保持湿度85%~98%，每天通风2~3次，每次0.5~1h，逐渐分化为菌盖后，室内光照强度增强到2000lux，温度20℃，全天通风，促进灵芝生长使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到5000lux，继续培养5d，菌盖颜色进一步加深，则得到富集SOD的灵芝子实体，即为富含SOD的灵芝产品，子实体中SOD的含量为36IU/mg。

Claims (3)

1.一种富含SOD的灵芝产品的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、将灵芝(Ganoderma lucidum)麦粒种接种到富集SOD灵芝栽培培养基中，接种量为富集SOD灵芝栽培培养基质量的5~15%，于温度22~35℃，相对湿度50%~85%下培菌房中培菌，暗培养40~60d，至菌丝充满培养基，再将温度调至10~15℃培养3~5d至长出原基，所述的富集SOD灵芝栽培培养基是由栽培基料和铜锌溶液按质量比1∶1.1~1.4组成，所述的栽培基料，按总质量分数100%计，包括玉米芯30%~50%，木屑20%~40%，麸皮或米糠20%~30%，蔗糖1%~5%和石膏粉1%~3%；所述的铜锌溶液是在每25L水中加有甘氨酸铜1~3g、葡萄糖酸铜1~3g、甘氨酸锌2~5g和柠檬酸锌1~3g；

b、原基于温度20~35℃、相对湿度75%~90%、光照强度100~1000lux下培育，每天通风1~2次，每次0.5~1h，至原基分化长出子实体，再保持湿度85%~98%，每天通风2~3次，每次0.5~1h，逐渐分化为菌盖后，光照强度增强到1000~2000lux、温度20~35℃，全天通风，促进灵芝生长至菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大光照强度到2000~5000lux，继续培养5~10d，菌盖颜色进一步加深，得到富集SOD的灵芝子实体，即为富含SOD的灵芝产品。

2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述的灵芝麦粒种是通过以下方法制备：

（1）灵芝母种的制备：采集新鲜灵芝的子实体进行组织分离，按培养基质量2%~5%接种量接种到斜面PDA培养基，于温度22~25℃、湿度50%~75%下培养10~30d，至菌丝长满斜面，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株再次接种到斜面PDA培养基，重复上述步骤3次，挑取生长旺盛、粗壮均一的菌株作为灵芝母种；

（2）灵芝麦粒种的制备：用PDA斜面培养基复活灵芝母种，灵芝母种复活培养10d后菌丝长满斜面，将含有气生菌丝的斜面接入麦粒种培养基，于25℃培养10d，每隔3~4d摇动一次培养容器，以促使菌丝加快生长与防止结块，经15d长结实后检查菌种有无污染，无污染就得到灵芝麦粒种，所述麦粒种培养基由麦粒96%，石膏2%，麸皮2%组成，pH自然，121℃高压灭菌30min。

3.一种按照权利要求1或2所述的生产方法生产得到的富含SOD的灵芝产品。