CN102177817A - 一种富含sod北虫草的培育方法 - Google Patents
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Abstract
一种富含SOD北虫草的培育方法,它是以在培养基营养液中添加甘氨酸铜、甘氨酸锌,为北虫草提供了在生长过程中转化合成SOD必需的物质基础,使培育出的北虫草子实体SOD比活可媲美野生北虫草,达到50u/mg以上。
Description
技术领域
本发明涉及一种富含SOD北虫草的培育方法。
背景技术
超氧化物歧化酶(SOD)是一种存在于生物体内专一清除超氧阴离子自由基的金属酶,SOD在防御氧中毒,抗辐射损伤及预防衰老等方面起着十分重要的作用。人体内的自由基能杀死侵入体内的病菌、微生物,有保护身体的作用。但这种自由基过多时,它就象攻击细菌一样攻击体内的正常细胞,使细胞受到损伤而被破坏,损伤细胞中的遗传因子DNA,从而引起过早衰老和一系列疾病。体内的SOD可以清除过多的自由基,但人到中年后体内产生的SOD逐渐减少,SOD活力下降,机体衰老。外源补充SOD对于预防疾病、延缓衰老具有显著的功效。
冬虫草是我国特有的中药瑰宝,为麦角菌科,虫草属。较有名的有两个种,一种是生长在青藏高原山地上的冬虫夏草,另一种是生长在东北地区的北虫草。两个种的化学成分及氨基酸、微量元素基本相同,都含有虫草特有的腺苷、虫草酸、虫草素、虫草多糖及超氧化物歧化酶(SOD)等多种不同类型的活性物,使虫草具有广泛而明显的食疗补益功效和多种药理作用。临床医学研究证明,冬虫草对支气管平滑肌有明显的扩张作用,能增进肾上腺素的作用,用于治疗慢性支气管炎阻塞性肺气肿,肺结核等,冬虫草能提高机体免疫功能,延缓衰老,抑制肿瘤细胞,并能改善化疗引起的不良反应。用于治疗神经衰弱等多种疑难疾病的综合治疗,用于手术后恢复体能更可表现出卓越的功效。
北虫草在野外生长过程吸收培养基中的铜、锌元素转化合成超氧化物歧化酶Cu,Zn-SOD。而人工培育北虫草的培养基中Cu,Zn元素含量甚微,现有培育北虫草的技术都没有在培养基中添加转化合成SOD必需的铜、锌盐类,培育出的北虫草子实体中的SOD比活不超过20u/mg。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种富含SOD北虫草的培育方法,该方法是采用在培养基中添加甘氨酸铜和甘氨酸锌,提供转化合成Cu,Zn-SOD必要的物质基础来实现,使培育出的北虫草子实体SOD比活达到50u/mg以上。
本发明包括如下步骤:
(1)甘氨酸铜锌溶液的制备
称取甘氨酸铜1克、甘氨酸锌1克溶解在1000毫升水中,备用;
(2)营养液的制备
称取葡萄糖10-30克,蛋白胨10-20克,磷酸二氢钾1-3克,甘氨酸铜、锌溶液2-10毫升,加入到适量热水中,搅拌溶解后补加热水至1000亳升;
(3)培养基的制备
用600毫升规格大口玻璃瓶作培育瓶,加入大米50克,营养液80亳升,用聚丙烯塑料膜封瓶口,移入高压灭菌锅,在126℃温度下灭菌30-60分钟,待气压降至常压时开锅,取出培养基自然冷却至室温;
(4)接种
将培养基移至超净操作台上,打开封瓶口塑料膜,迅速用接种喷枪喷入北虫草液体菌种3-5毫升,封好瓶口;
(5)培育
接种后的培养基移入发菌室,在黑暗中保持温度18-22℃,湿度50-65%发菌5-7天;经5-7天发菌后培养基表面长成一层白色菌丝,移到有散射光照的培育架上,在散射光照下3-5天,白色菌丝渐渐转成桔黄至桔红色。控制温度20-22℃湿度70-85%,7-10天后呈现米粒状的子实体原基,北虫草的培育即进入“出草”阶段;再经过30-40天培育,北虫草子实体长到6-12厘米高,出现桔红色孢子粉时子实体已成熟即可采收;采收后及时干燥,用塑料袋密封,放入20℃以下的干燥室内保存。
本发明在培养基的营养液中加入北虫草生长过程中转化SOD必需的铜、锌元素,为生物转化合成SOD提拱了物质基础,使培育出的北虫草子实体SOD比活可媲美野生北虫草,达到50u/mg以上。
具体实施方式
实施例1
(1)氨酸铜、锌液的制备:
称取甘氨酸铜1克,甘氨酸锌1克,溶解在1000毫升水中,备用;
(2)营养液的制备:
称取葡萄糖10克,蛋白胨10克,磷酸二氢钾1克,甘氨酸铜锌液4亳升,加入到适量热水中,搅拌溶解后加热水补足1000毫升;
(3)营养基的制备
取大米50克,营养液80毫升放入600毫升规格大口玻璃瓶中,用聚丙烯塑料膜封好瓶口放入高压灭菌锅内,在126℃温度下灭菌40分钟,待气压降至常压时开锅取出,自然冷却至室温;
(4)接种
将培育瓶移至超净台上,打开封瓶塑料膜,迅速用接种枪喷入北虫草液体菌种4毫升,立即封好瓶口。
(5)培育
①接种后的培育瓶移入暗室,在黑暗中保持温度18-20C湿度60-65%发菌5-7天;
②经5-7天发菌后培养基表面长成一层白色菌丝,移到有散射光照的培育架上,在散射光照下3-5天,白色菌丝渐渐转为桔黄至桔红色;控制温度20-22℃,湿度70-85%,7-8天后培养基表面呈现出米粒状子实体原基;再经过30-40天培育,控制温度22-24℃,湿度85-90%,北虫草子实体长到6-12厘米,出现桔红色孢子粉时,子实体已成熟,即可采收;采收后用50-60℃热风干燥用塑料袋密封,放阴凉干燥的室内保存。
在培养基营养液中添加甘氨酸铜、甘氨酸锌,培育出的北虫草SOD比活达到50u/mg。每瓶可得北虫草(鲜草)40-50克,转化率达80-90%。
Claims (1)
1.一种富含SOD北虫草的培育方法,其特征是包括如下步骤:
(1)氨酸铜锌溶液的制备
称取甘氨酸铜1克、甘氨酸锌1克溶解在1000毫升水中;
(2)培养基营养液的制备
葡萄糖10-30克,蛋白胨10-20克、磷酸二氢钾1-3克、甘氨酸铜锌溶液2-10毫升,加入到适量热水中,搅拌溶解后补加热水至1000毫升;
(3)培养基的制备
用600毫升规格大口玻璃瓶作培育瓶,加入大米50克、营养液80毫升、用聚丙烯塑料膜封瓶口,在高压灭菌锅内126℃温度下灭菌30-60分钟;
(4)接种
将培养基移至超净操作台上,打开封瓶口塑料膜,迅速用接种喷枪喷入北虫草液体菌种3-5毫升,封好瓶口;
(5)培育
接种后的培养基移入发菌室,在黑暗中保持温度18-22℃,湿度50-65%发菌5-7天;经5-7天发菌后培养基表面长成一层白色菌丝,移到有散射光照的培育架上,在散射光照下3-5天,白色菌丝渐渐转成桔黄至桔红色;控制温度20-22℃湿度70-85%,7-10天后呈现米粒状的子实体原基,北虫草的培育即进入“出草”阶段;再经过30-40天培育,北虫草子实体长到6-12厘米高,出现桔红色孢子粉时子实体已成熟即可采收;采收后及时干燥,用塑料袋密封,放入20℃以下的干燥室内保存。
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