CN103156805A - 乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了属于兽药制剂领域的乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物，它的组成成分及其重量体积比(g/mL)为：乳酸环丙沙星5～10％，泊洛沙姆407 20～26％，泊洛沙姆188 0.5～10％，乙二胺四乙酸二钠0.01～0.04％，抑菌剂0.009～0.03％，抗氧化剂0.1～0.2％，溶剂为醋酸-醋酸钠缓冲液。本发明还公开了其制备方法。本发明原位凝胶组合物在室温下为液体，胶凝温度和体温相近，因而给药方便，胶凝速度快；其次，胶凝强度和黏附作用好，可定位准确给药，减少药物损失；此外，本发明具有缓释和长效作用，用药量少，给药次数少，并且本发明没有一般使用植入剂带来的创伤，减少了患者痛苦。

Description

乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于兽用原位凝胶制剂领域，具体涉及一种乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物，以及该组合物的制备方法。

背景技术

乳酸环丙沙星(Ciprofloxacin Lactate，CPFL)，为环丙沙星(Ciprofloxacin)的乳酸盐，易溶于水，属于兽医临床应用的喹诺酮类药物中较强的广谱抗菌药。其具有抗菌谱广、杀菌力强、良好的药物动力学特点、不良反应发生率低、抗菌后效应(postantibiotic effect)时间较长、价格低廉、且无交叉耐药性等优点，而被广泛应用于医学和兽医临床。临床上广泛用于控制由敏感病原体引起的胃肠道感染、肺部感染、产科感染和局部感染等，而兽医临床上用于全身各系统的感染，对消化道、呼吸道、泌尿生殖道、皮肤软组织感染及支原体感染均有良效。目前，乳酸环丙沙星被广泛用于畜禽、水产及昆虫(如家蚕、蜜蜂等)的各类细菌性疾病防治。

乳酸环丙沙星的常用剂型为注射液，及片剂、胶囊剂、可溶性粉等口服制剂。但是，CPFL注射液及口服制剂存在半衰期短、连续用药疗程比较长，给药次数多等缺点。频繁给药不仅耗费人力和时间，而且会引起动物的应激反应。另外，常用口服制剂还存在首过效应大、生物利用度低等不足。当今集约化养殖业的飞速发展客观上也需要高效、缓释、经济和给药方便的兽用新制剂。目前兽医临床中缓释制剂所占比例还很小。因此，开发提高药物生物利用度高、减少给药次数的乳酸环丙沙星缓释制剂尤其是注射型缓释制剂就越来越受兽医临床的欢迎。

原位凝胶(in situ gel)，又称在体凝胶、在位凝胶、即型凝胶，是指含有药物的高分子材料以溶液给药后，在给药部位对外界刺激(用药部位的温度、pH值、离子种类和浓度或光照度等变化)发生响应，发生分散状态或构象的可逆转化，形成半固体或固体的新型制剂。原位凝胶具有凝胶制剂的亲水性三维网络结构及良好的组织相容性，同时，独特的溶液-凝胶转变性质使其兼有制备简单、使用方便、与用药部位特别是黏膜组织亲和力强、滞留时间长等优点，加之广泛的用途和良好的控、释药性能，原位凝胶给药系统已成为药剂学领域的一个研究热点。

原位凝胶的形成机制是利用高分子材料对外界刺激，如温度、pH、光照或离子强度等的响应而使聚合物在生理条件下发生胶凝。根据外界刺激因素的不同，将其分为离子敏感型、pH敏感型、光敏感型和温度敏感型等类型。相比之下，温敏型原位凝胶(thermosensitive in situ gel)在应用中比较方便，是一种仅随贮藏条件或用药部位的温度变化而发生相转变的原位凝胶。该系统在室温条件下为自由流动的液体，在靶组织、靶器官、靶腔道给药后，在给药部位因温度升高而快速形成凝胶，达到定向给药或延缓药物释放的目的。其在生理温度条件下形成凝胶，并在所需的时间内保持其完整性，而不需要有机溶剂、聚合交联试剂以及其他外在因素触发胶凝。

温敏性原位凝胶主辅料主要包括聚氧乙烯-聚氧丙稀嵌段共聚物[poly(ethylen oxide)-poly(propyleneoxide)-poly(ethylene oxide，PEO-PPO-PEO，泊洛沙姆或普郎尼克)、聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物如PEG-PLA嵌段共聚物，纤维素类衍生物如乙羟基乙基纤维素，聚乙二醇聚ε-己内酯多嵌段共聚物、多糖类衍生物等。其中，非离子表面活性剂普郎尼克(pluronic)为聚氧乙烯(PEO)和聚氧丙烯(PPO)组成的ABA型嵌段共聚物，是研究最深入的制备温度敏感型原位凝胶的高分子材料。尤其是普郎尼克F127(又称泊洛沙姆407，P407)在温敏型原位凝胶领域应用最为广泛。泊洛沙姆407由聚氧乙烯和聚氧丙烯以7∶3的比例构成，其一定浓度的水溶液具有特殊的反向热胶凝性质，即低温时为自由流动的液体，体温下成为凝胶。

泊洛沙姆原位凝胶较之传统给药剂型具有显著优点：(1)组织相容性好，使用方便，可减少给药频率，提高动物顺应性。(2)具有良好的胶凝强度和粘附能力，从而延长药物在给药部位的滞留时间(如眼部、鼻腔或直肠给药)，提高生物利用度，降低药物的毒副作用。此外，其经直肠给药还可以减少药物的首过效应。(3)具有良好的缓、控释作用。外释药实验表明，泊洛沙姆407即型凝胶的释药性质虽受多种因素影响，但都表现出良好的缓释性能。(4)水溶液在体外条件或是胶凝温度下为易流动的液体状态，使其易于灌装和分剂量又便于工业化生产。(5)注射给药后，可在注射部位胶凝形成半固体凝胶状的药物储库，组织定位性强，既能达到缓释效果又可提高靶向性；且较之普通植入剂，还可减少创伤。

正是因为原位凝胶具有可注射、创伤小、给药方便、延缓药物释放、与组织接触紧密、生产制备较为简单、生理相容性好、给药量易于控制和粘附性好等优点(魏培等.中国医药工业杂志，2007，38(12)：890-894。张翠霞等.中国医院药学杂志，2006，26(4)：459-461)，近年来已广泛应用于直肠、注射、眼部和鼻部给药系统。

专利申请《治疗奶牛乳房炎的原位凝胶缓释制剂的制备方法》(公开号为：CN101664381A)公开了一种盐酸环丙沙星温度敏感型原位凝胶缓释制剂，该发明药物以微囊形式分布于高分子材料溶液中，存在稳定性差，且制备无菌、重现性好的微囊所需工艺较为复杂、微球在注射部位有迁移的可能性等问题。

孙海燕等在《环丙沙星温度敏感原位凝胶的制备及质量控制》(孙海燕等.中国药房.2009.16)中报道了一种治疗妇科及皮肤黏膜疾病的环丙沙星温度敏感原位凝胶，该原位凝胶由乳酸环丙沙星、泊洛沙姆407(重量比为16％，重量体积比为19％)、甘露醇、苯扎溴铵及水组成。该组合物存在以下缺点。①组合物的胶凝温度为29℃，而夏天气温常达29℃，制剂在该温度环境未使用便已成为凝胶，需要给制剂降温才能使用，同时对贮存温度也有更高要求；②泊洛沙姆407的浓度较低，在使用部位的组织液或分泌液的稀释作用下，胶凝温度可能会明显提高甚至失去胶凝能力；③缺少金属离子络合剂，影响制剂质量，因为乳酸环丙沙星在适量重金属离子如Fe³⁺作用下容易使制剂颜色变黄(谭日建.中国医院药学杂志，2000，20(3)：175。何丽春.乳酸环丙沙星注射液制备的颜色控制.右江民族医学院学报.2001，(2)：275-276。陈永祯.华西药学杂志.1997，12(1)：34)，环丙沙星结构中的4-酮氧基-3-羧基与高价铁离子发生络合反应，生成使溶液变黄的螯合物是溶液变黄的原因。此外，环丙沙星结构中的β-酮酸部分，在酸性加热(环丙沙星的盐酸盐及乳酸盐溶液均呈酸性，高压灭菌时又可提供热条件)及金属离子存在条件下会发生降解-脱羧，也影响质量(如色泽、杂质、含量)。(王如山等.中国医院药学杂志，1998，18(12)：570)④缺少pH调节剂：CPFL在pH＞5.0时，溶液容易析出晶体(谢本树.医学文选，2004，23(6)：735-736)，使制剂质量不达标。⑤缺少抗氧化剂：大气中的氧气易引起药物制剂的氧化，对于液体制剂而言更需要注意这点。⑥制剂中乳酸环丙沙星含量不超过3.7mg/mL，本制剂常具有较好的缓释作用，原位凝胶伴随凝胶的溶蚀而发生药物的释放。故其在给药部位形成药物贮库后，还存在当缓释速率相对比较慢时，每小时内释放的药物达不到有效剂量的问题(尤其是当制剂缓释周期比较长时)。

《乳酸环丙沙星眼用即型凝胶的研制》(孙建强等.中国抗生素杂志.2010年.04期)公开了一种由乳酸环丙沙星，泊洛沙姆407(重量体积比为22.25％)，甘油，5％的苯扎溴铵及水组成的乳酸环丙沙星眼用即型凝胶。该制剂的胶凝温度为25.3℃，在室温(25℃)及以上贮存时变得很粘稠或是已经形成凝胶，进而无法给药，而制剂降温处理恢复为液体后眼部给药，但冷刺激又会使顺应性变差。此外，根据上述乳酸环丙沙星普通注射液的研究结果可知，因没有金属离子络合剂，抗氧化剂及pH调节剂等，会使制剂质量不可靠。

经检索，没有发现有关注射或直肠给药用的乳酸环丙沙星温度敏感型原位凝胶组合物的报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物。

本发明另一目的在于提供上述乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物的制备方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物，其组成成分及其重量体积比(单位：g/mL，表示为：w/v，以下同)为：

乳酸环丙沙星                      5～10％，

泊洛沙姆407(普郎尼克F127)         20～26％，

泊洛沙姆188(普郎尼克F68)          0.5～10％，

乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)        0.01～0.04％，

抑菌剂                            0.009～0.03％，

抗氧化剂                          0.1～0.2％，

溶剂为醋酸-醋酸钠缓冲液；所述的重量体积比是指各组分的重量与溶剂的体积之间的比例，重量体积比的单位为：g/mL。

上述乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物，还可以表示为：其组成成分及其重量体积比例为：每100mL醋酸-醋酸钠缓冲液中加入乳酸环丙沙星5～10g，泊洛沙姆407(普郎尼克F127)20～26g，泊洛沙姆188(普郎尼克F68)0.5～10g，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)0.01～0.04g，抑菌剂0.009～0.03g，抗氧化剂0.1～0.2g。

上述原位凝胶组合物还可以在灌装后充惰性气体。

所述的惰性气体是指N₂或CO₂。

所述的乳酸环丙沙星温度敏感型原位凝胶组合物的胶凝温度30～36.5℃。

所述醋酸-醋酸钠缓冲液是作为可注射用溶剂的缓冲溶液；醋酸-醋酸钠缓冲液配制时所用的溶剂是注射用水。

上述原位凝胶组合物中所述的泊洛沙姆407(普郎尼克F127)的重量体积比优选为22～25％，进一步优选为23％～24％。

上述原位凝胶组合物中所述的泊洛沙姆188(普郎尼克F68)的重量体积比优选为0.5～4％。

上述原位凝胶组合物中所述的泊洛沙姆407(又称普郎尼克F127)高分子中的聚氧乙烯链段在共聚物中的重量百分比为70％，分子量为10000～15000(平均分子量13021)。

上述原位凝胶组合物中所述的泊洛沙姆188(又称普郎尼克F68)高分子中的聚氧乙烯链段在共聚物中的重量百分比为80％，分子量为7680～9510(平均分子量为8601)。

上述原位凝胶组合物中所述的乳酸环丙沙星的重量体积比优选为8％。本发明可以制备乳酸环丙沙星浓度高达约64mg/mL的原位凝胶组合物。

上述原位凝胶组合物中所述的抗氧剂的重量体积比优选为0.15％。

上述原位凝胶组合物中所述的抗氧剂是指焦亚硫酸钠或亚硫酸氢钠；优选亚硫酸氢钠。

上述原位凝胶组合物中所述的抑菌剂的重量体积比优选为0.01％。所述的抑菌剂是指苯扎溴铵或尼泊金甲酯(化学名称：对羟基苯甲酸甲酯)。

所述的抑菌剂是指苯扎溴铵，其重量体积比优选为0.009～0.03％。

所述的抑菌剂是指尼泊金甲酯，其重量体积比优选为0.009～0.015％。

上述原位凝胶组合物中所述的EDTA-2Na的重量体积比优选为0.03％。本发明中EDTA-2Na作为乳酸环丙沙星的稳定剂，一方面可以避免铁离子与环丙沙星邻位酮基的羧酸(吡酮酸)结构络合，导致乳酸环丙沙星分解，另一方面又可络合其它金属离子，从而避免金属离子与乳酸环丙沙星主结构中喹诺酮螯合，从而使乳酸环丙沙星游离出来而还原其本身的理化性质。

上述原位凝胶组合物中所述的醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度为0.025～1.398mol/L，pH＝3.6。醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度优选为0.2mol/L。醋酸-醋酸钠缓冲液不仅在控制制剂的pH方面起着重要作用，而且是乳酸环丙沙星在原位凝胶制剂中保持稳定的关键。

上述乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物的制备方法，包括以注射用水为溶剂配制醋酸-醋酸钠缓冲液，然后经0.22μm微孔滤膜过滤；按照重量体积比向醋酸-醋酸钠缓冲液中加入抗氧化剂、EDTA-2Na、抑菌剂，搅拌溶解；然后加入乳酸环丙沙星，搅拌溶解；再加入泊洛沙姆407和泊洛沙姆188，静置5～20min，搅拌均匀；置4℃冰箱中20～80min，取出，搅拌均匀，再置4℃冰箱中12～48小时，即得乳酸环丙沙星温度敏感型原位凝胶组合物。

本发明仅选择了乳酸环丙沙星抗菌药，其具有抗菌谱广、杀菌力强，良好的药物动力学特点、不良反应发生率低、价格低廉、且无交叉耐药性等优点，比较有市场价值；其目前临床常用的注射液及口服制剂不仅存在半衰期短、连续用药疗程比较长，给药次数多等缺点，且口服制剂还存在生物利用度比较低、首过效应大等不足。故其很适合作为具有缓、控释特点的原位凝胶的模型药物。其实除了乳酸环丙沙星，本发明也可用于其他抗菌药物替代乳酸环丙沙星，如氨基糖苷类、林可霉素、喹诺酮类等易溶于水的药物。

本发明利用泊洛沙姆407溶液特殊的反向热胶凝性质，利用泊洛沙姆188对泊洛沙姆407溶液的胶凝温度的调节能力，使得本发明温度敏感型原位凝胶组合物能够在室温(25℃)条件下以液体状态给药，能满足直肠、阴道、注射等给药时所需的流动性。本发明乳酸环丙沙星温度敏感型原位凝胶组合物液体状态给药后，在体温的作用下较快的胶凝而形成具有缓释作用的凝胶，因而可以达到在滞留部位缓慢释放药物(乳酸环丙沙星)的目的。

本发明乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物在兽医临床预防或治疗中的应用方法包括：肌内注射、直肠及阴道给药。阴道或直肠给药时，可以将单次使用剂量为3～5mL的本发明药液通过前端为管状结构的瓶口注入阴道或直肠，后使患畜保持姿势约一分钟。

本发明所具有的优点和有益效果：(1)与阴道或直肠用的乳酸环丙沙星栓剂、片剂、泡腾片剂、胶囊剂等这些依靠阴道或直肠内分泌的液体来溶解和分散药物的制剂相比，本发明的乳酸环丙沙星原位凝胶组合物经阴道或直肠黏膜给药，药物分布性更好，不会有异物感，增加患畜的顺应性，同时也避免了缺乏黏膜粘附力的固体乳酸环丙沙星栓剂易滑向结肠，使所载乳酸环丙沙星经历首过效应而减低疗效的缺点；(2)同阴道软膏、阴道栓剂、阴道膜剂及阴道凝胶剂等具有一定粘度的基质组合的乳酸环丙沙星制剂相比，本发明乳酸环丙沙星原位凝胶组合物药物分布更均匀且没有用药死角；(3)同阴道洗剂、喷雾剂等可注入阴道内的乳酸环丙沙星溶液相比，本发明原位凝胶组合物避免了乳酸环丙沙星溶液不能持续附着在阴道内表面，易流失或聚积等缺点。总之，本发明的制剂具有均匀分布和生物粘附性好的特点，既融合了乳酸环丙沙星溶液和凝胶的优点又避免了两者的不足，克服了现有的乳酸环丙沙星制剂所共有的无法避免局部药物浓度过高的情况出现的缺陷。

同临床常用的乳酸环丙沙星注射剂相比，本发明的注射用乳酸环丙沙星原位凝胶组合物有如下优点：(1)减少了给药频率，提高了动物的顺应性；(2)具有良好的缓、控释作用。外释药试验表明，本发明原位凝胶释药性质虽受振荡频率、释放面积等因素影响，但都表现出良好的缓、控释性能；(3)注射等方式给药后，在给药部位发生胶凝而形成半固体状的乳酸环丙沙星贮库，组织定位性强，可发挥一定的长效作用。同乳酸环丙沙星植入剂相比，本发明没有植入剂因手术植入时带来的创伤，又能达到缓释效果。

同临床常用的乳酸环丙沙星可溶性粉、片剂、胶囊剂等普通口服制剂相比本发明的优点是：(1)起效更快，可以用于病情急、病情严重的患畜给药；(2)没有可溶性粉等口服制剂适口性差而使动物常可能在药物治疗剂量下使用，导致防治效果不好，增加耐药菌株出现(若长期亚治疗剂量)，进而缩短乳酸环沙星的使用寿命；(3)没有乳酸环丙沙星常用口服制剂生物利用度低、首过效应大的缺点；(4)与口服制剂相比，给药更加方便；(5)可以减少给药频率从而可以节省劳力及减少动物的应激反应。

本发明的胶凝温度在室温(药典规定10℃～30℃)之上体温之下，因此其在室温时既具有注射液易于分剂量、给药方便的特点。本发明的胶凝温度均在30℃～37℃之间，可以保证其在动物体温下发生胶凝；还有在动物体温作用下胶凝迅速的特点，从而避免突释效应，用药更加安全。本发明胶凝温度高于现有的环丙沙星原位凝胶，从而方便环境温度为20℃～30℃时制剂的制备、分装及临床给药。

本发明原位凝胶组合物中含有苯扎溴铵或尼泊金甲酯等抑菌剂，不但可以保证药剂的稳定性，也能防止外源微生物对药剂的污染。本发明原位凝胶组合物中含有FDTA-2Na，可以络合制剂过程中引入的金属离子，从而防止金属离子如铁离子对本发明组合物的性状及含量产生影响，从而保证制剂的质量。本发明组合物中含有抗氧化剂，从而可以避免本发明组合物中的乳酸环丙沙星在制备、贮藏及使用中受空气中氧的影响而氧化。

为此本发明以乳酸环丙沙星为模型药物，制成温敏型原位凝胶，用于肌肉、皮下或腹腔注射，直肠及阴道等黏膜，局部注射或经皮给药，为兽医临床引入原位凝胶新剂型，为乳酸环丙沙星增加新制剂，以使广谱杀菌药乳酸环丙沙星得到更加广泛且充分的应用。

附图说明

图1.乳酸环丙沙星原位凝胶室温时为自由流动的液体照片。

图2.乳酸环丙沙星原位凝胶胶凝温度时转为凝胶的照片。

图3.组合物1、2、3凝胶经时溶蚀曲线图。

图4.组合物4、5、6凝胶经时溶蚀曲线图。

图5.组合物1、2、3药物经时释放曲线图。

图6.组合物4、5、6药物经时释放曲线图。

图7.组合物1不同时间点累积百分溶蚀率对百分释药率线性回归曲线图

图8.组合物2不同时间点累积百分溶蚀率对百分释药率线性回归曲线图。

图9.组合物3不同时间点累积百分溶蚀率对百分释药率线性回归曲线图。

图10.组合物4不同时间点累积百分溶蚀率对百分释药率线性回归曲线图。

图11.组合物5不同时间点累积百分溶蚀率对百分释药率线性回归曲线图。

图12.组合物6不同时间点累积百分溶蚀率对百分释药率线性回归曲线图。

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不对本发明保护范围构成限制。

实施例1醋酸-醋酸钠缓冲溶液的制备

按照如下方法进行：

(1)将1.6410g的分析纯醋酸钠加入到100mL注射用水中溶解，混匀，经0.22μm的微孔滤膜过滤，即得0.2mol/L的醋酸钠溶液。

(2)将12.0100g或吸取11.5mL的无水醋酸加入到注射用水1000mL中溶解，混匀，经0.22μm的微孔滤膜过滤，即得0.2mol/L的醋酸溶液。

(3)将(1)中醋酸钠溶液75mL和(2)中醋酸溶液925mL混合均匀，经0.22μm的微孔滤膜过滤，即得0.2mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH＝3.6)，约为1L。

实施例2乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物的制备(组合物1)

按照如下方法制备：将EDTA-2Na 0.012g、亚硫酸氢钠0.060g、5％苯扎溴铵溶液80微升(5％苯扎溴铵溶液是按照重量百分比将苯扎溴铵溶于注射用水中而得。此处相当于苯扎溴铵的重量体积比为0.01％)加入实施例1制备的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40mL中，搅拌使其溶解；然后加入乳酸环丙沙星3.2g，搅拌溶解；0.45μm微孔滤膜过滤，向所得滤液中加入泊洛沙姆407(德国BASF公司)9.60g和泊洛沙姆188(德国BASF公司)0.80g，静置20min，搅拌均匀；而后置4℃冰箱中60min，取出，搅拌均匀；再置4℃冰箱中20小时，即得澄明的乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物。115℃高压灭菌20min，放冷，产品检验合格后无菌分装。

实施例3乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物的制备(组合物2)

按照如下方法制备：将EDTA-2Na 0.008g、亚硫酸氢钠0.080g、5％苯扎溴铵溶液120微升(此处苯扎溴铵的重量体积比为0.015％)加入到实施例1制备的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40mL中，搅拌使其溶解；加入乳酸环丙沙星3.2g，搅拌溶解；0.45μm微孔滤膜过滤，再向滤液中加入泊洛沙姆407(德国BASF公司)9.60g和泊洛沙姆188(德国BASF公司)1.20g，静置15min，搅拌均匀，而后置4℃冰箱中80min，取出，搅拌均匀，再置4℃冰箱中24小时，便得澄明的乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物。115℃高压灭菌20min，放冷，产品检验合格后无菌分装。

实施例4乳酸环丙沙星温度敏感型原位凝胶制剂的制备(组合物3)

按照如下方法制备：将EDTA-2Na 0.012g、亚硫酸氢钠0.040g、5％苯扎溴铵溶液100微升(此处苯扎溴铵的重量体积比为0.0125％)加入到实施例1制备的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40mL中，搅拌使其溶解；加入乳酸环丙沙星3.2g，搅拌溶解；0.45μm微孔滤膜过滤，向滤液中加入泊洛沙姆407(德国BASF公司)9.20g和泊洛沙姆188(德国BASF公司)0.40g，静置10min，搅拌均匀，而后置4℃冰箱中30min，取出，搅拌均匀，再置4℃冰箱中15小时，便得澄明的乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物。115℃高压灭菌20min，放冷，产品检验合格后无菌分装。

实施例5乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物的制备(组合物4)

按照如下方法制备：将EDTA-2Na 0.012g、亚硫酸氢钠0.070g、尼泊金甲酯0.006g加入实施例1制备的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40mL中，搅拌使其溶解；然后加入乳酸环丙沙星3.2g，搅拌溶解；0.45μm微孔滤膜过滤，向所得滤液中加入泊洛沙姆407(德国BASF公司)9.60g和泊洛沙姆188(德国BASF公司)0.80g，静置20min，搅拌均匀；而后置4℃冰箱中60min，取出，搅拌均匀；再置4℃冰箱中24小时，即得澄明的乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物约50mL。115℃高压灭菌20min，放冷，产品检验合格后无菌分装。

实施例6乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物的制备(组合物5)

按照如下方法制备：将EDTA-2Na 0.012g、亚硫酸氢钠0.060g、尼泊金甲酯0.004g加入到实施例1制备的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40mL中，搅拌使其溶解；然后加入乳酸环丙沙星3.2g，搅拌溶解；0.45μm微孔滤膜过滤，向所得滤液中加入泊洛沙姆407(德国BASF公司)9.60g和泊洛沙姆188(德国BASF公司)0.800g，静置20min，搅拌均匀；而后置4℃冰箱中60min，取出，搅拌均匀；再置4℃冰箱中24小时，即得澄明的乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物约50mL。115℃高压灭菌20min，放冷，产品检验合格后无菌分装。

实施例7乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物的制备(组合物6)

按照如下方法制备：将EDTA-2Na 0.008g、亚硫酸氢钠0.080g、尼泊金甲酯0.006g加入到实施例1制备的0.2mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40mL中，搅拌使其溶解；然后加入乳酸环丙沙星3.2g，搅拌溶解；0.45μm微孔滤膜过滤，向所得滤液中加入泊洛沙姆407(德国BASF公司)9.60g和泊洛沙姆188(德国BASF公司)0.80g，静置30min，搅拌均匀；而后置4℃冰箱中60min，取出，搅拌均匀；再置4℃冰箱中20小时，即得澄明的乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物。115℃高压灭菌20min，放冷，产品检验合格后无菌分装。

实施例8乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物的制备(组合物7)

按照如下方法制备：将EDTA-2Na 0.012g、亚硫酸氢钠0.060g、尼泊金甲酯0.004g加入到实施例1制备的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40mL中，搅拌使其溶解；然后加入乳酸环丙沙星2.4g，搅拌溶解；0.45μm微孔滤膜过滤，向所得滤液中加入泊洛沙姆4079.20g和泊洛沙姆1880.80g，静置20min，搅拌均匀；而后置4℃冰箱中60min，取出，搅拌均匀；再置4℃冰箱中24小时，即得澄明的乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物。115℃高压灭菌20min，放冷，产品检验合格后无菌分装。

实施例9本发明温敏型原位凝胶组合物的胶凝温度鉴定试验

按照如下方法进行：分别取实施例2～8制备的原位凝胶组合物溶液(分别编号为组合物1、组合物2、组合物3、组合物4、组合物5、组合物6、组合物7)3mL分别置于不同的10mL试管中，插入精度为0.1℃的精密温度计，温度计的水银球须完全浸没在凝胶溶液中。将试管置于水浴中，同时保证水浴液面高出试管中的凝胶溶液至少2cm，缓慢升温，升温速率约为每1～2min升高1℃。将试管倾斜90°，观察内容物不流动时的温度即为胶凝温度。每个组合物测定4次，结果取其平均值。结果(见表1)显示组合物1、2、3、4、5、6、7的胶凝温度分别为32.5℃、33.5℃、31.4℃、32.5℃、32.7℃、32.4℃、32.5℃，在室温(25℃)条件下为自由流动的液体(见图1)，体温时形成凝胶(见图2)，符合注射用在体胶凝的要求，能满足临床实际需要。

表1本发明原位凝胶组合物的胶凝温度测定结果(均值百分位四舍五入)

实施例10本发明原位凝胶组合物的体外溶蚀及药物释放度试验

按照如下方法进行：采用无膜溶出模型研究实施例2～7制备的原位凝胶的溶蚀动力学及药物的体外释放情况。精密吸取实施例2、3、4、5、6、7制备的原位凝胶组合物(分别编号为组合物1、2、3、4、5、6)，置于预先已称重的内径为0.61cm的10mL具塞刻度试管中，再行称重，使加入的原位凝胶质量大概3.2g左右。将该试管置于37.3±0.2℃的恒温水浴振荡器中平衡10min，使聚合物溶液完全形成凝胶。小心加入经预热的37℃生理盐水2mL作为释放介质，在95次/min恒温水浴振荡，分别在10min、20min、45min、60min，2h、3h、5h、7h、10h、13h、16h、19h、22h立即倾出全部释放介质，将容器内外表面用滤纸吸干，迅速称量并纪录；然后重新放入恒温水浴振荡器中平衡10min，再补充释放介质2mL；如此反复操作，直至剩余凝胶量至少不足加入量的20％，不同实施例制备的原位凝胶组合物考察时设置3个平行管(重复)，结果取其平均值。直至试验结束，相邻时间点的样品重量差异即为此期间凝胶溶蚀量。计算不同时间点凝胶的累积溶蚀率(M)，以不同时间点原位凝胶的累积百分溶蚀率(M％)对时间(t)作图，得到凝胶经时溶蚀曲线。M％的计算公式为：M％＝Et/E×100％，其中Et为t时刻的累积凝胶溶蚀量；E为凝胶初始重量。结果(见图3和图4)发现尽管存在溶蚀时间及溶蚀速率(看不同时间点曲线的切线斜率)上的差异，但溶蚀曲线的走势均比较相似，所考察原位凝胶组合物的体外溶蚀是一个比较缓慢过程。由此提示：本发明所述组合物存在类似或相同的溶蚀动力机制；说明本发明原位凝胶组合物给药后，给药部位形成的凝胶需要一个缓慢过程才能将其消除，从而可以提高药物的体内滞留时间。

在考察凝胶溶蚀动力学的同时测定药物释放度：将溶蚀试验得到的样品用生理盐水定容至5mL，得到稀释样品A；取稀释样品A 0.2mL稀释至8mL，混匀得到稀释样品B；取稀释样品B适量适当稀释，混匀后的样品用紫外分光光度法测定药物浓度，并计算累积释药率(Q)。以不同时间点原位凝胶的累积百分释药率(Q％)对t作图，得药物经时释放曲线；Q％的计算公式为：Q％＝Rt/R×100％，其中Rt为t时刻的累积药物释放量；R为理论载药量。结果(见图5、6)组合物1、2、3、4、5、6具有明显的缓释作用，相比，普通的乳酸环丙沙星注射液(市售)则无缓释作用。

以本发明原位凝胶组合物的百分累积溶蚀率(M％)为横坐标，百分累积释放率(Q％)为纵坐标进行线性回归，得到如图7(对应组合物1)、图8(对应组合物2)、图9(对应组合物3)、如图10(对应组合物4)、图11(对应组合物5)、图12(对应组合物6)所示的回归曲线。组合物1、组合物2、组合物3、组合物4、组合物5、组合物6对应的回归方程分别为Q％＝1.071M％+2.06(R²＝0.9995)、Q％＝0.9863M％+1.499(R²＝0.9991)、Q％＝1.0432M％+4.0499(R²＝0.9975)Q％＝1.0625M％+3.2252(R²＝0.9978)、Q％＝1.0085M％+1.8548(R²＝0.9998)、Q％＝1.0221M％+1.3576(R²＝0.999)。各拟合方程的斜率均接近1，且线性关系良好(R²均接近1)，说明凝胶溶蚀与药物释放以相似的速度进行，凝胶溶蚀控制药物的释放。因此，说明本发明原位凝胶组合物具有良好的缓、控释作用，用药安全性好(因溶蚀控制乳酸环丙沙星缓慢释放)。

Claims (11)

1.一种乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物，其特征在于其组成成分及其重量体积比为：

乳酸环丙沙星            5～10％，

泊洛沙姆407             20～26％，

泊洛沙姆188             0.5～10％，

EDTA-2Na                0.01～0.04％，

抑菌剂                  0.009～0.03％，

抗氧化剂                0.1～0.2％，

溶剂为醋酸-醋酸钠缓冲液；其中所述的重量体积比是指各组成成分的重量与溶剂的体积之间的比例，重量体积比的单位为：g/mL。

2.按照权利要求1所述的原位凝胶组合物，其特征在于在权利要求1所述的凝胶组合物灌装后充惰性气体。

3.按照权利要求1或2所述的原位凝胶组合物，其特征在于泊洛沙姆407的重量体积比为22～25％；所述的泊洛沙姆407分子中聚氧乙烯链段在共聚物中的重量百分比为70％，分子量为10000～15000。

4.按照权利要求1或2所述的原位凝胶组合物，其特征在于所述的泊洛沙姆188的重量体积比为0.5～4％；所述的泊洛沙姆188分子中聚氧乙烯链段在共聚物中的重量百分比为80％，分子量为7680～9510。

5.按照权利要求1或2所述的原位凝胶组合物，其特征在于所述的乳酸环丙沙星的重量体积比为8％。

6.按照权利要求1或2所述的原位凝胶组合物，其特征在于所述的抗氧剂的重量体积比为0.15％；所述的抗氧剂是指焦亚硫酸钠或亚硫酸氢钠。

7.按照权利要求1或2所述的原位凝胶组合物，其特征在于所述的抑菌剂的重量体积比为0.01％；所述的抑菌剂是指苯扎溴铵或尼泊金甲酯。

8.按照权利要求1或2所述的原位凝胶组合物，其特征在于所述的EDTA-2Na的重量体积比为0.03％。

9.按照权利要求1或2所述的原位凝胶组合物，其特征在于所述的醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度为0.025～1.398mol/L，pH＝3.6。

10.按照权利要求9所述的原位凝胶组合物，其特征在于所述的醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度为0.2mol/L。

11.权利要求1所述的乳酸环丙沙星温敏型原位凝胶组合物的制备方法，其特征在于包括以注射用水为溶剂配制醋酸-醋酸钠缓冲液，然后经0.22μm微孔滤膜过滤；按照重量体积比向醋酸-醋酸钠缓冲液中加入抗氧化剂、EDTA-2Na和抑菌剂，搅拌溶解；然后加入乳酸环丙沙星，搅拌溶解；再加入泊洛沙姆407和泊洛沙姆188，静置5～20min，搅拌均匀；置4℃冰箱中20～80min，取出，搅拌均匀，再置4℃冰箱中12～48小时，即得乳酸环丙沙星温度敏感型原位凝胶组合物。

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