CN103134921A - 一种地沟油胶体金速测卡 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述速测卡包括一个载体，并用所述载体上的胶体金作为示踪标志物，所述胶体金用于检测检测对象中的极性标志物，所述极性标志物为极性比甘油三酯高的植物油脂分子发生热反应、聚合、氧化、水解产物，包括甘油三酯热氧化产物(含有醛基、酮基、羟基、过氧化氢基和羧基的甘油三酯)、热聚产物、热氧化聚合物、水解产物(游离脂肪酸、单甘油酯和双甘油酯)，所述速测卡的NC膜上包被所述极性标志物抗原，所述抗原包括包括三氯乙酸、硫代巴比妥酸，所述三氯乙酸、硫代巴比妥酸在所述抗原中的体积比为3∶1至10∶1之间；所述NC膜每4cm膜的水层析时间为180s， 孔径为0.2-0.85μm，NC膜包含阴离子表面活性剂。本发明能快速判定待测油样是否为地沟油，大大提高了准确率，具有广阔的市场前景。

Description

一种地沟油胶体金速测卡

技术领域

本发明公开了一种地沟油胶体金速测卡，属于食品安全检测技术领域。

背景技术

地沟油包括泔水油、尸油、废油、混合油四种，原料中混有大量污水、垃圾、洗涤剂、腐肉等，包含重金属、砷、霉菌、黄曲霉素、苯并芘等有毒有害成分，会毒害大脑、肠胃、肝脏、肾脏等器官，引起头晕、失眠、乏力、消化不良、头痛、肝区不适、胃癌、肠癌、肾癌，以及乳腺、卵巢、小肠等部位的病变。地沟油缺乏人体需要从合格油脂中摄取的维生素E、不饱和脂肪酸等，反而大量增加反式脂肪酸、饱和脂肪酸，容易引发肥胖、脂肪肝，高血脂、高血压、胆囊炎、胃炎、心脏病。

一、研发先进的地沟油检测设备和技术，有迫切的健康、法律、行政需求

全球食用地沟油绝大部分分布在中国市场。据CNN报道，中国每年消费300-500万吨地沟油，按照300万吨计算，平均到13亿人头上，相当于每人每年摄入4.6斤地沟油。由于大量、频繁摄入地沟油，以及摄入其他有毒有害的食品、肉类、蔬菜、水、饮料、奶制品，到2010年，中国处于亚健康状态的人口已超过7亿，占全国总人口的60%至70%；地沟油诱发或影响的肠胃、肥胖、精神、肝肾疾病也大量增加。

地沟油产业链还出现了全球化趋势：即国外的厨房垃圾、腐尸、废油等加工成地沟油，端上中国餐桌。就像全球电子垃圾、服装垃圾大部分卖给中国一样，全世界的厨房垃圾、动物腐尸、废油等也在向中国聚集，变成有毒有害的食用油，进入中国人的身体。

为了杜绝地沟油上餐桌，2012年2月，最高人民法院等三部门联合下发了关于惩治地沟油犯罪活动的通知，规定依据刑法第144条生产有毒有害食品罪、第144条销售有毒有害食品罪、第143条销售不符合安全标准的食品罪、第140条销售伪劣产品罪、第213条假冒注册商标罪、第214条销售假冒注册商标的商品罪，凡从事与地沟油有关的犯罪主犯、累犯，可判处死刑。

因此，食用油生产、销售单位或个人，如不积极购买、安装、使用地沟油检测仪器，一旦卷入地沟油产业链，将面临严重的刑事法律风险。

2012年5月，卫生部发布通知，提出将选择一批地沟油检测仪器、地沟油快速检测方法，向全国推广。因此，各级卫生管理部门将引导企业积极购买、安装、使用地沟油检测仪器，推广好的检测方法。

2012年7月，国务院发文规定，食品安全问题纳入地方政府官员的业绩考核体系，并要求在3年内解决地沟油等食品安全突出问题；5年内，建立完善的食品安全监管体制机制、食品安全法律法规和标准体系、检验检测和风险监测等技术支撑体系。因此，我国急需研发新的地沟油检测设备、仪器、试剂、方法，建立地沟油检验检测和风险监测等技术支撑体系。

二、现有技术检测方法单一，设备复杂，操作困难，专业技术要求高，检测速度太慢

现有的地沟油检测技术主要面向食品卫生等执法部门，检测方法单一，设备复杂，操作困难，专业技术要求高，检测速度太慢，不适合家用、民用，更不适合快检，以及低成本的频繁检测。

如201110131492.4号专利文献涉及一种检测地沟油的方法：①将待测油样加入到顶空瓶中，在40℃～150℃的温度下摇动顶空瓶，然后平衡10min～120min；②使用注射器吸取平衡后的顶空瓶上层的气体进样至气相色谱-质谱联用仪中，在设定的色谱条件和质谱条件下得到气相色谱-质谱联用谱图；③通过NIST质谱图库对气相色谱-质谱联用谱图进行定性分析；当检测到待测油样中含有脂肪酸，则判定该待测油样为地沟油或者含有地沟油；所述的脂肪酸为乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸中的一种或者两种或者多种。本发明的方法准确性好、适用于所有地沟油的检测。

201110098263.7号专利文献涉及一种地沟油快速检测装置及检测方法，该装置包括侧边抛磨光纤传感器、控制模块以及显示模块，侧边抛磨光纤传感器的两端分别连接至光源以及光功率计，光源受控制模块控制，光功率计与控制模块相连，显示模块与控制模块相连。该发明通过侧边抛磨光纤传感器能快速获得地沟油对光的衰减数据，通过对衰减光的分析，可以精确地区分地沟油与食用植物油，提高了检测精度和准确度。

201010540281.1号专利文献涉及一种地沟油检测设备，它包括封闭壳体内被测油检测室一侧的吸管、至少两组发光管和接收管，吸管通过吸泵与被测油检测室相通，一组发光管和接收管在同一光轴上一发一收，用于测量被测油的光吸收，另一组发光管和接收管以小于90度的夹角在被测油检测室一侧，用于测量被测油的光散射，当按壳体上端的工作开关，壳体内的吸泵打开工作，壳体外的吸管对准被检测油，将被检测油吸入被测油检测室，当被检测油到被测油检测室设定的高度后，检测电路控制发光管向被检测油发出一定波长的光，通过另一侧的接收管进行接收，检测电路将对接收管信号进行检测、分析。

上述检测方法或者设备针对的指标单一，设备复杂，操作困难，专业技术要求高，检测速度太慢。

三、现有技术检测指标单一，指标偏僻，检测对象单一，检测可信度低

有些现有技术能实现快速检测，但是检测指标单一，指标偏僻，检测对象单一，检测可信度低。

例如，201110302043.1号专利文献涉及一种地沟油的检测试剂及其制备方法和检测方法，它包括按照体积百分比计算的邻二氮菲溶液10％～20％、醋酸铵缓冲液10％～20％、盐酸羟胺铁溶液10％～20％、二氯甲烷40％～60％；它能建立适用于现场监督检验、分析成本低的快速筛查方法，整个操作过程包括显色溶液制备2min、油样提取17min，然后加入到显色溶液中进行显色，整个操作过程在20min完成。且无需对照品也无需精密仪器，分析成本低、操作简单快速，可适用于现场监督检验；而且该方法可以检出用现行国家标准检验合格的地沟油，弥补了现行国家标准缺陷。

该技术的原理是：泔水油、混合油均包含厨房洗涤剂，即制备地沟油的废水、厨房垃圾、洗涤污水中必然包含一种最基本的阴离子表面活性剂——十二烷基苯磺酸纳。因此，该技术的检测对象是，地沟油中的十二烷基苯磺酸纳。可是，地沟油中的尸油、废油不含十二烷基苯磺酸纳，而且很多泔水油、混合油未必包含十二烷基苯磺酸纳，而是包含其他阴离子表面活性剂。

因此，该专利技术的检测指标单一，指标偏僻，检测对象单一，检测可信度低。

由于地沟油检测涉及重大的经济利益问题，检测方法和工具应具有交互印证功能。通过统一配置的试剂盒，提供完全自动，半自动、人工的检测路径，实现生物传感器在差异性检测路径上的数据融合，能大大提高检测精度，既为快速检测便利，又为更精确的人工检测提供便利。

总之，为了应对“禁止地沟油上餐桌”的健康、法律、行政需求，我国急需探索新的技术、试剂和方法。

发明内容

通过克服现有技术的缺陷，本发明公开了一种一种地沟油胶体金速测卡。

“地沟油”主要是在生活中存在的各类劣质油，如回收的食用油、反复使用的炸油等，长期食用可能会引发癌症，对人体的危害极大。建立有效鉴别地沟油方法，对加强监督管理，确保食用油质量和人民健康具有重要价值。

极性物质是食用油在煎炸或高温加热条件下发生劣变，热氧化反应和水解反应，产生比正常动、植物油脂分子(甘油三酯)极性较大的一些成分，甘油三酯热氧化产物(含有醛基、酮基、羟基、过氧化氢基和羧基的甘油三酯)、热聚产物、热氧化聚合物、水解产物(游离脂肪酸、单甘油酯和双甘油酯)总称。这些物质对人体酶系统有严重的破坏作用。地沟油中这些物质的含量很高，并且化学结构与原植物油相近，一般提炼处理方式不太容易将这些物质清除出去；同时，地沟油熬制和精炼过程中也会产生某些极性物质，因此极性物质能较真实和全面的反映油脂的劣变程度（劣质油）。油样中极性组分的某种标志物（极性标志物）可与特定的抗原抗体反应，因此，研究地沟油中极性物质的极性标志物敏感、特异、快速、简便的检测方法和试剂非常必要。

本发明人研制的试纸卡、探针、生物传感器或生物检测组件，就是用于地沟油中极性标志物的快速筛选检测。该极性标志物快速检测试剂（胶体金法）是应用层析式竞争法原理，即将经过改造的极性标志物抗原包被在NC膜上，用于捕捉标本中的极性标志物，同时用胶体金标记抗极性标志物抗体用进行免疫检测，标本经过短暂的纸层析0.5-10分钟就可用肉眼判断结果。该技术与其它方法比较，优势在于：检测过程中标本处理简单，不需要专门仪器和人员培训，非专业人员按照说明书即可操作，并可迅速观察结果，很适合现场和基层快速的筛查、准确判定是否存在地沟油。所需材料包括氯化金(HAuCl4)、NC膜、极性标志物抗原、抗体；制备过程包括：胶体金的制备——最适偶联抗体浓度的测定——金标探针的制备——NC膜的包被——成品。

对于集成化的高通量检测，所述速测卡可配置到光电设备上，用光学设备读取监测结果。此外，所述速配卡还可配置到一个试剂盒中，与试剂盒中的其他组件实施的人工检测实施结果的交互印证。

具体而言，本发明公开了一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述速测卡包括一个载体，并用所述载体上的胶体金作为示踪标志物，所述胶体金用于检测检测对象中的极性标志物，所述极性标志物为极性比甘油三酯高的植物油脂分子发生热反应、聚合、氧化、水解产物，包括甘油三酯热氧化产物(含有醛基、酮基、羟基、过氧化氢基和羧基的甘油三酯)、热聚产物、热氧化聚合物、水解产物(游离脂肪酸、单甘油酯和双甘油酯)，所述速测卡的NC膜上包被所述极性标志物抗原，所述抗原包括包括三氯乙酸、硫代巴比妥酸，所述三氯乙酸、硫代巴比妥酸在所述抗原中的体积比为3：1至10：1之间；所述NC膜每4cm膜的水层析时间为180s， 孔径为0.2-0.85μm，NC膜包含阴离子表面活性剂；所述速测卡的制备步骤是：

S1．制备胶体金；

S2. 测定最适偶联抗体浓度；

S3. 制备金标探针；

S4. 包被NC膜；

S5. 包装成品，即所述载体；

所述速测卡的人工使用方法包括如下步骤：

阅读包装盒、单卡包装袋或者速测卡本体上印制的操作指南，根据指南开始检测；

检测结束，等待速测卡显示速测结果；

根据包装盒、单卡包装袋或者速测卡本体上印制的比对标准，判断检测结果；

或者，所述速测卡的半自动检测方法包括如下步骤：

阅读包装盒、单卡包装袋或者速测卡本体上印制的操作指南，根据指南开始检测；

把速测卡放置到自动读取设备指定的组件中；

所述自动读取设备自动读取检测结果，并在屏幕上显示检测结果；

或者，所述速测卡的全自动检测方法包括如下步骤：

第一自动装置用一个以上速测卡对应检测不同样品，所述第一自动装置为机械传送装置；

第二自动装置读取每个速测卡对各自对应的样品的检测结果数据，并读取样品来源或名称数据，所述第二自动装置通过软件处理光学分析数据，生成生物化学数据，即所述检测结果数据，通过读取所述样品负载的RFID、二维码，或者图形、文字，自动识别样品来源或样品名称；

第三自动装置显示所述监测结果，同时存储、打印或传送所述数据，所述第三自动装置把所述数据通过网络上传到一个远程计算机。

所述的一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于， 所述极性标志物为丙二醛。

所述的一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述速测卡配置到一个 检测试剂盒中，采用如下步骤的人工检测方法对速测卡的检测结果进行第二重印证：

S1. 选定识别地沟油的至少2种检测对象；

S2. 针对S1中的至少2种检测对象，统一配置检测试剂盒；

S3. 针对S1中的至少2种检测对象，用S2的检测试剂盒对同一待测样品进行独立检测；

S4. 所述S3的独立检测显示至少2种检测对象均表明同一被测样品不是地沟油，则认定其不是地沟油，否则认定为地沟油。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述S1中的检测对象包括极性标志物、动物油、酸价、水分。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述极性标志物的检测方法是：

将待测油样混匀，用0.2ml塑料吸管取油样6滴于玻璃比色管中，再向试管中加入1毫升试剂1，摇动30秒，在沸水浴中加热5分钟，取出，与标准比色管对比；样品检测溶液所显红色浅于标准比色管的红色，则样品为阴性样品；样品检测溶液所显红色接近标准比色管的红色，则样品为可疑样品；样品检测溶液所显红色深于标准比色管的红色，则样品为阳性样品；

所述试剂1为极性标志物检测试剂，组分为：2-9%体积份的三氯乙酸，及0.3-0.9%体积份的硫代巴比妥酸，其余为蒸馏水，所述试剂1配制完成后放置在棕色玻璃瓶中避光保存；

所述极性标志物为极性比甘油三酯高的植物油脂分子发生热反应、聚合、氧化、水解产物。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述动物油的检测方法是：

取部分样品置于温度为12±2℃的环境中半小时，观察油样的凝固现象；油样温度降至12±2℃时，油样有絮状物、部分或全部凝固为阳性，没有凝固为阴性。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述酸价的检测方法是：

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象；如果溶液显纯浅黄色，说明油样酸价≥8mgKOH/g，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品；

所述试剂2为酸价、水分检测试剂，组分为：0.01-1%的溴酚蓝，溶解于甲醇、乙醇中，加入氢氧化钾、氢氧化钠或者其他碱性物质，制成碱性的有机溶剂。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述水分的检测方法是：

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象；溶液混浊，说明油样中水分超出正常值，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括多环芳烃，所述S2中的检测试剂盒包括多环芳径检测试剂和组件。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括胆固醇，所述S2中的检测试剂盒包括胆固醇检测试剂和组件。

具体而言，在所述试剂盒中的速测卡获得检测结果后，还可用所述试剂盒中的其他组件应用如下地沟油多参数综合快速筛查的方法实施并行检测，获得实现检测结果的双重印证。所述的一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，包括如下步骤：

S1. 选定识别地沟油的至少2种检测对象；

S2. 针对S1中的至少2种检测对象，统一配置检测试剂盒；

S3. 针对S1中的至少2种检测对象，用S2的检测试剂盒对同一待测样品进行独立检测；

S4. 所述S3的独立检测显示至少2种检测对象均表明同一被测样品不是地沟油，则认定其不是地沟油，否则认定为地沟油。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述S1中的检测对象包括极性标志物、动物油、酸价、水分。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述极性标志物的检测方法是：

将待测油样混匀，用0.2ml塑料吸管取油样6滴于玻璃比色管中，再向试管中加入1毫升试剂1，摇动30秒，在沸水浴中加热5分钟，取出，与标准比色管对比；样品检测溶液所显红色浅于标准比色管的红色，则样品为阴性样品；样品检测溶液所显红色接近标准比色管的红色，则样品为可疑样品；样品检测溶液所显红色深于标准比色管的红色，则样品为阳性样品；

所述试剂1为极性标志物检测试剂，组分为：1-10%体积份的三氯乙酸，及0.1-1%体积份的硫代巴比妥酸，其余为蒸馏水，所述试剂1配制完成后放置在棕色玻璃瓶中避光保存；

所述极性标志物为极性比甘油三酯高的植物油脂分子发生热反应、聚合、氧化、水解产物。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述动物油的检测方法是：

取部分样品置于温度为12±2℃的环境中半小时，观察油样的凝固现象；油样温度降至12±2℃时，油样有絮状物、部分或全部凝固为阳性，没有凝固为阴性。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述酸价的检测方法是：

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象；如果溶液显纯浅黄色，说明油样酸价≥8mgKOH/g，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品；

所述试剂2为酸价、水分检测试剂，组分为：0.01-1%的溴酚蓝，溶解于甲醇、乙醇中，加入氢氧化钾、氢氧化钠或者其他碱性物质，制成碱性的有机溶剂。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述水分的检测方法是：

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象；溶液混浊，说明油样中水分超出正常值，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括多环芳烃，所述S2中的检测试剂盒包括多环芳径检测试剂和组件。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括胆固醇，所述S2中的检测试剂盒包括胆固醇检测试剂和组件。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括电导率，所述S2中的检测试剂盒包括电导率检测仪器和组件。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括特定基因组成，所述S2中的检测试剂盒包括特定基因的检测试剂和组件。

具体而言，本发明的方法包括如下步骤：

S1. 选定识别地沟油的至少2种检测对象；

S2. 针对S1中的至少2种检测对象，统一配置检测试剂盒；

S3. 针对S1中的至少2种检测对象，用S2的检测试剂盒对同一待测样品进行独立检测；

S4. 所述S3的独立检测显示至少2种检测对象均表明同一被测样品不是地沟油，则认定其不是地沟油，否则认定为地沟油。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述S1中的检测对象包括极性标志物、动物油、酸价、水分。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述极性标志物的检测方法是：

将待测油样混匀，用0.2ml塑料吸管取油样6滴于玻璃比色管中，再向试管中加入1毫升试剂1，摇动30秒，在沸水浴中加热5分钟，取出，与标准比色管对比；样品检测溶液所显红色浅于标准比色管的红色，则样品为阴性样品；样品检测溶液所显红色接近标准比色管的红色，则样品为可疑样品；样品检测溶液所显红色深于标准比色管的红色，则样品为阳性样品；

所述试剂1为极性标志物检测试剂，组分为：1-10%体积份的三氯乙酸，及0.1-1%体积份的硫代巴比妥酸，其余为蒸馏水，所述试剂1配制完成后放置在棕色玻璃瓶中避光保存；

所述极性标志物为极性比甘油三酯高的油脂分子发生热反应、聚合、氧化、水解产物。

所述极性标志物优选为丙二醛。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述动物油的检测方法是：

取部分样品置于温度为12±2℃的环境中半小时，观察油样的凝固现象；油样温度降至12±2℃时，油样有絮状物、部分或全部凝固为阳性，没有凝固为阴性。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述酸价的检测方法是：

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象；如果溶液显纯浅黄色，说明油样酸价≥8mgKOH/g，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品；

所述试剂2为酸价、水分检测试剂，组分为：0.01-1%的溴酚蓝，溶解于甲醇、乙醇中，加入氢氧化钾、氢氧化钠或者其他碱性物质，制成碱性的有机溶剂。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述水分的检测方法是：

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象；溶液混浊，说明油样中水分超出正常值，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括多环芳烃，所述S2中的检测试剂盒包括多环芳径检测试剂和组件。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括胆固醇，所述S2中的检测试剂盒包括胆固醇检测试剂和组件。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括电导率，所述S2中的检测试剂盒包括电导率检测仪器和组件。

所述一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括特定基因组成，所述S2中的检测试剂盒包括特定基因的检测试剂和组件。

优选对同一检测油样，用同一检测试剂盒检测油样的极性标志物、动物油、酸价、水分。

本发明还公开了一种地沟油检测试剂的用途，其特征在于，所述试剂为极性标志物检测试剂，包括1-10%体积份的三氯乙酸，及0.1-1%体积份的硫代巴比妥酸，其余为蒸馏水，所述试剂各组分被混合配制完成后避光保存；

极性组分是食用油在煎炸或高温加热条件下发生劣变，热氧化反应和水解反应，产生比正常动、植物油脂分子(甘油三酯)极性较大的一些成分，甘油三酯热氧化产物(含有醛基、酮基、羟基、过氧化氢基和羧基的甘油三酯)、热聚产物、热氧化聚合物、水解产物(游离脂肪酸、单甘油酯和双甘油酯)总称。极性标志物为极性组分中的一种，如丙二醛，3-羟基甘油三酯，双甘油三酯等。

将待测油样混匀，取油样与所述试剂混合，油样与所述试剂的体积配比为1:1至1:10之间，油样与所述试剂混合后摇匀为样品检测溶液，取1至5毫升样品检测溶液在沸水浴中加热1-10分钟，取出，与标准比色管对比；

样品检测溶液所显红色浅于标准比色管的红色，则样品为阴性样品；样品检测溶液所显红色接近标准比色管的红色，则样品为可疑样品；样品检测溶液所显红色深于标准比色管的红色，则样品为阳性样品。

本发明还公开了一种地沟油检测试剂的用途，其特征在于，所述试剂为酸价、水分检测试剂，包括0.01-1%体积份的溴酚蓝（指示剂），溶解于甲醇、乙醇中，加入氢氧化钾、氢氧化钠，或者其他碱性物质，制成碱性有机溶剂；

将待测油样混匀，取油样与所述试剂混合，油样与所述试剂的体积配比为1:1至1:10之间，油样与所述试剂混合后摇匀为样品检测溶液，静置1-10分钟；

静置后样品检测溶液显纯浅黄色，则油样酸价≥8mgKOH/g，为阳性样品；静置样品检测溶液混浊，则油样异常，认定油样中水分超出正常值，为阳性样品；静置样品检测溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明，认定油样为阴性样品。

本发明还公开了一种地沟油检测试剂的用途，其特征在于，用所述极性标志物检测试剂，以及所述酸价、水分检测试剂检测同一个待测油样，任一检测结果为阳性则判定样品为阳性样品，任一检测结果均为阴性则判定样品为阴性样品。

所述的一种地沟油检测试剂的用途，其特征在于，所述指示剂为石蕊、孔雀绿、百里酚酞、玫瑰花汁，或者其他的蓝色或绿色指示剂。

所述的一种地沟油检测试剂的用途，其特征在于，对所述同一个待测油样进行动物油检测；取部分样品置于温度为12±2℃的环境中半小时，观察油样的凝固现象；在所述环境中，油样温度降至12±2℃时，油样有絮状物、部分或全部凝固，则判断油样为阳性，油样没有凝固，则判断油样为阴性。

所述的一种地沟油检测试剂的用途，其特征在于，对判断为阳性的油样，进行棕榈油、椰子油检测，如果油样不是棕榈油、椰子油，则判断油样为阳性；如果油样是棕榈油或者椰子油，则判断油样为阴性。

本发明的技术原理是：

泔水油、尸油、废油、混合油均包含极性组分、动物油，存在酸价、水分超标问题；因此，把极性组分、动物油、酸价、水分选作四大检测指标·。

极性组分是食用油在煎炸或高温加热条件下发生劣变，热氧化反应和水解反应，产生比正常动、植物油脂分子极性较大的一些成分。油样中极性组分的某种标志物（如含有醛基、酮基、羟基、过氧化氢基或羧基的甘油三酯）与试剂1反应显红色，该标志物含量越高则红色越深，红色深度超过临界值则为阳性。

动物油在正常植物油中不存在，在烹饪过程中可能加入或混入，因此可以通过检测植物油中是否含有动物油而判定是否为“地沟油”。

    劣质油的酸价或水分等成分可能超出正常值，通过酸价和水分等成分的检测，辅助检测指标1的判断。

操作步骤及结果判定

具体而言，本发明的试剂盒适合于对各类劣质油的快速筛查。

本发明的试剂盒通过对劣质油的四个指标进行快速检测，综合判断结果，适用于监督管理部门、餐厅和个人对各种“地沟油”的快速筛查。

规格：100次/盒。

试剂盒组成：

试剂盒由试剂1、试剂2、标准比色管、试管架、1ml塑料滴管、0.2ml塑料滴管、样品杯、玻璃比色管等组成，配套附件为水浴锅或者电热杯。

其中，试剂1是本试剂盒的关键组成部分，用于检测地沟油中的极性组分。极性组分是食用油在煎炸或高温加热条件下发生劣变，热氧化反应和水解反应，产生比正常动、植物油脂分子极性较大的一些成分。油样中极性组分的某种标志物（如含有醛基、酮基、羟基、过氧化氢基或羧基的甘油三酯）与试剂1反应显红色，该标志物含量越高则红色越深，红色深度超过临界值则为阳性。

试剂2是用于检测待测油样中的酸价和水分等成分，劣质油的酸价或水分等成分可能超出正常值，通过检测酸价和水分，可以用来辅助判断待测油样。

标准比色管中是已经配置好的用于对比颜色深浅的标准溶液。

试管架用于放置检测过程中用于取样待测的试管。

1ml塑料滴管，取液器具，用于准确吸取1ml地沟油检测试剂。

0.2ml塑料滴管，取样器具，用于吸取待测样品。

样品杯作为一种容器，用于盛放从大量样品中取出的一小部分待测样品，并在此混匀

玻璃比色管作为一种反应容器，用于放置检测试剂盒待测样品，以供其产生化学反应。

水浴锅或者电热杯，用于反应过程中的加热，沸水浴。

具体操作步骤及结果判定：

1、极性标志物的检测

将待测油样混匀，用0.2ml塑料吸管取油样6滴于玻璃比色管中，再向试管中加入1毫升试剂1，摇动30秒，在沸水浴中加热5分钟，取出，与标准比色管对比。

结果判断：样品检测溶液所显红色浅于标准比色管的红色，则样品为阴性样品；样品检测溶液所显红色接近标准比色管的红色，则样品为可疑样品；样品检测溶液所显红色深于标准比色管的红色，则样品为阳性样品。

2、植物油中混入动物油的检测

取部分样品置于温度为12±2℃的环境中半小时，观察油样的凝固现象。

结果判断：油样温度降至12±2℃时，油样有絮状物、部分或全部凝固为阳性，没有凝固为阴性。阳性样品需要排除棕榈油和椰子油等。

3、酸价、水分等的检测

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象。

结果判断：如果溶液显纯浅黄色，说明油样酸价≥8mgKOH/g，为阳性样品；溶液混浊，说明油样异常，可能是油样中水分等成分超出正常值，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品。

4、综合判定

    四项指标（极性标志物、动物油、酸价、水分）中的任何一项为阳性，则判定样品为阳性样品，四项指标均为阴性则判定样品为阴性样品。

所述试剂的组分为：

试剂1（极性标志物检测试剂）：1-10%体积份的三氯乙酸，及0.1-1%体积份的硫代巴比妥酸，其余为蒸馏水，试剂配制完成后需要放置在棕色玻璃瓶中避光保存；

试剂2（酸价、水分检测试剂）：0.1-1%的溴酚蓝，溶解于甲醇、乙醇中，加入氢氧化钾、氢氧化钠等碱性物质，制成碱性的有机溶剂。

本发明的有益特点是：它针对真实的地沟油样品，筛选、配置特定试剂，设计综合性、多参数筛查的检测步骤和方法，能大大提高地沟油检测的精度和速度。

具体实施方式

实施例1：

本实施例公开了一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述速测卡包括一个载体，并用所述载体上的胶体金作为示踪标志物，所述胶体金用于检测检测对象中的极性标志物，所述极性标志物为极性比甘油三酯高的植物油脂分子发生热反应、聚合、氧化、水解产物，包括甘油三酯热氧化产物(含有醛基、酮基、羟基、过氧化氢基和羧基的甘油三酯)、热聚产物、热氧化聚合物、水解产物(游离脂肪酸、单甘油酯和双甘油酯)，所述速测卡的NC膜上包被所述极性标志物抗原，所述抗原包括包括三氯乙酸、硫代巴比妥酸，所述三氯乙酸、硫代巴比妥酸在所述抗原中的体积比为3：1至10：1之间；所述NC膜每4cm膜的水层析时间为180s， 孔径为0.2-0.85μm，NC膜包含阴离子表面活性剂；所述速测卡的制备步骤是：

S1．制备胶体金；

S2. 测定最适偶联抗体浓度；

S3. 制备金标探针；

S4. 包被NC膜；

S5. 包装成品，即所述载体；

所述速测卡的半自动检测方法包括如下步骤：

阅读包装盒、单卡包装袋或者速测卡本体上印制的操作指南，根据指南开始检测；

把速测卡放置到自动读取设备指定的组件中；

所述自动读取设备自动读取检测结果，并在屏幕上显示检测结果。

所述的一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于， 所述极性标志物为丙二醛。

所述的一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述速测卡配置到一个 检测试剂盒中，采用如下步骤的人工检测方法对速测卡的检测结果进行第二重印证：

S1. 选定识别地沟油的至少2种检测对象；

S2. 针对S1中的至少2种检测对象，统一配置检测试剂盒；

S3. 针对S1中的至少2种检测对象，用S2的检测试剂盒对同一待测样品进行独立检测；

S4. 所述S3的独立检测显示至少2种检测对象均表明同一被测样品不是地沟油，则认定其不是地沟油，否则认定为地沟油。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述S1中的检测对象包括极性标志物、动物油、酸价、水分。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述极性标志物的检测方法是：

将待测油样混匀，用0.2ml塑料吸管取油样6滴于玻璃比色管中，再向试管中加入1毫升试剂1，摇动30秒，在沸水浴中加热5分钟，取出，与标准比色管对比；样品检测溶液所显红色浅于标准比色管的红色，则样品为阴性样品；样品检测溶液所显红色接近标准比色管的红色，则样品为可疑样品；样品检测溶液所显红色深于标准比色管的红色，则样品为阳性样品；

所述试剂1为极性标志物检测试剂，组分为：5%体积份的三氯乙酸，及0.5%体积份的硫代巴比妥酸，其余为蒸馏水，所述试剂1配制完成后放置在棕色玻璃瓶中避光保存；

所述极性标志物为极性比甘油三酯高的植物油脂分子发生热反应、聚合、氧化、水解产物。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述动物油的检测方法是：

取部分样品置于温度为13℃的环境中半小时，观察油样的凝固现象；油样温度降至13℃时，油样有絮状物、部分或全部凝固为阳性，没有凝固为阴性。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述酸价的检测方法是：

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象；如果溶液显纯浅黄色，说明油样酸价≥8mgKOH/g，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品；

所述试剂2为酸价、水分检测试剂，组分为：0.8%的溴酚蓝，溶解于甲醇、乙醇中，加入氢氧化钾、氢氧化钠或者其他碱性物质，制成碱性的有机溶剂。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述水分的检测方法是：

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象；溶液混浊，说明油样中水分超出正常值，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括多环芳烃，所述S2中的检测试剂盒包括多环芳径检测试剂和组件。

所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括胆固醇，所述S2中的检测试剂盒包括胆固醇检测试剂和组件。

实施例2：

本实施例公开了一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1. 选定识别地沟油的4种检测对象：极性标志物、动物油、酸价、水分；

S2. 针对S1中的4种检测对象，统一配置检测试剂盒；

S3. 针对S1中的4种检测对象，用S2的检测试剂盒对同一待测样品进行独立检测；

S4. 所述S3的独立检测显示4种检测对象均表明同一被测样品不是地沟油，则认定其不是地沟油，否则认定为地沟油。

为实现本实施例的内容，配置试剂盒：

试剂盒的规格：100次/盒

试剂盒组成

试剂1：100ml                        0.2ml塑料滴管：100只

试剂2:  100ml                        1ml塑料滴管：20只

标准比色管：1个                      样品杯：100个

玻璃比色管：8个                      试管架：1个

1、极性标志物的检测

将待测油样混匀，用0.2ml塑料吸管取油样6滴于玻璃比色管中，再向试管中加入1毫升试剂1，摇动30秒，在沸水浴中加热5分钟，取出，与标准比色管对比。

结果判断：样品检测溶液所显红色浅于标准比色管的红色，则样品为阴性样品；样品检测溶液所显红色接近标准比色管的红色，则样品为可疑样品；样品检测溶液所显红色深于标准比色管的红色，则样品为阳性样品。

2、植物油中混入动物油的检测

取部分样品置于温度为13℃的环境中半小时，观察油样的凝固现象。

结果判断：油样温度降至123℃时，油样有絮状物、部分或全部凝固为阳性，没有凝固为阴性。阳性样品需要排除棕榈油和椰子油等。

3、酸价、水分等的检测

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象。

结果判断：如果溶液显纯浅黄色，说明油样酸价≥8mgKOH/g，为阳性样品；溶液混浊，说明油样异常，可能是油样中水分等成分超出正常值，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品。

4、综合判定

四项指标中的任何一项为阳性则判定样品为阳性样品，四项指标均为阴性则判定样品为阴性样品。

保存条件和有效期：试剂常温保存，有效期12个月。

试剂1（极性标志物检测试剂）：7%体积份的三氯乙酸，及0.8%体积份的硫代巴比妥酸，其余为蒸馏水，试剂配制完成后需要放置在棕色玻璃瓶中避光保存；

试剂2（酸价、水分检测试剂）：0.5%的溴酚蓝，溶解于甲醇、乙醇中，加入氢氧化钾、氢氧化钠等碱性物质，制成碱性的有机溶剂。

实施例2：

在实施例1的基础上，本实施例公开了一种地沟油多参数综合快速筛查的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1. 选定识别地沟油的2种检测对象：极性标志物、酸价；同时，选定识别地沟油的另外4种检测对象：多环芳烃、胆固醇、电导率、特定基因；

S2. 针对S1中的检测对象，统一配置检测试剂盒；

S3. 针对S1中的检测对象，用S2的检测试剂盒对同一待测样品进行独立检测；

S4. 所述S3的独立检测显示检测对象均表明同一被测样品不是地沟油，则认定其不是地沟油，否则认定为地沟油。

多环芳烃是食用油经过加热如炒、烤、煎后，产生的含多个苯环的芳香族化合物，属于持久性有机污染物。所述S1中的检测对象包括多环芳烃，则所述S2中的检测试剂盒包括多环芳径检测试剂和组件。

食用植物油中一般不含胆固醇或含量极低。技术人员根据地沟油中可能含有动物源性成分，推断如果检出胆固醇并超过一定范围，可认定该油脂为地沟油。所述S1中的检测对象包括胆固醇，则所述S2中的检测试剂盒包括胆固醇检测试剂和组件。

正常油脂几乎不导电，但油脂酸败后产生的各种极性物质可使油脂产生导电性。地沟油由于掺杂了大量金属离子而产生导电性，电导率较高。所述S1中的检测对象包括电导率，则所述S2中的检测试剂盒包括电导率检测仪器和组件。

地沟油是多种不同来源的废弃油脂混合而成，往往含有动物油脂，检测人员根据分子生物学基因鉴定方法，鉴定识别出油脂中的动物基因，可判定食用油中是否含有动物源性成分。所述S1中的检测对象包括特定基因组成，则所述S2中的检测试剂盒包括特定基因的检测试剂和组件。

Claims (10)

1.一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述速测卡包括一个载体，并用所述载体上的胶体金作为示踪标志物，所述胶体金用于检测检测对象中的极性标志物，所述极性标志物为极性比甘油三酯高的植物油脂分子发生热反应、聚合、氧化、水解产物，包括甘油三酯热氧化产物(含有醛基、酮基、羟基、过氧化氢基和羧基的甘油三酯)、热聚产物、热氧化聚合物、水解产物(游离脂肪酸、单甘油酯和双甘油酯)，所述速测卡的NC膜上包被所述极性标志物抗原，所述抗原包括包括三氯乙酸、硫代巴比妥酸，所述三氯乙酸、硫代巴比妥酸在所述抗原中的体积比为3：1至10：1之间；所述NC膜每4cm膜的水层析时间为180s， 孔径为0.2-0.85μm，NC膜包含阴离子表面活性剂；所述速测卡的制备步骤是：

S1．制备胶体金；

S2. 测定最适偶联抗体浓度；

S3. 制备金标探针；

S4. 包被NC膜；

S5. 包装成品，即所述载体；

所述速测卡的人工使用方法包括如下步骤：

阅读包装盒、单卡包装袋或者速测卡本体上印制的操作指南，根据指南开始检测；

检测结束，等待速测卡显示速测结果；

根据包装盒、单卡包装袋或者速测卡本体上印制的比对标准，判断检测结果；

或者，所述速测卡的半自动检测方法包括如下步骤：

阅读包装盒、单卡包装袋或者速测卡本体上印制的操作指南，根据指南开始检测；

把速测卡放置到自动读取设备指定的组件中；

所述自动读取设备自动读取检测结果，并在屏幕上显示检测结果；

或者，所述速测卡的全自动检测方法包括如下步骤：

第一自动装置用一个以上速测卡对应检测不同样品，所述第一自动装置为机械传送装置；

第二自动装置读取每个速测卡对各自对应的样品的检测结果数据，并读取样品来源或名称数据，所述第二自动装置通过软件处理光学分析数据，生成生物化学数据，即所述检测结果数据，通过读取所述样品负载的RFID、二维码，或者图形、文字，自动识别样品来源或样品名称；

第三自动装置显示所述监测结果，同时存储、打印或传送所述数据，所述第三自动装置把所述数据通过网络上传到一个远程计算机。

2.根据权利要求1所述的一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于， 所述极性标志物为丙二醛。

3. 根据权利要求2所述的一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述速测卡配置到一个 检测试剂盒中，采用如下步骤的人工检测方法对速测卡的检测结果进行第二重印证：

S1. 选定识别地沟油的至少2种检测对象；

S2. 针对S1中的至少2种检测对象，统一配置检测试剂盒；

S3. 针对S1中的至少2种检测对象，用S2的检测试剂盒对同一待测样品进行独立检测；

S4. 所述S3的独立检测显示至少2种检测对象均表明同一被测样品不是地沟油，则认定其不是地沟油，否则认定为地沟油。

4.根据权利要求3所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述S1中的检测对象包括极性标志物、动物油、酸价、水分。

5.根据权利要求4所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述极性标志物的检测方法是：

将待测油样混匀，用0.2ml塑料吸管取油样6滴于玻璃比色管中，再向试管中加入1毫升试剂1，摇动30秒，在沸水浴中加热5分钟，取出，与标准比色管对比；样品检测溶液所显红色浅于标准比色管的红色，则样品为阴性样品；样品检测溶液所显红色接近标准比色管的红色，则样品为可疑样品；样品检测溶液所显红色深于标准比色管的红色，则样品为阳性样品；

所述试剂1为极性标志物检测试剂，组分为：2-9%体积份的三氯乙酸，及0.3-0.9%体积份的硫代巴比妥酸，其余为蒸馏水，所述试剂1配制完成后放置在棕色玻璃瓶中避光保存；

所述极性标志物为极性比甘油三酯高的植物油脂分子发生热反应、聚合、氧化、水解产物。

6.根据权利要求5所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述动物油的检测方法是：

取部分样品置于温度为12±2℃的环境中半小时，观察油样的凝固现象；油样温度降至12±2℃时，油样有絮状物、部分或全部凝固为阳性，没有凝固为阴性。

7.根据权利要求6所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述酸价的检测方法是：

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象；如果溶液显纯浅黄色，说明油样酸价≥8mgKOH/g，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品；

所述试剂2为酸价、水分检测试剂，组分为：0.01-1%的溴酚蓝，溶解于甲醇、乙醇中，加入氢氧化钾、氢氧化钠或者其他碱性物质，制成碱性的有机溶剂。

8.根据权利要求7所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述水分的检测方法是：

用0.2ml塑料滴管取6滴油样于玻璃比色管中，加入1ml试剂2，振摇10秒，静置10分钟，观察现象；溶液混浊，说明油样中水分超出正常值，为阳性样品；溶液显蓝色或浅蓝色且澄清透明为阴性样品。

9.根据权利要求8所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括多环芳烃，所述S2中的检测试剂盒包括多环芳径检测试剂和组件。

10.根据权利要求9所述一种地沟油胶体金速测卡，其特征在于，所述S1中的检测对象还包括胆固醇，所述S2中的检测试剂盒包括胆固醇检测试剂和组件。