CN103086995B

CN103086995B - 2-[4-（苯并噁唑-2-基氧基）苯氧基]烷酰胺及其应用

Info

Publication number: CN103086995B
Application number: CN201310040974.8A
Authority: CN
Inventors: 胡艾希; 刘祈星; 柳爱平; 李婉; 颜晓维; 方毅林
Original assignee: Hunan University
Current assignee: Hunan University
Priority date: 2013-02-01
Filing date: 2013-02-01
Publication date: 2014-08-13
Anticipated expiration: 2033-02-01
Also published as: CN103086995A

Abstract

本发明涉及化学结构式Ⅰ所示的2-[4-（苯并噁唑-2-基氧基）苯氧基]烷酰胺或其光学异构体：式中R₁选自：H、C₁～C₁烷基、C₃~C₄直链或支链烷基；R₂选自：烯丙基、炔丙基、卤代烯丙基、卤代炔丙基；X₁~X₆选自：氢、C₁~C₂烷基、三氟甲基、氟、氯、溴、硝基、或三氟甲氧基。2-[4-（苯并噁唑-2-基氧基）苯氧基]烷酰胺或其光学异构体在制备抗肺腺癌药物中的应用。

Description

2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺及其应用

技术领域

本发明涉及一类新化合物及其用途，具体是2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺或其光学异构体及其在制备抗肺腺癌A549药物中的应用。

背景技术

4-芳氧基苯氧基烷酸衍生物在具有广泛的生物活性，其中芳氧苯氧丙酸衍生物作为其典型代表，在农用除草剂中已有20余个商品化品种[DE2640730，DE3004770，US4713109，EP302203，JP54022371，EP4414，US:20030096706]，主要作用方式是抑制植物乙酰辅酶A羧化酶，从而影响植物脂肪酸的合成进而导致植物死亡而达到除草的目的。同时4-芳氧基苯氧基烷酸衍生物在抗癌药物的研究中也有大量报道[Investigational New Drugs，1999，16:287–296；Investigational New Drugs，1998，16:129–139；药学学报，2005，40(9):814-819]，其中XK469(2-(4-(7-氯喹喔啉-2-基氧基)苯氧基)丙酸)是美国杜邦公司正在进行Ⅰ期临床研究的一新型抗肿瘤药物，XK469具有很广的抗瘤谱，副作用小，对多种实体瘤模型有效，如结肠癌Colon38和乳腺癌等。和其他抗肿瘤药物相比，XK469具有较低的细胞毒性，而且在体内也显示较好的抗肿瘤活性[J Med Chem，2001，44(11):1758-76.]。

2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺或其光学异构体的抗癌活性没有研发报道。

发明内容

本发明的目的提供了化学结构式I所示的2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺或其光学异构体：

式中R₁选自：H、C₁～C₁烷基、C₃～C₄直链或支链烷基；R₂选自：烯丙基、炔丙基、2-氯烯丙基、3-氯烯丙基、3,3-二氯烯丙基、2-溴烯丙基、3-溴烯丙基、3,3-二溴烯丙基、2-氟烯丙基、3-氟烯丙基、3,3-二氟烯丙基、2-碘烯丙基、3-碘烯丙基或3,3-二碘烯丙基；X₁选自：氢、C₁～C₂烷基；X₂选自：氢、C₁～C₂烷基；X₃选自：氢、C₁～C₂烷基、氟、氯、溴；X₄选自：氢、C₁～C₂烷基、甲氧基、三氟甲基、氟、氯、溴或硝基；X₅选自：氢、C₁～C₂烷基、甲氧基、三氟甲基、氟、氯、溴或三氟甲氧基；X₆选自：氢、C₁～C₂烷基、氟、氯、溴。

本发明的目的提供了2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

本发明的目的提供了式I所示的2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺或其光学异构体选自下列化合物：

[0011]

本发明的目的提供了化学结构式I所示的2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺或其光学异构体在制备抗肺腺癌A549药物中的应用。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明发现2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺或其光学异构体具有抗肺腺癌A549的活性，可作为制备抗肺腺癌A549药物。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

(R)-N-(2-炔丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

(1)(R)-2-[4-(6-氯-苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]丙酸的制备

氢氧化钠溶液(20mL，10％)，冰浴下分批加入(R)-2-(4-羟基苯氧)丙酸(3.64g，0.02mol)，搅拌0.5h，此钠盐溶液滴加到含有2,6-二氯苯并噁唑(3.76g，0.02mol)的甲苯溶液30ml，滴加完后加入四丁基溴化铵0.2g，升温至50℃反应3小时，升温至回流1小时。冷却，分出水层，稀盐酸调节pH3～4，过滤，水洗，干燥得灰色固体(R)-2-[4-(6-氯-苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]丙酸6.02g，产率90％。

(2)O-炔丙基羟铵盐酸盐的制备

N,N-二甲基甲酰胺(DMF，150mL)，3-溴-1-丙炔(11.8g，0.1mol)和N-羟基邻苯二甲酰亚胺(16.3g，0.1mol)，搅拌溶解，滴加入三乙胺(12.2g，0.12mol)。50℃下搅拌12h。反应物冷却，倒入冰水(500mL)中，过滤，水洗。加入浓盐酸100mL(37％)，55℃下搅拌4小时。反应物冷却、过滤，取滤液，减压脱溶，得淡黄色O-炔丙基羟铵盐酸盐3.7g，产率34.6％。

(3)(R)-N-(2-炔丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

甲苯(40mL)，(R)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酸(1.11g，3.3mmol)和二氯亚砜(1.18g，10mmol)。回流4h后脱去溶剂甲苯。再向100mL三口瓶中加入二氯甲烷(40mL)，O-炔丙基羟铵盐酸盐(0.36g，3.3mmol)和催化量的4-二甲基氨基吡啶(DMAP)。反应物在冰浴下搅拌10min，滴加三乙胺(1.0g，10mmol)。继续搅拌2h，倒入200ml冰水中，用二氯甲烷萃取。有机相水洗(100mL×2)，无水硫酸钠干燥，脱溶。减压柱层析[薄层色谱硅胶，V(石油醚):V(乙酸乙脂)＝3:1]得到类白色固体(R)-N-(2-炔丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺0.55g，收率42.7％，熔点：154.8～155.2℃；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ:1.64(d，J＝6.6Hz，3H，CHCH ₃)，2.57(t，J＝2.4Hz，1H，C≡CH)，4.59(s，2H，OCH₂)，4.77(q，J＝6.6Hz，1H，CHCH₃)，7.02(d，J＝9.0Hz，2H，C₆H₄)，7.27(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.4Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.34(d，J＝9.0Hz，2H，C₆H₄)，7.38(d，J＝8.4Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.45(d，J＝2.4Hz，1H，Benzoxazole-H)，9.12(brs，1H，NH)。¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)δ：18.71，63.66，75.32，76.70，77.48，110.69，116.67，119.16，121.70，125.11，128.84，139.29，147.22，148.41，154.72，162.81，168.85；LC-MS(Pos M⁺)m/z)：387。

实施例2

(R)-N-(3,3-二氯-2-烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

(1)O-3,3-二氯-2-烯丙基羟胺盐酸盐的制备

按照实施例1中O-炔丙基羟铵盐酸盐的合成方法，用1,1,3-三氯丙烯代替2-炔丙基溴，合成O-3,3-二氯-2-烯丙基羟胺盐酸盐

(2)(R)-N-(3,3-二氯-2-烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

按实施例1方法制得的(R)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰氯(1.17g，3.3mmol)，二氯甲烷(40mL)，O-3,3-二氯-2-烯丙基羟胺盐酸盐(0.60g，3.3mmol)和催化量的4-二甲基氨基吡啶(DMAP)。冰浴下搅拌10min，滴加三乙胺(1.0g，10mmol)。继续搅拌2h，倒入200ml冰水中，用二氯甲烷萃取。有机相水洗(100mL×2)，无水硫酸钠干燥，脱溶。减压柱层析[薄层色谱硅胶，V(石油醚):V(乙酸乙脂)＝3:1]得到白色固体的标题化合物1.03g，收率67.6％。熔点：142.1～142.6℃；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ:1.62(d，J＝6.6Hz，3H，CHCH ₃)，4.55(d，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，4.78(q，J＝6.6Hz，1H，CHCH₃)，6.19(t，J＝7.2Hz，1H，OCH₂CH)，7.01(d，J＝9.0Hz，2H，C₆H₄)，7.27(dd，J₁＝8.7Hz，J₂＝2.1Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.35(d，J＝9.0Hz，2H，C₆H₄)，7.39(d，J＝8.7Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.46(d，J＝2.1Hz，1H，Benzoxazole-H)，8.95(brs，1H，NH)。¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)δ：18.66，72.54，75.31，110.66，116.58，119.13，121.66，123.60，125.08，126.94，128.81，139.25，147.16，148.36，154.64，162.71，169.40；LC-MS(PosM⁺)m/z):457。

实施例3

(R,Z)-N-(3-氯烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

(1)(Z)-O-3-氯烯丙基羟铵盐酸盐的制备

N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(150mL)，(Z)-1,3-二氯丙烯(11.1g，0.1mol)和N-羟基邻苯二甲酰亚胺(16.3g，0.1mol)，搅拌溶解，滴加入三乙胺(12.2g，0.12mol)。50℃下搅拌12h。反应物冷却，倒入冰水(500mL)中，过滤，水洗。加入浓盐酸100mL(37％)，55℃下搅拌4小时。反应物冷却、过滤，取滤液，减压脱溶，得淡黄色(Z)-O-3-氯烯丙基羟铵盐酸盐5.45g，产率37.8％。

(2)(R,Z)-N-(3-氯烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

按实施例1方法制得白色固体的(R,Z)-N-(3-氯烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺。熔点128.2～128.3℃，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ:1.57(d，J＝6.6Hz，3H，CHCH ₃)，4.66(d，J＝6.0Hz，2H，OCH₂)，4.75(q，J＝6.6Hz，1H，CHCH₃)，6.03～6.05(m，1H，OCH₂CH)，6.30(d，J＝7.2Hz，1H，＝CClH)，6.97(d，J＝9.0Hz，2H，C₆H₄)，7.27(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.8Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.34(d，J＝9.0Hz，2H，C₆H₄)，7.39(d，J＝8.4Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.46(d，J＝1.8Hz，1H，Benzoxazole-H)，9.00(brs，1H，NH)；LC-MS(Pos M⁺)m/z):423。

实施例4

(R,E)-N-(3-氯烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

(1)(E)-O-3-氯烯丙基羟铵盐酸盐的制备

N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(150mL)，(E)-1,3-二氯丙烯(11.1g，0.1mol)和N-羟基邻苯二甲酰亚胺(16.3g，0.1mol)，搅拌溶解，滴加入三乙胺(12.2g，0.12mol)。50℃下搅拌12h。反应物冷却，倒入冰水(500mL)中，过滤，水洗。加入浓盐酸100mL(37％)，55℃下搅拌4小时。反应物冷却、过滤，取滤液，减压脱溶，得淡黄色(E)-O-3-氯烯丙基羟铵盐酸盐3.21g，产率22.3％。

(2)(R,E)-N-(3-氯烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

按实施例1方法制得白色固体的(R,E)-N-(3-氯烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺。熔点138.9～146.2℃，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ:1.62(d，J＝6.6Hz，3H，CHCH ₃)，4.35～4.41(m，2H，OCH₂)，4.73(q，J＝6.6Hz，1H，CHCH₃)，6.03～6.12(m，1H，OCH₂CH)，6.26(d，J＝7.5Hz，1H，＝CClH)，6.97(d，J＝9.3Hz，2H，C₆H₄)，7.27(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.1Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.36(d，J＝9.3Hz，2H，C₆H₄)，7.42(d，J＝8.4Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.45(d，J＝2.1Hz，1H，Benzoxazole-H)，8.84(brs，1H，NH)；LC-MS(Pos M⁺)m/z):423。

实施例5

(R)-N-(2-氯烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

(1)O-2-氯烯丙基羟铵盐酸盐的制备

N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(150mL)，2,3-二氯丙烯(11.1g，0.1mol)和N-羟基邻苯二甲酰亚胺(16.3g，0.1mol)，搅拌溶解，滴加入三乙胺(12.2g，0.12mol)。50℃下搅拌12h。反应物冷却，倒入冰水(500mL)中，过滤，水洗。加入浓盐酸100mL(37％)，55℃下搅拌4小时。反应物冷却、过滤，取滤液，减压脱溶，得淡黄色O-2-氯烯丙基羟铵盐酸盐8.12g，产率56.7％。

(2)(R)-N-(2-氯烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

按实施例1方法制得白色固体的(R)-N-(2-氯烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺。熔点134.5～136.5℃，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ：1.63(d，J＝6.9Hz，3H，CHCH ₃)，4.51(d，J＝4.2Hz，2H,OCH₂)，4.75(q，J＝6.9Hz，1H，CHCH₃)，5.43(d，J＝9.9Hz，2H，CCl＝CH ₂)，7.00(d，J＝9.0Hz，2H，C₆H₄)，7.27(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.8Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.34(d，J＝9.0Hz，2H，C₆H₄)，7.39(d，J＝8.4Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.45(d，J＝1.8Hz，1H，Benzoxazole-H)，9.01(brs，1H，NH)。¹³C NMR(75MHz，CDCl3)δ：18.71，75.18，78.43，110.86，116.56，118.26，119.13，121.61，125.08， 128.81，135.62，139.24，147.17，148.36，154.66，162.70，169.01；LC-MS(Pos M⁺)m/z):423。

实施例6

(R)-N-(烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

(1)O-烯丙基羟铵盐酸盐的制备

N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(150mL)，3-氯丙烯(7.6g，0.1mol)和N-羟基邻苯二甲酰亚胺(16.3g，0.1mol)，搅拌溶解，滴加入三乙胺(12.2g，0.12mol)。50℃下搅拌12h。反应物冷却，倒入冰水(500mL)中，过滤，水洗。加入浓盐酸100mL(37％)，55℃下搅拌4小时。反应物冷却、过滤，取滤液，减压脱溶，得淡黄色O-烯丙基羟铵盐酸盐3.5g，产率32.1％。

(2)(R)-N-(烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺的制备

按实施例1方法制得白色固体的(R)-N-(烯丙氧基)-2-[4-(6-氯苯并噁唑-2-基氧)苯氧]丙酰胺。熔点150.5～160.6℃，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ:1.61(d，J＝6.9Hz，3H，CHCH ₃)，4.39～4.43(m，2H，OCH₂)，4.74(q，J＝6.9Hz，1H，CHCH₃)，5.26～5.34(m，2H，＝CH₂)，5.92～6.01(m，1H，OCH₂CH)，6.98(d，J＝9.0Hz，2H，C₆H₄)，7.27(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.1Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.35(d，J＝9.0Hz，2H，C₆H₄)，7.39(d，J＝8.4Hz，1H，Benzoxazole-H)，7.45(d，J＝2.1Hz，1H，Benzoxazole-H)，8.83(brs，1H，NH)。¹³CNMR(75MHz，CDCl₃)δ：18.82，75.37，77.62，110.67，116.569，119.18，121.58，121.63，125.09，128.81，131.51，139.31，147.14，148.40，154.75，162.74，168.70；LC-MS(Pos M⁺)m/z):389。

实施例7

2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺及其光学异构体的抗肿瘤活性

1.抗肿瘤活性原理

MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑；3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，MTT]为基础。MTT是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲瓒(formazon)，而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。

2.抗肿瘤活性实验

试样：2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺及其光学异构体(I)。

细胞系：肺腺癌细胞系A549(中南大学湘雅医学院细胞库提供)。

试剂：噻唑蓝(MTT)、RPMI1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术公司)；胰酶(美国AMRESCO公司)；96孔培养板(美国英杰生命技术公司)；二甲基亚砜(美国Sigma公司)。

仪器：HFsafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO₂培养箱(上海力申科学仪器有限公司)；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；Multiskan MK3型酶标仪(美国Thermo公司)；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。

实验操作：试样对于癌细胞的测试。一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度(1.000μmol/mL、0.300μmol/mL、0.100μmol/mL、0.030μmol/mL和0.010μmol/mL)，每个浓度4个平行试样，每组实验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔OD值，检测波长570nm。

3.抗肿瘤活性评价

1)细胞抑制率计算：

2)IC₅₀值计算

试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，利用软件计算试样对细胞的半数抑制浓度IC₅₀值。优秀2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺及其光学异构体对于肺腺癌A549细胞的IC₅₀见表1。

表12-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺及其光学异构体对肺腺癌A549细胞的抑制活性

活性测试结果显示，2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺及其光学异构体对于肺腺癌A549细胞具有良好的抑制活性，可用于制备抗肺腺癌药物。

Claims

1.化学结构式Ⅰ所示的2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺光学异构体：

式中R₁选自：氢、甲基、C₃～C₄直链或支链烷基；R₂选自：烯丙基、炔丙基、2-氯烯丙基、3-氯烯丙基、3,3-二氯烯丙基、2-溴烯丙基、3-溴烯丙基、3,3-二溴烯丙基、2-氟烯丙基、3-氟烯丙基、3,3-二氟烯丙基、2-碘烯丙基、3-碘烯丙基或3,3-二碘烯丙基；X₁、X₂、X₃、X₄、X₆选自：氢或C₁～C₂烷基；X₅选自：氟、氯或溴。

2.权利要求1所述的2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺光学异构体选自如下化合物：

3.权利要求1所述的2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺光学异构体的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

式中R₁，R₂，X₁～X₆的定义如权利要求1所述。

4.权利要求1或2所述的2-[4-(苯并噁唑-2-基氧基)苯氧基]烷酰胺光学异构体在制备抗肺腺癌药物中的应用。