CN103076421A - 瑞巴派特有关物质检查的分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及瑞巴派特有关物质检查的分析方法。具体而言，本发明涉及一种瑞巴派特质量分析的方法，该方法包括使用高效液相色谱法对瑞巴派特原料药或者包含瑞巴派特的药物制剂进行质量分析的步骤。本发明方法中使用的色谱柱是C18色谱柱；柱温是30~40℃。本发明用高效液相色谱法，在一定色谱条件下有效分离瑞巴派特及其各杂质，通过该方法能准确的测定瑞巴派特中各个杂质的量。

Description

瑞巴派特有关物质检查的分析方法

技术领域

本发明属于药物分析化学领域，涉及对抗溃疡药瑞巴派特质量进行分析的方法，具体涉及用液相色谱法分离测定瑞巴派特及其多种已知杂质的分析方法。

背景技术

瑞巴派特(Rebamipide，CAS No:90098-04-7)，化学名为(±)-2-(4-氯苯甲酰胺基)-3-[2(1H)－喹诺酮-4]丙酸，分子式为C19H15ClN2O4，分子量为370.79，其结构式如下：

瑞巴派特是一种治疗胃溃疡药，最早上市是在1990年由日本大冢制药有限公司研制生产的新型抗溃疡药。用于合成本品的起始原料有4-(溴甲基)-2-喹啉酮(本发明中简称杂质A)、在合成过程中会带入邻氯异构体(本发明中简称杂质B)，还有中间体1(本发明中简称杂质C)和中间体2(本发明中简称杂质D)，其化学名和结构式见表1。

其中，对于邻氯异构体(杂质B)是起始原料对氯苯甲酰氯中残留的少量邻氯苯甲酰氯与中间体2反应得到的；对于瑞巴派特的生产过程中带入的4-(溴甲基)-2-喹啉酮(杂质A)、邻氯异构体(杂质B)、中间体1(杂质C)和中间体2(杂质D)均为杂质，在生产瑞巴派特过程中均需要进行质量控制。在查阅的各国药典中，只有日本药典有收载瑞巴派特，但是没有记载针对上述的4种杂质进行质量控制。因此，实现瑞巴派特及其各杂质间的有效分离对测定瑞巴派特和各杂质的量具有重大的意义。

表1杂质化学名称和结构式

根据日本药典收载的瑞巴派特有关物质测定方法，用waterssymmtry(C18，150mm×4.6mm)色谱柱检测，取2.44g的1-癸烷磺酸钠，加水溶解并稀释至1000ml，然后加入甲醇1000ml及磷酸10ml，摇匀，作为流动相。虽然此方法可以将部分杂质与主峰瑞巴派特分开，但我们以系统适用性溶液进行验证试验，结果表明，该方法不能将4种已知杂质有效分离。经过反复试验，流动相比例调整为甲醇-癸烷磺酸钠溶液(40:60)，中间体1和4-(溴甲基)-2-喹啉酮之间还是达不到基线分离。

另一种方法是国家标准瑞巴派特(YBH03942009)有关物质测定方法，用月旭色谱柱(C18，250mm×4.6mm)进行检测，以甲醇-磷酸盐缓冲液(体积比为52:48，取磷酸二氢钾6.8g，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液152ml，加入10%的四丁基氢氧化铵溶液20ml，加水至1000ml，摇匀，即得)为流动相。用此方法进行试验，以系统适用性溶液进行验证试验，结果表明，该方法不能够将4种已知杂质有效分离。因此用上述两种此色谱条件测定的结果是不可靠的，因而无法对瑞巴派特进行可靠和有效的质量控制。

因此本领域仍然期待有用于控制瑞巴派特质量的有效方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于控制瑞巴派特质量的有效方法。本发明人令人意外地发现，用特定的色谱分析条件例如使用C18色谱柱，例如使用甲醇-磷酸盐缓冲液分离测定瑞巴派特及其制剂有关物质的高效液相色谱方法，可以有效地实现瑞巴派特及其杂质的分离及测定。本发明人经过反复试验发现，用月旭(C18，150mm＊4.6mm)色谱柱检测以甲醇-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液152ml，加入10%的四丁基氢氧化铵溶液10ml，加水至1000ml，用磷酸调节pH至6.5，摇匀，即得)(45:55)为流动相，可以将瑞巴派特与4种已知杂质进行有效分离，从而可以准确控制瑞巴派特的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分离、检测出瑞巴派特及其杂质。

为此，本发明第一方面提供了一种瑞巴派特质量分析的方法，该方法包括使用高效液相色谱法对瑞巴派特原料药或者包含瑞巴派特的药物制剂进行质量分析的步骤。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱。发明人发现，采用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂的色谱柱，能够有效分离瑞巴派特中可能含有的4种已知杂质。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱的填料粒度为3~10μm，优选填料粒度为5μm。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱的内径为3~10mm，优选色谱柱的内径为4.6mm。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱的柱长为100~200mm，优选色谱柱的柱长为150mm。

根据本发明第一方面的方法，高效液相色谱法使用的色谱柱的填料粒径5μm，色谱柱的内径为4.6mm，色谱柱的柱长为150mm。以上型号参数可以简写为5μm，150×4.6mm，或简写为150mm×4.6mm×5μm，或其它类似简写方式。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是C18色谱柱。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是XB-C18色谱柱。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是品牌为月旭XB-C18的色谱柱。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是品牌为月旭Unilmate XB-C18的色谱柱。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法分离分析时色谱柱的柱箱温度是30~40℃，例如33~37℃，例如约35℃。本发明已经发现，在柱箱温度为33~37℃的范围内具有相当好的分离效果，且色谱峰的对称性良好。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法是使用A、B、C三种流动相。流动相A为甲醇，流动相B为乙腈，流动相C为磷酸盐缓冲液。按体积份数计，流动相的比例为甲醇:乙腈:磷酸盐缓冲液=(10-90):((0-20):(90-10)，优选流动相的比例为甲醇:乙腈:磷酸盐缓冲液=(20-80):(0-5):(80-20)，优选流动相的比例为甲醇:乙腈:磷酸盐缓冲液=(40-45):0:(60-55)，优选流动相的比例为甲醇:乙腈:磷酸盐缓冲液=45:0:55。

在一个实施方案中，所述磷酸盐缓冲液pH值为5.0～12.0，例如pH值为7.0～10.0，例如pH值为5.5～8.0，例如pH值为6.3～6.7，例如pH值为6.5±0.05。本发明已经发现，在pH值为6.3~6.7的范围内具有相当好的分离效果。所述磷酸盐缓冲液中用于pH调节的酸或碱包括磷酸、枸橼酸、酒石酸、甲酸、草酸、磷酸氢二盐、磷酸二氢盐，优选磷酸。

在一个实施方案中，所述磷酸盐缓冲液中还加入有离子对试剂，优选离子对试剂为用于酸性化合物的离子对试剂，优选离子对试剂为四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵和/或十二烷基三甲基氯化铵，优选四丁基氢氧化铵为10%水溶液。发明人发现流动相中特定的离子对试剂可与有机酸活性成分瑞巴派特形成离子对，从而进行反相离子对色谱分离，在不干扰可能含有的4种已知杂质的前提下，能够更好地分离瑞巴派特与杂质，且有效改善峰形。

在一个实施方案中，所述磷酸缓冲液是通过以下步骤获得的：取磷酸二氢钾，加入氢氧化钠溶液溶解，加入离子对试剂，用磷酸调节pH。在一个实施方案中，所述磷酸缓冲液是通过以下步骤获得的：取磷酸二氢钾4~10g，加入0.05~0.2mol/L氢氧化钠溶液50-200ml，加入5~25%的四丁基氢氧化铵溶液5~30ml，加水至800~1500ml，用磷酸调节pH至6.3~6.7，摇匀，即得。在一个实施方案中，所述磷酸缓冲液是通过以下步骤获得的：取磷酸二氢钾6.8g，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液152ml，加入10%的四丁基氢氧化铵溶液10ml，加水至1000ml，用磷酸调节pH至6.5，摇匀，即得，优选流动相的比例为甲醇:磷酸盐缓冲液=45:55。

根据本发明第一方面的方法，其中进行高效液相色谱法测试时，测试溶液注入液相色谱仪的量为10～100μl，例如10～50μl，例如10～30μl,例如20μl。

根据本发明第一方面的方法，该方法包括以下步骤：

(1)、分别取背景技术部分表1所述各中间体以及瑞巴派特或含瑞巴派特的药物制剂样品适量，分别用甲醇溶解样品，并配制成每1ml含这些物质0.1～3.0mg/ml的样品溶液，包括单一成分的溶液和混合成分的溶液；

(2)、设置流动相的流速为0.8～1.2ml/min，使用紫外检测器，检测波长为：210nm～250nm，使用XB色谱柱，色谱柱的柱箱温度为30℃～40℃；流动相的比例为：A:B:C=(40-45):0:(60-55)，流动相C磷酸缓冲液的pH值5.5～8.0；

(3)、取步骤(1)的溶液10～30μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分(主药)保留时间的至少3倍，获得高效液相色谱分析图，从中读取和/或计算杂质的以下至少一个信息：杂质数量、杂质种类、杂质相对量、各色谱峰之间的分离度。

根据本发明的方法，其任一实施方案可以与其它方案任意进行组合，只要这种组合不会出现矛盾。

下面对本发明作进一步详细描述。

在本发明中，提及XB，是指一类液相色谱柱，采用独特的双封尾技术，具有高表面覆盖率和完全封尾的特点。与一般C18色谱柱相比，可以最大程度避免产生托尾现象，具有良好的对称峰形。

有文献报道在对瑞巴派特进行分析时使用色谱柱为C18，此款色谱柱的选择性较强，但不耐纯水相。本发明人经大量反复试验，使用XB-C18柱，不仅可以很好的分离各杂质与降解峰，还可以比之前的方法检出更多的降解杂质。从而更准确的控制了瑞巴派特的质量。本发明可以简单、准确的测定瑞巴派特的有关物质。

在一个实施方案中，本发明所说的用液相色谱法分离测定瑞巴派特及其制剂的有关物质的方法，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以甲醇为流动相A，以乙腈为流动相B，以磷酸盐缓冲液(pH值为5.5～8.0)为流动相C，进行洗脱。

在一个实施方案中，上述所用色谱柱选自品牌为月旭XB-C18的色谱柱。

在一个实施方案中，本发明所述的分离测定方法，可按以下方法实现：

(1)、取瑞巴派特或含瑞巴派特的制剂样品适量，用流动相溶解样品，并配制成每1ml含瑞巴派特0.1～3.0mg/ml的样品溶液，优选是配制成0.1～1.0mg/ml的样品溶液，优选是配制成0.4mg/ml的样品溶液；

(2)、设置流动相的流速为0.8～1.2ml/min，流动相的流速优选为0.9～1.1ml/min，流动相的流速优选为1.0ml/min；检测波长为：210nm～250nm，优选波长为235nm；色谱柱的柱箱温度为：30℃～40℃，柱箱温度优选为33~37℃，柱箱温度优选为35℃；流动相的比例为：A:B:C=(20-80):(0-5):(80-20)，流动相的比例优选为：A:B:C=(40-45):0:(60-55)，流动相的比例优选为：A:B:C=45:0:55；流动相C磷酸缓冲液的pH值为5.0～12.0，其优选pH值为7.0～10.0，其优选pH值为5.5～8.0，其优选pH值为6.3～6.7，其优选pH值为6.5±0.05；

(3)、取步骤(1)的溶液10～100μl，注入液相色谱仪，完成瑞巴派特有关物质的测定。

在一个实施方案中，高效液相色谱仪可以是使用岛津LC-10ATvp/LC-solution/LC-10AD/SIL-10AD/SPD-M10A/SCL-10A/DGU-14A高效液相色谱仪，或者也可以采用其它色谱系统。

在一个实施方案中，使用的色谱柱为：XB-C18，填料粒度可以是5μm，柱内径可以是4.6mm，柱长可以是5~40cm，例如柱长可以是10~20cm，例如15cm。

在一个实施方案中，使用的色谱柱柱温：35℃。

在一个实施方案中，使用的流动相：以甲醇为流动相A，以乙腈为流动相B，以磷酸盐缓冲液为流动相C，磷酸盐缓冲液的pH值为5.0～12.0，其优选pH值为7.0～10.0，其优选pH值为5.5～8.0，其优选pH值为6.3～6.7，其优选pH值为6.5±0.05；

在一个实施方案中，流动相的流速为1.0ml/min。

在一个实施方案中，使用的检测器的检测波长：235nm。

在一个实施方案中，液相分析进样体积为：20μl。

本发明采用XB-C18色谱柱，能够有效的分离瑞巴派特及其杂质；选用流动性相溶解样品，抵消了溶剂峰，同时也不干扰中间体2的检测，；本发明解决了分离测定瑞巴派特已知杂质和未知杂质测定的问题，从而保证了瑞巴派特及其制剂的质量可控。

附图说明

图1、空白溶剂的HPLC色谱图；图中纵坐标volts表示伏特，横坐标minutes表示分钟，下同。

图2、瑞巴派特的HPLC色谱图。

图3、4-(溴甲基)-2-喹啉酮的HPLC色谱图。

图4、中间体1的HPLC色谱图。

图5、中间体2的HPLC色谱图。

图6、邻氯异构体的HPLC色谱图。

图7、系统适用性溶液（混合杂质对照品）的HPLC色谱图。

具体实施方式

通过以下实例对本发明做进一步具体说明，但应该理解，以下实例不限于本发明的范围。

以下各实施例和对照例使用的试剂可从市场上容易地购得。

实施例1

仪器及条件：

岛津2010AH一体机型的高效液相色谱仪及岛津的LC-solution工作站；十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(Unilmate,XB-C18，4.6mm×15cm×5μm，月旭)；以甲醇为流动相A，以磷酸缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液152ml，加入10%的四丁基氢氧化铵溶液10ml，加水至1000ml，用磷酸调节pH至6.5，摇匀，即得)为流动相C，流动相为流动相A甲醇与流动相C磷酸缓冲液按照体积份45:55的比例配制；检测波长为235nm；柱温为35℃。流动相流速：1.0ml/min，液相分析进样体积为：20μl，自动进样。

试验步骤：

称取4-(溴甲基)-2-喹啉酮、中间体1、中间体2、邻氯异构体和瑞巴派特各适量，加甲醇分别溶解并稀释成每1ml含有各成分均为0.4mg的溶液，作为贮备液，从贮备液中精密量取适量，加流动相稀释制成每1ml中含有各杂质均为0.4μg的溶液，作为系统适用性溶液。

精密吸取流动相20μl，按上述色谱条件进行色谱分析，记录色谱图(记录时间为主峰保留时间的3倍以上)，结果见图1。

精密吸取瑞巴派特溶液20μl，按上述色谱条件进行色谱分析，记录色谱图(记录时间为主峰保留时间的3倍以上)，结果见图2。

精密吸取4-(溴甲基)-2-喹啉酮溶液20μl，按上述色谱条件进行色谱分析，记录色谱图(记录时间为主峰保留时间的3倍以上)，结果见图3。

精密吸取中间体1溶液20μl，按上述色谱条件进行色谱分析，记录色谱图(记录时间为主峰保留时间的3倍以上)，结果见图4。

精密吸取中间体2溶液20μl，按上述色谱条件进行色谱分析，记录色谱图(记录时间为主峰保留时间的3倍以上)，结果见图5。

精密吸取邻氯异构体溶液20μl，按上述色谱条件进行色谱分析，记录色谱图(记录时间为主峰保留时间的3倍以上)，结果见图6。

精密吸取系统适用性溶液20μl，按上述色谱条件进行色谱分析，记录色谱图(记录时间为主峰保留时间的3倍以上)，结果见图7。

由图1可知，空白溶剂无吸收峰，不干扰本品有关物质检测。图2-6可知，本发明检测条件可以有效检测出瑞巴派特及其杂质。由图7可知，主峰瑞巴派特与杂质峰、杂质峰之间均能够达到基线分离，满足系统适用性要求。

实施例2

仪器及条件：

岛津2010AH一体机型的高效液相色谱仪及岛津的LC-solution工作站；十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(Unilmate,XB-C18，4.6mm×15cm×5μm，月旭)；以甲醇为流动相A，以磷酸缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g,加入0.1mol/L氢氧化钠溶液152ml,加入10%的四丁基氢氧化铵溶液10ml,加水至1000ml,用磷酸调节pH至6.5，摇匀，即得)为流动相C，流动相为流动相A甲醇与流动相C磷酸缓冲液按照体积份45:55的比例配制；检测波长为235nm；柱温为35℃。流动相流速：1.0ml/min，液相分析进样体积为：20μl，自动进样。

试验步骤：

取瑞巴派特(原料药)适量，用流动相溶解，并配制成每1ml中含瑞巴派特0.4mg的供试品溶液。

精密吸取流动相20μl，按上述色谱条件进行色谱分析，记录色谱图(记录时间为主峰保留时间的3倍以上)。

色谱检测证明原料药中未检出4种已知杂质(杂质A、杂质B、杂质C和杂质D)，其他单个杂质也小于0.1%（面积归一化法）。可见，证明空白辅料不干扰测定。色谱检测结果与原料药要求的实际纯度相符，故本法可以用于瑞巴派特原料药的质量监测。

实施例3

仪器及条件：

岛津2010AH一体机型的高效液相色谱仪及岛津的LC-solution工作站；十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(Unilmate,XB-C18，4.6mm×15cm×5μm，月旭)；以甲醇为流动相A，以磷酸缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g,加入0.1mol/L氢氧化钠溶液152ml,加入10%的四丁基氢氧化铵溶液10ml,加水至1000ml,用磷酸调节pH至6.5，摇匀，即得)为流动相C，流动相为流动相A甲醇与流动相C磷酸缓冲液按照体积份45:55的比例配制；检测波长为235nm；柱温为35℃。流动相流速：1.0ml/min，液相分析进样体积为：20μl，自动进样。

试验步骤：

取瑞巴派特片剂，用流动相溶解，并配制成每1ml中约相当于含瑞巴派特0.4mg的供试品溶液；同法制备空白辅料溶液。

精密吸取流动相20μl，按上述色谱条件进行色谱分析，记录色谱图(记录时间为主峰保留时间的3倍以上)。

由色谱检测结果可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好，杂质峰与主峰分离度均大于2.5。

实施例4

基本上与实施例1相同的方法，不同的是在配制流动相C时，配制成不同的pH值，然后按照实施例1的方法对高温降解溶液进行检测，以检出的杂质个数以及全部色谱峰中任意相邻两色谱峰之间的分离度的最小值为指标，考察不同pH值的流动相C在洗脱中的分离效果，进样体积为20μl。结果如下：

流动相C的pH值	可检出的杂质个数	最小分离度
			5.0	2	0.49
5.4	3	1.07
			5.7	3	1.19

6.0	4	1.43
			6.3	7	1.93
6.5	7	2.49
			6.7	7	2.37
7.0	4	2.09
			7.4	3	1.44
7.7	2	1.18
			8.0	2	1.03

对于药物的高效液相色谱分析方法而言，本领域技术人员清楚，通常而言可接受的分离度一般需要在1.0以上，通常分离度大于1.5时认为可以满足质量控制方法要求的标准。本发明人出人意料地发现，在使用梯度洗脱过程中，当流动相C的pH值在6.3~6.7的范围内时，不但分离度良好，而且可以检测到最多的杂质；在低于或高于此pH值范围时，有一些杂质检测不到，并且它们之间的分离度也较差甚至不能满足一般的分析要求，这对于化学药品严格的质量分析方法是不可取的。因此在本发明一个特别优选的实施方案中，使用的流动相C的pH值在6.3~6.7范围内。

实施例5

基本上与实施例1相同的方法，不同的是在进行分离时测定不同的色谱柱温度，照实施例1的方法对高温降解溶液进行检测，以检出的杂质个数以及全部色谱峰中任意相邻两色谱峰之间的分离度的最小值为指标，考察不同柱温在梯度洗脱中的分离效果，结果如下：

柱温(℃)	杂质个数	最小分离度
			25	1	0.39
27	1	0.57
			29	2	1.17
31	4	1.42
			33	7	2.30
35	7	2.49

37	7	2.30
			39	5	1.46
41	2	1.12
			43	2	0.85
45	1	0.42

本发明人出人意料地发现，在使用梯度洗脱过程中，当色谱柱的柱温在33~37℃的范围内时，不但分离度良好，而且可以检测到最多的杂质；在低于或高于此温度范围时，有一些杂质检测不到，并且它们之间的分离度也较差甚至不能满足一般的分析要求，这对于化学药品严格的质量分析方法是不可取的。因此在本发明一个特别优选的实施方案中，使用的柱温为33~37℃。

实施例6

基本上与实施例1相同的方法，不同的是使用210nm、225nm、250nm三种波长进行检测，对降解试验样品进行测定。结果与实施例1的结果基本相同，色谱图中可以读取到主峰以及4个杂质峰，各峰间的分离良好(相邻两色谱峰之间的分离度均在2.0以上，任意相邻两峰之间的分离度，最小值为2.02)。表明检测波长在210nm~250nm范围内均可满足测定要求。

实施例7

基本上与实施例1相同的方法，不同的是配制降解试验样品样品时，浓度分别为0.5、1.0、或2.5mg/ml的溶液，对这些降解试验样品进行测定。结果与实施例1的结果基本相同，色谱图中可以读取到主峰以及4个杂质峰，各峰间的分离良好(相邻两色谱峰之间的分离度均在2.0以上，任意相邻两峰之间的分离度，最小值为2.38)。表明样品浓度在0.5~2.5mg/ml范围内均可满足测定要求。

实施例8

基本上与实施例1相同的方法，不同的是在洗脱过程中，流动相C的比例为50%或60%，对降解试验样品进行测定。结果与实施例1的结果基本相同，色谱图中可以读取到主峰以及4个杂质峰，各峰间的分离良好(相邻两色谱峰之间的分离度均在2.0以上，任意相邻两峰之间的分离度，最小值为2.11)。表明梯度洗脱时流动相A和B的比例适当调整仍然可以满足测定要求。因此在本发明的一个实施方案中，由流动相A/流动相C组成的混合流域动相中，流动相C的比例可以为50~60%，即流动相A:流动相C=40:60~60:40。

本发明人在另外的试验中，照实施例1的方法，使用ODS柱(4.6mm×25cm×5μm，THERMO)，结果在对降解试验样品进行测定时，无法检测到杂质。

实施例9

使用实施例1的方法，测定3批瑞巴派特原料药，以及三批分别此3批原料药制备成的片剂(加入有乳糖、微晶纤维素、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮以便压制成片)。按照药物分析领域对药品进行有关物质检查的一般要求进行测定，结果表明，三批原料药的有关物质总量分别为0.51%、0.57%、0.68%；分别由此3批原料药制备成的片剂的有关物质总量(扣除辅料影响)分别为0.53%、0.61%、0.69%，显示原料与制剂有良好的一致性。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种瑞巴派特质量分析的方法，该方法包括使用高效液相色谱法对瑞巴派特原料药或者包含瑞巴派特的药物制剂进行质量分析的步骤。

2.根据权利要求1的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱；例如所述高效液相色谱法使用的色谱柱是XB-C18色谱柱;例如所述高效液相色谱法使用的色谱柱是月旭XB-C18色谱柱。

3.根据权利要求1的方法，其中所述高效液相色谱法分离分析时色谱柱的柱温是30~40℃，例如33~37℃，例如约35℃。

4.根据权利要求1的方法，其中所述高效液相色谱法使用A、B、C三种流动相；进一步地，流动相A为甲醇，流动相B为乙腈，流动相C为磷酸盐缓冲液。

5.根据权利要求4的方法，所述磷酸缓冲液是通过以下步骤获得的：称取磷酸二氢钾，去离子水溶解，再用酸或碱磷酸调节pH值，例如所述磷酸盐缓冲液中用于pH调节的酸或碱包括磷酸、枸橼酸、酒石酸、甲酸、草酸、磷酸氢二盐、磷酸二氢盐。

6.根据权利要求5的方法，所述磷酸缓冲液其pH值为5.0～12.0，例如pH值为7.0～10.0，例如pH值为5.5～8.0，例如pH值为6.3～6.7，例如pH值为6.5±0.05。

7.根据权利要求6的方法，其中所述高效液相色谱法中使用的流动相的比例为甲醇:乙腈:磷酸盐缓冲液=(10-90):((0-20):(90-10)，例如流动相的比例为甲醇:乙腈:磷酸盐缓冲液=(20-80):(0-5):(80-20)，例如流动相的比例为甲醇:乙腈:磷酸盐缓冲液=(40-45):0:(60-55)。

8.根据权利要求7的方法，所述磷酸盐缓冲液中还加入有离子对试剂，优选离子对试剂为用于酸性化合物的离子对试剂，优选离子对试剂为四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵和/或十二烷基三甲基氯化铵，优选四丁基氢氧化铵为10%水溶液。

9.根据权利要求1-8的方法，其中所述高效液相色谱法中流动相的流速为0.8～1.2ml/min，流动相的流速优选为0.9～1.1ml/min，流动相的流速优选为1.0ml/min；所述紫外检测器所用的检测波长是210nm～250nm，优选的检测波长为235nm。

10.根据权利要求1-9的方法，该方法包括以下步骤：

(1)、取4-(溴甲基)-2-喹啉酮或含4-(溴甲基)-2-喹啉酮的药物制剂样品适量，用甲醇溶解样品，并配制成每1ml含4-(溴甲基)-2-喹啉酮0.1～3.0mg/ml的样品溶液；

(2)、设置流动相的流速为0.8～1.2ml/min，使用紫外检测器，检测波长为：210nm～250nm，使用XB色谱柱，色谱柱的柱箱温度为30℃～40℃；流动相的比例为：A:B:C=(40-45):0:(60-55)，流动相C磷酸缓冲液的pH值5.5～8.0；

(3)、取步骤(1)的溶液10～30μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分保留时间的至少3倍，获得高效液相色谱分析图，从中读取和/或计算杂质的以下至少一个信息：杂质数量、杂质种类、杂质相对量、各色谱峰之间的分离度。

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